寡肽-1活性成分的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種寡肽?1活性成分的提取方法，包括如下步驟：勻漿：將動物顎下腺組織破碎，調(diào)節(jié)其pH值至弱酸性，進(jìn)行攪拌以得到勻漿液；提取：將勻漿液冷凍后再解凍，離心分離后取上清液；提純：將上清液依次進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液。本發(fā)明提出的寡肽?1活性成分的提取方法操作簡單，成本低，且提取的寡肽?1活性成分純度較高、比活性高。
【專利說明】
寡肽-1活性成分的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)領(lǐng)域，具體涉及寡肽-1活性成分的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]寡肽是多肽的一種分類，分子量段一般在1000道爾頓一下，一般由2-6個氨基酸組成。寡肽與其他肽的區(qū)別在于，分子量小的寡肽可以比多肽具有更高皮膚滲透性，更容易被人體皮膚吸收，同時由于分子量小到了一定程度，生物活性就發(fā)生了質(zhì)的飛躍。肽分子量越小，“氨基酸鏈”越短，就越易被人體吸收和利用。
[0003]寡肽又可分為:寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5等。寡肽-1能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化，從而以新生細(xì)胞替代衰老細(xì)胞和死亡細(xì)胞。寡肽-1在醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的意義，它能促進(jìn)受傷的皮膚組織生長，抑制胃酸的分泌，可促進(jìn)燒傷皮膚的生長和皮膚潰瘍的愈合，在皮膚病、胃病、角膜抑制手術(shù)中起著重要作用。同時，寡肽-1在美容界也有很大的應(yīng)用前景。傳統(tǒng)化妝品起的是外部修飾作用，不能從根本上解決皮膚問題，而寡肽-1應(yīng)用在美容化妝品中是依據(jù)人體皮膚的生理結(jié)構(gòu)，在分子水平上對細(xì)胞進(jìn)行修復(fù)和調(diào)整。
[0004]但是，由于寡肽-1主要存在于新鮮組織細(xì)胞中，在提取過程中容易分解失效，因此，動物組織細(xì)胞中的寡肽-1 一直未得到很好利用;此外，來源于新鮮組織或細(xì)胞的寡肽-1提取效率較低，獲得量少，造成提取成本高、產(chǎn)品純度低和比活性低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。
[0006]為此，本發(fā)明的提出了一種寡肽-1活性成分的提取方法，操作簡單，提取成本低、產(chǎn)品純度高且比活性高。
[0007]本發(fā)明提出的一種寡肽-1活性成分的提取方法，包括如下步驟:勻漿:將動物顎下腺組織破碎，調(diào)節(jié)其PH值至弱酸性，進(jìn)行攪拌以得到勻漿液;提取:將勻漿液冷凍后再解凍，離心分離后取上清液;提純:將上清液依次進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液。
[0008]根據(jù)本發(fā)明實施例的寡肽-1活性成分的提取方法，提取過程只用到實驗常用設(shè)備，操作簡單且提取成本低，通過膜包的大小控制寡肽-1活性成分的純度，可以提取純度較高的寡肽-1活性成分。
[0009]另外，根據(jù)本發(fā)明上述實施例的一種寡肽-1活性成分的提取方法，還可以具有如下附加的技術(shù)特征:
[0010]進(jìn)一步地，還包括在提純后對濾出液進(jìn)行濃縮的步驟，取濃縮液。
[0011 ]進(jìn)一步地，勻漿步驟、提純步驟和濃縮步驟均在O °C?4°C的條件下進(jìn)行。
[0012]進(jìn)一步地，在勾楽步驟中，破碎的動物顎下腺組織的體積為0.5mm3?2mm3。
[0013]進(jìn)一步地，在勻漿步驟中，采用濃度為0.3%?I %的冰乙酸調(diào)節(jié)破碎的動物顎下腺組織的pH值至5?5.5，冰乙酸與破碎的動物顎下腺組件按重量份數(shù)比為(0.7:1)?(1:
0.7)。
[0014]進(jìn)一步地，在勾楽步驟中，攪拌的轉(zhuǎn)速為8000rpm/min?15000rpm/min，攪拌時間為3min?1min0
[0015]進(jìn)一步地，在提取步驟中，對勻漿液進(jìn)行冷凍的溫度-100°C?_20°C，冷凍后再解凍的過程至少重復(fù)兩次，離心分離的7000rpm/min?13000rpm/min，離心分離的時間為20min?40min，解凍過程和離心分離過程均在0°C?4°C的條件下進(jìn)行。
[0016]進(jìn)一步地，在提純步驟中，采用孔徑為0.2μπι?Ιμπι的濾膜進(jìn)行過濾。
[0017]進(jìn)一步地，在提純步驟中，采用Skd?13kd的膜包進(jìn)行超濾。
[0018]進(jìn)一步地，在濃縮步驟中，采用0.8kd?1.3kd的膜包進(jìn)行濃縮。
[0019]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0020]圖1是本發(fā)明實施例的寡肽-1活性成分的提取方法的流程圖；
[0021]圖2是本發(fā)明實施例提取的寡肽-1活性成份與陰性對照樣、陽性對照樣和空白對照樣的對比圖；
[0022]圖3是本發(fā)明實施例提取的寡肽-1活性成分的質(zhì)譜圖。
【具體實施方式】
[0023]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號表示相同。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0024]下面參考附圖來詳細(xì)說明根據(jù)本發(fā)明實施例的一種寡肽-1活性成分的提取方法。
[0025]如圖1所示，本發(fā)明提出的一種寡肽-1活性成分的提取方法100，包括如下步驟。
[0026]步驟101:勻漿:將動物顎下腺組織破碎，調(diào)節(jié)其pH值至弱酸性，進(jìn)行攪拌以得到勻漿液。在提取動物顎下腺組織時，可以把顎下腺組織周圍的結(jié)締組織、脂肪和肌肉等沒有用的組織去除干凈，剩下純顎下腺組織，可以減小后續(xù)處理的工作量。可以將動物顎下腺組織剪碎至體積為0.5_3?2_3大小放在(TC?4°C環(huán)境下待用，體積太大不易充分勻漿，且溫度過高或過低都會引起寡肽-1活性成分的降解。
[0027]在調(diào)節(jié)寡肽-1活性成分活性成份的pH值時，優(yōu)選濃度為0.3 %?I %的冰乙酸，調(diào)節(jié)破碎的動物顎下腺組織的pH值至5?5.5，冰乙酸與破碎的動物顎下腺組件按重量份數(shù)比為(0.7:1)?(1:0.7)。也可選用鹽酸、草酸等酸性物質(zhì)來調(diào)節(jié)。
[0028]步驟102:提取:將勻漿液冷凍后再解凍，離心分離后取上清液。詳細(xì)地講，可以將勻漿液取出放置在-100°C?_20°C快速冷凍，然后解凍，解凍的溫度最好不超過4°C，并重復(fù)此過程2次以上，目的是使細(xì)胞充分釋放寡肽-1活性成分。離心分離過程也在(TC?4°C的條件下進(jìn)行。
[0029]步驟103:提純:在O°C?4 °C的條件下，將上清液依次進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液。詳細(xì)地講，就是將解凍后的寡肽-1活性成分在轉(zhuǎn)速為7000rpm/min?13000rpm/min的條件下進(jìn)行離心分離，時間優(yōu)選為20min?40min，可以實現(xiàn)固液分離，破碎的組織沉淀在試管底部，然后取上清液進(jìn)行過濾。過濾時優(yōu)選孔徑為0.2μπι?Ιμπι的濾膜，去除一些大顆粒物質(zhì)和離心未沉淀的組織。過濾時可用針式過濾器，工業(yè)化生產(chǎn)可以使用較大的過濾器，以提高工作效率。
[0030]然后，在O0C?40C的條件下，將過濾后的液體進(jìn)行超濾?？梢赃x用方便工業(yè)化生產(chǎn)的超濾設(shè)備，采用Skd?13kd的膜包，濾出液變的清亮泛黃。優(yōu)選的，超濾后可選用0.Skd?
1.3kd的膜包對提取物進(jìn)行濃縮，取回流液。在提純步驟的間歇，為防止寡肽-1活性成分的降解，可以將待提純物置于冰上保存。
[0031]如圖2所示，I號，2號和3號為根據(jù)本發(fā)明實施例的提取物，4號為陰性對照，提取物中沒有寡肽-1活性成分質(zhì)；5號為陽性對照，提取物中有寡肽-1活性成分;6號和7號為空白對照。I號，2號和3號的顏色深度更接近5號，說明I號，2號和3號中含有寡肽-1活性成分，顏色深度比5號深，說明寡肽-1活性成分的濃度比5號中蛋白的濃度較高。
[0032]圖3為本發(fā)明實施例提取的寡肽-1活性成分的質(zhì)譜圖。寡肽-1活性成分的信號峰清晰可見，說明寡肽-1活性成分的純度較高，且峰的相對強(qiáng)度較高，說明根據(jù)本發(fā)明實施例提取的寡肽-1活性成分的含量較高。
[0033]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0034]優(yōu)選實施例一:
[0035]勻漿:在4°C的環(huán)境下，將動物顎下腺組織破碎成0.5mm3大小，稱重，按照重量份數(shù)0.7:1的比例添加濃度為0.3%的冰乙酸調(diào)節(jié)其pH值至5，即0.7份動物顎下腺組織中加入I份冰乙酸，在8000rpm/min的攪拌速率下攪拌3min以得到勾楽液。
[0036]提取:將勻漿液置于-100°C環(huán)境下冷凍后再解凍到4°C，然后在7000rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心分離20min，取上清液。
[0037]提純:用0.2μπι的濾膜過濾上清液，濾出液用8kd的膜包進(jìn)行超濾，進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液，再用0.Skd的膜包對濾出液進(jìn)行濃縮。在做過濾、超濾和濃縮準(zhǔn)備工作時，將待提純物置于冰上保存。
[0038]優(yōu)選實施例二:
[0039]勻漿:在20C的環(huán)境下，將動物顎下腺組織破碎成1.3mm3大小，稱重，按照重量份數(shù)1:1的比例添加濃度為0.6%的冰乙酸調(diào)節(jié)其pH值至5.3，S卩I份動物顎下腺組織中加入I份冰乙酸，在1100rpm/min的攪拌速率下攪拌6min以得到勾楽液。
[0040]提取:將勻漿液置于-60°C環(huán)境下冷凍后再解凍到2°C，重復(fù)兩次，然后在10000rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心分離30min，取上清液。
[0041]提純:用0.6μπι的濾膜過濾上清液，濾出液用1kd的膜包進(jìn)行超濾，進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液，再用Ikd的膜包對濾出液進(jìn)行濃縮。在做過濾、超濾和濃縮準(zhǔn)備工作時，將待提純物置于冰上保存。
[0042]優(yōu)選實施例三:
[0043]勻漿:在O0C的環(huán)境下，將動物顎下腺組織破碎成2mm3大小，稱重，按照重量份數(shù)I:
0.7的比例添加濃度為1%的冰乙酸調(diào)節(jié)其pH值至5.5，S卩I份動物顎下腺組織中加入0.7份冰乙酸，在15000rpm/min的攪拌速率下攪拌I Omin以得到勾楽液。
[0044]提取:將勻漿液置于-20°C環(huán)境下冷凍后再解凍到0°C，重復(fù)四次，然后在13000rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心分離40min，取上清液。
[0045]提純:用Ιμπι的濾膜過濾上清液，濾出液用13kd的膜包進(jìn)行超濾，進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液，再用1.3kd的膜包對濾出液進(jìn)行濃縮。在做過濾、超濾和濃縮準(zhǔn)備工作時，將待提純物置于冰上保存。
[0046]根據(jù)本發(fā)明實施例的寡肽-1活性成分的提取方法，提取過程只用到實驗常用設(shè)備，操作簡單且提取成本低，通過膜包的大小控制寡肽-1活性成分的純度，可以提取純度較高的寡肽-1活性成分。
[0047]盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項】
1.一種寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，包括如下步驟: 勻漿:將動物顎下腺組織破碎，調(diào)節(jié)其PH值至弱酸性，進(jìn)行攪拌以得到勻漿液； 提取:將所述勻漿液冷凍后再解凍，離心分離后取上清液； 提純:將所述上清液依次進(jìn)行過濾、超濾，取濾出液。2.如權(quán)利要求1所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，還包括在提純后對所述濾出液進(jìn)行濃縮的步驟，取濃縮液。3.如權(quán)利要求2所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，勻漿步驟、提純步驟和濃縮步驟均在O 0C?4°C的條件下進(jìn)行。4.如權(quán)利要求1或2所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在勻漿步驟中，破碎的動物顎下腺組織的體積為0.5mm3?2mm3。5.如權(quán)利要求1或2所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在勻漿步驟中，采用濃度為0.3%?I %的冰乙酸調(diào)節(jié)破碎的動物顎下腺組織的pH值至5?5.5，冰乙酸與破碎的動物顎下腺組件按重量份數(shù)比為(0.7:1)?(1: 0.7)。6.如權(quán)利要求1或2的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在勻漿步驟中，攪拌的轉(zhuǎn)速為8000rpm/min ?15000rpm/min，攬摔時間為 3min ?lOmin。7.如權(quán)利要求1或2述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在提取步驟中，對勻漿液進(jìn)行冷凍的溫度-100°c?-20°c，冷凍后再解凍的過程至少重復(fù)兩次，離心分離的7000rpm/min?13000rpm/min，離心分離的時間為20min?40min，解凍過程和離心分離過程均在O 0C?4°C的條件下進(jìn)行。8.如權(quán)利要求1或2所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在提純步驟中，采用孔徑為0.2μπι?Ιμπι的濾膜進(jìn)行過濾。9.如權(quán)利要求1或2所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在提純步驟中，采用8kd?13kd的膜包進(jìn)行超濾。10.如權(quán)利要求2所述的寡肽-1活性成分的提取方法，其特征在于，在濃縮步驟中，采用0.8kd?1.3kd的膜包進(jìn)行濃縮。
【文檔編號】C07K1/14GK105859827SQ201610231287
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月14日
【發(fā)明人】成姚斌
【申請人】揚(yáng)州夢曉生物工程有限公司