α-咔啉類化合物，其制備方法以及用圖
【專利摘要】本發(fā)明提供了一類α-咔啉類化合物，其制備方法以及用途，具體地，本發(fā)明提供了一類具有如下通式Ⅰ所示結(jié)構(gòu)的化合物，其中，各基團(tuán)的定義如說明書中所述。所述的式I化合物具有拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ和微管蛋白雙重抑制效果，可以抑制癌細(xì)胞的增殖。。
【專利說明】
a -咔啉類化合物，其制備方法以及用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)和藥物治療領(lǐng)域。具體涉及一類含有a -咔啉（9H-吡啶并 [2, 3-b]吲哚）母核化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽及水合物，其制備方法及它們在治療與 拓?fù)洚悩?gòu)酶II以及微管蛋白相關(guān)疾病如腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] DNA作為遺傳信息的攜帶者，在整個生命過程中起到非常重要的作用。在DNA轉(zhuǎn) 錄、復(fù)制以及基因表達(dá)中，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶對DNA復(fù)雜的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的調(diào)控和維持使生命井然 有序。自1971年J.C. Wang發(fā)現(xiàn)第一個可以改變DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的co蛋白以來，研究者對 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶進(jìn)行了細(xì)致的研究。根據(jù)作用機(jī)制和生物結(jié)構(gòu)的不同，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶分為 拓?fù)洚悩?gòu)酶I和拓?fù)洚悩?gòu)酶II。真核生物拓?fù)洚悩?gòu)酶II為同源二聚體，包括兩個亞型：Topo II a和Topo II 。二者的生理功能存在著較大差別：Topo II a傾向于對正超螺旋的DNA 起作用，而Topo II 0并沒有表現(xiàn)出對超螺旋DNA構(gòu)象的特殊選擇性；Topo II a對細(xì)胞增 殖起重要作用，在細(xì)胞快速增殖期含量較高，因而可作為判斷細(xì)胞增殖程度的標(biāo)志物；Topo II P在細(xì)胞中含量相對穩(wěn)定，與細(xì)胞增殖狀態(tài)及細(xì)胞周期無相關(guān)性。Topo I在DNA雙鏈上 產(chǎn)生單鏈斷裂，使另一單鏈從缺口處穿過，改變DNA超螺旋或螺旋化不足的情況。Topo II 與Topo I斷裂機(jī)理不同，它在DNA主鏈上產(chǎn)生雙鏈斷裂，使另一條雙鏈DNA從缺口處穿過。 除了能完成所有Topo I的功能以外，Topo II還能在DNA復(fù)制完成后分開相互交聯(lián)的姐妹 染色單體。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑通過影響Topo II酶作用過程的各個階段來破壞酶的 活性。它可以直接作用于DNA，也可以作用于拓?fù)洚悩?gòu)酶II，還可以作用于DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶 II -DNA斷裂復(fù)合物，來完成對拓?fù)洚悩?gòu)酶II活性的抑制，并最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。研究表明， 大部分DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑的細(xì)胞毒性是通過形成DNA-酶-藥物三元復(fù)合物，阻斷酶 與DNA反應(yīng)的最后一步即單鏈或雙鏈DNA在切口部位的重新接合而實(shí)現(xiàn)的。抑制劑的作用 實(shí)際上是使細(xì)胞內(nèi)功能正常的拓?fù)洚悩?gòu)酶II轉(zhuǎn)變?yōu)閷?dǎo)致DNA鏈斷裂的致傷物，而細(xì)胞死亡 的最終原因可能是由于DNA鏈斷裂的錯誤修復(fù)或是由于可斷裂復(fù)合物的形成及穩(wěn)定存在， 激活了細(xì)胞內(nèi)一系列導(dǎo)致細(xì)胞程序性死亡的過程?；趯opo II在細(xì)胞中關(guān)鍵作用的認(rèn) 識，對拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑的研究一直是抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)之一。目前已上市的拓?fù)?異構(gòu)酶II抑制劑有依托泊苷，替尼泊苷，多柔比星，伊達(dá)比星，表柔比星和米托蒽醌等。
[0003] 微管是細(xì)胞骨架的主要組成部分，由a _微管蛋白和0 _微管蛋白異二聚體組成， 具有中空管狀結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。此外，還有一種Y微管蛋白，它不是微管的組成成分，但參與微 管的組裝。微管具有聚合和解聚的動力學(xué)特性，在維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞分裂、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及物 質(zhì)輸送等過程中起著重要作用。微管在細(xì)胞分裂前期聚合成為紡錘體，而紡錘體在有絲分 裂中牽引染色體向兩極移動進(jìn)入兩個子細(xì)胞中，完成細(xì)胞增殖。由于微管在細(xì)胞分裂中具 有極其重要的作用，現(xiàn)已成為抗腫瘤藥物研究的重要靶點(diǎn)之一，作用于微管系統(tǒng)的微管蛋 白抑制劑也已成為一類有效的抗腫瘤藥物。微管蛋白抑制劑根據(jù)作用機(jī)制的不同分為兩種 類型：抑制微管蛋白聚合的微管蛋白解聚劑和促進(jìn)微管蛋白聚合的微管蛋白聚合劑。同時， 根據(jù)微管蛋白抑制劑與微管蛋白作用位點(diǎn)的不同又可分為3類：作用于秋水仙堿位點(diǎn)的微 管蛋白抑制劑，作用于長春堿位點(diǎn)的微管蛋白抑制劑和作用于紫杉醇位點(diǎn)的微管蛋白抑制 劑。大量結(jié)構(gòu)多樣的微管蛋白抑制劑已被合成，且部分化合物表現(xiàn)出了很強(qiáng)的抗腫瘤作用。
[0004] 臨床上DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑和微管蛋白抑制劑經(jīng)常聯(lián)合用藥用于治療腫瘤， 常見阿霉素，依托泊苷與長春新堿，紫杉醇聯(lián)合用藥治療白血病，肺癌，乳腺癌和胃癌等。聯(lián) 合用藥具有很多優(yōu)點(diǎn)，例如，紫杉醇和阿霉素的聯(lián)合用藥不但對癌癥的治療起到協(xié)同作用， 同時還能減少由于藥物毒性引起的副作用。此外，聯(lián)合用藥在一定程度上還能減緩腫瘤的 耐藥性。顯然，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白的雙重抑制劑將比聯(lián)合用藥更為簡便和易于 控制。但現(xiàn)階段還沒有相關(guān)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白雙重抑制劑的報導(dǎo)。
[0005] a -咔啉（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚）是咔啉類化合物中的一種。上個世紀(jì)六七十 年代，人們在駱駝蓬科植物駱駝蓬的種子中發(fā)現(xiàn)咔啉類生物堿-駱駝蓬堿具有多種生物學(xué) 活性后，便引起了研究咔啉類衍生物的熱潮。咔啉為吡啶并吲哚結(jié)構(gòu)，根據(jù)吡啶氮原子的不 同，在咔啉前綴上不同的希臘字母以示區(qū)別，其中咔啉類化合物在天然產(chǎn)物中最為常 見，而a -咔啉類化合物研究相對較少。具有a -咔啉結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物大多具有很好的生物 活性，因其與DNA的結(jié)合活性或者對Topo- II的抑制活性展現(xiàn)出優(yōu)良的抗病毒、抗癌活性。 a _咔啉類化合物還具有抗抑郁和抗精神類疾病的作用。a _咔啉衍生物也可作為一些激 酶抑制劑，如細(xì)胞周期依賴性激酶抑制劑，酪氨酸激酶抑制劑等。此外，還報道a -咔啉類 化合物有抗瘧原蟲活性。
[0006] 綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的具有抗病毒、抗癌活性的a -咔啉衍生物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種新的具有抗病毒、抗癌活性的a -咔啉衍生物。
[0008] 本發(fā)明的第一方面，提供了一類具有如下通式I所示結(jié)構(gòu)的化合物：
[0009]
[0010]其中，
[0011] Ri、R2、R3、R4各自獨(dú)立地選自下組：氫、鹵素、硝基、氨基、羥基、取代或未取代的 C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3-C6的環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈 或支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈亞烷基-胺基、取代或未取代的C1-C4 的直鏈或支鏈胺基，以及取代或未取代的含氧或氮的飽和五元或六元雜環(huán)基；
[0012] R5選自下組：氫、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的 C3-C6的環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直 鏈或支鏈亞烷基-羥基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基，以及取代或未取代的含 氧或氮的飽和五元或六元雜環(huán)基；
[0013] R6選自下組：氫、鹵素、羥基、氨基、甲氨基、二甲氨基、取代或未取代的C1-C4的直 鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基、取代或未取代的C1-C4的直鏈 或支鏈胺基-氧基；
[0014] R7選自下組：氫、鹵素、羥基、氨基、甲基、甲氧基、甲氨基、二甲氨基，-0AC、甲氧羰 基，乙酰氨基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或 支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基；
[0015] Rs選自下組：氫、鹵素、羥基、氨基、甲基、甲氧基、甲氨基、二甲氨基、甲氧羰基、乙 酰氨基、甲砜基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈 或支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基；
[0016] X為鏈接基團(tuán)，選自下組：亞甲基、氧、硫、羰基、亞砜基、砜基
[0017] 其中，所述的取代指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、 C1-C8烷基-胺基、羥基、甲基胺基、氨基、C1-C8烷基-氧基。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述的取代的烷基為被選自下組的取代基取代：含氧基團(tuán)、含氮 基團(tuán)，或氟原子。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，R5選自下組：氫、羥乙基、N，N-二甲基氨基乙基；
[0020] R6選自下組：氫、羥基、-nh-ch3、-NH 2、-N(CH3)2、-0(CH2)20H、-0(CH 2)2N(CH3)2;
[0021] R7選自下組：氫、氟、羥基、甲基、甲氧基、乙酰氨基、-OAc ;
[0022] Rs選自下組：氫、氟、氯、溴、甲基、甲氧基、乙酰氨基、二甲氨基、甲砜基；

[0023] X選自下組：氧、硫. 羰基、亞砜基、砜基、 、
[0024] 在另一優(yōu)選例中，R!為氫、鹵素；
[0025] R2為氫、鹵素、甲氧基、二甲胺基、嗎啉基；
[0026] R3為氫、鹵素、甲氧基；
[0027] R4為氫、鹵素、甲氧基；
[0028] R5為氫、羥乙基、N，N-二甲基氨基乙基；
[0029] &為 H、-OH、-0 (CH 2) 20H、-0 (CH2) 2N (CH3) 2、-NH-CH3、-N (CH3) 2、-NH2;
[0030] 馬為 H、鹵素、-0CH 3、-OH、-OAc ;
[0031] Rs為 H、鹵素、甲基、-0CH3、-S02-CH3、-N(CH3) 2、-NHAc。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，札為氫、氟；
[0033] R2為氫、氟、氯、甲氧基、二甲胺基、嗎啉基；
[0034] R3為氫、氟、氯、甲氧基；
[0035] R4為氫、氟、甲氧基；
[0036] R5為氫、羥乙基、N，N-二甲基氨基乙基；
[0037] R6為氫、羥基、氨基、甲胺基、二甲胺基、-0 (CH 2) 20H、-0 (CH2) 2N (CH3) 2;
[0038] R7為氫、氟、羥基、甲氧基、-OAc ;
[0039] Rs為氫、氟、氯、溴、甲氧基、乙酰氨基、二甲氨基、甲砜基；
[0040] X為鏈接的硫、甲氨基、羰基、亞砜基、砜基、
[0041 ] 在另一優(yōu)選例中，所述的化合物中，&、R2、R3、R 4、R5、R6、R7、RjP X中任一個分別為 實(shí)施例中所述具體化合物中所對應(yīng)的基團(tuán)。
[0042] 在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物具有選自下組的結(jié)構(gòu)：

[0045] 在另一優(yōu)選例中，所述的化合物為選自下組的化合物：I -4、I -11、I -16、 I -23、I -28、I -32、I -33、I -37、I -36、I -34、I-41〇
[0046] 本發(fā)明的第二方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的化合物的制備方法，包 括步驟（b)和任選的（c)、（cl)和/或（c2):
[0047] (b)在有機(jī)溶劑中，在還原劑存在下，用式3化合物進(jìn)行關(guān)環(huán)反應(yīng)，得到式la化合 物；
[0048]
[0049] (c)在有機(jī)溶劑中，在堿存在下，用式la化合物與R5Y進(jìn)行取代反應(yīng)，得到式lb化 合物；
[0050]
[0051] (cl)用式lb化合物制備式lb'化合物；
[0052]
[0053] (c2)用式lb'化合物制備式I化合物；
[0054]
[0055] 優(yōu)選地，所述的方法還包括步驟：
[0056] (a)在有機(jī)溶劑中，用式1化合物和式2化合物反應(yīng)，得到式3化合物；
[0058] 式中，Y選自下組：氯、碘、溴、甲磺酸酯基、對甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基；其 余各基團(tuán)的定義如本發(fā)明第一方面中所述。
[0059] 在另一優(yōu)選例中，所述的步驟（a)在醋酐和/或醋酸鈉存在下進(jìn)行。
[0060] 優(yōu)選地，所述的式1化合物與醋酸鈉的摩爾比為1:0. 8-1. 2。
[0061] 優(yōu)選地，所述的式1化合物與式2化合物的摩爾比為1:0. 8-1. 2。
[0062] 在另一優(yōu)選例中，所述的步驟（a)在四氯化鈦和吡啶存在下進(jìn)行（優(yōu)選地，所述的 式1化合物與四氯化鈦的摩爾比為1:1-3)。
[0063] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（a)中，所述的有機(jī)溶劑選自下組：醋酸酐、吡啶、四 氫呋喃、二氧六環(huán)、DMF、N_甲基吡咯烷酮、二氯甲烷、氯仿，或其組合。
[0064] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（a)中，所述的反應(yīng)溫度為70_100°C。
[0065] 在另一優(yōu)選例中，所述的步驟（b)中，所述的還原劑選自下組：氫氣、鐵粉、鋅粉、 硫化物；更佳地為鐵粉或鋅粉。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，所述的步驟（b)在醋酸回流條件下進(jìn)行。
[0067] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（b)中，所述的有機(jī)溶劑選自下組：醋酸、四氫呋喃、 二氧六環(huán)、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮，或其組合。
[0068] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（b)中，所述的反應(yīng)溫度為90_130°C。
[0069] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（c)中，所述的堿選自下組：氫化鈉、叔丁醇鉀、叔丁 醇鈉，或其組合；優(yōu)選為氫化鈉。
[0070] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（c)中，所述的反應(yīng)溫度為10_40°C (優(yōu)選為室溫）。
[0071] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（c)中，所述的有機(jī)溶劑選自下組：N，N_二甲基甲酰 胺、二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃，或其組合。
[0072] 本發(fā)明的第三方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的化合物的制備方法，所 述方法包括步驟（d):
[0073] (d)在惰性溶劑中，在堿存在下，用式5化合物與式6化合物反應(yīng)，得到式Ic化合 物；
[0074]
[0075] 或所述方法包括步驟（e)和任選的步驟（f):
[0076] (e)在惰性溶劑中，在堿存在下，用式5化合物與式7化合物反應(yīng)，得到式Id化合 物；
[0077]
[0078] (f)在惰性溶劑中，在氧化劑存在下，用式Id化合物與氧化劑反應(yīng)，得到式Ie化合 物；
[0079]
[0080] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（d)中，所述的堿選自下組：叔丁醇鈉，和/或叔丁醇 鉀。
[0081] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（d)中，所述的反應(yīng)在過渡金屬（優(yōu)選Pd或Cu)存 在下進(jìn)行。
[0082] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（d)中，所述的反應(yīng)在催化劑存在下進(jìn)行；較佳地， 所述的催化劑選自下組：〇價鈀、膦配體，或其組合。
[0083] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（d)中，所述的反應(yīng)溫度為100_120°C。
[0084] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（d)中，所述的惰性溶劑為叔丁醇。
[0085] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（e)中，所述的堿選自下組：甲基鋰、正丁基鋰、叔丁 基鋰，或其組合；優(yōu)選為甲基鋰，叔丁基鋰，或其組合。
[0086] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（e)中，所述的反應(yīng)溫度為_80°C到室溫（10~ 40 °C ) 〇
[0087] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（e)中，所述的惰性溶劑為無水四氫呋喃。
[0088] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（f)中，所述的氧化劑選自下組：三氧化鉻/吡啶、三 氧化絡(luò)/硫酸、Dess-Martin氧化劑或二氧化猛，或其組合；優(yōu)選為Dess-Martin氧化劑。
[0089] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（f)中，所述的惰性溶劑為二氯甲烷。
[0090] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟（f)中，所述的反應(yīng)溫度為10-40°C (優(yōu)選為室溫）。
[0091] 在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括任選的步驟（dl):用式Ic化合物制備式Ic' 化合物；
[0092]
[0093] 式中，X'選自下組：亞甲基、氧、硫、羰基、亞砜基、砜基
且X'與X不同。
[0094] 本發(fā)明的第四方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物，或其藥學(xué) 上可接受的鹽或水合物的用途，用于（a)體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞生長；(b)制備治療 腫瘤的藥物組合物；（c)體外非治療性地抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性；（d)體外非治療性地 抑制微管蛋白的活性；（e)體外非治療性地使細(xì)胞微管解聚；(f)體外非治療性地抑制腫瘤 細(xì)胞的增殖生長；（g)制備具有拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白雙重抑制活性的藥物組合物。
[0095] 在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤細(xì)胞選自下組：口腔癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、白 血病細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞，或 其組合。
[0096] 在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述的式I化合物被用于抑制腫瘤細(xì)胞增殖生長時，所述的 抑制活性IC 5。值為l_2000nmol，優(yōu)選為2-1000nmol，更優(yōu)選為10-500nmol。
[0097] 本發(fā)明的第五方面，提供了一種拓?fù)洚悩?gòu)酶II活性抑制劑，所述的拓?fù)洚悩?gòu)酶II 活性抑制劑含有抑制有效量的如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或 水合物。
[0098] 本發(fā)明的第六方面，提供了一種細(xì)胞微管解聚劑，所述的細(xì)胞微管解聚劑含有解 聚有效量的如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。
[0099] 本發(fā)明的第七方面，提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有治療有效量 的如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。
[0100] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物是治療腫瘤的藥物組合物。
[0101] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性。
[0102] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于抑制微管蛋白的活性。
[0103] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物的劑型包括：口服制劑、注射劑和外用制劑。
[0104] 本發(fā)明的第八方面，提供了一種拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白雙重抑制劑，所述的抑 制劑包括如本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。
[0105] 在另一優(yōu)選例中，所述的雙重抑制劑用于治療腫瘤。
[0106] 在另一優(yōu)選例中，所述的雙重抑制劑可抑制選自下組的蛋白的表達(dá)： MCL-1(myeloid cell leukemia-1)、 cIAPl(cellular inhibitor of apoptosis protein-1)或 XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)〇
[0107] 本發(fā)明的第九方面，提供了一種治療腫瘤的方法，所述方法包括步驟：給需要的對 象施用安全有效量的如本發(fā)明第一方面中所述的化合物或如本發(fā)明第七方面所述的藥物 組合物。
[0108] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0109] 圖1為化合物I -4抗腫瘤瘤譜；
[0110] 圖2為化合物I -4對細(xì)胞微管的作用（圖中標(biāo)尺長度指示10 iiM);
[0111] 圖3為化合物I -4對Top2酶活性抑制作用；
[0112] 圖4為化合物I -4與聯(lián)合用藥在HeLa細(xì)胞中的區(qū)別。
【具體實(shí)施方式】
[0113] 本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，提供了一類具有如式I所示結(jié)構(gòu)的化合物，所 述的化合物可以抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的kDNA解螺旋活性，同時促使細(xì)胞微管蛋白解聚，進(jìn)而 抑制腫瘤細(xì)胞的生長。基于上述發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
[0114] 術(shù)語
[0115] 在本文中，除特別說明之處，術(shù)語"取代"指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下 組的取代基取代心~C i。烷基、C3~C i。環(huán)烷基、C C i。烷氧基、鹵素、羥基、羧基（-C00H)、 Ci~C i。醛基、C 2~C i。?； 2~c i。酯基、氨基、苯基；所述的苯基包括未取代的苯基或具 有1-3個取代基的取代苯基，所述取代基選自：鹵素、Ci-Ci。烷基、氰基、0H、硝基、C 3~C i。環(huán) 烷基、Ci~C 1()烷氧基、氣基。
[0116] 除特別說明之處，本發(fā)明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任選地為R構(gòu)型 或S構(gòu)型，或R構(gòu)型和S構(gòu)型的混合物。
[0117] 術(shù)語"(；~(：4烷基"指具有1~4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙 基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、或類似基團(tuán)。
[0118] 術(shù)語"C3~(：6環(huán)烷基"指具有3~6個碳原子的環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊 基、環(huán)庚基、或類似基團(tuán)。
[0119] 術(shù)語"(；~C 4烷氧基"指具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧基、乙 氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或類似基團(tuán)。
[0120] 術(shù)語"鹵素"指F、Cl、Br和I。
[0121] 術(shù)語"(；~C 4胺基"指具有"C廣C 4烷基-NH-"或"（烷基）2-N-(碳原子總數(shù)為 1-4) "結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，例如ch3nh-、c2h5nh-、c3h 7nh-、（CH3)2N-，或類似基團(tuán)。其中，Ci~(：4燒 基的定義如前所述。
[0122] 術(shù)語"Q~C4亞烷基-胺基"指具有"C廣C4亞烷基-NH 2"、"烷基-N-亞烷基-(碳 原子總數(shù)為1-4) "、或"（烷基）2-N-亞烷基-(碳原子總數(shù)為1-4) "結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，例如-CH2 順2、-(：2115順2、-(：311 7順2、-(：21^(013)2，或類似基團(tuán)。其中，(： 1~。4亞烷基為。1~。4烷基失去 一個氫原子形成的基團(tuán)，(；~(： 4烷基的定義如前所述。
[0123] 式I化合物
[0124] 本發(fā)明的目的是提供一類通式I含有a _咔啉（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚）母核 的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。
[0125] 其中
[0126] &、1?2、1?3、1?4單獨(dú)或同時為氫，鹵素，C1-C4的直鏈或支鏈烷基，C3-C6的環(huán)烷基，含 氧、氮或氟的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、醇或胺，以及含氧或氮的飽和五元或六元雜環(huán)基；
[0127] R5為氫，C1-C4的直鏈或支鏈烷基，C3-C6的環(huán)烷基，含氧或氮的C1-C4的直鏈或 支鏈烷基、醇或胺，以及含氧或氮的飽和五元或六元雜環(huán)基；
[0128] R6為氫，鹵素，羥基，氨基，甲氨基，二甲氨基，含氧或氮的C1-C4的直鏈或支鏈烷 基、醇或胺；
[0129] R7為氫，鹵素，羥基，氨基，甲氧基，甲氨基，二甲氨基，甲氧羰基，乙酰氨基，含氧或 氮的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、醇或胺；
[0130] Rs為氫，鹵素，羥基，氨基，甲氧基，甲氨基，二甲氨基，甲氧羰基，乙酰氨基，甲砜 基，含氧或氮的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、醇或胺；
[0131] X為鏈接基團(tuán)，可以是亞甲基，氧，硫，羰基，亞砜基，砜基，
[0132] 優(yōu)選地，
[0133] &、1?2、1?3、1?4單獨(dú)或同時為氫，鹵素，C1-C4的直鏈或支鏈烷基，C3-C6的環(huán)烷基，含 氧、氮或氟的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、醇或胺，以及含氧或氮的飽和五元或六元雜環(huán)基；
[0134] R5為氫，羥乙基，N，N_二甲基氨基乙基；
[0135] R6為氫，羥基，氨基，甲氨基，二甲氨基，_0(CH2) 20H，-0(CH2)2N(CH3)2;
[0136] R7為氫，氟，羥基，甲氧基，甲氧羰基，乙酰氨基；
[0137] Rs為氫、氟、氯、溴、甲氧基、乙酰氨基、二甲氨基、甲砜基；

[0138] X為鏈接的氧，硫， 幾基，亞諷基，諷基，， ?
[0139] 更優(yōu)選地，
[0140] &為氫，氟；
[0141] R2為氫，氟，氯，甲氧基，二甲胺基，嗎啉基；
[0142] R3為氫，氟，氯，甲氧基；
[0143] R4為氫，氟，甲氧基；
[0144] R5為氫，羥乙基，N，N_二甲基氨基乙基；
[0145] R6為氫，羥基，胺基，甲胺基，二甲胺基，-0 (CH 2) 20H，-0 (CH2) 2N (CH3) 2;
[0146] R7為氫，氟，羥基，甲氧基、甲氧羰基；
[0147] Rs為氫、氟、氯、溴、甲氧基、乙酰氨基、二甲氨基、甲砜基；
[0148] X為鏈接的硫，甲氨基，羰基，亞砜基，砜基，
[0149] 最優(yōu)選的，本發(fā)明提供了如下所示化合物：
[0150]


[0153] 式I化合物的制備
[0154] 本發(fā)明的另一目的是提供通式I所示化合物的制備方法，合成路線如方案1或2 所示：
[0155] 方案 1
[0157] a)使化合物1(3-醛基色酮）與化合物2 (鄰硝基苯乙腈），在一定條件下縮合生 成化合物3,所述條件為醋酐/醋酸鈉體系，或者四氯化鈦/吡啶體系；
[0158] b)化合物3在還原劑（氫氣，鐵粉，鋅粉，硫化物）作用下加熱關(guān)環(huán)生成化合物 4/ I 〇
[0159] c)化合物4在堿（氫化鈉，叔丁醇鉀，叔丁醇鈉）作用下取代進(jìn)一步生成化合物 I 〇
[0160] 優(yōu)選地，所述步驟a)條件為：化合物1與化合物2溶于醋酸酐，在醋酸鈉作用下 70-KKTC攪拌過夜反應(yīng)，薄層色譜檢測反應(yīng)完全。
[0161] 所述步驟b)條件為：化合物3在鐵粉或鋅粉還原下，醋酸回流反應(yīng)，薄層色譜檢測 反應(yīng)完全。
[0162] 所述步驟c)條件為：化合物4在氫化鈉作用下，室溫取代生成化合物I。
[0163] 方案 2
[0165] d)使化合物5與化合物6在堿存在下過渡金屬（Pd或Cu) /配體催化偶聯(lián)生成化 合物I ;
[0166] e)使化合物5與芳香醛7在強(qiáng)堿（甲基鋰、正丁基鋰或叔丁基鋰）條件下生成化 合物8/ I ;
[0167] f)使部分化合物8在氧化劑（三氧化絡(luò)/吡啶、三氧化絡(luò)/硫酸、Dess-Martin氧 化劑或二氧化錳）作用下進(jìn)一步氧化為終產(chǎn)I。
[0168] 優(yōu)選地，所述步驟d)條件為：化合物7與化合物8以叔丁醇為溶劑，叔丁醇鈉作 堿，〇價鈀、膦配體作催化劑，100-120°C反應(yīng)至薄層色譜檢測反應(yīng)完全。
[0169] 所述步驟e)條件為：無水四氫呋喃為溶劑，甲基鋰，叔丁基鋰作堿，-80°C到室溫 反應(yīng)。
[0170] 所述步驟f)條件為：二氯甲燒作溶劑，氧化劑為Dess-martin氧化劑，室溫反應(yīng)至 薄層色譜檢測反應(yīng)完全。
[0171] 式I化合物的用途
[0172] 發(fā)明人設(shè)計(jì)合成了一類含有如式I所示的a _咔啉母核的拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋 白雙重抑制劑。所述的式I化合物具有明確的構(gòu)效關(guān)系，部分化合物顯示了很強(qiáng)的細(xì)胞增 殖抑制作用，如化合物1-4, 1-32, 1-33等。該類新結(jié)構(gòu)的a -咔啉類化合物有望成為新型 抗腫瘤藥物，所述腫瘤包括口腔癌，肺癌，肝癌，白血病，胃癌，宮頸癌，卵巢癌，乳腺癌，結(jié)腸 癌和前列腺癌等。
[0173] 特別地，所述的式I化合物在誘導(dǎo)凋亡實(shí)驗(yàn)中，表現(xiàn)出的作用機(jī)制不同于拓?fù)洚?構(gòu)酶II抑制劑（如依托泊苷）和微管蛋白抑制劑（如長春新堿）的聯(lián)合用藥，具體地， 所述的雙重抑制劑可抑制選自下組的蛋白的表達(dá)：MCL_1 (myeloid cell leukemia-1)、 cIAPl(cellular inhibitor of apoptosis protein-1)或 XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)，而在聯(lián)合用藥中觀察不到上述的蛋白被抑制。
[0174] 藥物組合物和施用方法
[0175] 由于本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的對拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白的雙重抑制活性，因此 本發(fā)明化合物及其各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有 本發(fā)明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解由與拓?fù)洚悩?gòu)酶II 和/或微管蛋白活性或表達(dá)量相關(guān)的疾病，尤其適用于與拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白活性或 表達(dá)量均相關(guān)的疾病。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明化合物可用于治療以下疾?。嚎谇话?，肺癌，肝 癌，白血病，胃癌，宮頸癌，卵巢癌，乳腺癌，結(jié)腸癌和前列腺癌等等。
[0176] 本發(fā)明的藥物組合物包含安全有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受 的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中"安全有效量"指的是：化合物的量足以明顯 改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有l(wèi)_2000mg本發(fā)明化合物/ 劑，更佳地，含有5-200mg本發(fā)明化合物/劑。較佳地，所述的"一劑"為一個膠囊或藥片。
[0177] "藥學(xué)上可以接受的載體"指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物 質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性。"相容性"在此指的是組合 物中各組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥 學(xué)上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物（如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、 纖維素乙酸酯等）、明膠、滑石、固體潤滑劑（如硬脂酸、硬脂酸鎂）、硫酸鈣、植物油（如豆 油、芝麻油、花生油、橄欖油等）、多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等）、乳化劑（如 吐溫:(i )、潤濕劑（如十二烷基硫酸鈉）、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、無熱原 水等。
[0178] 本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括 (但并不限于）：口服、瘤內(nèi)、直腸、腸胃外（靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下）、和局部給藥。
[0179] 用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑 型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑（或載體）混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或 與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b) 粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；（c)保濕 劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅 酸鹽、和碳酸鈉；（e)緩溶劑，例如石蠟；（f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例 如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和（i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸 鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也 可包含緩沖劑。
[0180] 固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和 其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的 釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放。可采用的包埋組分的實(shí)例是聚合物質(zhì) 和蠟類物質(zhì)。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。
[0181] 用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。 除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增 溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰 胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物 等。
[0182] 除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味 劑、嬌味劑和香料。
[0183] 除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯 山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。
[0184] 用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、 懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和 非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。
[0185] 用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。 活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要 的推進(jìn)劑一起混合。
[0186] 本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。
[0187] 使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發(fā)明化合物適用于需要治療的哺乳動物 (如人），其中施用時劑量為藥學(xué)上認(rèn)為的有效給藥劑量，對于60kg體重的人而言，日給藥 劑量通常為1~2000mg，優(yōu)選5~500mg。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀 況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
[0188] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)包括：
[0189] (1)提供了一類結(jié)構(gòu)新穎的化合物，所述的化合物同時具有拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制 活性和微管蛋白抑制活性。
[0190] (2)提供了一種具有腫瘤抑制活性的化合物，所述的化合物可以用于制備治療腫 瘤的藥物。
[0191] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
[0192] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明所涉及化合物的結(jié)構(gòu)和制備方法及體外抑制腫瘤細(xì)胞 的活性作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。
[0193] 所有實(shí)施例中，起始化合物1、化合物2、化合物5化合物6以及化合物7購于上海 書亞醫(yī)藥科技有限公司、韶遠(yuǎn)科技（上海）有限公司、北京百靈威科技有限公司、上海晶純 生化科技股份有限公司、上海泰坦科技有限公司。鈀催化劑及膦配體購自北京百靈威科技 有限公司。除特殊說明外，其他起始試劑、溶劑、材料均來源于國藥試劑集團(tuán)公司。 1H NMR 由BrucherAM-400型或GEMINI-300型核磁共振儀記錄，化學(xué)位移以5 (ppm)表示。質(zhì)譜由 Agilentl200-6110型單四級桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀記錄。分離用200-300目硅膠由青島海 洋化工廠提供。其中英文縮寫所代表的化學(xué)試劑如下：
[0194] DMF N，N-二甲基甲酰胺
[0195] PPA多聚磷酸
[0196] THF四氫呋喃
[0197] mCPBA間氯過氧苯甲酸
[0198] DCM 二氯甲烷
[0199] dba二亞芐基丙酮
[0200] Xphos 2-雙環(huán)己基膦-2'，4'，6' -三異丙基聯(lián)苯
[0201] TMS三甲基硅基
[0202] 化合物的制備與合成
[0203] 實(shí)施例1 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯腈（化合物 3a)的制備
[0205] 于25mL圓底燒瓶中，加入化合物3-醛基-色酮la 100mg(0. 574mmol)，鄰硝基苯 乙腈93mg(0. 574mmol)，醋酸鈉47mg(0. 574mmol)，醋酸酐5mL，于90°C油浴鍋中攪拌加熱過 夜。次日降溫至室溫，倒入150mL冰水中淬滅反應(yīng)。50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相后50mL 飽和食鹽水洗滌，然后無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑，粗品用硅膠柱層析純化（石 油醚/乙酸乙酯=4:1)得淺黃色固體162mg，收率88%。
[0206] 4 NMR(300MHz，Chloroform-d) S 9. 03 (s，1H)，8. 27 (d，J = 9. 4Hz，1H)，8. 18 (d，J =8. 1Hz, 1H), 7. 82 - 7. 41 (m, 8H).
[0207] LC-MS :319(M+1)。
[0208] (2-羥基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -1)的制備
[0209]
[0210] 于25mL圓底燒瓶中，加入5mL醋酸，化合物3a 100mg(0. 314mmol)，鐵粉 106mg(l. 89mmol)，加熱回流反應(yīng)2小時。冷卻至室溫后將反應(yīng)體系倒入200mL水中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，隨后用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸 干溶劑，粗品用硅膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=5:1)得淺黃色固體58mg，收率64%。
[0211] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 12. 30 (s, 1H), 10. 32 (s, 1H), 8. 88 (s, 1H), 8. 73 (s, 1H), 8. 29 (d, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 62 - 7. 38 (m, 4H), 7. 28 (t, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 10 - 6. 91 (m, 2H).
[0212] LC-MS :289 (M+l)。
[0213] 實(shí)施例2 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (6-甲基-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯腈 (化合物3b)的制備
[0214]
[0215] 95mg(0. 5mmol)3-醛基6-甲基色酮lb為原料，參考化合物3a的合成過程，得淺黃 色固體146mg，收率88%。
[0216] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 01 (s, 1H), 8. 18(d, J = 8. 2Hz, 1H) , 8. 04 (s, 1H) , 7. 79 - 7. 7 1 (m, 1H) , 7. 69 - 7. 52 (m, 4H) , 7. 46 (d, J = 8. 6Hz, 1H), 2. 49 (s, 3H).
[0217] LC-MS :333(M+1)。
[0218] (2-羥基-5-甲基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -2) 的制備
[0219]
[0220] 100mg(0. 3mmol)3b為原料，參考化合物I -1的合成過程，得黃色固體52mg，收率 58%〇
[0221] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 13. 62 (s, 1H) , 12. 11 (s, 1H) , 8. 68 (d, J = 7. 7Hz, 1H) , 8. 19 (d, J = 8.7Hz,lH),8.05 - 7.95 (m,lH),7.91(s,lH),7.57-7. 42 (m, 2H) , 7. 33 - 7. 2 1 (m, 1H) , 7. 1 1 (d, J = 6. 8 Hz, 1H) , 6. 8 5 (d, J = 7. 9Hz, 1H), 2. 32 (s, 3H).
[0222] LC-MS :303 (M+l)。
[0223] 實(shí)施例3 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (7-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯 腈（化合物3c)的制備
[0224]
[0225] 103mg(0. 5mmol)3-醛基7-甲氧基色酮lc為原料，參考化合物3a的合成過程，得 淺黃色固體12511^，收率72%。
[0226] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 8. 96 (s, 1H), 8. 22 - 8. 13 (m, 2H), 7. 79 -7. 58 (m, 3H), 7. 54(s, 1H), 7. 04(dd, J = 8. 9, 2. 4Hz, 1H) , 6. 93 (d, J = 2. 3Hz, 1H), 3. 95 (s, 3H).
[0227] LC-MS :349(M+1)。
[0228] (2-羥基-4-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2,3_b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物 I -3)的制備
[0229]
[0230] 105mg(0.3mmol)3c為原料，參考化合物I -1的合成過程，得白色固體74mg，收率 78%〇
[0231] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 13. 30 (s, 1H) , 12. 10 (s, 1H) , 8. 67 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 8. 18 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 8. 02 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 7. 58 (d, J = 2. 4Hz, 2H), 7. 56 -7. 42 (m, 2H), 7. 25 (t, J = 7. 4Hz, 1H), 6. 95 - 6. 82 (m, 2H), 3. 79 (s, 3H).
[0232] LC-MS :319 (M+l) 〇
[0233] 實(shí)施例4 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯 腈（化合物3d)的制備
[0234]
[0235] 103mg (0. 5mmol) 6-甲氧基-3-醛基-色酮Id為原料，參考化合物3a的合成過程， 得淺黃色固體15211^，收率87%。
[0236] 4匪1?(30011^，〇11(^(^〇^11-(1)5 8.86(8，111)，8.17((1，了 = 9.11^，111)，7.81-7. 49 (m, 5H), 7. 10 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 6. 89 (d, J = 9. 4Hz, 1H), 4. 00 (s, 3H).
[0237] LC-MS :349 (M+l)。
[0238] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物 I _4)的制備
[0239]
[0240] 105mg(0. 3mmol)3d為原料，參考化合物I -1的合成過程，得白色固體57mg，收率 60%〇
[0241] :H NMR(300MHz, DMS〇-d6) 8 12. 31 (s, 1H), 9. 73 (s, 1H), 8. 89 (s, 1H), 8. 73 ( s, 1H), 8. 30 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 7. 61 - 7. 45 (m, 2H), 7. 28 (t, J = 8. 2Hz, 1H), 7. 12 - 7. 03 (m, 1H), 6. 99 - 6. 87 (m, 2H), 3. 72 (s, 3H).
[0242] LC-MS :319(M+1) 〇
[0243] 實(shí)施例5 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (6-氟-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯腈（化 合物3e)的制備
[0244]
[0245] 97mg (0? 5mmol) 6-氟-3-醛基-色酮le為原料，參考化合物3a的合成過程，得淺 黃色固體15211^，收率90%。
[0246] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 02(s, 1H), 8. 19(dd, J = 8. 1, 1. 3Hz, 1H), 7. 90 (dd, J = 8. 0, 3. 0Hz, 1H), 7. 76 (td, J = 7. 5, 1. 4Hz, 1H), 7. 70 - 7. 56 (m, 3H) ,7.53 - 7. 45 (m, 2H).
[0247] LC-MS :337 (M+l)。
[0248] (2-羥基-5-氟苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -5) 的制備
[0249]
[0250] 101mg(0. 3mmol)3e為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體60mg，收 率 65%。
[0251] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 13.68(s, 1H), 12. 17(s,2H),8.74- 8. 65 (m, 1H) , 8. 21 (d, J = 7. 7Hz, 1H) , 8. 05 (d, J = 8. 4Hz, 1H) , 7. 97 (d, J = 13. 8Hz, 1H), 7. 60 - 7. 42 (m, 2H), 7. 28 (t, J = 7. 4Hz, 1H), 7. 20 - 7. 11 (m, 1H), 7. 02 - 6. 89 (m, 1H).
[0252] LC-MS :307 (M+l)。
[0253] 實(shí)施例6 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (6-氯-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯腈（化 合物3f)的制備
[0254]
[0255] 105mg (0. 5mmol) 6-氯-3-醛基-色酮If為原料，參考化合物3a的合成過程，得淺 黃色固體162mg，收率92%。
[0256] 4 MMR(300MHz，Chloroform-d) S 9. 02 (s，1H)，8. 23 (d，J = 2. 6Hz，1H)，7. 80 - 7. 57 (m, 5H), 7. 55 (s, 1H) ,7.53 - 7. 48 (m, 1H).
[0257] LC-MS :353(M+1)。
[0258] (2-羥基-5-氯苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -6) 的制備
[0259]
[0260] 106mg(0. 3mmol)3f為原料，參考化合物I -1的合成過程，得黃色固體62mg，收率 64%〇
[0261] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 13. 90 (s, 1H) , 12. 18 (s, 1H) , 8. 71 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 8. 31 - 8. 14 (m, 2H), 8. 09 (d, J = 9. 2Hz, 1H), 7. 63 - 7. 44 (m, 2H), 7. 42 -7. 21 (m, 2H), 6. 99 (d, J = 8. 8Hz, 1H).
[0262] LC-MS :323 (M+l) 〇
[0263] 實(shí)施例7 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (6-溴-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯腈（化 合物3g)的制備
[0264]
[0265] 127mg (0. 5mmol) 6-溴-3-醛基-色酮lg為原料，參考化合物3a的合成過程，得淺 黃色固體17311^，收率87%。
[0266] 4 NMR(300MHz，Chloroform-d) S 9. 02 (s，1H)，8. 39 (d，J = 2. 4Hz，1H)，8. 19 (d，J =8. 3Hz, 1H), 7. 90 - 7. 55 (m, 4H), 7. 54 - 7. 43 (m, 2H).
[0267] LC-MS :397 (M+l)，399 (M+3)。
[0268] (2-羥基-5-溴苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -7) 的制備
[0269]
[0270] 120mg(0. 3mmol)3g為原料，參考化合物I -1的合成過程，得黃色固體63mg，收率 57%。
[0271] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12.31 (s，1H)，10.33 (s，1H)，8.88 (s，1H)，8.73 (s，1H)， 8. 30 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 65 - 7. 46 (m, 4H), 7. 34 - 7. 23 (m, 1H), 6. 97 (d, J = 8. 6Hz, 1H).
[0272] LC-MS :367 (M+l)，369 (M+3)。
[0273] 實(shí)施例8 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (7-氟-4-氧-4H-色酮-3-取代）丙烯腈（化 合物3h)的制備
[0274]
[0275] 97mg (0. 5mmol) 7-氟-3-醛基-色酮lh為原料，參考化合物3a的合成過程，得淺 黃色固體15111^，收率90%。
[0276] :H NMR (300MHz，Chloroform-d) S 8. 99 (s，1H)，8. 29 (dd，J = 8.9,6. 2Hz, 1H), 8. 19 (d, J = 8.3Hz, lH),7.8〇-7.71(m, 1H),7.70- 7. 56 (m, 2H), 7. 50 (s, 1H), 7. 26 - 7. 14 (m, 2H).
[0277] LC-MS :337 (M+l)。
[0278] (2-羥基-4-氟苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -8) 的制備
[0279]
[0280] 101mg(0. 3mmol)3h為原料，參考化合物I -1的合成過程，得黃色固體42mg，收率 45%〇
[0281] :H NMR(300MHz,DMS0-d6) 8 12. 16(s, 1H), 8. 70(d, J = 8. 4Hz, 1H), 8. 18 (t, J = 8. 9Hz, 2H), 7. 97 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 7. 60 - 7. 42 (m, 2H), 7. 27 (t, J = 8. 0Hz, 1H), 6. 88 - 6. 71 (m, 2H).
[0282] LC-MS :307 (M+l)。
[0283] 實(shí)施例8 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (7-羥基-6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3i)的制備
[0284]
[0285] 110mg(0. 5mmol) 7-羥基-6-甲氧基-3-醛基-色酮li為原料，參考化合物3a的 合成過程，得淺黃色固體118mg，收率65%。
[0286] 4 MMR (300MHz，Chloroform-d) S 9. 01 (s，1H)，8. 19 (d，J = 8. 8Hz，1H)，7. 85 - 7. 57 (m, 4H), 7. 52 (s, 1H), 7. 33 (s, 1H), 3. 96 (s, 3H), 2. 38 (s, 3H).
[0287] LC-MS :365(M+1)。
[0288] 5-羥基-2-甲氧基-4- (9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-羰基）苯基乙酸酯（化合物 I -9)的制備
[0289]
[0290] 100mg(0. 274mmol) 3i為原料，參考化合物I -1的合成過程，得黃色固體45mg，收 率 44%。
[0291] 4 MMR(300MHz，DMS0-d6) S 12. 29(s，1H), 10. 10(s，1H)，8. 92(s，1H)，8. 76(s， 1H), 8. 40 - 8. 24 (m, 2H), 7. 62 - 7. 43 (m, 1H), 7. 35 - 7. 23 (m, 1H), 7. 16 (s, 1H), 6. 77 (s, 1H), 3. 73 (s, 3H), 2. 30 (s, 3H).
[0292] LC-MS :377 (M+l) 〇
[0293] 實(shí)施例9 (2, 4-二羥基-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲 酮（化合物I -10)的制備
[0294]
[0295] 5mL 圓底燒瓶，加入 90mg(0.239mmol) I -9,95.6mg(2.39mmol)Na0H，4mL THF，lmL 水，室溫攪拌過夜反應(yīng)，次日150mL水稀釋，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，50mL飽和食 鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品硅膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯= 4:1)得淺黃色固體25mg，收率31 %。
[0296] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 23 (s，1H)，11. 68 (s，2H)，8. 90 (s，1H)，8. 75 (s，1H)， 8. 32 (d, J = 7. 3Hz, 1H), 7. 63 - 7. 46 (m, 2H), 7. 37 - 7. 20 (m, 1H), 7. 08 (s, 1H), 6. 47 (s, 1H), 3. 68 (s, 3H).
[0297] LC-MS :335 (M+l)。
[0298] 實(shí)施例11 (E/Z) -2- (2-硝基苯）-3- (6, 7-二甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取代） 丙稀腈（化合物3 j)的制備
[0299]
[0300] 200mg(0.854mmol)6,7-二甲氧基-3-醛基-色酮lj為原料，參考化合物3a的合 成過程，得淺黃色固體142mg，收率44%。
[0301] 4匪1?(30011^，〇11(^(^〇^11-(1)5 8.98(8，111)，8.17((1，了 = 9.11^，111)，7.81- 7. 53 (m, 5H), 6. 95 (s, 1H), 4. 03 (s, 3H), 4. 00 (s, 3H).
[0302] LC-MS :379(M+1)。
[0303] (2-羥基-4, 5-二甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合 物I -11)的制備
[0304]
[0305] 135mg(0. 357mmol) 3j為原料，參考化合物I -1的合成過程，得黃色固體85mg，收 率 68%。
[0306] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12.24 (s，1H)，11.58 (s，1H)，8.91 (s，1H)，8.76 (s，1H)， 8. 32 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 62 - 7. 45 (m, 2H), 7. 35 - 7. 22 (m, 1H), 7. 09 (s, 1H), 6. 67 (s, 1H), 3. 87 (s, 3H), 3. 67 (s, 3H).
[0307] LC-MS :349 (M+l)。
[0308] 實(shí)施例12 (E/Z)-2-(4, 5-二甲氧基硝基苯基）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色 酮-3-取代）丙烯腈（化合物3k)的制備
[0310] 102mg(0. 5mmol) ld，lllmg(0. 5mmol) 2b為原料，參考化合物3a的合成過程，得黃 色固體150mg，收率74%。
[0311] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 02 (s, 1H), 7. 76 (s, 1H), 7. 60 (d, J = 3. 2Hz, 1H), 7. 54 - 7. 44 (m, 2H), 7. 39 - 7. 31 (m, 1H), 6. 90 (s, 1H), 4. 04 (s, 3H), 4. 01 (s, 3H), 3. 92 (s, 3H).
[0312] LC-MS :409 (M+l)。
[0313] (6, 7-二甲氧基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）（2-羥基-5甲氧基苯基）甲 酮（化合物I -12)的制備
[0314]
[0315] 100mg(0. 245mmol) 3k為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體54mg， 收率58%。
[0316] 4 NMR (300MHz，Chloroform-d) S 11. 46 (s，1H)，9. 67 (s，1H)，8. 80 (s，1H)，8. 62 (s， 1H), 7. 53 (s, 1H), 7. 24 - 7. 16 (m, 2H), 7. 12 - 7. 02 (m, 2H), 4. 02 (s, 3H), 4. 01 (s, 3H), 3. 74 (s ,3H).
[0317] LC-MS :379(M+1) 〇
[0318] 實(shí)施例13 (E/Z)-2-(4-甲氧基硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物31)的制備
[0320] 102mg(0. 5mmol) ld，96mg(0. 5mmol)2c為原料，參考化合物3a的合成過程，得類白 色固體122mg，收率64%。
[0321] 4 NMR (300MHz，Chloroform-d) S 8. 99 (s，1H)，7. 67 (d，J = 2. 9Hz，1H)，7. 60 (d，J =3. 0Hz, 1H), 7. 53 - 7. 45 (m, 3H), 7. 33 (dd, J = 9. 2, 3. 0Hz, 1H), 7. 23 (d, J = 2. 6Hz, 1H), 3 .94 (s, 3H), 3. 92 (s, 3H).
[0322] LC-MS :379 (M+l)。
[0323] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（7-甲氧基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮 (化合物I -13)的制備
[0324]
[0325] 100mg(0. 265mmol)31為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體50mg， 收率54%。
[0326] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 18 (s，1H)，9. 72 (s，1H)，8. 75 (s，1H)，8. 63 (s，1H)，8 .17 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 7. 12 - 6. 81 (m, 5H), 3. 86 (s, 3H), 3. 72 (s, 3H).
[0327] LC-MS :349(M+1)。
[0328] 實(shí)施例14 (E/Z)-2-(4-氯-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙稀腈（化合物3m)的制備
[0330] 102mg(0. 5mmol) ld，98mg(0. 5mmol)2d為原料，參考化合物3a的合成過程，得類白 色固體132mg，收率69%。
[0331] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 02 (s, 1H), 8. 17(s, 1H), 7. 73(dd, J = 8. 5, 2. 3Hz, 1H), 7. 62 - 7. 46 (m, 4H), 7. 34 (dd, J = 9. 2, 2. 9Hz, 1H), 3. 93 (s, 3H).
[0332] LC-MS :383 (M+l)。
[0333] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（7-氯-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -14)的制備
[0334]
[0335] 100mg(0. 262mmol)3m為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體63mg， 收率68 %。
[0336] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 18 (s，1H)，9. 72 (s，1H)，8. 75 (s，1H)，8. 63 (s，1H)，8 .17 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 7. 12 - 6. 81 (m, 5H), 3. 86 (s, 3H), 3. 72 (s, 3H).
[0337] LC-MS :353 (M+l)。
[0338] 實(shí)施例15 (E/Z)-2-(4-氟-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3n)的制備
[0340] 102mg (0? 5mmol) ld，90mg (0? 5mmol) 2e為原料，參考化合物3a的合成過程，得黃色 固體17〇11^，收率93%。
[0341] :H NMR (300 MHz, Chloroform-d) 8 9 . 0 1 ( s , 1 H) , 7 . 9 2 ( d d, J = 8. 1, 2. 7Hz, 1H), 7. 63 - 7. 55 (m, 2H), 7. 55 - 7. 45 (m, 3H), 7. 40 - 7. 31 (m, 1H), 3. 93 (s, 3H).
[0342] LC-MS :367 (M+l)。
[0343] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（7-氟-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -15)的制備
[0344]
[0345] 100mg(0. 273mmol)3n為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體55mg， 收率60 %。
[0346] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 01 (s, 1H), 7. 92(dd, J = 8. 1, 2. 7Hz, 1H), 7. 63 - 7. 55 (m, 1H), 7. 55 - 7. 45 (m, 1H), 7. 40 - 7. 31 (m, 4H), 3. 93 (s, 3H).
[0347] LC-MS :337(M+1)。
[0348] 實(shí)施例16 (E/Z)-2-(5-氟-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3〇)的制備
[0350] 102mg (0? 5mmol) ld，90mg (0? 5mmol) 2f為原料，參考化合物3a的合成過程，得類白 色固體135mg，收率74%。
[0351] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 9. 01 (s, 1H) , 8. 38 - 8. 26 (m, 1H) , 7. 81 -7. 58 (m, 5H), 7. 50 (d, J = 6. 0Hz, 1H), 3. 89 (s, 3H).
[0352] LC-MS :367 (M+l)。
[0353] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（6-氟-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -16)的制備
[0354]
[0355] 100mg(0. 273mmol)3o為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體58mg， 收率63%。
[0356] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 34 (s，1H)，9. 73 (s，1H)，8. 95 (s，1H)，8. 75 (s，1H)，8 .22(d, J= 11. 9Hz, 1H), 7. 61 - 7. 46 (m, 1H), 7. 46 - 7. 27 (m, 1H), 7. 18 - 7. 02 (m, 1H), 6. 99 -6. 88 (m, 2H), 3. 73 (s, 3H).
[0357] LC-MS :337(M+1)。
[0358] 實(shí)施例17 (E/Z)-2-(6-氟-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3p)的制備
[0360] 102mg(0. 5mmol) ld，90mg(0. 5mmol)2g為原料，參考化合物3a的合成過程，得類白 色固體165mg，收率90%。
[0361] 4匪1?(30011^，〇11(^(^〇^11-(1)5 9.06(8，111)，7.99((1，了 = 9.41^，111)，7.68- 7. 47 (m, 5H), 7. 38 - 7. 30 (m, 1H), 3. 92 (s, 3H).
[0362] LC-MS :367 (M+l)。
[0363] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（5-氟-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -17)的制備
[0364]
[0365] 130mg(0. 355mmol)3p為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體60mg， 收率50 %。
[0366] :H NMR(300MHz, DMS〇-d6) 8 12. 63 (s, 1H), 9. 75 (s, 1H), 8. 81 (s, 1H), 8. 63 (s, 1H), 7. 60 - 7. 36 (m, 2H), 7. 16 - 6. 89 (m, 4H), 3. 72 (s, 3H).
[0367] LC-MS :337 (M+l)。
[0368] 實(shí)施例18 (E/Z)-2-(3-甲氧基-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3q)的制備
[0370] 102mg(0. 5mmol) ld，97mg(0. 5mmol)2h為原料，參考化合物3a的合成過程，得類白 色固體120mg，收率63%。
[0371] :H NMR (300MHz, Chlorof orm-d) 8 8. 89 (s, 1H) ,7.64 - 7. 45 (m, 4H) ,7.37-7. 29 (m, 1H), 7. 15 (t, J = 7. 8Hz, 2H), 3. 96 (s, 3H), 3. 91 (s, 3H).
[0372] LC-MS :379 (M+l) 〇
[0373] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（8-甲氧基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮 (化合物I -18)的制備
[0374]
[0375] 100mg(0. 265mmol) 3q為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體48mg， 收率52%。
[0376] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 43 (s，1H)，9. 73 (s，1H)，8. 85 (s，1H)，8. 73 (s，1H)，7 .86 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 28 - 6. 86 (m, 5H), 3. 99 (s, 3H), 3. 72 (s, 3H).
[0377] LC-MS :349(M+1)。
[0378] 實(shí)施例19 (E/Z)-2-(5-氯-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3r)的制備
[0380] 102mg (0? 5mmol) ld，97mg (0? 5mmol) 2i為原料，參考化合物3a的合成過程，得黃色 固體168mg，收率88%。
[0381] 4匪1?(30011^，〇11(^(^〇^11-(1)5 9.03(8，111)，8.15((1，了 = 9.11^，111)，7.66-7. 48 (m, 5H), 7. 41 - 7. 31 (m, 1H), 3. 93 (s, 3H).
[0382] LC-MS :383 (M+l)。
[0383] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（6-氯-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -19)的制備：
[0384]
[0385] 145mg(0. 265mmol) 3r為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體82mg， 收率61 %。
[0386] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 45 (s，1H)，9. 76 (s，1H)，8. 99 (s，1H)，8. 78 (s，1H)，8 .48 (s, 1H), 7. 63 - 7. 43 (m, 2H), 7. 15 - 7. 05 (m, 1H), 7. 02 - 6. 86 (m, 2H), 3. 74 (s, 3H).
[0387] LC-MS :353 (M+l)。
[0388] 實(shí)施例20 (E/Z)-2-(3-氟-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3s)的制備
[0389]
[0390] 102mg(0. 5mmol) ld，91mg(0. 5mmol)2j為原料，參考化合物3a的合成過程，得白色 固體135mg，收率74%。
[0391] :H NMR (300MHz, Chlorof orm-d) 8 8. 95 (s, 1H) ,7.68 - 7. 56 (m, 2H) ,7.54-7. 45 (m, 1H), 7. 46 - 7. 30 (m, 3H), 3. 92 (s, 3H).
[0392] LC-MS :367(M+1)。
[0393] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（8-氟-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -20)的制備
[0394]
[0395] 115mg(0. 314mmol) 3s為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體33mg， 收率31 %。
[0396] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 82 (s，1H)，9. 76 (s，1H)，8. 95 (s，1H)，8. 79 (s，1H)，8 .16 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 48 - 7. 35 (m, 1H), 7. 33 - 7. 20 (m, 1H), 7. 12 - 7. 04 (m, 1H), 7. 02 -6. 90 (m, 2H), 3. 73 (s, 3H).
[0397] LC-MS :337 (M+l)。
[0398] 實(shí)施例21 (E/Z)-2-(5-甲氧基-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙烯腈（化合物3t)的制備
[0400] 102mg (0. 5mmol) ld，97mg (0. 5mmol) 2k為原料，參考化合物3a的合成過程，淺黃色 固體158mg，收率84%。
[0401] :H NMR(300MHz, Chlorof orm-d) 8 9. 02 (d, J = 0. 9Hz, 1H) , 8. 24 (d, J =9. 1Hz, 1H) , 7. 60 (d, J = 3. 1Hz, 1H) , 7. 53 - 7. 48 (m, 2H) , 7. 34 (dd, J = 9. 2, 3. 1Hz, 1H), 7. 05 (dd, J = 9. 1, 2. 8Hz, 1H), 6. 99 (d, J = 2. 7Hz, 1H), 3. 97 (s, 3H), 3. 93 (s ,3H).
[0402] LC-MS :379 (M+l) 〇
[0403] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（6-甲氧基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮 (化合物I -21)的制備
[0404]
[0405] 125mg(0. 331mmol)3t為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體52mg， 收率45%。
[0406] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 13 (s，1H)，9. 74 (s，1H)，8. 90 (s，1H)，8. 74 (s，1H)，7 .93 (d, J = 2. 5Hz, 1H), 7. 46 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 7. 21 - 7. 03 (m, 2H), 7. 03 - 6. 90 (m, 2H), 3. 8 5(s, 3H), 3. 74 (s, 3H).
[0407] LC-MS :349(M+1)。
[0408] 實(shí)施例22 (E/Z) -3- (6-(甲砜基）-4-氧-4H-色酮-3-取代）-2- (2-硝基苯）丙 稀腈（化合物3u)的制備
[0410] 100mg(0. 397mmol) lk為原料，參考化合物3a的合成過程，得淺黃色固體82mg，收 率 52%〇
[0411] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 04(d, J = 1. 0Hz, 1H), 8. 87 (d, J = 2. 3Hz, 1H), 8. 30 (dd, J = 8. 8, 2. 4Hz, 1H), 8. 21 (dd, J = 8. 0, 1. 3Hz, 1H), 7. 80 -7. 75 (m, 2H), 7. 62 - 7. 58 (m, 2H), 7. 48 - 7. 46 (m, 1H), 3. 15 (s, 3H).
[0412] LC-MS :397 (M+l)。
[0413] (2-羥基-5-(甲砜基）苯基）（9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物 I -22)的制備
[0414]
[0415] 100mg(0.253mmol)3u為原料，參考化合物I -1的合成過程，得白色固體32mg，收 率 35%。
[0416] :H NMR(300MHz, DMS〇-d6) 8 12. 37 (s, 1H), 11. 23 (s, 1H), 8. 93 (s, 1H), 8. 7 6 (s, 1H), 8. 32 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 8. 04 - 7. 88 (m, 2H), 7. 64 - 7. 48 (m, 2H) ,7.37-7. 14 (m, 2H), 3. 23 (s, 3H).
[0417] LC-MS :367(M+1)。
[0418] 實(shí)施例23 (E/Z)-2-(5-二甲氨基-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色 酮-3-取代）丙烯腈（化合物3v)的制備
[0420] 102mg(0. 5mmol) ld，103mg(0. 5mmol) 21為原料，參考化合物3a的合成過程，淺黃 色固體122mg，收率62%。
[0421] :H NMR(300MHz, Chloroform-d) 8 9. 02 (d, J = 1. 0Hz, 1H), 8. 21 (d, J = 9. 4Hz, 1H), 7. 60 (d, J = 3. 0Hz, 1H), 7. 53 - 7. 48 (m, 1H), 7. 44 (d, J = 1. 0Hz, 1H), 7. 34 (dd, J =9. 2, 3. 0Hz, 1H), 6. 68 (dd, J = 9. 5, 2. 8Hz, 1H), 6. 56 (d, J = 2. 9Hz, 1H), 3. 92 (s, 3H), 3. 1 7 (s, 6H).
[0422] LC-MS :392 (M+l)。
[0423] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（6-二甲氨基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲 酮（化合物I -23)的制備
[0424]
[0425] 100mg(0. 256mmol) 3v為原料，參考化合物I -1的合成過程，得紅色固體39mg，收 率 42%。
[0426] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 11.92 (s，1H)，9.71 (s，1H)，8.83 (s，1H)，8.67 (s，1H)，7 .65 (s, 1H), 7. 39 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 7. 15 - 7. 03 (m, 2H), 6. 99 - 6. 86 (m, 2H), 3. 72 (s, 3H), 2 .94 (s, 6H).
[0427] LC-MS :362 (M+l)。
[0428] 實(shí)施例24 (E/Z)-2-(5-嗎啉基-2-硝基苯）-3-(6-甲氧基-4-氧-4H-色酮-3-取 代）丙稀腈（化合物3w)的制備
[0430] 102mg(0. 5mmol) ld，124mg(0. 5mmol)2m為原料，參考化合物3a的合成過程，白色 固體17711^，收率82%。
[0431] 4 NMR (300MHz，Chloroform-d) 5 9.02 (s，1H)，8.21 (d，J = 9. 3Hz，1H)，7.60 (d，J =3. 1Hz, 1H), 7. 53 - 7. 43 (m, 2H), 7. 34 (dd, J = 9. 2, 3. 1Hz, 1H), 6. 89 (dd, J = 9. 3, 2. 8Hz, 1H), 6. 79 (d, J = 2. 8Hz, 1H), 3. 92 (s, 3H), 3. 91 - 3. 85 (m, 4H), 3. 48 - 3. 39 (m, 4H).
[0432] LC-MS :434(M+1)。
[0433] (2-羥基-5-甲氧基苯基）（6-嗎啉基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮 (化合物I -24)的制備
[0434]
[0435] 100mg(0. 231mmol)3w為原料，參考化合物I -1的合成過程，得類白色固體52mg， 收率56%。
[0436] :H NMR (600MHz, DMS〇-d6) 8 12. 05 (s, 1H), 9. 72 (s, 1H), 8. 86 (s, 1H), 8. 72 ( s, 1H), 7. 88(s, 1H), 7. 44(d, J = 8. 8Hz, 1H), 7. 25 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 7. 06 (dd, J = 8. 8, 2. 9Hz, 1H), 6. 98 - 6. 92 (m, 2H), 3. 79 (s, 4H), 3. 73 (s, 3H), 3. 14 (s, 4H).
[0437] LC-MS :404 (M+l)。
[0438] 實(shí)施例25 N- (3-甲氧基苯基）-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-胺（化合物I -26) 的制備
[0440] 于25mL圓底燒瓶中，加入5mL叔丁醇，100mg (0? 404mmol) 3-溴-9H-吡啶并 [2, 3_b]吲噪（化合物 f5)，65mg(0. 526mmol)3_ 甲氧基苯胺（化合物 6a)，3〇mg(0. 042臟〇1) Pd2dba3, 31mg(0. 084mmol)Xphos，117mg(l. 21mmol)叔丁酉享鈉，氮?dú)獗Ｗo(hù)，10CTC攪拌反應(yīng) 12 小時。反應(yīng)完全后體系降溫至室溫，倒入150mL冰水中淬滅，50mL DCM萃取三次，合并有 機(jī)相，后用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品硅膠柱層析純化 (石油醚/乙酸乙酯=2:1)得淺黃色固體52mg，收率44%。
[0441] 4 NMR (300MHz，Chloroform-d) 5 9.09 (s，1H)，8.35 (d，J = 2.2Hz，1H)，8.21 (d，J =2. 3Hz, 1H), 8. 00 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 7. 55 - 7. 45 (m, 2H), 7. 31 - 7. 20 (m, 1H), 7. 16 (t, J = 8. 0Hz, 1H), 6. 53 (dd, J = 8. 9, 1. 0Hz, 1H), 6. 49 - 6. 40 (m, 1H), 3. 77 (s, 3H).
[0442] LC-MS :290 (M+l)。
[0443] 實(shí)施例26 N- (3-甲氧基苯基）-N-甲基-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-胺（化合 物I -27)的制備
[0445] 100mg(0. 404mmol)化合物5,73mg(0. 526mmol)化合物6b為原料，參考化合物 I -26制備方法得黃色固體55mg，收率45%。
[0446] :H NMR (300MHz, Chlorof orm-d) 8l〇.16(s,lH),8.51(s,lH),8.45-8. 30 (m, 2H), 8. 20 (s, 1H), 8. 04 (dd, J = 22. 8, 9. 8Hz, 1H), 7. 61 - 7. 39 (m, 3H), 7. 23 -7. 03 (m, 1H), 6. 45 - 6. 27 (m, 2H), 3. 74 (s, 3H), 3. 41 (s, 3H).
[0447] LC-MS :304(M+1)。
[0448] 實(shí)施例27 3-((3-甲氧基苯基）-硫代）-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚（化合物I -28) 的制備
[0450] 100mg(0. 404mmol)化合物5,85mg(0. 606mmol)化合物6c為原料，參考化合物 I -26制備方法得黃色固體55mg，收率44%。
[0451] 4 NMR (300MHz，Chloroform-d) S 9. 53 (s，1H)，8. 63 (d，J = 2. 1Hz，1H)，8. 50 (d，J =2. 1Hz, 1H), 8. 03 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 54 - 7. 50 (m, 2H), 7. 34 - 7. 27 (m, 1H), 7. 16 (t, J = 7. 9Hz, 1H), 6. 78 - 6. 67 (m, 3H), 3. 72 (s, 3H).
[0452] LC-MS :307 (M+l)。
[0453] 實(shí)施例28 3-((3-甲氧基苯基）_亞砜基）-9H_吡啶并[2, 3-b]吲噪（化合物 I -29)的制備
[0455]于 25mL 圓底燒瓶中，加入 20mg (0? 065mmol)化合物 I -28, llmg (0? 07mmol)mCPBA， 5mL DCM，室溫攪拌反應(yīng)3小時，后倒入150mL DCM中，依次用50mL飽和硫代硫酸鈉溶液， 50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品硅膠柱層析純化（石油醚/ 乙酸乙酯=3:1)得淺黃色固體19mg，收率90%。
[0456] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 12. 24 (s, 1H) , 8. 86 (s, 1H) , 8. 73 (s, 1 H),8.28(d,J = 9. 0Hz, 1H) , 7. 69 (d, J = 11. 9Hz, 1H) , 7. 52 (s, 2H) , 7. 50 -7. 33 (m, 1H), 7. 29 (m, 2H), 7. 04 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 3. 80 (s, 3H).
[0457] LC-MS :323(M+1) 〇
[0458] 實(shí)施例29 3-((3-甲氧基苯基）-砜基）-9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚（化合物I -30) 的制備
[0459]
[0460] 20mg(0. 065mmol)化合物 I -28,22mg(0. 14mmol)mCPBA 為原料，參考化合物 I -29 制備方法，得淺黃色固體15mg，收率68%。
[0461] 4 MMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 50 (s，1H)，9. 18 (s，1H)，8. 98 (s，1H)，8. 37 (d，J = 9. 1Hz, 1H), 7. 65 - 7. 47 (m, 5H), 7. 41 - 7. 29 (m, 1H), 7. 22 (d, J = 9. 9Hz, 1H), 3. 84 (s, 3H).
[0462] LC-MS :339 (M+l)。
[0463] 實(shí)施例30 (2-(甲胺基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物 I -31)的制備
[0464]
[0465] 于25mL圓底燒瓶中，加入35mg(0. 122mmol)化合物I -l，5mL吡啶，室溫下滴加 42mg(0. 146mmol)三氟甲磺酸酐，滴加完后室溫攪拌反應(yīng)過夜。次日將反應(yīng)體系減壓旋轉(zhuǎn)蒸 干，加入23mg(0. 122mmol)碘化亞銅，15mL甲氨的乙醇溶液，100°C密封反應(yīng)過夜。次日降溫 至室溫后倒入150mL水中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫 酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品硅膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=3:1)得橘紅色固 體35mg，收率94%。
[0466] :H NMR (300MHz, Chloroform-d) 8 9. 29 (s, 1H), 8. 35 (s, 1H), 8. 21 (s, 1H), 8. 0 8 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 7. 74 (s, 1H), 7. 61 - 7. 49 (m, 3H), 7. 38 - 7. 29 (m, 1H), 7. 04 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 6. 92 - 6. 82 (m, 1H), 6. 70 - 6. 59 (m, 1H), 3. 28 (s, 3H).
[0467] LC-MS :302 (M+l)。
[0468] 實(shí)施例31 (2-氨基-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮 (化合物I -32)的制備
[0469]
[0470] 以71mg(0. 222mmol)化合物I -4為原料，參考化合物I -31制備方法，以氨氣的 乙醇溶液代替甲胺的乙醇溶液氨解，得黃色固體18mg，收率26%。
[0471] 4 MMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 20 (s，1H)，8. 83 (s，1H)，8. 68 (s，1H)，8. 30 (d，J = 8. 8Hz, 1H), 7. 59 - 7. 47 (m, 2H), 7. 32 - 7. 23 (m, 1H), 7. 05 (dd, J = 8. 3, 3. 0Hz, 1H), 6. 94 - 6. 83 (m, 1H), 6. 51 (s, 1H), 3. 58 (s, 3H).
[0472] LC-MS :318(M+1) 〇
[0473] 實(shí)施例32 (2-甲氨基-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲 酮（化合物I -33)的制備
[0474]
[0475] 以71mg(0. 222mmol)化合物I -4為原料，參考化合物I -31制備方法，得黃色固 體5〇11^，收率68%。
[0476] 4 MMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 13 (s，1H)，8. 55 (s，1H)，8. 35 (s，1H)，8. 21 (d，J = 8. 1Hz, 1H), 7. 80 - 7. 40 (m, 3H), 7. 26 (s, 1H), 6. 94 (m, 2H), 6. 29 (s, 1H), 3. 46 (s, 3H), 3. 21 (s ,3H).
[0477] LC-MS :332 (M+l)。
[0478] 實(shí)施例33 (2-羥基-5-甲氧基苯基）（9-(2_(二甲氨基）乙基）-9H_吡啶并 [2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -34)的制備
[0479]
[0480] 于25mL圓底燒瓶中，加入100mg(0. 314mmol)化合物I _4,5mL DMF，0°C下加入 50mg(1.26mmol)NaH，室溫反應(yīng) 1 小時。后加入 37mg(0.345mmol)2-氯-N，N-二甲基乙胺， 室溫攪拌反應(yīng)36小時。反應(yīng)體系倒入150mL冰水中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，50mL 飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品用硅膠柱層析純化（DCM/CH30H = 20:1)得褐色固體58mg，收率48%。
[0481] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 9. 75 (s，1H)，8. 90 (s，1H)，8. 78 (s，1H)，8. 34 (d，J = 8. 4Hz, 1H), 7. 82 - 7. 71 (m, 1H), 7. 58 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 32 (t, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 12 -7. 01 (m, 1H)，7. 03 - 6. 86 (m, 2H)，4. 61 (s, 2H)，3. 72 (s, 3H)，2. 74 (s, 2H)，2. 21 (s, 6H) ?
[0482] LC-MS :390(M+1)。
[0483] 實(shí)施例34 (2-羥基-5-甲氧基苯基）（9-(2-羥乙基）-9H-吡啶并[2, 3-b]叼丨 哚-3-取代）甲酮（化合物I -35)的制備
[0484]
[0485] 以 100mg(0. 314mmol)化合物 I -4,65mg(0. 345mmol) 2-溴乙醇為原料，參考化合 物I -34制備方法，得白色固體60mg，收率53%。
[0486] :H NMR (300MHz, DMS0-d6) 8 9. 74 (s, 1H), 8. 90 (s, 1H), 8. 78 (s, 1H), 8. 33 ( d, J = 7. 9Hz, 1H), 7. 76(d, J = 8. 8Hz, 1H), 7. 57 (t, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 32 (t, J = 7. 4Hz, 1H), 7. 14 - 7. 04 (m, 1H), 6. 99 - 6. 89 (m, 2H), 4. 91 (t, J = 5. 4Hz, 1H), 4. 57 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 91 - 3. 78 (m, 2H), 3. 73 (s, 3H).
[0487] LC-MS :363 (M+l)。
[0488] 實(shí)施例35 (5-(二甲胺基）-2-羥基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代） 甲酮（化合物I -36)的制備
[0489]
[0490] 于 15mL 封管中，加入 100mg(0. 272mmol)化合物 I -7,52mg(0. 272mmol)碘化亞 銅，10mL二甲氨的水溶液，120°C下密封反應(yīng)過夜。冷卻至室溫后將反應(yīng)體系倒入150mL水 中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，隨后用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀蒸干，粗品硅膠柱層析純化（DCM/CH 30H = 20:1)得褐色固體15mg，收率17%。
[0491] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12.27 (s，1H)，9.51 (s，1H)，8.88 (s，1H)，8.73 (s，1H)，8 .29 (d, J = 10. 2Hz, 1H), 7. 61 - 7. 42 (m, 2H), 7. 37 - 7. 12 (m, 2H), 7. 05 - 6. 84 (m, 1H), 6. 82 - 6. 58 (m, 1H),2. 81(s, 6H).
[0492] LC-MS :332(M+1)。
[0493] 實(shí)施例36 (2-羥基-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮 肟（化合物I -44)的制備
[0494]
[0495] 于 15mL封管中，加入 100mg(0. 314mmol)化合物 I -4,88mg(l. 26mmol)鹽酸輕胺， 130mg(l. 57mmol)醋酸鈉，10mL乙二醇，130°C下密封反應(yīng)過夜。冷卻至室溫后將反應(yīng)體系 倒入150mL水中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，隨后用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸 鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品硅膠柱層析純化（DCM/CH 30H = 20:1)得白固體95mg，收率 90%〇
[0496] 4 NMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 00 (s，1H)，11. 69 (s，1H)，10. 47 (s，1H)，8. 57 (s，1H) ,8. 37 (s, 1H), 8. 20 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 7. 61 - 7. 41 (m, 2H), 7. 30 - 7. 15 (m, 2H), 6. 89 (s, 1H) ,6. 50 (s, 1H), 3. 56 (s, 3H).
[0497] LC-MS :334 (M+l)。
[0498] 實(shí)施例37 2-(羥基（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲基）-4-硝基苯酚（化 合物8a)的制備
[0500] 于25mL長頸圓底兩口瓶中，氮?dú)夥諊录尤?00mg(0. 809mmol)化合物5,15mL重 蒸THF，降溫至-78°C，緩慢滴加0. 9mL(l. 13mmol) 1. 3M甲基鋰THF溶液，-78°C下攪拌反應(yīng) 半小時，緩慢滴加1. 3mL(l. 64mmol) 1. 3M叔丁基鋰THF溶液，-78°C下攪拌反應(yīng)半小時，體系 呈深綠色。然后，緩慢滴加774mg(3. 24mmol)化合物7a的5mL THF (重蒸）溶液，滴加完全 后自然緩慢升溫至室溫，繼續(xù)反應(yīng)20小時。后將反應(yīng)體系倒入150mL飽和氯化銨中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品 硅膠柱層析純化（DCM/CH 30H = 20:1)得褐色固體184mg，收率65%。
[0501] LC-MS :350(M+1)。
[0502] N-(4-羥基-3-(9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-羰基）苯基）乙酰胺（化合物I -25) 的制備
[0503]
[0504] 于50mL圓底燒瓶中，加入180mg (0? 516mmol)化合物8a，30mL無水DCM， 241mg(0. 568mmol)Dess-Martin氧化劑，室溫攪拌反應(yīng)3小時。后將反應(yīng)體系倒入150mL DCM中，50mL水洗滌三次，有機(jī)相依次用50mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，50mL飽和食鹽水洗 滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑，粗品加入144mg(2. 58mmol)鐵粉，5mL醋酸，加 熱回流反應(yīng)2小時。后將反應(yīng)體系倒入150mL水中，50mL DCM萃取三次，合并有機(jī)相，用 50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品用硅膠柱層析純化（DCM/ CH30H = 50:1)得褐色固體25mg，收率14%〇
[0505] :H NMR (300MHz, DMS0-d6) 8 12. 31 (s, 1H), 10. 12 (s, lH),9.89(s, 1H),8. 88(s, 1 H), 8. 73 (s, 1H), 8. 29 (d, J = 8. 9Hz, 1H), 7. 76 - 7. 61 (m, 2H), 7. 61 - 7. 45 (m, 2H), 7. 33 - 7. 23 (m, 1H), 6. 95 (d, J = 9. 1Hz, 1H), 2. 00 (s, 3H).
[0506] LC-MS :346(M+1)。
[0507] 實(shí)施例38 (2-(二甲胺基）-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代） 甲醇（化合物8b)的制備
[0509] 以200mg(0. 809mmol)化合物5,629mg(3. 24mmol)化合物7b為原料，參考化合物 8a制備方法，得黃色固體202mg，收率72%。
[0510] :H NMR (300MHz, Chloroform-d) 8 9. 60 (s, 1H),8. 51(s, 1H),8. 41(s, 1H), 8. 03 (d, J =7. 7Hz, 1H), 7. 57 - 7. 41 (m, 2H), 7. 34 - 7. 19 (m, 2H), 6. 84 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 6. 58 (d, J = 2. 9Hz, 1H), 6. 16 (s, 1H), 3. 73 (s, 3H), 2. 62 (s, 6H).
[0511] LC-MS :348 (M+l)。
[0512] (2-(二甲胺基）-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化 合物I -37)的制備
[0514] 于50mL圓底燒瓶中，加入200mg (0? 576mmol)化合物8b，30mL無水DCM， 269mg(0. 634mmol)Dess-Martin氧化劑，室溫攪拌反應(yīng)3小時。然后將反應(yīng)體系倒入150mL DCM中，50mL水洗滌三次后，有機(jī)相用50mL飽和碳酸氫鈉洗滌，50mL飽和食鹽水洗滌，無水 硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑，粗品用硅膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=2:1)得 紅褐色固體15511^，收率78%。
[0515] 4 MMR(300MHz，DMS0-d6) S 12. 27(s，1H)，8. 86(s，1H)，8. 64(s，1H)，8. 29(d，J = 8. 3Hz, 1H), 7. 64 - 7. 45 (m, 2H), 7. 31 - 7. 06 (m, 3H), 6. 94 - 6. 86 (m, 1H), 3. 76 (s, 3H), 2. 49 ( s, 6H).
[0516] LC-MS :346(M+1)。
[0517] 實(shí)施例39 (2-2-(二甲胺基）乙氧基）-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]叼| 哚-3-取代）甲醇（化合物I -38)的制備
[0519] 以200mg(0. 809mmol)化合物5,723mg(3. 24mmol)化合物7c為原料，參考化合物 8a制備方法，得淺黃色固體150mg，收率47%。
[0520] :H NMR(300MHz, DMS〇-d6) 8 11. 66 (s, 1H), 8. 43 - 8. 35 (m, 2H), 8. 12 (d, J =7. 7Hz, 1H), 7. 51 - 7. 36(m, 2H), 7. 26 - 7. 13(m, 2H), 6. 87(d, J = 8. 8Hz, 1H), 6. 79 - 6. 71 (m, 1H), 6. 09 (s, 1H), 4. 03 - 3. 84 (m, 2H), 3. 73 (s, 3H), 2. 64 - 2. 53 (m, 2H), 2. 18 (s, 6H).
[0521] LC-MS :392 (M+l)。
[0522] 實(shí)施例40 2- (2-(二甲胺基）乙氧基）-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲 哚-3-取代）甲酮（化合物I -40)的制備
[0523]
[0524] 以100mg(0. 255mmol)化合物I -38為原料，參考化合物化合物I -37制備方法得 白色固體52mg，收率52%。
[0525] :H NMR (300MHz, DMS〇-d6) 8 12. 32(s, lH),8.85(s, lH),8.67(s, 1H), 8. 30 (d, J = 8. 9Hz, 1H), 7. 93 (d, J = 10. 8Hz, 1H), 7. 58 - 7. 41 (m, 2H) ,7.32-7. 10(m, 2H), 7. 00(s, 1H), 4. 09 - 3. 93(m, 2H), 3. 77(s, 3H), 2. 39 - 2. 23 (m, 2H), 1. 92 (s, 6H).
[0526] LC-MS :390(M+1)。
[0527] 實(shí)施例41 2-((2-(羥基（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲基）-4-甲氧基 苯氧基）乙醇（化合物I -39)的制備
[0529] 以150mg(0. 607mmol)化合物5,652mg(2. 43mmol)化合物7d為原料，參考化合物 8a制備方法，得淺黃色固體133mg，收率60%。
[0530] 4 MMR(300MHz，DMS0-d6) S 11. 64(s，1H)，8. 46(s，1H)，8. 44(s，1H)，8. 13(d，J =7. 6Hz, 1H), 7. 48 - 7. 36 (m, 1H), 7. 25 (d, J = 3. 2Hz, 1H), 7. 21 - 7. 14 (m, 1H), 6. 83 (d, J =9.1Hz, 1H), 6.73 (dd，J = 8. 8,3.2Hz, 1H), 6.17 (d，J = 4.0Hz, 1H), 5.84 (d，J = 4. 0Hz, 1H), 4. 92 (t, J = 5. 3Hz, 1H), 3. 96 - 3. 78 (m, 2H), 3. 72 (s, 3H), 3. 71 - 3. 65 (m, 2H).
[0531] LC-MS :365 (M+l)。
[0532] 實(shí)施例42 (2- (2-羥基乙氧基）-5-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取 代）甲酮（化合物I -41)的制備
[0533]
[0534] 以95mg(0. 261mmol)化合物I -39為原料，參考化合物化合物I -37制備方法得 白色固體72mg，收率77%。
[0535] 泊匪R(300MHz，DMS0-d6) S 12. 30(s，1H)，8. 87(s，1H)，8. 68(s，1H)，8. 30(d ,J = 8. 1Hz, 1H), 7. 61 - 7. 44 (m, 2H), 7. 35 - 7. 07 (m, 3H), 6. 97 (s, 1H), 4. 54 (t, J = 5. 4Hz, 1H), 3. 91 (t, J = 5. 4Hz, 2H), 3. 77 (s, 3H), 3. 31 - 3. 20 (m, 2H).
[0536] LC-MS :363 (M+l)。
[0537] 實(shí)施例43 2-(羥基（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲基）-4-甲氧基苯酚 (化合物I -42)的制備
[0538]
[0539] 以150mg(0. 607mmol)化合物5, 544mg(2. 43mmol)化合物7e為原料，參考化合物 8a制備方法，得白色固體113mg，收率58%。
[0540] 4 MMR(300MHz，DMS0-d6) S 11. 70(s，1H)，9. 02(s，1H)，8. 40(s，2H), 8. 14(d，J =7. 7Hz, 1H), 7. 51 - 7. 37 (m, 2H), 7. 24 - 7. 11 (m, 2H), 6. 72 - 6. 59 (m, 2H), 6. 11 (d, J = 4. 0Hz, 1H), 5. 87 (d, J = 4. 2Hz, 1H), 3. 69 (s, 3H).
[0541] LC-MS :321(M+1) 〇
[0542] 實(shí)施例44 (3-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲醇（化合物 8c)的制備
[0544] 以200mg(0. 809mmol)化合物5,441mg(3. 24mmol)化合物7f為原料，參考化合物 8a制備方法，得白色固體200mg，收率81 %。
[0545] 4 MMR (300MHz，Chloroform-d) S 9. 06 (s，1H)，8. 48 (s，1H)，8. 33 (s，1H)，8. 02 (d ,J = 8. 4Hz, 1H), 7. 52 - 7. 43 (m, 2H), 7. 34 - 7. 28 (m, 2H), 7. 07 - 7. 00 (m, 2H), 6. 84 (dd, J = 8. 7, 3. 1Hz, 1H), 6. 07 (s, 1H), 3. 81 (s, 3H).
[0546] LC-MS :305 (M+l)。
[0547] (3-甲氧基苯基）（9H-吡啶并[2, 3-b]吲哚-3-取代）甲酮（化合物I -43)的制 備
[0548]
[0549] 以200mg (0. 658mmol)化合物8c為原料，參考化合物化合物I -37制備方法得白 色固體112mg，收率56%。
[0550] 4 MMR (300MHz，DMS0-d6) S 12. 34 (s，1H)，8. 94 (s，1H)，8. 79 (s，1H)，8. 32 (d，J = 7. 8Hz, 1H), 7. 66 - 7. 47 (m, 3H), 7. 42 - 7. 16 (m, 4H), 3. 84 (s, 3H).
[0551] LC-MS :303 (M+l)。
[0552] 生物活性測試實(shí)驗(yàn)
[0553] 1、部分化合物對腫瘤細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)
[0554] 實(shí)驗(yàn)方法：磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法（參考文獻(xiàn)：Zhang Z, Meng T, Yang N, Wang ff, Xiong B, Chen Y, et al. MT119, a new planar-structured compound, targets the colchicine site of tubulin arresting mitosis and inhibiting tumor cell proliferation. International Journal of Cancer 2011 ； 129(1) : 214-24)
[0555] 具體方法如下：
[0556] (1)將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞按照合適密度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔90 y 1，培養(yǎng) 過夜；
[0557] (2)加入不同濃度的化合物作用72h，每個濃度3個復(fù)孔，并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽 水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔；
[0558] (3)作用結(jié)束后，貼壁細(xì)胞傾去培養(yǎng)液，加入10% (w/v)三氯乙酸（100 y 1/孔） 于4°C固定lh ;
[0559] (4)用蒸餾水沖洗5次，在室溫下干燥后，每孔加入SRB溶液（4mg/ml，溶于1 %冰 乙酸）100 y 1，室溫下孵育染色15min ;
[0560] (5)用1 %冰乙酸沖洗5次以洗去未結(jié)合的SRB，室溫干燥后，每孔加入150 y 1 10mM Tris溶液，酶標(biāo)儀測定560nm波長下的光密度（0D值）。
[0561] 按照以下公式計(jì)算化合物對腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用：抑制率（％ ) = (0D_m -0D 給藥孔）/〇D劇孔X 100%，并據(jù)此按logit法計(jì)算達(dá)到5〇%抑制率時的化合物濃度，即IC5。值。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。
[0562] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不少化合物對HeLa細(xì)胞及HT-29 (American Type Culture Collection)細(xì)胞均具有良好的抑制活性（表1.)。其中化合物I -4對多種腫瘤細(xì)胞口腔 癌，肺癌，肝癌，白血病，胃癌，宮頸癌，卵巢癌，乳腺癌，結(jié)腸癌和前列腺癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的 抑制作用，抗瘤譜較廣（圖1)。
[0563] 表1.部分化合物在細(xì)胞水平對HeLa和HT-29細(xì)胞的增殖生長抑制作用

[0566] 2、化合物I -4對細(xì)胞微管蛋白的影響
[0567] 實(shí)驗(yàn)方法：免疫焚光法（Immunofluorescence-based laser confocal microscopy)(參考文獻(xiàn) Wang W, Wang YQ，Meng T，Yi JM，Huan XJ，Ma LP，et al. MCL-lDegradation Mediated by JNK Activation via MEKKl/TAKl-MKK4Contributes to Anticancer Activity of New Tubulin Inhibitor MT189. Molecular Cancer Therapeutics, 2014 ; 13 (6) : 1480-91)。其原理是抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)。
[0568] 具體方法如下：
[0569] (1)將對數(shù)生長期 HeLa 細(xì)胞（American Type Culture Collection) (1 X 105個 / 孔）接種于12孔培養(yǎng)板的蓋玻片上；
[0570] (2)細(xì)胞貼壁過夜后，加入不同濃度的化合物I -4及陽性對照化合物紫杉醇 (paclitaxel)和長春新喊（vincristine) (Sigma-Aldrich)，處理 HeLa 細(xì)胞 lh ;
[0571] (3)將培養(yǎng)液棄掉，每孔加入1ml 4%多聚甲醛，固定30min ;
[0572] (4)用含 0? 2 % 的 Tween-20 的 TBST 洗液洗滌 3 次，每孔加入 1ml 0? 2 % Triton X-100通透細(xì)胞15min ;
[0573] (5)用TBST洗液洗滌3次，每孔加入1ml 3% BSA封閉15min ;
[0574] (6)小心夾取蓋玻片，細(xì)胞面朝下置于Parafilm膜上3% BSA配制的一抗溶液中， 于濕潤條件下雜交lh ;
[0575] (7)用TBST洗液洗滌3次，小心夾取蓋玻片，細(xì)胞面朝下置于Parafilm膜上3% BSA配制的二抗溶液中，于濕潤條件下雜交lh ;
[0576] (8)用TBST洗液洗滌3次，向載玻片上滴加含DAPI的封片劑3 y 1，夾取蓋玻片細(xì) 胞面朝下放在載玻片上，利用共聚焦熒光顯微鏡觀察微管狀態(tài)的變化情況并拍照。
[0577] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物I -4與微管解聚劑相同，促進(jìn)微管發(fā)生解聚，而與微管穩(wěn) 定劑紫杉醇作用不同（圖2)。在0. 1 yM時化合物I -4就能明顯使微管發(fā)生解聚，破壞其 細(xì)胞內(nèi)正常的網(wǎng)絡(luò)狀分布；〇. 3 yM時幾乎能使微管完全解聚。
[0578] 3、化合物I -4對拓?fù)洚悩?gòu)酶II (Top2)的影響
[0579] 實(shí)驗(yàn)方法：Top2 介導(dǎo)的 kDNA 去連環(huán)反應(yīng)（Top2_mediated supercoiled pBR322relaxation)(參考文獻(xiàn)：Meng LH, Zhang JS，Ding J. Salvicine，a novel DNA topoisomerase II inhibitor, exerting its effects by trapping enzyme-DNA cleavage complexes. Biochemical Pharmacology 2001 ;62(6):733_41)。其原理是 kDNA 結(jié)構(gòu)呈網(wǎng) 絡(luò)狀，分子量很大無法進(jìn)入1 %的瓊脂糖凝膠中，而Top2能夠催化其發(fā)生去連環(huán)反應(yīng)，產(chǎn)生 2. 5KB的單體環(huán)狀DNA，能夠快速進(jìn)入1 %的瓊脂糖凝膠中，通過考查化合物對單體環(huán)狀DNA 產(chǎn)生的影響反映其對Top2活性的影響。
[0580] 具體方法如下：
[0581] 反應(yīng)體系：
[0582] 100ng kDNA(TopoGEN)
[0583] 4U Top2
[0584] buffer:4lil 10XDNA Top2buffer(mixed by buffer A and B in the Top2assay kit,
[0585] TopoGEN)
[0586] ddH20: up to 20 y 1
[0587] 反應(yīng)條件：37°C ;30min。
[0588] 以 R16(5_(2_(dimethylamino)ethyl)-4H_benzo[de]benzo[4, 5]thieno[2, 3_g] isoquinoline-4, 6 (5H) -dione)為陽性對照，化合物I -4分別取100 y M和150 y M兩個濃 度進(jìn)行活性檢測。反應(yīng)結(jié)束后用1 %的瓊脂糖凝膠在TAE緩沖液中電泳lh，電壓100V。用 1 y g/ml的GelRed染色后通過凝膠成像系統(tǒng)拍照。
[0589] 結(jié)果顯示，100 y M濃度時化合物I -4能顯著抑制Top2的kDNA解螺旋活性，Top2 產(chǎn)生的單體環(huán)狀DNA完全消失（圖3)。
[0590] 4.化合物I -4誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡與依托泊苷（Top2抑制劑）與長春新堿（微管 蛋白抑制劑）聯(lián)合用藥區(qū)別實(shí)驗(yàn)
[0591] 實(shí)驗(yàn)方法：Western blot 實(shí)驗(yàn)（參考文獻(xiàn) Wang W, Wang YQ，Meng T，Yi JM，Huan XJ,Ma LP, et al. Molecular Cancer Therapeutics 2014 ； 13 (6):1480-91.)
[0592] 具體方法如下：
[0593] (1)將處于對數(shù)生長期的HeLa細(xì)胞，按合適密度接種于6孔培養(yǎng)板中，待細(xì)胞貼壁 過夜后加入相應(yīng)濃度的化合物，于37°C作用相應(yīng)時間。
[0594] (2)之后，每孔加入 1XSDS 上樣緩沖液（50mM Tris pH 6. 8, lOOmM DIT，2% SDS， 〇? 1 %溴酚藍(lán)，10 %甘油）裂解細(xì)胞。
[0595] (3)收集細(xì)胞裂解液后，于沸水浴中加熱10min，10, OOOrpm離心10min。取上清液 進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳結(jié)束后，用半干電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)將蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。
[0596] (4)轉(zhuǎn)移結(jié)束后，用麗春紅（Ponceau S)染色確定轉(zhuǎn)移情況和蛋白條帶在硝酸 纖維素膜上的位置，標(biāo)記后用含5%脫脂奶粉的封閉液[5%脫脂奶粉、20mM Tris-HCl pH7. 2-7. 4,150mM NaCl，0. 1% Tween-20]于搖床室溫封閉30min。然后，將膜置于封閉液 (5%脫脂奶粉）稀釋的一抗中4°C過夜。
[0597] 用洗液[100mM Tris-HCl pH7. 2-7. 4,0. 9% NaCl，0. 2% Tween-20]室溫洗滌三 次，每次l〇min。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫置于搖床上平緩搖動lh。再用洗液 洗滌三次后，發(fā)色，曝光，顯影，定影，拍照。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，采用Adobe Photoshop CS2對 Western blot結(jié)果進(jìn)行定量分析。
[0598] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在誘導(dǎo)凋亡實(shí)驗(yàn)中，與濃度和時間相關(guān)，化合物I -4誘導(dǎo) 腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制與長春新堿類似，但不同于依托泊苷，也不同于兩者的聯(lián)合用 藥。兩者的聯(lián)合用藥不能像化合物I -4 一樣抑制HeLa細(xì)胞中MCL-l(myeloid cell leukemia-1), cIAPl (cellular inhibitor of apoptosis protein-1)和 XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)顯示出化合物I -4在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 機(jī)制上與聯(lián)合用藥的區(qū)別（圖4)。
[0599] 5.化合物I -4對耐藥腫瘤細(xì)胞生長抑制作用實(shí)驗(yàn)
[0600] 實(shí)驗(yàn)方法及具體操作參考實(shí)驗(yàn)1，耐藥細(xì)胞株分別為長春新堿耐藥的KB細(xì)胞（KB/ VCR)，對阿霉素耐藥的MES-SA細(xì)胞（MES-SA/DX5)和對米托蒽醌耐藥的HL60細(xì)胞（HL60/ MX2)?；衔颕 -4對耐藥腫瘤細(xì)胞和親代腫瘤細(xì)胞生長抑制作用見表2。
[0601] 表2.化合物I -4在細(xì)胞水平對耐藥腫瘤細(xì)胞和親代腫瘤增殖生長抑制作用
[0603] RF :耐藥指數(shù)
[0604] 從以上結(jié)果可以看出，該類化合物具有明顯的抗腫瘤作用，而且對耐藥腫瘤細(xì)胞 也有很強(qiáng)的作用，尤其是該類化合物對耐藥腫瘤細(xì)胞株強(qiáng)烈的殺滅作用值得關(guān)注。且初步 的作用機(jī)制顯示該類化合物與聯(lián)合用藥的結(jié)果并不完全相同，如依托泊苷VP_16(Top2抑 制劑）與長春新堿（微管蛋白抑制劑）的聯(lián)合用藥。這類雙重抑制劑使將來的用藥更為簡 便，且不易產(chǎn)生耐藥性。
[0605] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范 圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一類具有如下通式I所示結(jié)構(gòu)的化合物：其中， &、R2、R3、R4各自獨(dú)立地選自下組：氫、鹵素、硝基、氨基、羥基、取代或未取代的C1-C4 的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3-C6的環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈 烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈亞烷基-胺基、取代或未取代的C1-C4的直鏈 或支鏈胺基，以及取代或未取代的含氧或氮的飽和五元或六元雜環(huán)基； R5選自下組：氫、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3-C6的 環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈 亞烷基-羥基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基，以及取代或未取代的含氧或氮的 飽和五元或六元雜環(huán)基； R6選自下組：氫、鹵素、羥基、氨基、甲氨基、二甲氨基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或 支鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支 鏈胺基_氧基； R7選自下組：氫、鹵素、羥基、氨基、甲基、甲氧基、甲氨基、二甲氨基，-OAC、甲氧羰基，乙 酰氨基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷 氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基；Rs選自下組：氫、鹵素、羥基、氨基、甲基、甲氧基、甲氨基、二甲氨基、甲氧羰基、乙酰氨 基、甲砜基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支 鏈烷氧基、取代或未取代的C1-C4的直鏈或支鏈胺基； X為鏈接基團(tuán)，選自下組：亞甲基、氧、硫、幾基、亞諷基、諷基、其中，所述的取代指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、 C1-C8烷基、C1-C8烷基-胺基、羥基、甲基胺基、氨基、C1-C8烷基-氧基。2. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物，其特征在于， R5選自下組：氫、羥乙基、N，N-二甲基氨基乙基； R6選自下組：氫、羥基、-NH-CH 3、-NH2、-N (CH3) 2、-0 (CH2) 20H、-0 (CH2) 2N (CH3) 2; R7選自下組：氫、氟、羥基、甲基、甲氧基、乙酰氨基、-〇Ac ; Rs選自下組：氫、氟、氯、溴、甲基、甲氧基、乙酰氨基、二甲氨基、甲砜基；3. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物，其特征在于， 札為氫、氟； R2為氫、氟、氯、甲氧基、二甲胺基、嗎啉基； r3為氫、氟、氯、甲氧基； r4為氫、氟、甲氧基； R5為氫、羥乙基、N，N-二甲基氨基乙基； R6為氫、羥基、氨基、甲胺基、二甲胺基、-〇 (CH 2) 20H、-0 (CH2) 2N (CH3) 2; R7為氫、氟、羥基、甲氧基、_〇Ac ; R8為氫、氟、氯、溴、甲氧基、乙酰氨基、二甲氨基、甲砜基； X為鏈接的硫、甲氨基、羰基、亞砜基、砜基、4. 如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于，包括步驟（b)和任選的（c)、 (cl)和 / 或（c2): (b) 在有機(jī)溶劑中，在還原劑存在下，用式3化合物進(jìn)行關(guān)環(huán)反應(yīng)，得到式la化合物；(c) 在有機(jī)溶劑中，在堿存在下，用式la化合物與R5Y進(jìn)行取代反應(yīng)，得到式lb化合 物；(cl)用式lb化合物制備式lb'化合物；(c2)用式lb'化合物制備式I化合物；優(yōu)選地，所述的方法還包括步驟： (a)在有機(jī)溶劑中，用式1化合物和式2化合物反應(yīng)，得到式3化合物；式中，Y選自下組：氯、碘、溴、甲磺酸酯基、對甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基；其余各 基團(tuán)的定義如權(quán)利要求1中所述。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括步驟（d): (d) 在惰性溶劑中，在堿存在下，用式5化合物與式6化合物反應(yīng)，得到式Ic化合物；或所述方法包括步驟（e)和任選的步驟（f): (e) 在惰性溶劑中，在堿存在下，用式5化合物與式7化合物反應(yīng)，得到式Id化合物；(f) 在惰性溶劑中，在氧化劑存在下，用式Id化合物與氧化劑反應(yīng)，得到式Ie化合物；式中，各基團(tuán)的定義如權(quán)利要求1中所述。6. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物的用途，其特征在 于，（a)體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞生長；(b)制備治療腫瘤的藥物組合物；(c)體外非治 療性地抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性；（d)體外非治療性地抑制微管蛋白的活性；(e)體外非 治療性地使細(xì)胞微管解聚；（f)體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖生長；(g)制備具有拓 撲異構(gòu)酶II和微管蛋白雙重抑制活性的藥物組合物。7. -種拓?fù)洚悩?gòu)酶II活性抑制劑，所述的拓?fù)洚悩?gòu)酶II活性抑制劑含有抑制有效量 的如權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。8. -種細(xì)胞微管解聚劑，所述的細(xì)胞微管解聚劑含有解聚有效量的如權(quán)利要求1所述 的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。9. 一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有治療有效量的如權(quán)利要求1所述的化合 物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。10. -種拓?fù)洚悩?gòu)酶II和微管蛋白雙重抑制劑，其特征在于，所述的抑制劑包括如權(quán) 利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。
【文檔編號】A61P35/02GK105820165SQ201510005697
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2015年1月5日
【發(fā)明人】楊春皓, 繆澤鴻, 張小飛, 衣君玫, 賀茜, 宦霞娟, 宋姍姍, 王迎慶, 陳奕, 丁健
【申請人】中國科學(xué)院上海藥物研究所