一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步驟：(1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2～4次，洗滌干凈的螺旋藻經(jīng)壓力為200～400kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5～7min，超聲波處理12～15min，將破碎的螺旋藻懸濁液于中離心10min，收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4～5℃下儲(chǔ)存；(2)雙水相萃取：向步驟(1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入甲氧基聚乙二醇和酒石酸鉀鈉，勻速攪拌1～2h，靜置24h使兩相分開(kāi)，收集上相；(3)成品制備：將步驟(2)所得藻藍(lán)蛋白液過(guò)DE?AE?Sephadex陰離子交換層析柱，采用0～0.35mol/L的氯化鈉進(jìn)行線性洗脫，收集氯化鈉濃度為0.25～0.3mol/L時(shí)的洗脫液，透析凍干制得藻藍(lán)蛋白粉末。本發(fā)明分離效果好，過(guò)濾分離回收率高，產(chǎn)品質(zhì)量高，運(yùn)行成本低。
【專利說(shuō)明】
一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白 的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本領(lǐng)域涉及天然產(chǎn)物深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸 鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 螺旋藻（Spirulina)是一種螺旋狀、不分枝的多細(xì)胞絲狀微藻(Microalga)，系藍(lán) 藻門(mén)（〇5^11(^115^3)、段殖體目（11〇1'111〇8〇113168)、顫藻科（〇8(3；[131：01^30636)、螺旋藻屬 (Spirulina)的古老低等原核生物。目前已知螺旋藻有30多種，最具有開(kāi)發(fā)價(jià)值的是鈍頂螺 旋藻、極大螺旋藻和鹽澤螺旋藻，其中鈍頂螺旋藻的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高。鈍頂螺旋藻具有蛋白含 量高、繁殖快等特點(diǎn)，藻粉中藻藍(lán)蛋白（Phycocyanin，PC)含量高達(dá)20 %，是一種藻藍(lán)蛋白含 量車父尚的澡類品種。澡監(jiān)蛋白具有抗癌、抗氧化、治療腦缺血損傷、提機(jī)體尚免疫力等多種 生理功能。藻藍(lán)蛋白的純化技術(shù)也成為人們研究的重點(diǎn)問(wèn)題之一。目前，藻藍(lán)蛋白常用的分 離純化技術(shù)有鹽析、雙水相萃取、反膠團(tuán)萃取、柱層析等幾種。已報(bào)道的螺旋藻藻藍(lán)蛋白分 離純化大多采用沉淀、離心、透析和色譜等工藝，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中存在步驟繁瑣、能耗高、 產(chǎn)率低、操作周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。
[0003] 甲氧基聚乙二醇具有良好的水溶性、潤(rùn)濕性、潤(rùn)滑性、生理惰性、對(duì)人體無(wú)刺激、溫 和，在化妝品和制藥工業(yè)中應(yīng)用廣泛?？蛇x取不同分子質(zhì)量級(jí)分的產(chǎn)品來(lái)改變制品的粘度、 吸濕性和組織結(jié)構(gòu)。相對(duì)分子量低的產(chǎn)品（分子量小于2000)適于作潤(rùn)濕劑和稠度調(diào)節(jié)劑， 用于膏霜、乳液、牙膏和剔須膏等。相對(duì)分子量高的產(chǎn)品適用于唇膏、除臭棒、香皂、剔須皂、 粉底和美容化妝品等。在清洗劑中，也用做懸浮劑和增稠劑。在制藥工業(yè)中，用作油膏、乳 劑、軟膏、洗劑和栓劑的基質(zhì)。也有將本品與丙烯酸等含有可聚合雙建反應(yīng)，合成酯類以增 加其反應(yīng)活性，是制備聚羧酸鹽高效水泥減水劑的主要單體類原材料。分子鏈末端的羥基 活性得到最大程度的保留，具有姣好的親水性和羥基反應(yīng)活性。
[0004] 目前，缺乏一種過(guò)濾分離回收率高的甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分 離藻藍(lán)蛋白的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種過(guò)濾分離回收率高的甲氧基聚乙二 醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：本發(fā)明的一種甲氧基聚乙二 醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包括如下步驟：
[0007] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液:用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2~4次，洗滌干凈的螺旋 藻經(jīng)壓力為200~400kg/cm 2的高壓細(xì)胞勾衆(zhòng)機(jī)破碎5~7min，超聲波處理12~15min，將破 碎的螺旋藻懸濁液于中離心l〇min，收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4~5°C下儲(chǔ) 存；
[0008] (2)雙水相萃取：向步驟（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入甲氧基聚乙二醇和酒 石酸鉀鈉，勻速攪拌1~2h，靜置24h使兩相分開(kāi)，收集上相；
[0009] (3)成品制備:將步驟(2)所得藻藍(lán)蛋白液過(guò)DE-AE-Sephadex陰離子交換層析柱， 采用0~0.35mol/L的氯化鈉進(jìn)行線性洗脫，收集氯化鈉濃度為0.25~0.3mol/L時(shí)的洗脫 液，透析凍干制得藻藍(lán)蛋白粉末。
[0010] 進(jìn)一步地，在步驟（1)中，所述破碎的螺旋藻懸濁液的離心的設(shè)備為離心機(jī)，離心 速率為8000 ~10000r/min。
[0011] 進(jìn)一步地，在步驟（2)中，所述甲氧基聚乙二醇質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的12~ 20% 〇
[0012] 更進(jìn)一步地，在步驟（2)中，所述酒石酸鉀鈉質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的17~ 23%〇
[0013] 進(jìn)一步地，在步驟(2)中，所述含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的 65 ~71%〇
[0014] 有益效果:本發(fā)明分離效果好，過(guò)濾分離回收率高，產(chǎn)品質(zhì)量高，運(yùn)行成本低;過(guò)程 無(wú)需添加化學(xué)藥品、溶媒溶劑，不帶入二次污染物質(zhì);設(shè)備可自動(dòng)運(yùn)行，穩(wěn)定性好。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0016] (1)本發(fā)明的雙水相萃取與其他分離方法相比，具有易放大、操作時(shí)間短、成相物 質(zhì)對(duì)待分離的生物活性物質(zhì)無(wú)毒負(fù)作用等優(yōu)點(diǎn)。在雙水相體系中，待分離的組分選擇性分 配于其中一相，而其他雜質(zhì)組分分配于另一相中，因此使待分離組分的濃度和純度都得到 提高。其中影響雙水相萃取的因素很多，主要有:聚合物種類、聚合物平均分子質(zhì)量和濃度、 成相無(wú)機(jī)鹽種類和濃度、離子強(qiáng)度、pH值等等。
[0017] (2)本發(fā)明的雙水相體系用于萃取螺旋藻細(xì)胞破碎液中藻藍(lán)蛋白，經(jīng)一次萃取藻 藍(lán)蛋白收率可達(dá)94.11%，分配系數(shù)達(dá)到8.03,分離因數(shù)達(dá)到6.5。結(jié)果證實(shí)螺旋藻藻藍(lán)蛋白 在該體系中的分配系數(shù)和分離因數(shù)均較高。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為破壁后螺旋藻溶液的紫外-可見(jiàn)吸收?qǐng)D；
[0019] 圖2為酒石酸鉀鈉飽和度對(duì)藻藍(lán)蛋白純度的影響圖；
[0020] 圖3為pH值對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 以下通過(guò)實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)附圖進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例是 本發(fā)明的闡釋和舉例，并不以任何形式限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實(shí)施例1
[0023]本發(fā)明的一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包 括如下步驟：
[0024] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2次，洗滌干凈的螺旋藻 經(jīng)壓力為200kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5min，超聲波處理12min，將破碎的螺旋藻懸濁 液于中離心l〇min，收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4.5°C下儲(chǔ)存;所述破碎的螺旋 藻懸濁液的離心的設(shè)備為離心機(jī)，離心速率為9000r/min。
[0025] (2)雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入甲氧基聚乙二醇和酒 石酸鉀鈉，勻速攪拌lh，靜置24h使兩相分開(kāi)，收集上相;所述甲氧基聚乙二醇質(zhì)量為雙水相 體系總質(zhì)量的15 %。所述酒石酸鉀鈉質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的19 %。所述含藻藍(lán)蛋白的 粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的71 %。
[0026] (3)成品制備:將步驟(2)所得藻藍(lán)蛋白液過(guò)DE-AE-Sephadex陰離子交換層析柱， 采用0~0.35mol/L的氯化鈉進(jìn)行線性洗脫，收集氯化鈉濃度為0.25~0.3mol/L時(shí)的洗脫 液，透析凍干制得藻藍(lán)蛋白粉末。
[0027]如圖1所示，圖1為破壁后螺旋藻溶液的紫外-可見(jiàn)吸收?qǐng)D，藻藍(lán)蛋白溶液在280nm 和620nm處有最大吸收波長(zhǎng)，螺旋藻蛋白在280nm處有最大吸收峰，藻藍(lán)蛋白在620nm處有最 大吸收峰，凍融破壁后螺旋藻溶液中藻藍(lán)蛋白純度為0.4,其中螺旋藻雜蛋白含量較多。 [0028] 實(shí)施例2
[0029]本發(fā)明的一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包 括如下步驟：
[0030] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻3次，洗滌干凈的螺旋藻 經(jīng)壓力為400kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎7min，超聲波處理13min，將破碎的螺旋藻懸濁 液于中離心l〇min，收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于5°C下儲(chǔ)存;所述破碎的螺旋藻 懸濁液的離心的設(shè)備為離心機(jī)，離心速率為8000r/min。
[0031] (2)雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入甲氧基聚乙二醇和酒 石酸鉀鈉，勻速攪拌2h，靜置24h使兩相分開(kāi)，收集上相;所述甲氧基聚乙二醇質(zhì)量為雙水相 體系總質(zhì)量的18%。所述酒石酸鉀鈉質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的23%。所述含藻藍(lán)蛋白的 粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的67%。
[0032] (3)成品制備:將步驟(2)所得藻藍(lán)蛋白液過(guò)DE-AE-Sephadex陰離子交換層析柱， 采用0~0.35mol/L的氯化鈉進(jìn)行線性洗脫，收集氯化鈉濃度為0.25~0.3mol/L時(shí)的洗脫 液，透析凍干制得藻藍(lán)蛋白粉末。
[0033] 實(shí)施例3
[0034]本發(fā)明的一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，包 括如下步驟：
[0035] (1)制備藻藍(lán)蛋白粗提取液：用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻4次，洗滌干凈的螺旋藻 經(jīng)壓力為300kg/cm 2的高壓細(xì)胞勾衆(zhòng)機(jī)破碎6min，超聲波處理15min，將破碎的螺旋藻懸池 液于中離心10min，收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4°C下儲(chǔ)存;所述破碎的螺旋藻 懸濁液的離心的設(shè)備為離心機(jī)，離心速率為l〇〇〇〇r/min。
[0036] (2)雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入甲氧基聚乙二醇和酒 石酸鉀鈉，勻速攪拌1.6h，靜置24h使兩相分開(kāi)，收集上相;所述甲氧基聚乙二醇質(zhì)量為雙水 相體系總質(zhì)量的17%。所述酒石酸鉀鈉質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的20%。所述含藻藍(lán)蛋白 的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的65%。
[0037]試驗(yàn) 1
[0038] 酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)雙水相形成的影響
[0039] 酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)雙水相形成的影響如表1所示，
[0040]表 1
[0042]^由表1所示，當(dāng)甲氧基聚乙二醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一定時(shí)，隨著酒石酸鉀鈉濃度的增加， 相比逐漸降低，藻藍(lán)蛋白的分配系數(shù)先升高后降低，藻藍(lán)蛋白的純度應(yīng)該呈現(xiàn)先升高后降 低，上相中藻藍(lán)蛋白的提取率先升高后降低。當(dāng)甲氧基聚乙二醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一定時(shí)，酒石酸 鉀鈉濃度為21%時(shí)，上相中藻藍(lán)蛋白純度、提取率達(dá)到最大值。隨著酒石酸鉀鈉濃度在一定 范圍內(nèi)的提高，雙水相體系逐漸遠(yuǎn)離臨界點(diǎn)，物質(zhì)在兩相中界面張力增大，有利于藻藍(lán)蛋白 在上相富集，多糖在下相富集；當(dāng)酒石酸鉀鈉濃度更大時(shí)，上相體積逐漸減小，同時(shí)粘度逐 漸增大，不利于藻藍(lán)蛋白的在上相的富集。
[0043] 如圖2所示，10 %~30 %酒石酸鉀鈉析得到的藻藍(lán)蛋白純度較低，30 %~45 %酒石 酸鉀鈉析出藻藍(lán)蛋白，藻藍(lán)蛋白純度逐漸增加，大于45%飽和度酒石酸鉀鈉鹽析藻藍(lán)蛋白 純度變化不大。確定：10 %~30 %之間的酒石酸鉀鈉飽和度可以用來(lái)除去大量螺旋藻雜蛋 白，大于40%飽和度的酒石酸鉀鈉用于沉淀藻藍(lán)蛋白和藻藍(lán)蛋白的富集純化。
[0044] 試驗(yàn) 2
[0045] 甲氧基聚乙二醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取的影響
[0046] 甲氧基聚乙二醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取的影響如表2所示，
[0047] 表 2
[0048]
[0049] 從表2可以看出，甲氧基聚乙二醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取率和純度均有 影響。當(dāng)甲氧基聚乙二醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%時(shí)，藻藍(lán)蛋白萃取率達(dá)到了 94.11%，純度達(dá)到 了0.76。
[0050] 由試驗(yàn)2可知，甲氧基聚乙二醇與酒石酸鉀鈉形成的雙水相體系中，上相為甲氧基 聚乙二醇相，下相為酒石酸鉀鈉鹽相。當(dāng)甲氧基聚乙二醇的濃度大于其成相臨界點(diǎn)的濃度 時(shí)，系統(tǒng)遠(yuǎn)離臨界點(diǎn)，系線長(zhǎng)度增大，兩相性質(zhì)的差別也增大，同時(shí)蛋白質(zhì)在兩相中的界面 張力差別增大，使其趨于向一側(cè)分配。在甲氧基聚乙二醇-酒石酸鉀鈉雙水相體系中，酒石 酸鉀鈉濃度的增高會(huì)使下相鹽析作用加強(qiáng)，下相中的藻藍(lán)蛋白向上相轉(zhuǎn)移，并富集于上相。 當(dāng)富集到上相的藻藍(lán)蛋白濃度超過(guò)其溶解度時(shí)，藻藍(lán)蛋白就會(huì)被析出而分布在上下相之 間，造成萃取率下降。同時(shí)，當(dāng)甲氧基聚乙二醇相對(duì)分子質(zhì)量較大時(shí)，由于其極強(qiáng)的吸水能 力，會(huì)導(dǎo)致下相酒石酸鉀鈉濃度增大，上相自由水含量降低，也會(huì)造成部分蛋白質(zhì)在上下相 之間析出。當(dāng)甲氧基聚乙二醇的相對(duì)分子質(zhì)量為4000U或6000U時(shí)，下相中沒(méi)有檢測(cè)到藻藍(lán) 蛋白，但上下相之間有藻藍(lán)蛋白析出。選擇適宜的甲氧基聚乙二醇相對(duì)分子質(zhì)量及酒石酸 鉀鈉濃度對(duì)于提高藻藍(lán)蛋白的萃取率非常重要。
[0051 ]試驗(yàn) 3
[0052]離子強(qiáng)度對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響
[0053]雙水相體系上下相間存在電位差，通過(guò)加入不同種類和濃度的鹽可以使得體系的 電荷狀態(tài)和疏水作用發(fā)生改變，進(jìn)而對(duì)物質(zhì)在兩相中的分配產(chǎn)生顯著影響。配置甲氧基聚 乙二醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%，酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%的體系，并考察分別添加不同濃度 的NaCl情況下對(duì)藻藍(lán)蛋白萃取的影響。離子強(qiáng)度對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響如表 3所示，
[0054]表 3
[0057] 由表3可知，隨著NaCl濃度的升高，上相中藻藍(lán)蛋白純度與提取率都先升高后降 低。當(dāng)甲氧基聚乙二醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%，酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%時(shí)，與未添加NaCl 的體系相比，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%的NaCl情況下，上相中藻藍(lán)蛋白純度與提取率都較高。
[0058] 試驗(yàn) 4
[0059] pH值對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響
[0060] 雙水相體系pH值變化能改變兩相的點(diǎn)位，并影響蛋白質(zhì)帶點(diǎn)性質(zhì)，從而影響藻藍(lán) 蛋白在兩相中的分配。配制酒石酸鉀鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%，甲氧基聚乙二醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 12%的雙水相體系，體系pH為5.8~6.3。由于藻藍(lán)蛋白較穩(wěn)定的pH范圍為4.5~8.5，因此調(diào) 節(jié)體系pH分別為4.0,5.0,6.0，7.0和8.0 wH值對(duì)雙水相體系及藻藍(lán)蛋白萃取的影響如圖3 所示，隨著雙水相體系pH的升高，上相中藻藍(lán)蛋白的純度與提取率都呈降低趨勢(shì)。而體系原 始的pH約為6.0。
[0061]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，本發(fā)明 要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)、說(shuō)明書(shū)及其等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方法，其特征在于包 括如下步驟： (1) 制備藻藍(lán)蛋白粗提取液:用蒸餾水清洗新鮮的螺旋藻2~4次，洗滌干凈的螺旋藻經(jīng) 壓力為200~400kg/cm2的高壓細(xì)胞勻漿機(jī)破碎5~7min，超聲波處理12~15min，將破碎的 螺旋藻懸濁液于中離心10min，收集上清液，制得含藻藍(lán)蛋白的粗提液于4~5°C下儲(chǔ)存； (2) 雙水相萃?。合虿襟E（1)所得含藻藍(lán)蛋白的粗提液中加入甲氧基聚乙二醇和酒石酸 鉀鈉，勻速攪拌1~2h，靜置24h使兩相分開(kāi)，收集上相； (3) 成品制備:將步驟(2)所得藻藍(lán)蛋白液過(guò)DE-AE-Sephadex陰離子交換層析柱，采用0 ~0.35mol/L的氯化鈉進(jìn)行線性洗脫，收集氯化鈉濃度為0.25~0.3mol/L時(shí)的洗脫液，透析 凍干制得藻藍(lán)蛋白粉末。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方 法，其特征在于:在步驟(1)中，所述破碎的螺旋藻懸濁液的離心的設(shè)備為離心機(jī)，離心速率 為8000~10000r/min。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的方 法，其特征在于:在步驟(2)中，所述甲氧基聚乙二醇質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的12~20%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋白的 方法，其特征在于:在步驟(2)中，所述酒石酸鉀鈉質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì)量的17~23%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或3或4所述的甲氧基聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相萃取分離藻藍(lán)蛋 白的方法，其特征在于:在步驟(2)中，所述含藻藍(lán)蛋白的粗提液的質(zhì)量為雙水相體系總質(zhì) 量的65~71 %。
【文檔編號(hào)】C07K1/14GK105820238SQ201610240773
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年4月18日
【發(fā)明人】高志剛, 汪世軍, 王峰
【申請(qǐng)人】東臺(tái)市賜百年生物工程有限公司