一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，主要步驟包括采集經(jīng)抗凝處理的新鮮豬血，離心分離得到血球液，經(jīng)溶血、酶解、離心得到酶解液，酶解液經(jīng)超濾膜過(guò)濾、納濾膜濃縮后噴霧干燥得豬血球活性小肽粉。本發(fā)明的方法選用高效內(nèi)切蛋白酶，采用一步酶解法并結(jié)合超濾膜與納濾膜分離技術(shù)，工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)效率高，成本低，適合規(guī)?；墓I(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明所制備的產(chǎn)品中活性小分子肽（相對(duì)分子量介于180～1000Da之間）含量高達(dá)75%以上，有機(jī)卟啉鐵（血紅素鐵）含量達(dá)到0.2%以上，灰份含量低于5.0%，游離氨基酸含量低于11%。產(chǎn)品能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力和抗病能力，是一種新型的功能性蛋白質(zhì)飼料原料。
【專利說(shuō)明】
一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及動(dòng)物血液蛋白深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球 活性小肽粉的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 根據(jù)含氨基酸殘基數(shù)的不同，肽可以分為多肽、寡肽、小肽。一般來(lái)講，含氨基酸殘 基數(shù)超過(guò)50個(gè)的通常稱為蛋白質(zhì)，低于50個(gè)大于10個(gè)氨基酸殘基的稱為多肽，低于10個(gè)氨 基酸殘基的稱為寡肽。小肽是指相對(duì)分子量介于180~1000 Da之間的二肽、三肽和四肽。大 量研究表明，在動(dòng)物體內(nèi)存在小肽吸收機(jī)制，小肽能完整地通過(guò)腸黏膜細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)。 動(dòng)物67 %的氨基酸是以小肽的形式吸收的，剩余的33 %才以游離氨基酸(FAA)的形式吸收。 小肽不僅為蛋白質(zhì)合成提高氮架，而且具有重要的生理調(diào)節(jié)功能。小肽的生理功能主要體 現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：（1)促進(jìn)氨基酸吸收，提高蛋白質(zhì)合成速度。小肽不僅能被小腸粘膜吸 收利用，其合成蛋白質(zhì)的速度也遠(yuǎn)遠(yuǎn)尚于氣基酸。（2)提尚礦物質(zhì)的吸收利用率。在動(dòng)物體 內(nèi)，大多數(shù)的礦物元素吸收都要以蛋白質(zhì)為載體，小肽可以與金屬離子形成螯合物，保證其 可溶狀態(tài)，從而可以促進(jìn)礦物元素的被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程及其儲(chǔ)存。（3)提高動(dòng)物機(jī)體免疫力。小 肽能夠通過(guò)誘導(dǎo)小腸絨毛刷狀緣膜酶活性上升和刺激消化酶分泌，抑制大腸桿菌的繁殖， 來(lái)提高機(jī)體的免疫力。（4)促進(jìn)消化道的發(fā)育，減少腹瀉的發(fā)生。幼齡動(dòng)物因消化道中的酶 活較低，消化能力差，當(dāng)日糧中蛋白質(zhì)和游離氨基酸濃度過(guò)高時(shí)，容易引起動(dòng)物的腹瀉。小 肽通過(guò)誘導(dǎo)小腸中一些酶活性的提高，使小腸消化功能發(fā)育提前，從而促進(jìn)幼小動(dòng)物的健 康生長(zhǎng)，提高其生產(chǎn)性能。因此，近年來(lái)功能性小肽產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)制備已成為保健食品和動(dòng)物 營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
[0003] 豬血球是從豬血全血中離心分離得到的一種富含血紅蛋白（Hemoglobin)的血細(xì) 胞，也稱紅細(xì)胞或紅血球，其血紅蛋白的含量達(dá)到36%以上，約占全血蛋白質(zhì)總量80%，是一 種品質(zhì)優(yōu)良的動(dòng)物源性蛋白質(zhì)資源。尤其值得一提的是，豬血球中還含有豐富的有機(jī)卟啉 鐵(也稱血紅素鐵），每100g血球蛋白粉中有機(jī)卟琳鐵(血紅素鐵)的含量尚達(dá)0.3克以上。有 機(jī)卟啉鐵亦即血紅素型鐵在腸道可以不受食物其他因素的影響進(jìn)入腸黏膜，較其他植物性 鐵或動(dòng)物性非血紅素型鐵以及無(wú)機(jī)鐵吸收率高，因此添加富含有機(jī)卟啉鐵(血紅素鐵)的血 粉是幼齡動(dòng)物補(bǔ)鐵和預(yù)防母豬貧血極為有效的方法。
[0004] 多年來(lái)，國(guó)內(nèi)豬血加工企業(yè)基本上都是將從全血中分離得到的血球液直接噴霧干 燥加工成血球蛋白粉。這種血球蛋白粉因蛋白質(zhì)含量高，有機(jī)卟啉鐵含量豐富，目前在部分 畜禽和水產(chǎn)飼料中得到一定程度的應(yīng)用。但是，由于血紅蛋白分子量大(分子量分布范圍主 要集中在10000-60000Da之間），沒(méi)有經(jīng)過(guò)降解的血球蛋白粉不易被動(dòng)物消化吸收，特別是 幼畜由于消化功能尚未健全、酶系統(tǒng)發(fā)育不完善，對(duì)血紅蛋白的消化能力差，利用率低，并 造成環(huán)境污染，市場(chǎng)接受度不高，這是制約目前血球蛋白粉在養(yǎng)殖生產(chǎn)特別是在斷奶仔豬 日糧中大量推廣應(yīng)用的一個(gè)重要因素。另一方面，目前市場(chǎng)上生產(chǎn)銷售的血球蛋白粉基本 上都不含有活性肽類物質(zhì)或者活性小分子肽含量很低，僅僅只能作為普通的蛋白質(zhì)飼料原 料銷售，導(dǎo)致其經(jīng)濟(jì)附加值不高，難以滿足當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)對(duì)功能性飼料原料的迫切需求。
[0005] 為了解決血球中血紅蛋白大分子難以被消化吸收的問(wèn)題，提升血球蛋白粉的營(yíng)養(yǎng) 價(jià)值和利用效果，近年來(lái)國(guó)內(nèi)一些科研工作者在改進(jìn)血球液加工工藝技術(shù)方面做了許多嘗 試，并取得了一些進(jìn)步，其中不少已申請(qǐng)了發(fā)明專利。例如，CN200610034691.2公開(kāi)了一種 豬血血紅蛋白生物酶解制備低分子肽及氨基酸的方法，該方法以豬血血紅細(xì)胞為原料，通 過(guò)高壓均質(zhì)或超聲波處理并結(jié)合復(fù)合蛋白酶酶解技術(shù)，制備出低分子肽和氨基酸，蛋白質(zhì) 回收率高，產(chǎn)物無(wú)不良風(fēng)味。但是，該方法所得的產(chǎn)品中主要成分是分子量為1000 ODa以下 的豬血紅蛋白酶解產(chǎn)物，其中肽的分子量分布和含量特別是功能性的小分子肽含量并不清 楚。CN201210191699.5公開(kāi)了一種二步酶解法生產(chǎn)高品質(zhì)血球蛋白肽的制備方法。該方法 以豬血紅血球?yàn)樵希盟嵝缘鞍酌负椭行缘鞍酌高M(jìn)行分步酶解處理，并結(jié)合離心沉淀 和化學(xué)氧化脫色方法，去除血紅素，最終得到脫色的血球蛋白肽，產(chǎn)品具有良好的外觀色 澤，無(wú)臭味，產(chǎn)品中分子量小于5000Da的多肽類物質(zhì)占80%以上。但是，該技術(shù)方法需要進(jìn)行 兩步酶解處理，特別是在酸性蛋白酶水解過(guò)程中，在酸性條件下(PH2-3)部分血紅蛋白易發(fā) 生變性，并與血紅素一起沉淀，被離心分離去除，因而蛋白質(zhì)回收率較低，尤其是作為動(dòng)物 重要補(bǔ)鐵來(lái)源的有機(jī)卟啉鐵(血紅素鐵)流失，同時(shí)因多次調(diào)節(jié)PH值，帶入較多的鹽份，從而 造成制備產(chǎn)物中灰分含量較高，產(chǎn)品中活性小分子肽(相對(duì)分子量介于180~1000 Da之間） 的含量也沒(méi)有報(bào)道。CN201410547593.3公開(kāi)了一種豬血球蛋白粉的制備方法，以豬血全血 為原料，通過(guò)離心分離和超聲波處理制備豬血血紅蛋白液，再依次對(duì)血紅蛋白液進(jìn)行物理 脫氧、超聲處理、復(fù)合酶分段酶解、活性碳脫色、膜超濾濃縮、噴霧干燥等復(fù)雜的工藝流程處 理，最后得到乳白色的豬血球蛋白多肽粉和血紅素肽，該方法雖然徹底脫除了血球蛋白多 肽粉的顏色和血腥味，產(chǎn)品感官性狀大幅提升，蛋白消化吸收率有所提高，但是需要多次超 聲波處理，分段酶解，反復(fù)離心以及脫色濃縮，工藝繁瑣，成本高，所得產(chǎn)品是分子量在 6000Da以上的蛋白多肽粉，不含活性小分子肽，經(jīng)濟(jì)附加值不高。因此，現(xiàn)有技術(shù)方案無(wú)論 是在制備工藝的簡(jiǎn)易性與可操作性方面還是在產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功能性方面都存在不足 之處。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備 方法，該方法以豐富的豬血為原料，工藝簡(jiǎn)單，成本低，易于實(shí)施，所得產(chǎn)品中活性小分子肽 含量高，易于消化吸收利用，能明顯提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，改善動(dòng)物免疫機(jī)能，以滿足市場(chǎng) 對(duì)功能性蛋白飼料原料的需求。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種一步酶解法生產(chǎn)豬血 球活性小肽粉的制備方法，包括以下步驟： (1) 豬血球液制備:采集經(jīng)抗凝處理的新鮮豬血，離心分離，收集血紅細(xì)胞，即得到血球 液； (2) 溶血:往血球液中加入其體積1-2倍的去離子水，不斷攪拌溶血30-90min，攪拌速度 為30-60r/min，得到溶血液； (3) 酶解:調(diào)節(jié)溶血液PH值至8.0-9.0，加入蛋白酶，在40-60 °C溫度下酶解4-16h，將酶 解液升溫至85°C滅酶5-10分鐘，即得到酶解液； (4) 離心:將酶解液進(jìn)行高速離心，收集上清夜，去除沉淀； (5) 超濾:將收集的離心上清液經(jīng)截留分子量為1000-3000Da的超濾膜裝置進(jìn)行超濾， 收集透過(guò)液； (6) 納濾:將收集的超濾透過(guò)液，用截留分子量為150-300Da的納濾膜進(jìn)行納濾濃縮， 收集濃縮液； (7) 噴霧干燥:將所得到的納濾濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得到豬血球活性小肽粉。
[0008] 上述步驟（1)中所述的抗凝處理是添加食品級(jí)檸檬酸鈉，添加量為新鮮豬血重量 的0.3-0.6%，先將稱量好的檸檬酸鈉配制成10-15%檸檬酸鈉溶液，然后在采集新鮮豬血過(guò) 程中邊攪拌邊緩慢加入檸檬酸鈉溶液。
[0009] 上述步驟（1)中所述的離心分離是采用管式離心機(jī)連續(xù)分離，離心轉(zhuǎn)速大于 10000r/min。
[0010] 上述步驟(3)所述的蛋白酶為枯草桿菌蛋白酶，酶活力為180000-200000U/ml，蛋 白酶的添加量為血球液重量的0.1-1.0%。
[0011 ]上述步驟(4)所述的高速離心是采用管式離心機(jī)分離，離心轉(zhuǎn)速大于10000r/min。
[0012] 上述步驟(7)所述的噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度為200-250°C，出風(fēng)口溫度為70-100 cC。
[0013] 通過(guò)實(shí)施上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有如下的有益效果： (1)本發(fā)明的方法采用從枯草桿菌中提取的內(nèi)切蛋白酶，將血紅蛋白水解成最理想的 小分子肽段，水解效率高。
[0014] (2)本發(fā)明的方法采用一步酶解法并結(jié)合利用超濾與納濾膜分離技術(shù)，工藝流程 非常簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)效率高，成本低，適合規(guī)?；墓I(yè)生產(chǎn)。
[0015] (3)本發(fā)明所制備的豬血球活性小肽粉產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，其中活性小分子肽(相對(duì) 分子量介于180~1000 Da之間）含量高達(dá)75%以上，有機(jī)卟啉鐵(血紅素鐵)含量達(dá)到0.2%以 上，灰份含量低于5.0%，游離氨基酸含量低于11%;產(chǎn)品中的活性小肽、有機(jī)卟啉鐵與氨基酸 共存，協(xié)同增效，易于吸收利用。
[0016] (4)本發(fā)明所制備的豬血球活性小肽粉產(chǎn)品具有良好的促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高動(dòng)物 免疫力和抗病能力的功效，可作為一種新型的功能性蛋白質(zhì)飼料原料，廣泛應(yīng)用于飼料工 業(yè)特別是幼畜和弱畜飼料中。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為本發(fā)明一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但是本發(fā)明的實(shí)施方式并 不局限于此實(shí)施例表示的范圍。
[0019] 實(shí)施例1 (1)豬血球液制備:采集經(jīng)抗凝處理的新鮮豬血1000L，用管式離心機(jī)連續(xù)離心分離得 到440L血球液和560L血漿液，收集血球液，血漿液經(jīng)噴霧干燥制成血漿蛋白粉;抗凝處理時(shí) 添加食品級(jí)檸檬酸鈉，添加量為新鮮豬血重量的0.4%，先將稱量好的檸檬酸鈉配制成10%梓 檬酸鈉溶液，然后在采集新鮮豬血過(guò)程中邊攪拌邊緩慢加入檸檬酸鈉溶液； (2) 溶血:將血球液栗入反應(yīng)罐中，加入440L的去離子水，不斷攪60min，使血球破碎，攪 拌速度為30r/min，制得溶血液880L; (3) 酶解:繼續(xù)攪拌下將溶血液加熱升溫至50°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)其PH值至8.5，隨后添 加血球液重量0.4%的蛋白酶(酶活力200000U/ml)，不斷攪拌，每間隔一小時(shí)檢測(cè)酶解液的 PH值，當(dāng)PH值下降至8.0以下時(shí)，補(bǔ)堿液調(diào)PH值至8.0，保溫酶解4h后，將酶解液升溫至85 °C 滅酶10分鐘，即得到酶解液； (4) 離心:將酶解液采用管式離心機(jī)連續(xù)分離，離心轉(zhuǎn)速為16300r/min，收集離心上清 夜636L，去除沉淀； (5) 超濾:將收集的離心上清液經(jīng)截留分子量為1000 Da的中空纖維超濾膜裝置，得到超 濾透過(guò)液510L; (6) 納濾:將收集的超濾透過(guò)液，再用截留分子量為200Da的納濾膜過(guò)濾濃縮，收集濃 縮液336L; (7) 噴霧干燥:將所得到的納濾濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得到豬血球活性小肽粉121Kg; 噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度為220°C，出風(fēng)口溫度為80°C。
[0020] 實(shí)施例2 (1) 豬血球液制備:采集經(jīng)抗凝處理的新鮮豬血2000L，用管式離心機(jī)連續(xù)離心分離得 到850L血球液和1150L血漿液，收集血球液，血漿液經(jīng)噴霧干燥制成血漿蛋白粉;抗凝處理 時(shí)添加食品級(jí)檸檬酸鈉，添加量為新鮮豬血重量的0.5%，先將稱量好的檸檬酸鈉配制成10% 檸檬酸鈉溶液，然后在采集新鮮豬血過(guò)程中邊攪拌邊緩慢加入檸檬酸鈉溶液； (2) 溶血:將血球液栗入反應(yīng)罐中，加入850L的去離子水，不斷攪60min，使血球破碎，攪 拌速度為50r/min，制得溶血液1700L; (3) 酶解:繼續(xù)攪拌下將溶血液加熱升溫至55°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)其PH值至8.5，隨后添 加血球液重量0.3%的蛋白酶(酶活力200000U/ml)，不斷攪拌，每間隔一小時(shí)檢測(cè)酶解液的 PH值，當(dāng)PH值下降至8.0以下時(shí)，補(bǔ)堿液調(diào)PH值至8.0，保溫酶解6h后，將酶解液升溫至85 °C 滅酶10分鐘，即得到酶解液； (4) 離心:將酶解液采用管式離心機(jī)連續(xù)分離，離心轉(zhuǎn)速為16300r/min，收集離心上清 夜1210L，去除沉淀； (5) 超濾:將收集的離心上清液經(jīng)截留分子量為2000Da的中空纖維超濾膜裝置，得到超 濾透過(guò)液1045L; (6) 納濾:將收集的超濾透過(guò)液，再用截留分子量為200Da的納濾膜過(guò)濾濃縮，收集濃 縮液744L; (7) 噴霧干燥:將所得到的納濾濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得到豬血球活性小肽粉243Kg; 噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度為230°C，出風(fēng)口溫度為90°C。
[0021] 實(shí)施例3 (1)豬血球液制備:采集經(jīng)抗凝處理的新鮮豬血5000L，用管式離心機(jī)連續(xù)離心分離得 到2160L血球液和2840L血漿液，收集血球液，血漿液經(jīng)噴霧干燥制成血漿蛋白粉;抗凝處理 時(shí)添加食品級(jí)檸檬酸鈉，添加量為新鮮豬血重量的0.5%，先將稱量好的檸檬酸鈉配制成10% 檸檬酸鈉溶液，然后在采集新鮮豬血過(guò)程中邊攪拌邊緩慢加入檸檬酸鈉溶液； (2) 溶血:將血球液栗入反應(yīng)罐中，加入22001^的去離子水，不斷攪6〇1^11，使血球破碎， 攪拌速度為50r/min，制得溶血液4360L; (3) 酶解:繼續(xù)攪拌下將溶血液加熱升溫至55°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)其PH值至8.5，隨后添 加血球液重量0.2%的蛋白酶(酶活力200000U/ml)，不斷攪拌，每間隔一小時(shí)檢測(cè)酶解液的 PH值，當(dāng)PH值下降至8.0以下時(shí)，補(bǔ)堿液調(diào)PH值至8.0，保溫酶解8h后，將酶解液升溫至85 °C 滅酶10分鐘，即得到酶解液； (4) 離心:將酶解液采用管式離心機(jī)連續(xù)分離，離心轉(zhuǎn)速為16300r/min，收集離心上清 夜2850L，去除沉淀； (5) 超濾:將收集的離心上清液經(jīng)截留分子量為3000Da的中空纖維超濾膜裝置，得到超 濾透過(guò)液2470L; (6) 納濾:將收集的超濾透過(guò)液，再用截留分子量為200Da的納濾膜過(guò)濾濃縮，收集濃 縮液1620L; (7) 噴霧干燥:將所得到的納濾濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得到豬血球活性小肽粉631Kg; 噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度為230°C，出風(fēng)口溫度為90°C。
[0022] 對(duì)上述實(shí)施例得到的產(chǎn)品主要成分以及蛋白質(zhì)（肽)分子量分布與產(chǎn)品功效進(jìn)行 檢測(cè)。
[0023] 產(chǎn)品主要成分檢測(cè)：按照常規(guī)方法對(duì)產(chǎn)品粗蛋白、小分子肽（相對(duì)分子量在180-1 OOODa)、粗灰分、水分、鐵等主要成分進(jìn)行檢測(cè)。
[0024] 結(jié)果如表1: 表1豬血球活性小歎粉主要成分含:懸
從表1中可以看出，實(shí)施例所得的產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量均在87%以上，小分子肽含量達(dá)到 75%以上，灰分含量小于5%，鐵含量在0.2%以上。
[0025]蛋白質(zhì)(肽)分子量分布檢測(cè):對(duì)上述實(shí)施例得到的產(chǎn)品取樣送江南大學(xué)分析測(cè)試 中心，采用高效凝膠過(guò)濾色譜(HPLC)法測(cè)定，以已知分子量蛋白質(zhì)做參照。
[0026] 結(jié)果如表2:
從表2中可以看出，產(chǎn)品中相對(duì)分子量在180-1 OOODa的小肽組分占蛋白質(zhì)(肽)的比例 在85%以上，分子量小于ISODa的游離氨基酸所占比例在11%以下。
[0027]功效檢測(cè)：選擇35日齡的杜X長(zhǎng)X大三元雜交仔豬120頭，按體重相近、遺傳基礎(chǔ) 相似的原則，隨機(jī)分為3個(gè)處理組，分別為基礎(chǔ)日糧組、基礎(chǔ)日糧+0.5%小肽組、基礎(chǔ)日糧+ 1.0%小肽組，每個(gè)處理組設(shè)四個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭豬，試驗(yàn)期30天。
[0028] 結(jié)果見(jiàn)表3: .表3豬M球活性肽粉對(duì)斷婼仔豬生產(chǎn)性能及愈液指櫬的影晌
從表3中可以看出，與對(duì)照組相比，添加血球活性小肽組平均日增重提高了 10.6-14.0%，腹瀉率降低34.9-40.8%;血液總蛋白、球蛋白、IgG含量分別提高了11.5-19.9%、9.4_ 23.0%、34.4-56.3%，這說(shuō)明豬血球活性小肽粉能明顯促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育，提高仔豬生產(chǎn)性 能，增強(qiáng)仔豬的免疫機(jī)能。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，包括以下步驟： (1) 豬血球液制備：在新鮮的豬血中加入檸檬酸鈉做抗凝處理，然后離心分離，收集血 紅細(xì)胞，即得到血球液； (2) 溶血:往血球液中加入其體積1-2倍的去離子水，不斷攪拌溶血30-90min，攪拌速度 為30-60r/min，得到溶血液； (3) 酶解：調(diào)節(jié)溶血液PH值至8.0-9.0，加入蛋白酶，在40-60 °C溫度下酶解4-16h，將酶 解液升溫至85 °C滅酶5-10分鐘，得到酶解液； (4) 離心:將酶解液進(jìn)行高速離心，收集上清夜，去除沉淀； (5) 超濾:將收集的離心上清液經(jīng)截留分子量為1000-3000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，收集 透過(guò)液； (6) 納濾:將收集的超濾透過(guò)液，用截留分子量為150-300Da的納濾膜進(jìn)行納濾濃縮， 收集濃縮液； (7 )噴霧干燥:將所得到的納濾濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得到豬血球活性小肽粉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，其特征 在于:步驟（1)所述檸檬酸鈉為食品級(jí)檸檬酸鈉，添加量為新鮮豬血重量的0.3-0.6%，先將 稱量好的檸檬酸鈉配制成10-15%梓檬酸鈉溶液，然后向新鮮豬血中邊攪拌邊緩慢加入檸檬 酸鈉溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，其特征 在于:步驟(1)所述離心分離是采用管式離心機(jī)連續(xù)分離，離心轉(zhuǎn)速大于l〇〇〇〇r/min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，其特征 在于:步驟(3)所述蛋白酶為枯草桿菌蛋白酶，酶活力為180000-200000U/ml，蛋白酶的添加 量為血球液重量的0.1 _1.0%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，其特征 在于:步驟(4)所述高速離心是采用管式離心機(jī)分離，離心轉(zhuǎn)速大于10000r/min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種一步酶解法生產(chǎn)豬血球活性小肽粉的制備方法，其特征 在于:步驟(7)所述噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度為200-250°C，出風(fēng)口溫度為70-100°C。
【文檔編號(hào)】C07K14/805GK105859874SQ201610355698
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月26日
【發(fā)明人】陳石良
【申請(qǐng)人】陳石良