一種鹽酸阿米洛利的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鹽酸阿米洛利的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的鹽酸阿米洛利的藥物組合物中含有鹽酸阿米洛利和一種從石韋的干燥葉中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，鹽酸阿米洛利、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，可以防治缺血性心律失常；鹽酸阿米洛利和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)缺血性心律失常的治療效果更為明顯，可以開(kāi)發(fā)成防治缺血性心律失常的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說(shuō)明】
一種鹽酸阿米洛利的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸阿米洛利的新用途，具體涉及鹽酸阿米洛利 的藥物組合物及其在缺血性心律失常中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸阿米洛利為較強(qiáng)的保鉀利尿藥，其作用部位為遠(yuǎn)曲小管和皮質(zhì)的集合管。降 低該部位氫、鉀分泌和鈉、鉀的交換，因而保鉀利尿。常和氫氯噻嗪、呋塞米合用，因不經(jīng)肝 代謝，肝功能損害者仍可應(yīng)用。
[0003] 缺血性心律失常的發(fā)生是由于心肌細(xì)胞缺血期間，ATP減少，心肌上ATP敏感鉀通 道激活，鉀外流增加，細(xì)胞膜向超極化發(fā)展，心肌動(dòng)作電位被抑制，興奮傳導(dǎo)中斷或減慢，導(dǎo) 致細(xì)胞脫耦聯(lián)而造成的。缺血性心律失常的治療不僅要抗心律失常，更重要的是要改善心 肌的缺血缺氧狀態(tài)保證心肌細(xì)胞得到充足的氧供、血供，以消除心律失常發(fā)生的誘因。
[0004] 迄今為止，尚未見(jiàn)鹽酸阿米洛利及其藥物組合物與缺血性心律失常的相關(guān)性報(bào) 道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸阿米洛利的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸阿米洛利和一種天然產(chǎn)物，鹽酸阿米洛利和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療缺血性心律失常。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -種鹽酸阿米洛利的藥物組合物，包括鹽酸阿米洛利、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0011] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將石韋的干燥葉粉碎，用70~ 80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正 丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇 萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收 集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正 相硅膠分離，依次用體積比為80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組 分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、15:1和2:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃 縮得到純的化合物(I)。
[0013] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹(shù)脂為D101型大孔吸附樹(shù)脂。
[0015]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備治療缺血性心律失常的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 上述鹽酸阿米洛利的藥物組合物在制備治療缺血性心律失常的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0019] 本發(fā)明提供的鹽酸阿米洛利的藥物組合物中含有鹽酸阿米洛利和一種從石韋的 干燥葉中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸阿米洛利和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)缺 血性心律失常具有治療作用;二者聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)缺血性心律失常的治療效果進(jìn)一步提高， 可以開(kāi)發(fā)成治療缺血性心律失常的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和 顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021 ]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]分離方法：（a)將石韋的干燥葉（2kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合 并提取液，濃縮至無(wú)醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水飽和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用D101型大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70%乙醇 洗脫10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (8個(gè)柱體積）、30:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組 分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1(8個(gè)柱體積）、15:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5 個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (290mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0024] 結(jié)構(gòu)確證:黃色粉末;冊(cè)431-1^顯示[1+似] +為111/2 447.2912，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C28H4Q〇3，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ΡΡπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (1 · 48， m)，H-l(1.91，m)，H-2(2.29，m)，H-3(2.32，m)，H-4(2.20，m)，H-4(2.45，m)，H-6(5.56，d，J = 9.8)，H-7(6.17，d，J=9.8)，H-ll(1.96，m)，H-ll(2.35，m)，H-12(1.71，m)，H-12(1.87，m)， H-15(2.25，m)，H-15(2.32，m)，H-16(1.38，m，2H)，H-17(1.25，m)，H-18(0.98，s)，H-19 (1.27，s)，H-20(2.06，m)，H-21(0.98，d，J = 6.5)，H-22(5. ll，dd，J=15.3,7.7)，H-23 (5.19，dd，J = 15.3,7.0)，H-24(1.81，m)，H-25(1.42，m)，H-26(0.79，d，J = 6.5)，H-27 (0.80，(1，了 = 6.5)，!1-28(0.88，(1，了 = 6.7);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。（卯111，0130-(16，1501〇^) :31.4(CH2d-C)，37.3(CH2,2-C)，210.6(C，3-C)，47.7(CH2,4-C)，84.5(C，5-C)，130.4(CH，6- C)，124.7(CH，7-C)，126.6(C，8-C)，103.5(C，9-C)，82.3(C，10-C)，31.1(CH2，11-C)，36.2 (CH2，12-C)，43.8(C，13-C)，150.7(C，14-C)，24.6(CH2，15-C)，27.5(CH2，16-C)，56.1(CH， 17-C)，17.3(CH3，18-C)，19.6(CH3，19-C)，38.8(CH，20-C)，20.7(CH 3,21-C)，134.7(CH，22- C)，132.0(CH，23-C)，42.6(CH，24-C)，32.5(CH，25-C)，19.3(CH3,26-C)，19.9(CH 3,27-C)， 17.1(013,28-〇。1!1-匪1?譜顯示六個(gè)甲基信號(hào)[3!10.79((1，了 = 6.5泡，]\^-26)，0.80((1，了 = 6.5Hz，Me-27)，0.88(d，J = 6.7Hz，Me-28)，0.98(s，Me-18)，0.98(d，J = 6.5Hz，Me-21)，1.27 (8，]\^-19)]，四個(gè)烯烴質(zhì)子[3!15.11((1(1，了=15.3,7.7抱，!1-22)，5.19((1(1，了=15.3,7.0抱， H-23)，5.56(d，J = 9.8Hz，H-6)，6.17(d，J = 9.8Hz，H-7)L13C-NMR 譜顯示 28 個(gè)共振碳信號(hào)， 包括六個(gè)甲基，七個(gè)亞甲基，八個(gè)次甲基[四個(gè)烯屬次甲基SC124.7(C-7)，130.4(C-6)， 132.0((：-23)，134.7((：-22)]，以及七個(gè)季碳[兩個(gè)烯屬季碳5(：126.6((：-8)和150.7((：-14)， 一個(gè)羰基碳 SC210.6(C-3)，三個(gè)含氧季碳 SC82.3(C-10)，84.5(C-5WP103.5(C-9)]<X-9(S C103.5)低場(chǎng)的化學(xué)位移表明C-9為縮醛碳。HMBC譜中H-6與C-5和C-10，Me-19與C-5和C-10， !1-7與(：-5、(：-8、(：-9和(：-14，!12-12與(：-9的相關(guān)性表明6,8-二氧雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯環(huán)和 固醇的 A和 C環(huán)相連。N0ESY 譜中 Μθ-19(δΗ1.27)與 Η-4β(δΗ2.45)和 Η-11β(δΗ2.35)之間的交 叉峰表明Α環(huán)和二氧戊環(huán)烷環(huán)為順式稠合，并且二氧戊環(huán)的C-0鍵為α導(dǎo)向。此外，Η-22和Η- 23之間較大的耦合常數(shù)（15.3Hz)表明C-22和C-23之間的雙鍵為Ε構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、 HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體 構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如 下：
[0025]
[0026] 實(shí)施例2:藥理作用
[0027] 1、材料與方法 [0028] 1.1動(dòng)物
[0029] 健康Wistar雄性大鼠，體重230~250g;豚鼠，體重280~300g，均由哈爾濱醫(yī)科大 學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0030] 1.2試劑與樣品
[0031 ]鹽酸阿米洛利購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例 1。阿托品、異丙腎上腺素、硝基四氮唑紅購(gòu)自Sigma公司；2%鹽酸利多卡因注射液購(gòu)自天津 金耀氨基酸有限公司，其它試劑均為市售分析純。
[0032] 1.3儀器
[0033] JH-2肌張力換能器(北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所）；BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都 泰盟科技有限公司）；數(shù)控恒溫浴鍋(上海申勝生物技術(shù)有限公司）。
[0034] 1.4大鼠分組及模型制備
[0035] 取Wistar健康雄性大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。即假手術(shù)組，模型對(duì)照組 (給等容量的生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組(利多卡因注射液）、鹽酸阿米洛利組(30mg · kg^1)、化 合物（I)組(30mg · kg<)、鹽酸阿米洛利與化合物（I)組合物組【15mg · kg<鹽酸阿米洛利+ 15mg · 1?1化合物（I )】、陽(yáng)性藥對(duì)照組(利多卡因注射液）。將大鼠腹腔注射2 %戊巴比妥鈉 麻醉后，剪開(kāi)心包膜，擠出心臟，將1號(hào)絲線穿過(guò)冠狀動(dòng)脈前降支下，然后將心臟復(fù)位，穩(wěn)定 5min后，尾靜脈注射藥物。15min后拉緊絲線，造成冠狀動(dòng)脈心肌缺血，冠狀動(dòng)脈阻斷l(xiāng)Omin 后，記錄心電圖（ECG)。假手術(shù)組大鼠僅開(kāi)胸，不施行冠脈結(jié)扎。觀察30min內(nèi)所出現(xiàn)的心律 失常類型；早搏(VPB)出現(xiàn)的次數(shù)和首次出現(xiàn)的時(shí)間。上述實(shí)驗(yàn)后，將實(shí)驗(yàn)用大鼠按照硝基 四氮唑法測(cè)定梗死面積。并與對(duì)照組進(jìn)行比較。
[0036] 梗死重量百分率（％ )=心肌梗死區(qū)重量X 100%/心肌總重量 [0037] 1.5對(duì)右心房的影響
[0038]浴槽中藥物，每隔5min加藥一次，每次加藥前，記錄上一次標(biāo)本收縮情況，計(jì)算收 縮幅度增加率，觀察藥物對(duì)大鼠離體右心房收縮力的影響。
[0039] 1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0040]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土S)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以Ρ<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0041 ] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2.1對(duì)大鼠心肌梗死模型心電圖的影響
[0043]尾靜脈注射藥物組與生理鹽水比較，早搏（VPB)的首發(fā)時(shí)間各組均有推遲（Ρ〈 0.05); Vro的發(fā)生頻數(shù)(30、15、7.5mg)各組都減少(Ρ〈0.05);與模型對(duì)照組比較，鹽酸阿米 洛利與化合物（I)組合物組和陽(yáng)性藥對(duì)照組早搏頻數(shù)明顯減少(Ρ<〇.01)，早搏首次發(fā)生時(shí) 間明顯延長(zhǎng)(Ρ<〇.01);與模型對(duì)照組比較，鹽酸阿米洛利組、化合物（I)組早搏頻數(shù)減少(Ρ <0.05)，早搏首次發(fā)生時(shí)間明顯延長(zhǎng)(Ρ<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0044] 2.2對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響
[0045] 尾靜脈注射藥物組與模型對(duì)照組比較，大鼠心肌梗死面積縮小(Ρ〈0.05)。與模型 對(duì)照組比較，鹽酸阿米洛利與化合物（I)組合物組和陽(yáng)性對(duì)照組心肌梗死面積顯著縮小(Ρ <〇.〇1);與模型對(duì)照組比較，鹽酸阿米洛利組、化合物（I)組心肌梗死面積縮小(Ρ<〇.05)。 結(jié)果見(jiàn)表1。
[0046] 2.3對(duì)大鼠右心房收縮性的影響
[0047]以右心房收縮幅度增加率（％ )計(jì)算，藥物可使大鼠離體右心房收縮力呈現(xiàn)增強(qiáng)趨 勢(shì)即正性肌力，與Κ-Η液溶劑對(duì)照組比較，存在顯著性差異(Ρ〈0.05)。與Κ-Η液溶劑對(duì)照組比 較，鹽酸阿米洛利與化合物（I)組合物組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠離體右心房收縮頻率明顯增加 (Ρ<0.01);與模型對(duì)照組比較，鹽酸阿米洛利組、化合物（I)組大鼠離體右心房收縮頻率增 加(Ρ<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0048] 表1對(duì)冠脈結(jié)扎大鼠心電圖、心肌梗死面積及右心房收縮性的影響
[0049]
[0050] 上述結(jié)果表明，鹽酸阿米洛利、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，可以防治缺血性心律失常； 鹽酸阿米洛利和化合物(I)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)缺血性心律失常的治療效果更為明顯，可以開(kāi)發(fā) 成防治缺血性心律失常的藥物。
[0051] 上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種鹽酸阿米洛利的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸阿米洛利、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸阿米洛利的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸阿米洛利的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將石 韋的干燥葉粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油酸、 乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取 物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70% 乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中 70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:l、30:l、15:l和5:l的二氯甲燒- 甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 25:1、15:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為D101型 大孔吸附樹(shù)脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進(jìn)行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療缺血性屯、律失常的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的鹽酸阿米洛利的藥物組合物在制備治療缺血性屯、律失常 的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/357GK105837593SQ201610261884
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年4月23日
【發(fā)明人】高滿珍
【申請(qǐng)人】高滿珍