磷酸苯丙哌林的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了磷酸苯丙哌林的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的磷酸苯丙哌林的藥物組合物中含有磷酸苯丙哌林和一種從川貝母的干燥鱗莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，磷酸苯丙哌林、化合物(Ⅰ)單獨(dú)使用時，能明顯改善擬血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力；磷酸苯丙哌林和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，改善效果更為明顯，可以開發(fā)成治療擬血管性癡呆的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
磷酸苯丙哌林的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及磷酸苯丙哌林的新用途，具體涉及磷酸苯丙哌林 的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 磷酸苯丙哌林為非麻醉性鎮(zhèn)咳劑，有雙重鎮(zhèn)咳作用，作用機(jī)制主要是阻斷肺-胸膜 的牽張感受器產(chǎn)生的肺-迷走神經(jīng)反射，同時對呼吸中樞也有抑制作用，故其鎮(zhèn)咳作用兼具 中樞性和末梢性雙重機(jī)制。其作用較可待因強(qiáng)2-4倍。藥理研究結(jié)果證明，可口服或靜注本 品2mg/kg可完全抑制多種刺激引起的咳嗽。本品口服生效快，服后15-20分鐘即生效，持續(xù) 時間長(4-7小時）。本品不抑制呼吸，無成癮性，不引起膽道及十二指腸痙攣或收縮，不會引 起便秘。
[0003] 血管性癡呆(vascular dementia，VD)是發(fā)生在腦血管疾病基礎(chǔ)上的以記憶、認(rèn)知 功能缺損為主，或伴有語言、視覺空間技能及情感或人格障礙的獲得性智能的持續(xù)性損害。
[0004] 迄今為止，尚未見磷酸苯丙哌林及其藥物組合物與血管性癡呆的相關(guān)性報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種磷酸苯丙哌林的藥物組合物，該藥物組合物中含有磷 酸苯丙哌林和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，磷酸苯丙哌林和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療血管性 癡呆。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
〇
[0009] -種磷酸苯丙哌林的藥物組合物，包括磷酸苯丙哌林、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將川貝母的干燥鱗莖粉碎，用 85~95 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正 丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用35 %乙醇洗脫8個柱體積，再用90 %乙醇洗脫12個柱體積， 收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗脫濃縮物用 正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4 個組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和10:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅 膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗脫液，洗脫 液減壓濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備治療血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 上述磷酸苯丙哌林的藥物組合物在制備治療血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的磷酸苯丙哌林的藥物組合物中含有磷酸苯丙哌林和 一種從川貝母的干燥鱗莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，磷酸苯丙哌林和該天然產(chǎn)物 單獨(dú)作用時，對血管性癡呆具有治療作用;二者聯(lián)合作用時，對血管性癡呆的治療效果進(jìn)一 步提尚，可以開發(fā)成治療血管性癡呆的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0020] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0021] 分離方法：（a)將川貝母的干燥鱗莖（2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提取（15L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用 90%乙醇洗脫12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中90%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1 (11個柱體積）、60:1 (9個柱 體積）、30:1(9個柱體積)和15:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1(6個柱體積）、30:1(8個柱體 積)和10:1(6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十 八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14 ~18個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (308mg，HPLC歸一化純度大于98% )。 [0022] 結(jié)構(gòu)確證:淺黃色粉末，HRAPCMS顯示[M+H]+為m/z 241.0831，結(jié)合核磁特征可得 分子式為&此2〇3，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ( ΡΡπι，CDC13，500MHz):H-1 (3 · 52，d，J = 6.2Hz，2H)，H-2(6.24，dd，J = 10.3,6.2Hz)，H-3(5.82，dd，J=10.3,7.1Hz)，H-4(3.73， m)，H-8(8.03，s)，H-12(8.43，s)，H-13(9.74，s)，H-14(10.38，s)，H-15(1.47，q，J=7.6Hz); 核磁共振碳譜數(shù)據(jù)知(？?111，〇0(：13，12510^):27.3(012，1-〇，124.6(01，2-〇，128.3(01，3- C)，29.8(CH，4-C)，125.8(C，5-C)，161.3(C，6-C)，120.4(C，7-C)，124.1(CH，8-C)，133.4(C， 9-C)，134.2(C，10-C)，129.8(C，n-C)，161.3(CH，12-C)，185.1(CH，13-C)，193.8(CH，14- C)，18.8(CH3，15-C)。紅外波譜表明該化合物含有羰基（1765CHT1)，烯烴（1647cnf〇和芳香環(huán) (1612cm-1,1564m-1,1463m-1)基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有15個碳信號，包括一個甲 基18.8,一個亞甲基27.3,七個次甲基(兩個羰基碳，三個烯烴碳與一個連氧烯烴碳） δ。124.6、128·3、29·8、124·1、161·3、185·1、193·8 以及六個季碳(六個烯烴碳）δ。125.8、 161.3、120.4、133.4、134.2、129.8;以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為三環(huán)結(jié) 構(gòu)。1Η-匪R譜顯示一個甲基質(zhì)子信號δΗ 1.47(3!14，1 = 7.6他），一組環(huán)內(nèi)烯烴質(zhì)子信號5116.24(1!1，(1(1，1=10.3,6.2!^)與5[15.82(1!1，(1(1，1=10.3,7.1!^)，一個環(huán)內(nèi)連氧烯烴質(zhì)子 信號5h 8.43(lH，s)，一個芳經(jīng)質(zhì)子信號5h 8.03(lH，s)，兩個醛基質(zhì)子信號δΗ 9.74(lH，s) 與δΗ 10.38(1!1，8)。腿8(：譜中，Η_13(δΗ 9.74)與C-7(Sc 120.4)和C-120c 161.3)的相關(guān)性 表明C-110c 129.8)位連有一個醛基，Η-14(δΗ 10.38)與 C-lO0c 134.2)和 C-8(Sc 124.1) 的相關(guān)性表明另一個醛基連接在090。133.4)位，!13-150111.47)與(：-30。128.3)和(：-5 00125.8)的相關(guān)性可知(：-4(3。29.8)位連有一個甲基。此外，分析圓8(：譜中!12-1與(：-2和 C-10，H-3 與 C-2 和 C-4，H-8 與 C-7 和 C-9，H-12 與 C-6 和 C-11 以及 H3-15 與 C-3 與 C-5 的相關(guān)性并 結(jié)合1Η」Η⑶SY譜中H2-l/H-2/H-3與H-12/H-8/H-13的相關(guān)性可以構(gòu)建出該化合物的連接 方式，進(jìn)而確證該化合物的結(jié)構(gòu)。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類 型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下式所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值 與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0023] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0024]
[0025] 實(shí)施例2:藥理作用 [0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] SD大鼠，雌雄各半，體重(250 ± 20)g(安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心）。
[0029] 1.2藥品與試劑
[0030]磷酸苯丙哌林購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例 1。甲磺酸二氫麥角堿緩釋膠囊(商品名:培磊能，2.5mg，賽諾菲-安萬特）；二磷酸腺苷(ADP， Sigma公司）；凝血酶（Sigma公司）；腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司）；康派特醫(yī)用 膠(北京瞬康醫(yī)用膠有限公司）；注射用青霉素鈉（中諾藥業(yè)石家莊有限公司）；慶大霉素注 射液(南京金陵制藥廠）；乙酰膽堿(Ach)測定試劑盒(R&D公司）。
[0031] 1.3儀器
[0032] RM-200八臂迷宮（成都泰盟科技）；0LYMPUSBX51顯微鏡（日本OLYMPUS公司）； RM2125型切片機(jī)(德國LEICA公司）；ELX808酶標(biāo)儀、ELX60洗板機(jī)(美國Bio-TEK)。
[0033] 1.4混合血栓誘導(dǎo)劑的制備
[0034] 造模前用無菌注射用水將ADP稀釋成1.25mmol · L-S將凝血酶稀釋成12.5U · mL ―1，腎上腺素為lmg · ml/1，按照100:200:5的比例混合，避光置冰盒內(nèi)備用。
[0035] 1.5VD模型的制備
[0036] 用3.5%水合氯醛腹腔注射(ip)大鼠麻醉后，仰臥頸正中切口，鈍性分離暴露右側(cè) 頸總動脈(CCA)，頸內(nèi)動脈（ICA)，頸外動脈(ECA)，結(jié)扎ECA各分支，用微血管夾暫時夾閉 CCA，將已經(jīng)裝好血栓誘導(dǎo)劑注射器經(jīng)ECA逆行向頸總動脈分叉處插入，緩慢注射備好的混 合血栓誘導(dǎo)劑，然后開放頸總動脈夾，造成多發(fā)性腦梗死復(fù)制擬VD模型。針孔用醫(yī)用膠粘 合，再內(nèi)外縫合切口，常規(guī)消毒切口，腹腔注射慶大霉素以預(yù)防感染。在全部造模過程中保 持動物體溫在37°C左右，以防止低溫對腦缺血損傷的作用。假手術(shù)組麻醉及手術(shù)方法同上， 但僅暴露右側(cè)CCA，不結(jié)扎ECA，向頸總動脈注射等體積生理鹽水。
[0037] 1.6實(shí)驗(yàn)動物分組及給藥
[0038]實(shí)驗(yàn)大鼠70只造模，將造模后成活54只的大鼠入圍進(jìn)行分組，隨機(jī)分為5組，其中 模型對照組11只，磷酸苯丙哌林組(80mg · kg<)、化合物（I)組(80mg · kg<)、磷酸苯丙哌林 與化合物（I)組合物【40mg · kg^1磷酸苯丙哌林+40mg · kg^1化合物（I)】組各11只，陽性藥物 10只。另設(shè)置假手術(shù)對照組10只，不給予混合血栓誘導(dǎo)劑外，其余處理與造模處理一致。除 去灌胃給藥過程中死亡大鼠，最終結(jié)果為磷酸苯丙哌林與化合物（I)組合物組7只、化合物 (I)組8只、磷酸苯丙哌林組8只，陽性藥物組8只（5mg · kg<)，假手術(shù)組9只，模型對照組8只， 模型對照組、假手術(shù)組按照等量給予蒸餾水。每天1次，連續(xù)灌胃21d。
[0039] 1.7標(biāo)本的采集
[0040] 用3.5%水合氯醛腹腔注射大鼠麻醉，腹主動脈取血后，立即于冰臺上快速斷頭處 死，取腦組織，分離腦皮質(zhì)和海馬，稱重。將腦皮質(zhì)置于勻漿器中，加入冰生理鹽水，研磨勻 漿，靜置，4°C，3000r .π?ιΤ1，離心10min，取上清液，制備10%的腦皮質(zhì)生理鹽水勻漿，用于 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定Ach的含量。生理鹽水沖洗海馬組織上的殘血，置于10%的 甲醛溶液中固定，用于HE染色。
[0041 ] 1.8行為學(xué)檢測
[0042]采用放射狀八臂迷宮。放射狀八臂迷宮是一種用于研究動物空間記憶的迷宮模 型。動物通過觀察周圍一些固定的參照物來學(xué)習(xí)和記憶自身與餌(置于迷宮臂末端的白色 小食丸）的相對位置。訓(xùn)練前大鼠先在迷宮內(nèi)適應(yīng)2d，每天1次，每次lOmin，大鼠可自由活動 和攝取食物。隨后禁食進(jìn)行每天1次訓(xùn)練，每次l〇min，共7d。每次訓(xùn)練時均設(shè)置八臂中只有4 臂（1、3、5、7臂)放有食物，為工作臂，余為參考臂。連續(xù)5次訓(xùn)練錯誤選擇次數(shù)為1次或1次以 下，同時工作記憶錯誤(WME)必須為零，認(rèn)為訓(xùn)練成功。實(shí)驗(yàn)時將大鼠放在迷宮中央?yún)^(qū)，15s 后將四周小門打開，大鼠可選擇任意1臂攝取食物。大鼠進(jìn)入工作臂并攝取食物為1次正確， 否則為錯誤選擇。重新進(jìn)入放餌臂稱WME，第一次進(jìn)入不放餌臂稱為參照記憶錯誤(RME)。
[0043] 1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0044] 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示， 顯著性差異水平P<〇. 05為標(biāo)準(zhǔn)。
[0045] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0046] 2.1對VD大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力的影響
[0047] VD大鼠連續(xù)灌胃給藥21d后，與假手術(shù)組相比，模型對照組大鼠的WME、RME次數(shù)顯 著增多(P<0.01);給予磷酸苯丙哌林、化合物(I)后能顯著減少VD大鼠的WME、RME次數(shù)(P< 0.05)，給予磷酸苯丙哌林與化合物（I)組合物和陽性藥后WME、RME次數(shù)明顯減少(P〈0.01)。 結(jié)果見表1。
[0048] 表1對VD大鼠工作記憶錯誤(mffi)、參照記憶錯誤(RME)次數(shù)的影響
[0049]
[0050] 2.2對VD大鼠腦皮質(zhì)Ach含量的影響
[0051]與假手術(shù)組相比，模型對照組大鼠腦皮質(zhì)中Ach的含量呈明顯降低(P<0.01);與 模型對照組相比，磷酸苯丙哌林與化合物（I)組合物組和陽性對照組大鼠腦皮質(zhì)中Ach的含 量明顯提高，存在顯著性差異(P<〇.01);磷酸苯丙哌林組、化合物（I)組也呈提高趨勢(P〈 0.05)。結(jié)果見表2。
[0052]表2對VD大鼠腦皮質(zhì)Ach含量的影響 [0053]
[0054]"""VD是由于腦缺血或出血性腦血管病引起的、以癡呆為主要臨床表現(xiàn)的腦功能衰退 性疾病。主要表現(xiàn)為智能衰退。智能通常包括抽象思維能力、理解力、判斷力、學(xué)習(xí)記憶、適 應(yīng)社會環(huán)境的能力等，其中學(xué)習(xí)記憶是智力最基本的要素，易于測定分析，故目前常把學(xué)習(xí) 記憶成績作為評價智能的一個主要指標(biāo)。中樞膽堿能系統(tǒng)在學(xué)習(xí)記憶中起著非常重要的作 用，中樞膽堿能通路是構(gòu)成學(xué)習(xí)記憶的主要通路，其中Ach是重要神經(jīng)遞質(zhì)。目前普遍認(rèn)為 VD額葉皮層及海馬膽堿能神經(jīng)元的損傷可能是認(rèn)知功能受損害的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。VD大鼠海馬 膽堿能神經(jīng)元減少而導(dǎo)致空間記憶能力下降。
[0055] 上述試驗(yàn)結(jié)果表明，磷酸苯丙哌林、化合物（I)單獨(dú)使用時，能明顯改善擬血管性 癡呆大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力;磷酸苯丙哌林和化合物（I)聯(lián)合作用時，改善效果更為明顯，可 以開發(fā)成治療擬血管性癡呆的藥物。
[0056] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種憐酸苯丙贓林的藥物組合物，其特征在于:包括憐酸苯丙贓林、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的憐酸苯丙贓林的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的憐酸苯丙贓林的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將川 貝母的干燥鱗莖粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石 油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇 萃取物；（b)步驟（a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用 90%乙醇洗脫12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b) 中90 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積 比為40:1、30:1和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~ 18個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進(jìn)行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的憐酸苯丙贓林的藥物組合物在制備治療血管性癡呆的藥 物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/4453GK105837541SQ201610264919
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月23日
【發(fā)明人】何淑瓊
【申請人】何淑瓊