miRNA在制備藥物性心臟病生物標(biāo)志物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是設(shè)及一種miRNA(microRNA化制備藥物性屯、臟 病生物標(biāo)志物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 廣義而論，凡由于藥物直接或間接的屯、肌毒性所導(dǎo)致的屯、臟病變，無論是因藥物 對屯、肌電生理的影響而引起的屯、肌除極和復(fù)極的異?；蚋鞣N屯、律失常，或屯、肌的收縮性因 藥物的毒性作用而受到抑制，進(jìn)而誘發(fā)或加重的屯、力衰竭，或因?qū)δ撤N藥物過敏而導(dǎo)致屯、 肌炎、屯、包炎，均可稱之為藥物性屯、臟病(化ug-induced head diseases)。與其他藥源性 疾病一樣，藥物性屯、臟病可由于藥物本身、用藥的醫(yī)師和受治的病人=方面的原因所促成， 但通常藥物本身和藥物相互作用是引起病變的主導(dǎo)因素。藥物累及屯、臟者主要是對屯、肌的 損害，但少數(shù)藥物也累及屯、包和屯、內(nèi)膜。
[0003] 雷公藤(Tripterygium Wil打dii化ok.f.)又名黃藤、黃藤木、典蠟藤、斷腸草等， 屬于衛(wèi)茅科木質(zhì)藤本植物。其英文名：Common Threewingnut Root,拉下名：Radix Tripterygii Wilfordii Tripterygium wilfordii HooK.f。文獻(xiàn)資料記載其味苦、辛，性 涼，大毒，歸肝、腎經(jīng)。具有桂風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、消腫止痛、殺蟲解毒等功效。雷公藤的根、 頸、葉均可作為藥用，主要藥用部位為其根。臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，雷公藤制劑治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié) 炎的機(jī)制與皮質(zhì)激素類相似，但沒有激素類的副作用，耐受性好，臨床應(yīng)用前景廣闊。然而 近年來的研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤可導(dǎo)致中毒性屯、肌炎，引起屯、肌傳導(dǎo)障礙，嚴(yán)重者可出現(xiàn)屯、源性 休克和屯、力衰竭。在各種雷公藤制劑導(dǎo)致的急性中毒性屯、肌損害中，又W雷公藤甲素引起 的屯、肌損害最為嚴(yán)重。
[0004] 生物標(biāo)志物(Biomarker)是指可W標(biāo)記系統(tǒng)、器官、組織、細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)或功 能的改變或可能發(fā)生的改變的生化指標(biāo)，具有非常廣泛的用途。生物標(biāo)志物可用于疾病診 斷、判斷疾病分期或者用來評價新藥或新療法在目標(biāo)人群中的安全性及有效性。目前臨床 上診斷屯、功能的生化指標(biāo)已被廣泛應(yīng)用于藥物屯、臟毒性的檢測。其中，屯、肌肌巧蛋白I (CTnI)是一種屯、肌細(xì)胞所特有的，僅存在于屯、室肌和屯、房肌中的蛋白。CTnI的分子量為 2化U，血清半衰期為化左右。C化I在屯、肌內(nèi)約有3 %~6 % W游離形式存在于胞漿中，其余 部分則W結(jié)合形式存在于肌原纖維中。正常人血清中CTn I的含量很少，在急性屯、肌梗塞 (AMI)發(fā)病后，血清CTn I多于3~化開始升高，10~2地達(dá)高峰，5~7d恢復(fù)正常。與屯、肌肌酸 激酶MB (CK-MB)相比，C化I在屯、肌中含量較多，分子量偏小，屯、肌損傷后易在血清中被測 出，故而其較為敏感，可用于檢出屯、肌的微小損傷。
[0005] miRNA(microRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼單鏈小分子RNA，約22個核巧酸長度，通 過識別特定的目標(biāo)mRNA，與勒ImRNA的3'非翻譯區(qū)（3' -unhanslated region，3' -UTR)互補(bǔ) 配對，進(jìn)行蛋白翻譯抑制或降解HiRNAnmiRNA廣泛參與機(jī)體的生長發(fā)育、細(xì)胞的代謝、增殖、 分化和調(diào)亡，參與了肝損傷、腫瘤形成、屯、血管疾病等多種病理過程。因此，正常機(jī)體內(nèi) miRNA的變化也指示著機(jī)體正常生理功能的改變，乃至病變的發(fā)生。已有700多種miRNA被發(fā) 現(xiàn)，收載于miRBase數(shù)據(jù)庫，目前miRNA已成為生命科學(xué)界研究的熱點(diǎn)。已有研究人員對腫 瘤、屯、腦血管疾病等多種病癥進(jìn)行了 WmiRNA為診斷指標(biāo)和治療祀點(diǎn)為目的的研究，并取得 了一些進(jìn)展。由于血漿、組織等生物樣本中的miRNA在室溫、高溫、不同pH、多次凍融后仍能 檢測到，并且含量變化不大，而此時大多數(shù)RNA、蛋白質(zhì)、酶都會降解、失活，因此miRNA的穩(wěn) 定性;快速、高通量的miRNA忍片檢測技術(shù);miRBase數(shù)據(jù)庫的日益完善，為其作為屯、肌毒性 生物標(biāo)志物進(jìn)行檢測提供了可能。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的旨在提供一種miRNA在制備藥物性屯、臟病生物標(biāo)志物中的用途。
[0007] 如本發(fā)明所用，大鼠的miR-15a-化是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其 堿基序列為：5 ' -AGGCCAUAUUGUGCUGCCUCA-3 '（沈Q ID No. 1)。
[000引大鼠的miR-483-3p是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其堿基序列為： 5'-CACUCCUCCCCUCCCGUCUUGU-3'(SEQ ID No.2)0
[0009] 大鼠的miR-127-5p是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其堿基序列為： 5'-CUGAAGCUCAGAGGGCUCUGAUU-3'(沈Q ID No.3)。
[0010] 大鼠的miR-615是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其堿基序列為：5'-GGGGGUCCCCGGUGCUCGGAUC-3'(SEQ ID No.4)〇
[0011] 具體地說，本發(fā)明的第一方面是提供了 miR-15a-化在制備檢測雷公藤或雷公藤提 取物導(dǎo)致的屯、肌損傷的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-15a-化的堿基序列如SEQ ID No. 1 所示，且所述雷公藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素為活性成分。
[0012] 本發(fā)明的第二方面是提供了 miR-615在制備檢測雷公藤或雷公藤提取物導(dǎo)致的屯、 肌損傷的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-615的堿基序列如SEQ ID No. 2所示，且所述雷公 藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素為活性成分。
[0013] 本發(fā)明的第S方面是提供了 miR-127-5p在制備檢測雷公藤或雷公藤提取物導(dǎo)致 的屯、肌損傷的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-127-5p的堿基序列如SEQ ID No.3所示，且所 述雷公藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素為活性成分。
[0014] 本發(fā)明的第四方面是提供了 miR-483-化在制備檢測雷公藤或雷公藤提取物導(dǎo)致 的屯、肌損傷的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-483-化的堿基序列如SEQ ID No. 4所示，且所 述雷公藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素為活性成分。
[0015] 在一優(yōu)選例中，所述雷公藤或雷公藤提取物的用量不會引起血漿屯、肌肌巧蛋白-I 的濃度變化。
[0016] 本發(fā)明的第五方面是提供了 miR-15a-化在制備檢測雷公藤甲素導(dǎo)致的屯、肌損傷 的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-15a-化的堿基序列如SEQ ID No. 1所示。
[0017] 本發(fā)明的第六方面是提供了 miR-615在制備檢測雷公藤甲素導(dǎo)致的屯、肌損傷的生 物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-615的堿基序列如SEQ ID No.2所示。
[0018] 本發(fā)明的第屯方面是提供了 miR-127-5p在制備檢測雷公藤甲素導(dǎo)致的屯、肌損傷 的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述11111?-127-59的堿基序列如56〇10齡.3所示。
[0019]本發(fā)明的第八方面是提供了 miR-483-3p在制備檢測雷公藤甲素導(dǎo)致的屯、肌損傷 的生物標(biāo)志物中的應(yīng)用，所述miR-483-化的堿基序列如SEQ ID No.4所示。
[0020] 在一優(yōu)選例中，所述雷公藤甲素的用量不會引起血漿屯、肌肌巧蛋白-I的濃度變 化。
[0021] 本發(fā)明各個方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得W詳盡描述。通過下文W及權(quán)利要求 的描述，本發(fā)明的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢將更為明顯。
【附圖說明】
[0022] 圖1為用雷公藤甲素0.1毫克/公斤體重灌胃14天，大鼠屯、肌組織的形態(tài)變化化E染 色）
[0023] 圖2為用屯、肌肌巧蛋白-I試劑盒測定不同劑量雷公藤甲素給大鼠灌胃14天，屯、肌 肌巧蛋白-I的濃度
[0024] 圖3為用雷公藤甲素0.1毫克/公斤體重灌胃，實(shí)時定量RT-PCR測定血漿中11111?魁-615、miRNA-l 27-5p、miR-l 5a-化和 miR-483-化的表達(dá)動態(tài)變化
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，運(yùn)些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中所使用的試劑和原料均可通過商業(yè)途徑購買 獲得。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建 議的條件。
[0026] 除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相