一種提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是將經(jīng)過4℃低溫預(yù)處理的種子液，接入含有12%NaCl的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)96小時，生物量比未經(jīng)低溫預(yù)處理的細胞有所提高。本發(fā)明方法簡單、便于操作，可用于乳酸菌的發(fā)酵生產(chǎn)。CGMCC NO.379220100429
【專利說明】
一種提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 嗜鹽四聯(lián)球菌(Tetragenococcus halophilus)屬于乳酸菌科中的四聯(lián)球菌屬，廣 泛存在于醬油、豆瓣和魚醬等鹽漬食品中。嗜鹽四聯(lián)球菌使這些傳統(tǒng)發(fā)酵食品的色澤更加 光亮，掩蓋食品咸味，促進香味成分的生成，對發(fā)酵調(diào)味品的風味起著重要作用。但是，在傳 統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品中，高鹽環(huán)境嚴重抑制了菌體的生長性能和代謝活力，影響了細胞的生理活性， 使產(chǎn)品的品質(zhì)受到嚴重影響。因此，提高嗜鹽四聯(lián)球菌在高鹽條件下的存活率具有重要意 義。
[0003] 嗜鹽四聯(lián)球菌在食品工業(yè)中的應(yīng)用，所遭遇到的脅迫環(huán)境是多重和復(fù)雜的。適應(yīng) 性反應(yīng)是乳酸菌常見的一種應(yīng)激保護方式，當細胞處于脅迫環(huán)境中時，由一種適應(yīng)性反應(yīng) 所誘導(dǎo)的保護作用，可以保護細胞抵御更為惡劣的環(huán)境脅迫，這些反應(yīng)可以用于提高乳酸 菌在脅迫條件下的存活。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種利用低溫預(yù)處理提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方 法。
[0005] 所述的低溫預(yù)處理條件為4°C，5_15 h。
[0006] 菌株:嗜鹽四聯(lián)球菌(Tetragenococcus halophilus)CGMCC 3792,實驗室從醬油 醪中分離，經(jīng)形態(tài)、生理生化特性試驗和16S rDNA測序鑒定，保藏于中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心（China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)，保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究 所；保藏日期為2010年4月29日，保藏編號為CGMCC 3792,并分類命名為嗜鹽四聯(lián)球菌 (Tetragenococcus halophilus)。
[0007] 種子培養(yǎng)方法:種子培養(yǎng)基為5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白東，5 g/L牛肉膏， 2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗壞血酸，0.25 g/L MgS〇4.7H2〇，19 g/?β-甘油磷酸鈉，pH為7.0。 取-80°C保藏的乳酸菌甘油管儲存液以5% (V/V)的接種量接種于種子培養(yǎng)基中，30°C靜置 培養(yǎng)24 h。
[0008] 低溫預(yù)處理方法:將培養(yǎng)好的種子液以10000 r/min(4°C)離心5 min收集菌體，將 菌體重懸于新鮮的種子培養(yǎng)基中進行4°C低溫預(yù)處理5-15 h。
[0009] 高鹽發(fā)酵培養(yǎng)方法:高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白東，5 g/L 牛肉膏，2.5 8/1酵母膏，〇.5 8/1抗壞血酸，〇.258/11%3〇4.7!12〇，19 8/10-甘油磷酸鈉， NaCl濃度調(diào)至為12%，pH為7.0。取經(jīng)過低溫預(yù)處理的種子液以5%(V/V)的接種量接種于高鹽 發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C靜置培養(yǎng)96 h。
[0010] 生物量的測定:取發(fā)酵結(jié)束后的菌懸液離心收集菌體，用無菌水洗滌3次后稀釋適 當?shù)谋稊?shù)，搖勻，用TU-1901雙束光紫外可見分光光度計，于600 nm處比濁測定0D值的大小。
[0011] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供的在發(fā)酵培養(yǎng)基中接入經(jīng)過4 °C低溫預(yù)處理的種 子液，嗜鹽四聯(lián)球菌CGMCC 3792在高鹽（12%NaCl)脅迫條件下，比對照組(未經(jīng)過4°C低溫預(yù) 處理)具有更好的生長性能。本發(fā)明提供一種基于低溫預(yù)處理提升嗜鹽四聯(lián)球菌鹽脅迫抗 性的方法，簡單易行，可探索乳酸菌應(yīng)對外界不同脅迫環(huán)境時啟動自適應(yīng)機制的協(xié)同作用 方式。
【具體實施方式】
[0012] 實例1:種子液未經(jīng)過4°C低溫預(yù)處理(對照組），T.halophilusCGMCC 3792的生長 情況(表1) 取-80 °C保藏的甘油儲存液以5%的接種量接種于種子培養(yǎng)基中，30 °C靜置培養(yǎng)24h至對 數(shù)中后期（以下簡稱種子液）。將種子液10000 r/min(4°C)離心5 min收集菌體，將菌體重懸 于新鮮的種子培養(yǎng)基中，以5%的接種量接種至高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)96 h，測定OD600值為 2.03〇
[0013] 實例2:種子液經(jīng)過4°C低溫預(yù)處理5-15 h(實驗組），T.halophilusCGMCC 3792的 生長情況(表1) 將種子液10000 r/min(4°c)離心5 min收集菌體，將菌體重懸于新鮮的種子培養(yǎng)基中 分別進行4°C低溫預(yù)處理5 h，10 h和15 h后，以5%的接種量接種至高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng) 96 h，測定OD6〇〇值分別為2.26，2.20和2.86，與對照組相比生物量分別提高了 11.3%，8.4%和 40.9%〇
[0014]表1高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中菌體生物量
〇
【主權(quán)項】
1. 一種提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，包含以下步驟： (1) 低溫預(yù)處理一種乳酸菌種子液； (2) 將所述乳酸菌種子液接入一種高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，其特征在于:所述乳酸 菌為嗜鹽四聯(lián)球菌（Tetragenococcus halophilus)CGMCC 3792。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，其特征在于:所述低溫 預(yù)處理時間為5小時至15小時。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，其特征在于:所述乳酸 菌的接種量為5%(V/V)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，其特征在于:所述乳酸 菌種子液的制備及低溫預(yù)處理，包含以下步驟： (1) 種子培養(yǎng)基為:5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白東，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏， 0.5 g/L抗壞血酸，0.25 g/LMgS〇4'7H20，19 g/L β-甘油磷酸鈉，pH為7.0; (2) 取-80°C保藏的乳酸菌甘油管儲存液，以5% (V/V)的接種量接種所述乳酸菌甘油管 儲存液于種子培養(yǎng)基中，30°C靜置培養(yǎng)24 h; (3) 將種子液以10000 r/min(4°C)離心5 min收集菌體，將菌體重懸于新鮮的種子培養(yǎng) 基中，于4°C條件下預(yù)處理。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述提高乳酸菌在高鹽條件下生物量的方法，其特征在于:所述高鹽 發(fā)酵培養(yǎng)基制備及培養(yǎng)條件，包含以下步驟： (1) 高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為:5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白東，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母 膏，0.5 g/L抗壞血酸，0.25 g/LMgS〇4'7H20，19 g/L β-甘油磷酸鈉，NaCl濃度調(diào)至12%，pH為 7.0； (2) 培養(yǎng)條件為：以5%(V/V)的接種量接種所述種子培養(yǎng)液于高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜置培養(yǎng)96 h。
【文檔編號】C12R1/01GK105838636SQ201510871124
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2015年12月2日
【發(fā)明人】吳重德, 何桂強, 黃鈞, 周榮清
【申請人】四川大學