一種灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液以及培育方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液以及培育方法。本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液主要由葡萄糖、黃豆粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、消泡劑、助長劑和水組成。本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液可以加快菌種的生長速度，提高菌種的活力和生命力，縮短灰樹花的菌齡和生長周期。而且該培養(yǎng)液培養(yǎng)的液體菌種發(fā)育健壯，抗菌和抗病毒能力強(qiáng)，菌齡整齊，生長均勻，全面提高了灰樹花液體菌種的質(zhì)量和產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本。
【專利說明】
_種灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液以及培育方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液以及培 育方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 灰樹花(Grifda frondosa)屬于擔(dān)子菌亞門層菌綱，非裙菌目多孔菌屬，又名貝葉 多孔菌、栗子菌、千佛菌、重菇、蓮花菇、舞菇等?；覙浠ǖ淖訉?shí)體富含人體必需的氨基酸和 維生素，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，而且其幼時(shí)肉質(zhì)柔軟，脆嫩味美，深受人們的喜愛。灰樹花的 子實(shí)體還含有β-葡聚糖，具有預(yù)防糖尿病、抗腫瘤和抗艾滋病病毒的作用，具有較高的藥用 價(jià)值。
[0003] 由于自然界中野生灰樹花的數(shù)量極少，并呈現(xiàn)逐年下降的趨勢，其數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能 滿足市場的需求。目前，灰樹花的人工栽培方法普遍采用母種制作原種、再擴(kuò)大制成栽培種 的固體培育法，但是該固體培育法存在周期長、菌齡不整齊的缺點(diǎn)。由于液體發(fā)酵產(chǎn)生的液 體菌種可以克服固體培養(yǎng)的缺陷，液體菌種接入固體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)還具有流動快、 分散性好、萌芽點(diǎn)多、發(fā)菌迅速、菌絲覆蓋早的優(yōu)點(diǎn)而逐漸取代灰樹花固體培育法。
[0004] 中國專利申請200910201986.8公開了一種灰樹花液體菌種及用其栽培灰樹花的 方法，所述的灰樹花的培養(yǎng)液配方由馬鈴薯、葡萄糖、玉米粉、麩皮浸提液和瓊脂組成，其灰 樹花的栽培菌袋的原料由木肩、棉籽殼、麩皮、玉米粉、紅糖、石膏和土組成。使用上述液態(tài) 培養(yǎng)液培養(yǎng)灰樹花可以加快菌種的生長速度，縮短發(fā)菌時(shí)間，顯著的縮短灰樹花的制作周 期，而且采用液體菌種制作的菌袋菌絲發(fā)育健壯，菌齡整齊，便于后期的同期催蕾處理，促 進(jìn)灰樹花的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0005] 中國專利申請201310267656.5公開了一種灰樹花液體菌種培養(yǎng)及高產(chǎn)栽培的方 法，所述斜面培養(yǎng)基的成分主要由馬鈴薯(去皮）、麥麩、葡萄糖、KH2P04、MgS〇4、蛋白胨、VBi 和瓊脂組成；所述液體種子培養(yǎng)基的成分主要由馬鈴薯（去皮）、葡萄糖、蛋白胨、kh2po4、 MgS04和VB組成;所述發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分主要由KH2P〇4、VB、葡萄糖、蛋白胨、MgS0 4組成。使用上述培養(yǎng)基培養(yǎng)灰樹花可以大大縮短菌種的制種時(shí)間，提高菌種質(zhì)量，降低菌種 生產(chǎn)成本，提高子實(shí)體品質(zhì)，具有很高的推廣價(jià)值。
[0006] 然而，采用上述液體培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的灰樹花液體菌種在栽培的過程容易感染病 毒，尤其容易感染黃腐病毒，導(dǎo)致灰樹花出現(xiàn)大規(guī)模的腐爛和黃化現(xiàn)象，嚴(yán)重影響灰樹花的 產(chǎn)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中灰樹花液體菌種培養(yǎng)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一 種生產(chǎn)成本低、生長周期短、菌種整齊、菌種覆蓋率高和抗菌抗病毒能力強(qiáng)的灰樹花液體菌 種的培養(yǎng)液以及培育方法，以解決上述缺陷。
[0008] 本發(fā)明提供了一種灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液，包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0009] 葡萄糖72-80份、黃豆粉12-20份、磷酸二氫鉀1-4份、硫酸鎂1-5份、消泡劑0. Οδ? ?. 1份、助長劑2-6 份和水 600-700 份。
[0010] 進(jìn)一步地，所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0011] 葡萄糖76-80份、黃豆粉16-20份、磷酸二氫鉀1-3份、硫酸鎂1-3份、消泡劑0. Οδ- Ο. 09 份、 助長劑3-5 份和水 620-700 份。
[0012]進(jìn)一步地，所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0013]葡萄糖78份、黃豆粉18份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.08份、助長劑4份 和水650份。
[0014] 進(jìn)一步地，所述消泡劑為聚醚改性硅消泡劑。
[0015] 進(jìn)一步地，所述助長劑由天麻素和藻酸雙酯鈉按重量比4-6:1-3組成。
[0016] 進(jìn)一步地，所述助長劑由天麻素和藻酸雙酯鈉按重量比5:2組成。
[0017] 另外，本發(fā)明還提供了一種灰樹花液體菌種的培育方法，包括以下步驟：
[0018] S1斜面試管菌種的培養(yǎng):將權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液裝于試管 中，接著將試管置于120-125°C下滅菌30-60min，冷卻后于35-37°C培養(yǎng)箱內(nèi)烘干，2-3天后 將灰樹花純菌種接種到斜面試管的固體培養(yǎng)基上，并于20_22°C恒溫條件下培養(yǎng)7-10天，得 斜面試管菌種；
[0019] S2三角瓶菌種的培養(yǎng):將權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液裝于三角瓶 中，接著將三角瓶置于120_125°C下滅菌30-60min，冷卻后將步驟S1得到的斜面試管菌種菌 絲分隔成長度為5_6mm的正方形小塊接種于三角瓶中培養(yǎng)，并于20-22Γ恒溫條件下培養(yǎng)7- 9天，得三角瓶液體菌種；
[0020] S3發(fā)酵罐菌種的培養(yǎng):將權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液裝于發(fā)酵罐 中，滅菌后將發(fā)酵罐溫度降至22-24Γ，將步驟S2得到的三角瓶液體菌種接種于發(fā)酵罐中培 養(yǎng)，在20-22Γ恒溫條件下培養(yǎng)7-10天，得發(fā)酵罐液體菌種；
[0021] S4栽培袋的制備:將栽培培養(yǎng)基裝于多孔袋，滅菌2-3h，冷卻后將步驟S3得到的發(fā) 酵罐液體菌種接種于多孔袋中栽培，所述栽培培養(yǎng)基主要由玉米芯20-40%、木肩20-40%、 田園土10-20%、玉米粉4-8%、麩皮14-20%、蔗糖0.5-2%和石膏0.5-2%組成；
[0022] S5菌絲培養(yǎng):將步驟S4得到的多孔袋放于培養(yǎng)室中培養(yǎng)20-30天后，放入出菇室中 培養(yǎng)22-25天，即得。
[0023] 進(jìn)一步地，所述步驟S4多孔袋中的含水量控制在63-65%，pH值為5.5-6.0。
[0024] 進(jìn)一步地，所述步驟S4中栽培培養(yǎng)基由玉米芯30%、木肩30%、田園土 15%、玉米 粉5%、麩皮18%、鹿糖1 %和石膏1 %組成。
[0025] 進(jìn)一步地，所述步驟S5培養(yǎng)室中多孔袋的袋間溫度控制在24_26°C，袋間⑶2含量 控制在1000-3000ppm，所述培養(yǎng)室內(nèi)的濕度控制在65-75%。
[0026] 進(jìn)一步地，所述步驟S5中出菇室的溫度控制在15-20°C，C02含量控制在800- lOOOppm，濕度控制在85-99%。其中，所述菌絲恢復(fù)時(shí)期出菇室的濕度控制在97-99%，所述 菌絲現(xiàn)蕾期出菇室的濕度控制在85-95%。
[0027]本發(fā)明提供的助長劑中的天麻素又稱為天麻苷，其化學(xué)名稱為:對羥甲基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷，其化學(xué)式為:C13H18〇7，CAS號為:62499-27-8。天麻素是從蘭科植物天麻的干 燥根塊提取得到，其具有較好的鎮(zhèn)靜和安眠作用，對神經(jīng)衰弱、失眠、頭痛癥狀有緩解作用。 藻酸雙酯鈉的化學(xué)名稱為藻酸丙脂硫酸酯鈉，分子式為:C6H9〇7Na，CAS號為:9005-38-3。藻 酸雙酯鈉具有抗凝血、降血脂、改善微循環(huán)等作用，主要用于缺血性腦血管病，也用于高血 脂癥，對心血管系統(tǒng)的疾病也有一定的療效。
[0028] 本發(fā)明提供的栽培培養(yǎng)基中的木肩為闊葉樹種的木肩，聚醚改性硅消泡劑的貨號 為:THIX-298醫(yī)藥消泡劑，購于煙臺恒鑫化工科技有限公司。
[0029] 本發(fā)明提供的由天麻素和藻酸雙酯鈉按一定重量比組成的助長劑，可以促進(jìn)灰樹 花的生長速度，提高灰樹花液體菌種的活力和生命力，縮短萌發(fā)時(shí)間，提高菌絲及胞外多糖 的產(chǎn)量，提高菌株對發(fā)酵環(huán)境及后續(xù)栽培環(huán)境的適應(yīng)性。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用本發(fā)明提供的灰 樹花液體菌種培養(yǎng)液培養(yǎng)灰樹花可以大大縮短灰樹花的菌種周期，其菌種周期為42-48天 左右，同時(shí)也可以有效的促進(jìn)灰樹花對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，其生物轉(zhuǎn)化率在58%以上，更有利 于灰樹花的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0030] 進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的助長劑還可以提高灰樹花液體菌種的抗菌、抗病毒能力， 經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液培養(yǎng)的灰樹花液體菌種在栽培過程 中，其子實(shí)體的黃腐病病發(fā)率在5%以內(nèi)，可以大大的提高灰樹花的產(chǎn)量，減少損失。
[0031] 本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液可以加快菌種的生長速度，提高菌種的活力 和生命力，縮短灰樹花的菌齡和生長周期。而且該培養(yǎng)液培養(yǎng)的液體菌種發(fā)育健壯，抗菌和 抗病毒能力強(qiáng)，菌齡整齊，生長均勻，全面提高了灰樹花液體菌種的質(zhì)量和產(chǎn)量，降低生產(chǎn) 成本。
[0032] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案具有以下優(yōu)勢：
[0033] (1)本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液可以加快菌種的生長速度，提高菌種 的活力和生命力，縮短灰樹花的菌齡和生長周期；
[0034] (2)本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液可以提高灰樹花液體菌種的抗菌抗病 毒能力，尤其對黃腐病病毒具有較好的抵抗作用，可以有效的減少損失；
[0035] (3)本發(fā)明提供的灰樹花液體菌種的培育方法成本低，栽培時(shí)間短，有利于該培育 方法的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】：
[0036] 以下通過【具體實(shí)施方式】的描述對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限 制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0037] 實(shí)施例1、
[0038]所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0039]葡萄糖72份、黃豆粉12份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.05份、助長劑2份 和水600份;所述助長劑由天麻素和藻酸雙酯鈉按重量比4:3組成。
[0040]所述灰樹花液體菌種的培育方法：
[0041] S1斜面試管菌種的培養(yǎng):將上述的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液裝于試管中，接著將試 管置于123°C下滅菌40min，冷卻后于36°C培養(yǎng)箱內(nèi)烘干，2天后將灰樹花純菌種接種到斜面 試管中的固體培養(yǎng)基上，并于22°C恒溫條件下培養(yǎng)10天，得斜面試管菌種；
[0042] S2三角瓶菌種的培養(yǎng):將上述的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液裝于三角瓶中，接著將三 角瓶置于123°C下滅菌40min，冷卻后將步驟S1得到的斜面試管菌種菌絲分隔成長度為5mm 的正方形小塊接種于三角瓶中培養(yǎng)，并于22°C恒溫條件下培養(yǎng)9天，得三角瓶液體菌種； [0043] S3發(fā)酵罐菌種的培養(yǎng):將上述的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液裝于發(fā)酵罐中，滅菌后將 發(fā)酵罐溫度降至22°C，將步驟S2得到的三角瓶液體菌種接種于發(fā)酵罐中培養(yǎng)，在22°C恒溫 條件下培養(yǎng)10天，得發(fā)酵罐液體菌種；
[0044] S4栽培袋的制備:將栽培培養(yǎng)基裝于多孔袋，多孔袋中的含水量控制在65%，pH值 為6.0,滅菌2h，冷卻后將步驟S3得到的發(fā)酵罐液體菌種接種于多孔袋中栽培，所述栽培培 養(yǎng)基由玉米芯30%、木肩30%、田園土 15%、玉米粉5%、麩皮18%、蔗糖1 %和石膏1 %組成； [0045] S5菌絲培養(yǎng):將步驟S4得到的多孔袋放于培養(yǎng)室中培養(yǎng)25天后，所述多孔袋的袋 間溫度控制在25°C，袋間C02控制在2000ppm，所述培養(yǎng)室內(nèi)的濕度控制在70%;放入出菇室 培養(yǎng)25天，所述出菇室的溫度控制在18°C，C02含量控制在800ppm，所述菌絲恢復(fù)時(shí)期出菇 室的濕度控制在98%，所述菌絲現(xiàn)蕾期出菇室的濕度控制在90%，即得。
[0046] 實(shí)施例2、
[0047]所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0048]葡萄糖78份、黃豆粉18份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.08份、助長劑4份 和水650份;所述助長劑由天麻素和藻酸雙酯鈉按重量比5:2組成。
[0049 ]所述灰樹花液體菌種的培育方法與實(shí)施例1類似。
[0050] 實(shí)施例3、
[0051 ]所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0052]葡萄糖80份、黃豆粉20份、磷酸二氫鉀4份、硫酸鎂5份、消泡劑0.1份、助長劑6份和 水700份;所述助長劑由天麻素和藻酸雙酯鈉按重量比6:1組成。
[0053]所述灰樹花液體菌種的培育方法與實(shí)施例1類似。
[0054] 對比例1、
[0055] 所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0056]葡萄糖78份、黃豆粉18份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.08份、助長劑4份 和水650份;所述助長劑為天麻素。
[0057]所述灰樹花液體菌種的培育方法與實(shí)施例1類似。
[0058]與實(shí)施例2的區(qū)別在于，助長劑為天麻素。
[0059] 對比例2、
[0060]所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0061]葡萄糖78份、黃豆粉18份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.08份、助長劑4份 和水650份;所述助長劑為藻酸雙酯鈉。
[0062 ]所述灰樹花液體菌種的培育方法與實(shí)施例1類似。
[0063] 與實(shí)施例2的區(qū)別在于，助長劑為藻酸雙酯鈉。
[0064] 對比例3、
[0065] 所述灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液包括如下組分及其重量份數(shù)：
[0066]葡萄糖78份、黃豆粉18份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.08份、助長劑4份 和水650份;所述助長劑由天麻素和藻酸雙酯鈉按重量比1:1組成。
[0067]所述灰樹花液體菌種的培育方法與實(shí)施例1類似。
[0068] 與實(shí)施例2的區(qū)別在于，助長劑中天麻素和藻酸雙酯鈉的重量比為1:1。
[0069] 試驗(yàn)例一、灰樹花的菌種培育周期試驗(yàn)
[0070] 1、試驗(yàn)材料:實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對比例1、對比例2和對比例3制備的灰樹 花液體菌種培養(yǎng)液。
[0071] 2、試驗(yàn)方法：
[0072] 將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對比例1、對比例2和對比例3制備的灰樹花液體菌 種培養(yǎng)液，分別設(shè)置為實(shí)施例1組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、對比例1組、對比例2組和對比例3 組，其中以不加助長劑的實(shí)施例2制備的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液作為對照組，將不同組的培 養(yǎng)液在同一條件下培育灰樹花菌種，觀察灰樹花的斜面試管菌種、三角瓶菌種、發(fā)酵罐菌種 的菌種培養(yǎng)周期，并記錄多孔袋長滿菌絲的時(shí)間，另外計(jì)算灰樹花的生物轉(zhuǎn)化率，生物轉(zhuǎn)化 率（％ )=子實(shí)體鮮品產(chǎn)量(g)/培養(yǎng)料干重(g) X100%。
[0073] 3、試驗(yàn)結(jié)果
[0074] 試驗(yàn)結(jié)果如表1和表2所示。
[0075]表1灰樹花液體菌種的培養(yǎng)周期
[0078] 表2灰樹花液體菌種的生物轉(zhuǎn)化率[0079]
[0076]
[0077]
[0080] 由上述表1和表2可知，使用實(shí)施例1-3制備的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液培養(yǎng)灰樹花 菌種的菌種周期為42-48天左右，生物轉(zhuǎn)化率在58%以上，而對比例1和對比例2制備的灰樹 花液體菌種培養(yǎng)液培養(yǎng)灰樹花菌種的菌種周期為在60天以上，生物轉(zhuǎn)化率不到40%，說明 本發(fā)明提供的由麻黃素和藻酸雙酯鈉按一定重量比組成的助長劑可以縮短灰樹花的培育 周期，提高灰樹花液體菌種的生物轉(zhuǎn)化率，更有利于產(chǎn)業(yè)化和規(guī)?；纳a(chǎn)。
[0081 ]試驗(yàn)例二、灰樹花液體菌種的抗黃腐病毒的試驗(yàn)
[0082] 1、試驗(yàn)材料:實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對比例1、對比例2和對比例3制備的灰樹 花液體菌種培養(yǎng)液。
[0083 ] 2、試驗(yàn)方法:將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對比例1、對比例2和對比例3制備的灰 樹花液體菌種培養(yǎng)液，分別設(shè)置為實(shí)施例1組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、對比例1組、對比例2 組和對比例3組，其中以不加助長劑的實(shí)施例2制備的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液作為對照組， 將不同組的培養(yǎng)液在同一條件下培育灰樹花菌種，觀察灰樹花子實(shí)體病斑情況，并計(jì)算灰 樹花子實(shí)體黃腐病發(fā)生率，其中灰樹花子實(shí)體出現(xiàn)腐爛、萎縮、成醬狀的現(xiàn)象評價(jià)為出現(xiàn)黃 腐病，灰樹花子實(shí)體黃腐病發(fā)生率=灰樹花子實(shí)體病斑個(gè)數(shù)/全部子實(shí)體總數(shù)。
[0084] 3、試驗(yàn)結(jié)果：
[0085]試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。
[0086] 表3灰樹花子實(shí)體黃腐病發(fā)生情況
[0087]
[0088] 由表3可知，使用本發(fā)明實(shí)施例1 -3制備的灰樹花液體菌種培養(yǎng)液培養(yǎng)的灰樹花液 體菌種在培育過程中黃腐病的發(fā)生率在5%以內(nèi)，而使用對比例1和對比例2制備的灰樹花 液體菌種培養(yǎng)液培養(yǎng)的灰樹花液體菌種在培育過程中黃腐病的發(fā)生率在20%以上，說明本 發(fā)明提供的由麻黃素和藻酸雙酯鈉按一定重量比組成的助長劑可以提高灰樹花的抗病毒 能力，更有利于產(chǎn)業(yè)化和規(guī)?；纳a(chǎn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液，其特征在于，包括如下組分及其重量份數(shù)： 葡萄糖72-80份、黃豆粉12-20份、磷酸二氫鉀1-4份、硫酸鎂1-5份、消泡劑0.05-0.1份、 助長劑2-6份和水600-700份。2. 如權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液，其特征在于，包括如下組分及其重量 份數(shù):葡萄糖78份、黃豆粉18份、磷酸二氫鉀2份、硫酸鎂2份、消泡劑0.08份、助長劑4份和水 650份。3. 如權(quán)利要求1或2所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液，其特征在于，所述消泡劑為聚醚 改性硅消泡劑。4. 如權(quán)利要求1或2所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液，其特征在于，所述助長劑由天麻 素和藻酸雙酯鈉按重量比4-6:1-3組成。5. 如權(quán)利要求4所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液，其特征在于，所述助長劑由天麻素和 藻酸雙酯鈉按重量比5:2組成。6. -種灰樹花液體菌種的培育方法，其特征在于，包括以下步驟： S1斜面試管菌種的培養(yǎng):將權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液裝于試管中，接 著將試管置于120_125°C下滅菌30-60min，冷卻后于35-37°C培養(yǎng)箱內(nèi)烘干，2-3天后將灰樹 花純菌種接種到斜面試管的固體培養(yǎng)基上，并于20-22Γ恒溫條件下培養(yǎng)7-10天，得斜面試 管菌種； S2三角瓶菌種的培養(yǎng):將權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液裝于三角瓶中，接 著將三角瓶置于120_125°C下滅菌30-60min，冷卻后將步驟S1得到的斜面試管菌種菌絲分 隔成長度為5_6mm的正方形小塊接種于三角瓶中培養(yǎng)，并于20-22Γ恒溫條件下培養(yǎng)7-9天， 得三角瓶液體菌種； S3發(fā)酵罐菌種的培養(yǎng):將權(quán)利要求1所述的灰樹花液體菌種的培養(yǎng)液裝于發(fā)酵罐中，滅 菌后將發(fā)酵罐溫度降至22-24Γ，將步驟S2得到的三角瓶液體菌種接種于發(fā)酵罐中培養(yǎng)，在 20-22Γ恒溫條件下培養(yǎng)7-10天，得發(fā)酵罐液體菌種； S4栽培袋的制備:將栽培培養(yǎng)基裝于多孔袋，滅菌2-3h，冷卻后將步驟S3得到的發(fā)酵罐 液體菌種接種于多孔袋中栽培，所述栽培培養(yǎng)基主要由玉米芯20-40%、木肩20-40%、田園 土 10-20 %、玉米粉4-8 %、麩皮14-20 %、蔗糖0.5-2 %和石膏0.5-2 %組成； S5菌絲培養(yǎng):將步驟S4得到的多孔袋放于培養(yǎng)室中培養(yǎng)20-30天后，放入出菇室中培養(yǎng) 22-25天，即得。7. 如權(quán)利要求6所述的灰樹花液體菌種的培育方法，其特征在于，所述步驟S4多孔袋中 的含水量控制在63-65 %，pH值為5.5-6.0。8. 如權(quán)利要求6所述的灰樹花液體菌種的培育方法，其特征在于，所述步驟S4中栽培培 養(yǎng)基由玉米芯30%、木肩30%、田園土 15%、玉米粉5%、麩皮18%、蔗糖1 %和石膏1 %組成。9. 如權(quán)利要求6所述的灰樹花液體菌種的培育方法，其特征在于，所述步驟S5培養(yǎng)室中 多孔袋的袋間溫度控制在24-26°C，袋間C0 2含量控制在1000-3000ppm，所述培養(yǎng)室內(nèi)的濕 度控制在65-75 %。10. 如權(quán)利要求6所述的灰樹花液體菌種的培育方法，其特征在于，所述步驟S5中出菇 室的溫度控制在15_20°C，C02含量控制在800-1000ppm，濕度控制在85-99%。
【文檔編號】C12N1/14GK105838621SQ201610188630
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月28日
【發(fā)明人】鄭列宜
【申請人】東莞市合心生物科技有限公司