一種液體中細菌的計數(shù)方法
【技術領域】
[0001 ]本發(fā)明涉及一種液體中的粒子計數(shù)方法，具體涉及一種液體中細菌的計數(shù)方法。
【背景技術】
[0002]細菌是自然界分布最廣、個體數(shù)量最多的生命體，是構成自然界物質循環(huán)的主要部分;按照基本形態(tài)可分為球菌、桿菌和螺旋菌等。細菌廣泛分布于環(huán)境中，人體身上也帶有相當多的細菌;據(jù)估計，人體內及表皮上的細菌細胞總數(shù)約是人體細胞總數(shù)的十倍;細菌對環(huán)境、人類和動物既有用處又有危害，一些細菌作為病原體，可以導致霍亂、肺結核等疾病，也會導致植物產生疾病;細菌對人類的活動有很大的影響，例如酸奶的制作、抗生素的制造、廢水的處理等，都與細菌有關，細菌在生物技術領域，也有廣泛的應用；另外，某些細菌在環(huán)境監(jiān)測、食品安全以及醫(yī)療衛(wèi)生等領域也是重要檢測指標，例如大腸桿菌的檢測;傳統(tǒng)的檢測細菌的方法，例如涂布計數(shù)法，發(fā)酵法等方法操作復雜、耗時長并且誤差大。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明提供一種易于操作、快速和成本低的液體中細菌的計數(shù)方法。
[0004]本發(fā)明采用的技術方案是:一種液體中細菌的計數(shù)方法，包括如下步驟:
[0005]取需要檢測的溶液，選擇三個連續(xù)級的10倍稀釋梯度，得到三個稀釋度溶液；
[0006]從每個稀釋度溶液中分別取三份樣品得到AlA^A3,形成液滴后逐滴滴下；
[0007]用激光束從液滴一側射入，從液滴中射出形成投影；
[0008]獲取每滴溶液的投影圖像，對投影圖像采用模式識別判斷是否有細菌，采用MPN計數(shù)方法計算細菌數(shù)量。
[0009]進一步的，將液滴逐滴滴到超疏水材料上，激光束從液滴上部射入，分別進行投影。
[0010]進一步的，所述液滴采用蠕動栗通過導管將水樣抽出形成。
[0011 ]進一步的，所述液滴通過注射器形成。
[0012]進一步的，所述激光束為可見光激光。
[0013]進一步的，所述MPN計數(shù)方法步驟如下:
[0014]每個液滴中有細菌標記為+，沒有細菌標記為-;
[0015]每個稀釋度的三份樣品HA3中存在+，記為I，沒有+，記為O;
[0016]將每個稀釋度的三份樣品的標記相加，為該稀釋度的標記；
[0017]將三個稀釋度的標記按順序排列，形成一組三位數(shù)，檢索MPN表中的排列查每毫升中細菌數(shù)量。
[0018]進一步的，操作過程在黑暗的環(huán)境中進行。
[0019]進一步的，獲取投影圖像之前，調整激光光束的位置，待細菌移動到液滴中央位置時，再獲取投影圖像。
[0020]進一步的，所述超疏水材料由四甲硅烷和含氟硅氧烷負載在玻璃上構成。
[0021]進一步的，溶液進行稀釋之前，在溶液中添加細菌染色劑或者添加納米粒子。
[0022](I)本發(fā)明不需要進行細菌培養(yǎng)，結合微生物檢測和光學現(xiàn)象，檢測過程簡單、分析過程快速；
[0023](2)本發(fā)明采用的設備結構簡單、成本低，可以對水樣給出定性定量結果；
[0024](3)本發(fā)明可以快速、準確識別不同細菌，方法操作簡單，適用于大范圍檢測。
【附圖說明】
[0025]圖1為本發(fā)明水樣的處理方法。
[0026]圖2為本發(fā)明具體實施例一的結構示意圖。
[0027]圖3為本發(fā)明具體實施例二的結構示意圖。
[0028]圖4為本發(fā)明具體實施例三的結構示意圖。
[0029]圖中:1-激光發(fā)生器，2-液滴，3-細菌，4-屏幕，5-拍照裝置，6_處理裝置，7_超疏水材料，8-注射器，9-蠕動栗。
【具體實施方式】
[0030]下面結合附圖和具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0031 ] 一種液體中細菌的計數(shù)方法，包括如下步驟:
[0032]取需要檢測的溶液，選擇三個連續(xù)級的10倍稀釋梯度，得到三個稀釋度溶液；
[0033]從每個稀釋度溶液中分別取三份樣品得到AlA^A3,形成液滴后逐滴滴下；
[0034]用激光束從液滴一側射入，從液滴中射出形成投影；
[0035]獲取每滴溶液的投影圖像，對投影圖像采用模式識別判斷是否有細菌，采用MPN計數(shù)方法計算細菌數(shù)量。
[0036]進一步的，將液滴逐滴滴到超疏水材料上，激光束從液滴上部射入，分別進行投影;超疏水材料的表面與水的接觸角大于150°，滾角小于10°的特性，將水樣滴在超疏水材料表面，液滴形成一個球狀液滴并保持其形狀不變。
[0037]進一步的，所述液滴采用蠕動栗通過導管將水樣抽出形成;蠕動栗可以控制出水速度以及出水量，利用蠕動栗通過導管將水樣抽出，水樣從導管另一頭緩慢流出形成液滴，可以維持其形狀不變。
[0038]進一步的，所述液滴通過注射器形成;將注射器倒置，緩慢推動活塞擠出水樣，從針頭流出的水樣形成液滴懸掛于針頭，并維持其形狀不變。
[0039]形成液滴的方式并不僅限于上述三種方式還可以采用模板法，即在透明材質上形成球孔，將液體注入形成球滴。
[0040]進一步的，所述激光束為可見光激光，一般采用波長為532nm的激光，也可以采用波長較小的綠光激光，能夠減小衍射現(xiàn)象。
[0041]進一步的，操作過程在黑暗的環(huán)境中進行，能夠保證拍攝出的圖片更加清晰。
[0042]每個稀釋度均取三份樣品AlA^A3分別檢測;可以提高測試的精度。
[0043]進一步的，所述MPN計數(shù)方法步驟如下:
[0044]每個液滴中有細菌標記為+，沒有細菌標記為
[0045]每個稀釋度的三份樣品HA3中存在+，記為I，沒有+，記為O;
[0046]將每個稀釋度的三份樣品的標記相加，為該稀釋度的標記；
[0047]將三個稀釋度的標記按順序排列，形成一組三位數(shù)，檢索MPN表中的排列查每毫升中細菌數(shù)量。
[0048]進一步的，獲取投影圖像之前，調整激光光束的位置，待細菌移動到液滴中央位置時，再獲取投影圖像。
[0049]進一步的，所述超疏水材料由四甲硅烷和含氟硅氧烷負載在玻璃上構成。
[0050]進一步的，溶液進行稀釋之前，在溶液中添加細菌染色劑或者添加納米粒子;將細菌進行染色或者采用納米粒子對細菌進行標記可以使得投影圖像更加清晰。
[0051]根據(jù)水樣中細菌的污染程度大致濃度確定稀釋倍數(shù)，水樣可以是任意體液(血液、尿液和唾液)，也可以是環(huán)境水樣，甚至是食品等液體;譬如唾液，那么用棉簽沾取，溶解在生理鹽水中，然后按照本發(fā)明的方法進行處理;血液、生理鹽水稀釋，都可以按本發(fā)