6(s,2H),3.61(s,3H)〇ES-MS[M+l] + ：301.0〇
[0104] 實(shí)施例2:對(duì)由TCR刺激誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖的抑制
[0105] 用從健康人供體的血液得到的原始T淋巴細(xì)胞(PBMC，外周血單核細(xì)胞），對(duì)化合物 AX-105、AX-106、AX-107和AX-108對(duì)TCR誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖的能力的影響進(jìn)行了評(píng)估。通過(guò) 用Ficoll-Paque Plus密度梯度對(duì)靜脈血離心分離志愿者的PBMC。將純化的細(xì)胞（NWT; Nylon Wood T細(xì)胞）以一式三份在96-孔板(0.5 X105/孔）中用200μ1完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，并在 存在或不存在濃度為1和1〇μΜ的不同化合物的情況下用0KT3(10μg/ml)或0KT3(lμg/ml) + CD28進(jìn)行刺激。將培養(yǎng)物孵育3天，并在添加0.5uCi [3H]TdR/孔后，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行最后12小 時(shí)培養(yǎng)方面的分析。摻入到DNA中的放射性通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)確定。隨著細(xì)胞的分裂，放射 性被摻入到允許知道細(xì)胞增殖程度的子細(xì)胞中。圖1中示出了測(cè)試化合物的抑制能力。
[0106] 另外，化合物4乂-129^乂-130^乂-131^乂-132和4乂-137的作用也用來(lái)自健康志愿 者、通過(guò)用Ficoll-Paque Plus密度梯度對(duì)靜脈血離心分離得到的外周血單核細(xì)胞(PBMC) 進(jìn)行了分析。為了純化T細(xì)胞，使PBMC通過(guò)尼龍木柱。對(duì)于細(xì)胞分裂分析，用羧基熒光素琥珀 酰亞胺酯（SCFE)對(duì)純化的T細(xì)胞進(jìn)行染色。標(biāo)記的細(xì)胞(0.5 X105/孔)在96-孔板中以一式 三份用200μ1完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，并在存在或不存在前述測(cè)試化合物的情況下用固定的0KT3 (lμg/ml)刺激6天，增殖的細(xì)胞(定義為CFSE低熒光性）的百分比通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)確定。圖2 中表示了測(cè)試化合物的抑制能力。
[0107] 這些測(cè)定方法使能夠評(píng)價(jià)和確認(rèn)化合物抑制T細(xì)胞增殖的能力，因此，有助于證實(shí) 這樣的化合物是用于開(kāi)發(fā)治療由T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病的新療法的候選物。
[0108] 實(shí)施例3:1型糖尿病模型的體內(nèi)測(cè)試
[0109] 每天監(jiān)測(cè)糖尿病的發(fā)展，并在對(duì)RIP-M0VA模型每天進(jìn)行或?qū)0D模型每?jī)芍芤淮?進(jìn)行的兩次連續(xù)測(cè)量中檢測(cè)到葡糖尿水平高于250mg/dl的情況下將該發(fā)展記錄為陽(yáng)性。治 療對(duì)疾病發(fā)生率和存活率的影響在如用于胰島炎的RIP-M0VA模型中進(jìn)行了評(píng)價(jià)。對(duì)浸泡在 石蠟中并固定在福爾馬林中的切片H&E的胰島炎的組織病理學(xué)評(píng)價(jià)通過(guò)使用如下分類系統(tǒng) 通過(guò)盲測(cè)進(jìn)行評(píng)估:〇級(jí)，無(wú)侵入；1級(jí)，胰島周圍炎(periinsulitis) ;2級(jí)，侵入>25% ;3級(jí)， 侵入>75%;以及4級(jí)，剩下的胰島。在第二階段，通過(guò)對(duì)已經(jīng)患糖尿病的RIP-mOVA小鼠的治 療來(lái)評(píng)價(jià)化合物的治療效果。在該第二階段過(guò)程中，在N0D小鼠模型中測(cè)試化合物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、異構(gòu)體或溶劑化物，其中：Ri選自氫、取代或未取代的&-C6烷基、取代或未取代的C3-C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳 基或取代或未取代的雜芳基、-CORs、-C (0) 0R5、-C (0) NR5R6、-CNR5; X選自-OH或-NR2R3; R2和R3獨(dú)立地選自氫、取代或未取代的&-C6烷基、取代或未取代的C3-C 6環(huán)烷基、取代或 未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、-COR?、-C (0) OR?、-C (0) NR7R8、-CNR?、-0R7、-NR7R8和-NR7C(0)R8； 或者，R2和R3與它們所結(jié)合的氮原子一起形成取代或未取代的雜環(huán)； R4為鹵素； Rs、R6、R7和Rs獨(dú)立地選自氫、&-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基、雜芳基和鹵素。2. 式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、異構(gòu)體或溶劑化物，其中：Ri選自氫、取代或未取代的&-C6烷基、取代或未取代的C3-C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳 基或取代或未取代的雜芳基、-CORs、-C (0) 0R5、-C (0) NR5R6、-CNR5; R2和R3獨(dú)立地選自氫、取代或未取代的&-C6烷基、取代或未取代的C3-C 6環(huán)烷基、取代或 未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、-COR?、-C (0) OR?、-C (0) NR7R8、-CNR?、-0R7、-NR7R8和-NR7C(0)R8； 或者，R2和R3與它們所結(jié)合的氮原子一起形成取代或未取代的雜環(huán)； R4為鹵素； R5、R6、R7和Rs獨(dú)立地選自氫、&-C4烷基、c3-c6環(huán)烷基、芳基、雜芳基和鹵素。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)所述的化合物，其中Ri為取代或未取代的&-C4烷基。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中Ri為-CH3。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中Ri為被C3-C6環(huán)烷基取代的&-C4烷基。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的式(I)的化合物，其中Ri為基團(tuán)-CH2-環(huán)丙基。7. 根據(jù)權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R2為H。8. 根據(jù)權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R3為取代或未取代的&-C4烷基。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物，其中R3為-CH2-CH3基團(tuán)。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物，其中R3為被-NR'R"基團(tuán)取代的Q-C4烷基，其中R'和 R 〃獨(dú)立地選自烷基。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，其中R3為-CH2-CH2-N(CH 3)2基團(tuán)。12. 根據(jù)權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R#PR3形成取代或未取代的飽和五 元雜環(huán)。13. 根據(jù)權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R#PR3形成取代或未取代的飽和六 元雜環(huán)。14. 根據(jù)權(quán)利要求12或13中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述飽和雜環(huán)上至少一個(gè)位置 被&_〇4烷基取代。15. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物，其中所述飽和六元雜環(huán)包含插入的另外的未取代 或被&-C4烷基取代的N原子。16. 根據(jù)權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R3為包含插入的另外的未取代或被 &-C4烷基取代的N原子的飽和六元雜環(huán)。17. 根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R4為氟。18. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的式(I)的化合物，選自如下系列： -(4-(4-氟苯基)-6-甲氧基-2H-色烯-3-基）（吡咯烷-1-基）甲酮， -N-乙基-4-(4-氟苯基)-6-甲氧基-2H-色烯-3-甲酰胺， -(4-(4-氟苯基)-6-甲氧基-2H-色烯-3-基）（4-甲基哌嗪-1-基）甲酮， -N-(2-(二甲基氨基）乙基)-4-(4-氟苯基)-6-甲氧基-2H-色烯-3-甲酰胺， -(6-(環(huán)丙基甲氧基)-4-(4-氟苯基)-2H-色烯-3-基）（吡咯烷-1-基）甲酮， -6-(環(huán)丙基甲氧基)-N-乙基-4- (4-氟苯基)-2H-色烯-3-甲酰胺，和 -(6-(環(huán)丙基甲氧基)-4-(4-氟苯基)-2H-色烯-3-基）（4-甲基哌嗪-1-基）甲酮， -(6-(環(huán)丙基甲氧基)-4-(4-氟苯基)-2H-色烯-3-基）（吡咯烷-1-基）甲酮， -6-(環(huán)丙基甲氧基)-N-乙基-4-(4-氟苯基)-2H-色烯-3-甲酰胺， -(6-(環(huán)丙基甲氧基)-4-(4-氟苯基)-2H-色烯-3-基）（4-甲基哌嗪-1-基）甲酮， -6-(環(huán)丙基甲氧基)-N-(2-(二甲基氨基）乙基)-4-(4-氟苯基)-2H-色烯-3-甲酰胺。19. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中X為-OH。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物，其為4-(4-氟苯基)-6-甲氧基-2H-色烯-3-羧酸。21. 根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的式(I)的化合物用于制備藥物的用途。22. 根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的式（I)的化合物用于制備用于治療由T淋巴細(xì) 胞中的TCR-Nck相互作用介導(dǎo)的疾病或病癥的藥物的用途。23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的用途，其中所述由T淋巴細(xì)胞中的TCR-Nck相互作用介導(dǎo)的 疾病或病癥選自：移植排斥，免疫性、自身免疫性和炎性疾病，神經(jīng)變性疾病，血液病和增生 性疾病。24. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中所述由T淋巴細(xì)胞中的TCR-Nck相互作用介導(dǎo)的 疾病或病癥選自：移植排斥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀肩病關(guān)節(jié)炎、銀肩病、I型糖尿病、與糖尿病 相關(guān)的并發(fā)癥、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、特應(yīng)性皮炎、肥大細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性反應(yīng)、白 血病、淋巴瘤以及與白血病和淋巴瘤相關(guān)的血栓栓塞性和過(guò)敏性并發(fā)癥。25. -種藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的式（I)的化合物和一種 或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。26. 用于獲得根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的式（I)的化合物的方法，包括如下步 驟： a) 使式(III)的化合物與式(IV)的化合物和式(V)的化合物反應(yīng)，其中，fo、X和R4的含義與權(quán)利要求1中的含義相同，以及 b) 以一個(gè)或多個(gè)步驟將式(III)的化合物轉(zhuǎn)化為另一種式(I)的化合物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一組式(I)的化合物，所述化合物包含色烯核并且能夠抑制由于TCR-Nck相互作用造成的淋巴細(xì)胞增殖，本發(fā)明還涉及這些化合物用于治療其中前述相互作用觸發(fā)并發(fā)癥的疾病或病癥如移植排斥反應(yīng)、免疫性或自身免疫性疾病、炎性疾病或增生性疾病的用途。
【IPC分類】A61P29/00, A61P35/00, A61K31/352, A61K31/4523, C07D405/06, A61K31/496, C07D311/60, A61K31/4025
【公開(kāi)號(hào)】CN105636943
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480057187
【發(fā)明人】安德烈斯·加赫特·馬特奧斯, 胡利奧·卡斯特羅·帕羅米諾, 盧克·馬蒂·克洛澤爾, 達(dá)米亞·托爾莫·卡魯利亞
【申請(qǐng)人】阿塔克斯生物制藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年6月1日
【申請(qǐng)日】2014年10月20日
【公告號(hào)】CA2925863A1, WO2015056086A1