一種從印度防己中提取、分離和純化印防己苦內(nèi)酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥用植物領(lǐng)域，一種從印度防己中提取、分離和純化印防己苦內(nèi)酯的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]印防己苦內(nèi)酯(Picroxin)是從防己科植物印度防Amamirta cocculus L.(Cocculus indicus)種子的提取出來的一種化合物，熔點(diǎn)248?250°C，分子式C15H18O7,藥理研究表明，印防己苦內(nèi)酯具有中樞興奮和解毒作用(動物試驗)。目前，國內(nèi)外對印防己苦內(nèi)酯的研究較少，尚未檢索到制備印防己苦內(nèi)酯的方法報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的在于提供一種印防己苦內(nèi)酯的制備方法，以填補(bǔ)該化合物制備方法的空白。
[0004]本發(fā)明的目的主要通過以下技術(shù)過程來實(shí)現(xiàn):
具體步驟如下:
(I)乙醇提取:印度防己切片，曬干，用粉碎機(jī)粉碎5kg，得到印度防己粉末，過20目篩，將印度防己粉末于紗布袋中包住，在60 0C水浴中用200mL 60-95%的乙醇回流提取6_12h，收集印度防己乙醇提取液。減壓除去部分乙醇，得到浸膏適量，待用。
[0005](2)D101大孔樹脂富集:將DlOl型大孔樹脂采用濕法裝柱(樹脂量以濕體積計為200-300mL，徑高比為1: (10-15))，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸餾水脫出至無醇味，備用。稱取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，經(jīng)200?500mL的60?95%乙醇充分溶解后，向其中加入80?150mL水，靜置過夜。將靜置后的藥液抽濾(0.22μπι的濾膜)，減壓回收上清液中的乙醇除凈，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔樹脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫，分段收集洗脫液。用HPLC進(jìn)行分析，確定選用90-100%甲醇洗脫液作為印度防己粗提物，待分離。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分離純化的印度防己粗提物。
[0006](3 )高速逆流色譜進(jìn)行分離和純化:用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的兩相溶劑體系，充分搖勻后，室溫靜置過夜。兩相溶劑分配達(dá)到平衡后，按上相和下相分開放入棕色廣口瓶中，超聲脫氣20min，備用。準(zhǔn)確稱取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超聲溶解，得到16.7g/L的樣品溶液，備用。將兩相溶劑系統(tǒng)中已超聲脫氣的上相為固定相，下相為流動相，以10?25mL/min的速度栗入高速逆流色譜分離管中，待上相充滿分離管后，順時針旋轉(zhuǎn)，緩慢均勻調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速至600?900r/m in，同時以1.5mL/min的速度將下相注入其中，待兩相平衡，將適量印度防己粗提物溶液注入分離管中，采集數(shù)據(jù)，按照色譜峰收集目標(biāo)成分。
[0007]所述步驟(2)中用到的大孔樹脂是經(jīng)過預(yù)處理的。
[0008]所述步驟(2)用DlOl型大孔樹脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫時，甲醇的濃度是逐漸遞增的。
[0009]所述步驟(3)用到的溶劑系統(tǒng)石油醚-氯仿-甲醇-水的體積比為(3-6):(2-9):(1-7):(3-8)o
[0010]該發(fā)明所說的一種從印度防己中提取、分離和純化印防己苦內(nèi)酯的方法的優(yōu)勢在于:
本發(fā)明(I)先用大孔樹脂有效成分進(jìn)行富集，降低了后續(xù)工序的處理量；(2)采用高速逆流色譜進(jìn)行分離和純化，不僅實(shí)現(xiàn)了連續(xù)化作業(yè)、動態(tài)逆流提取，且提高了有效成分的得率。
[0011]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的解釋。
[0012]實(shí)例I
印度防己切片，曬干，用粉碎機(jī)粉碎5kg，得到印度防己粉末，過20目篩，將印度防己粉末于紗布袋中包住，在60°C水浴中用200mL 75%的乙醇回流提取1h，收集印度防己乙醇提取液。減壓除去部分乙醇，得到浸膏適量，待用。將DlOl型大孔樹脂采用濕法裝柱(樹脂量以濕體積計為200mL，徑高比為1:12)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸餾水脫出至無醇味，備用。稱取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，經(jīng)200mL的75%乙醇充分溶解后，向其中加入150mL水，靜置過夜。將靜置后的藥液抽濾(0.22μπι的濾膜)，減壓回收上清液中的乙醇除凈，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔樹脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫，分段收集洗脫液。用HPLC進(jìn)行分析，確定選用90-100%甲醇洗脫液作為印度防己粗提物，待分離。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分離純化的印度防己粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的兩相溶劑體系，充分搖勻后，室溫靜置過夜。兩相溶劑分配達(dá)到平衡后，按上相和下相分開放入棕色廣口瓶中，超聲脫氣20min，備用。準(zhǔn)確稱取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超聲溶解，得到16.7g/L的樣品溶液，備用。將兩相溶劑系統(tǒng)中已超聲脫氣的上相為固定相，下相為流動相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色譜分離管中，待上相充滿分離管后，順時針旋轉(zhuǎn)，緩慢均勻調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速至700r/m in，同時以1.5mL/min的速度將下相注入其中，待兩相平衡，將適量印度防己粗提物溶液注入分離管中，采集數(shù)據(jù)，按照色譜峰收集目標(biāo)成分。HPLC檢測含量為97.8%ο
[0013]實(shí)例2
印度防己切片，曬干，用粉碎機(jī)粉碎5kg，得到印度防己粉末，過20目篩，將印度防己粉末于紗布袋中包住，在60°C水浴中用200mL 85%的乙醇回流提取6-12h，收集印度防己乙醇提取液。減壓除去部分乙醇，得到浸膏適量，待用。將DlOl型大孔樹脂采用濕法裝柱(樹脂量以濕體積計為250mL，徑高比為1:10)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸餾水脫出至無醇味，備用。稱取上述印度防己乙醇提取物浸膏50g，經(jīng)300mL的85%乙醇充分溶解后，向其中加入10mL水，靜置過夜。將靜置后的藥液抽濾(0.22μπι的濾膜)，減壓回收上清液中的乙醇除凈，所得的印度防己水溶液，用DlOl型大孔樹脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫，分段收集洗脫液。用HPLC進(jìn)行分析，確定選用90-100%甲醇洗脫液作為印度防己粗提物，待分離。按上述方法共得到印度防己乙醇提取物浸膏80g，得到待分離純化的印度防己粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的兩相溶劑體系，充分搖勻后，室溫靜置過夜。兩相溶劑分配達(dá)到平衡后，按上相和下相分開放入棕色廣口瓶中，超聲脫氣20min，備用。準(zhǔn)確稱取印度防己粗提物5.5g溶解于下相中，超聲溶解，得到16.7g/L的樣品溶液，備用。將兩相溶劑系統(tǒng)中已超聲脫氣的上相為固定相，下相為流動相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色譜分離管中，待上相充滿分離管后，順時針旋轉(zhuǎn)，緩慢均勻調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速至700r/m in，同時以1.5mL