一種從杜仲提取環(huán)橄欖樹脂素9-糖苷的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體設及杜仲中木脂素類化合物制備方法。
【背景技術】
[0002] 杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)為杜仲科植物杜仲的干燥樹皮。杜仲被譽為"活 化石植物"，藥用歷史悠久，《神農本草經》將其列為上品，謂其"主治腰膝痛，補中，益精氣， 堅筋骨，除陰下癢濕，小便余漸。久服，輕身耐老。"杜仲是我國傳統(tǒng)名貴滋補中藥，用于補肝 腎，強筋骨。
[0003] 杜仲中已見文獻報道的化學成分包括木脂素類、環(huán)締酸祗類、苯丙素類、黃酬類等 共約200個化學成分。木脂素類化合物是杜仲化學成分中研究最多、成分最明確、結構最清 晰的一類化合物，已分離得到的大多是雙四氨巧喃類化合物。迄今為止，從杜仲中分離出來 的木脂素類化合物有44個，多為巧類化合物，其糖基均為β-D-葡萄糖。結構類型多為雙環(huán)氧 木脂素（bisepoxylignans,即雙四氨巧喃類），如松脂醇二葡萄糖巧、下香脂二葡萄糖巧 等，另外還有少量單環(huán)氧木脂素(monoepo巧lignans)、新木脂素(neolignans)、倍半木脂素 (sesqiulignans)和環(huán)木脂素（。7(：1〇11肖]1日]13)等。目前未見從杜仲中分離得到環(huán)橄攬樹脂 素9-糖巧的相關報道。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是根據上面所述缺陷，提供一種提取率高的從杜仲提取環(huán)橄攬樹脂 素9-糖巧的方法。
[0005] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素 9-糖巧，具有如下結構：
[0006] -種杜仲提取環(huán)橄攬樹脂素 9-糖巧的方法，其特征在于，依次通過W下步驟制備 得到： (1) 杜仲經溶劑提取法，采用50%-95%的乙醇或甲醇提取，減壓回收提取液，得粗提物； (2) 取步驟(1)所得的粗提物，用蒸饋水溶解后靜置，離屯、，取上清液； (3) 取步驟(2)所得的上清液用石油酸萃取，棄去石油酸萃取液，剩余水溶液減壓濃縮 得浸膏； (4) 取步驟(3)所得的浸膏經大孔吸附樹脂分離，W蒸饋水和70%-95%的乙醇洗脫，乙醇 洗脫液經減壓濃縮得乙醇洗脫物； 巧)取步驟(4)所得的乙醇洗脫物經硅膠柱色譜法分離，W氯仿/甲醇混合溶劑梯度洗 脫； (6) 取步驟巧）中所得流分經ODS柱色譜法分離，W甲醇/水或乙醇/水混合溶劑梯度洗 脫； (7) 取步驟(6)中所得流分經MCI柱色譜法分離，W甲醇/水或乙醇/水混合溶劑梯度洗 脫； (8) 取步驟口）中所得流分經S邱hadex LH-20色譜法分離，W甲醇/水或乙醇/水混合溶 劑洗脫，得環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧粗品； (9) 取步驟(8)中所得環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧粗品經半制備或制備型HPLC色譜分離，W甲 醇/水，乙臘/水或甲醇/乙臘/水為流動相洗脫，得到環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧。
[0007] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟(3)石油酸與上清液體積比 為1:3~3:1，萃取次數為2~5次。
[0008] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟(4)大孔吸附樹脂分離時， 浸膏與蒸饋水的重量體積比為1:20~1:30;浸膏與乙醇的重量體積比為1:10~1:40。
[0009] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟巧)洗脫溶劑為1:0~20:1 的氯仿/甲醇。
[0010] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟(6)洗脫溶劑為1:9~4:0的 甲醇/水或乙醇/水。
[0011] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟(7)洗脫溶劑為1:10~4:0 的甲醇/水或乙醇/水。
[0012] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟(8)洗脫溶劑為1:10~2:1 的甲醇/水或乙醇/水。
[0013] 本發(fā)明提供的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的制備方法中步驟(9)流動相為甲醇/水、乙 臘/水或甲醇/乙臘/7心從甲醇/水混合溶劑比例為1:10~1:0、乙臘/水混合溶劑比例1:20 ~1:0的流分中得到環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了杜仲中環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的提取方法。該 方法得到了純度大于98%的環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧，提取率高。
【具體實施方式】
[001引下面的實施例將對本發(fā)明予W進一步的說明，但并不因此刪良制本發(fā)明。
[0016] 實施例1。
[0017] (1)杜仲藥材20kg，分別加入的95%乙醇，加熱回流提取3次，每次2小時，減壓回收 提取液，得乙醇粗提物。
[0018] (2)乙醇粗提物加50L蒸饋水，溶解后靜置12小時，轉速5000 rpm離屯、后得褐色粘 稠沉淀和澄清上清液，褐色沉淀棄去。
[0019] (3)向步驟(2)中澄清上清液中加入等體積石油酸，充分攬勻后，靜置12小時，取出 上清液，再向剩余的澄清溶液中加入等體積石油酸，重復上述操作二次，石油酸萃取液棄 去。剩余的澄清溶液減壓濃縮，得浸膏2.化g。
[0020] (4)取步驟(3)中浸膏2.化g經大孔吸附樹脂HPD 100分離，用50L蒸饋水洗脫，蒸饋 水洗脫液棄去。然后用60 L 95%乙醇洗脫，洗脫液經減壓濃縮后，得乙醇洗脫物。
[0021] (5)取步驟(4)中乙醇洗脫物，經硅膠柱色譜法分離，用氯仿：甲醇分別為1:0,20: 1，10:1，7:1，5:1，2:1，1:1進行梯度洗脫。
[0022] (6)取步驟巧）中W氯仿：甲醇為7:1洗脫所得流分，經0DS柱色譜法分離，用甲醇： 水分別為1:9，1:4,2:3,3:2,4:1，1:0進行梯度洗脫。
[0023] (7)取步驟(6)中甲醇:水為1:4洗脫所得流分，經MCI柱色譜法分離，用甲醇:水分 別為1:9，1:4,2:3,3:2,4:1，1:0進行梯度洗脫。
[0024] (8)取步驟(7)中甲醇：水為2:3洗脫所得流分，經S邱hadex LH-20柱色譜法分離， 用甲醇:水為3:7進行洗脫，得環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧粗品。
[00巧](9)環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧粗品經制備HPLC色譜分離，W甲醇:水為28:72等度洗脫， 流速為2ml/min，在保留時間18分鐘得到環(huán)橄攬樹脂素4 ' -糖巧2.15g，純度為98.3%。
[00%]環(huán)橄攬樹脂素9-糖巧的結構鑒定數據如下： 白色粉末，Molisch反應呈陽性，酸水解檢出D-葡萄糖。IR化化）cnfi: 3391,2936， 1605，1514，1450，1371，1256，1155，1076，1031，861，775,630,580,533。UV λ"3χ (C曲OH) nm: 207,284。冊 ESI MS m/z: 561.1955 ([M+Na] +，C2抽34化〇12，Calcd 561.1948)， 573.1742 ([M+Cl]-，C26出4CIO12，Calcd 573.1739)。
[0027] 1h NMR ( 600 MHz, MeOD) δ: 6.80 ( IH, d, J = 1.9 Hz, H-2)，6.76 ( IH, d, J = 7.9 Hz, H-5 )