一種芐達賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種芐達賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的芐達賴氨酸的藥物組合物中含有芐達賴氨酸和一種從延胡索的干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，芐達賴氨酸、化合物(Ⅰ)單獨作用時，可以提高小鼠肝組織中GSH含量，降低MDA含量，抑制TG的積累，具有一定的保肝作用；芐達賴氨酸和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，保肝效果更好，可以開發(fā)成保護肝臟的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種芐達賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及芐達賴氨酸的新用途，具體涉及芐達賴氨酸的藥 物組合物及其在保護肝臟中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 芐達賴氨酸化學名稱為L-賴氨酸（1-芐基-1H-吲哚唑-3-氧基）乙酸鹽，是一種眼 科用藥，適用于早期老年性白內(nèi)障。
[0003] 酒精的代謝和分解多在肝臟中完成，因此大量飲酒會給肝臟帶來很大負擔。同時 在酒精代謝過程中會產(chǎn)生許多代謝產(chǎn)物，如乙醛、自由基離子等。這些代謝產(chǎn)物的對機體的 傷害都大于酒精本身，會引發(fā)炎癥，造成肝細胞損傷，降低免疫功能，導(dǎo)致死亡。機體大量攝 入乙醇后，主要在乙醇脫氫酶(ADH)的催化下氧化為乙醛，并被乙醛脫氫酶氧化為乙酸鹽類 物質(zhì)。因此認為ADH是乙醇代謝過程中的一種重要酶類，保持其活性能夠加速體內(nèi)乙醇的分 解代謝，降低體內(nèi)乙醇的蓄積。乙醇大量氧化使得三羧酸循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影 響脂肪代謝，致使脂肪在肝細胞內(nèi)沉積。同時乙醇能激活氧分子，產(chǎn)生氧自由基導(dǎo)致肝細胞 膜的脂質(zhì)過氧化及體內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)消耗、丙二醛(MDA)升高，甘油三酯（TG)的代 謝也會受到明顯影響。
[0004] 迄今為止，尚未見芐達賴氨酸及其藥物組合物與保護肝臟的相關(guān)性報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種芐達賴氨酸的藥物組合物，該藥物組合物中含有芐達 賴氨酸和一種天然產(chǎn)物，芐達賴氨酸和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同保護肝臟。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0009] -種芐達賴氨酸的藥物組合物，包括芐達賴氨酸、如權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將延胡索的干燥塊莖粉碎，用 80~90 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正 丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用30 %乙醇洗脫6個柱體積，再用85 %乙醇洗脫12個柱體積， 收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗脫濃縮物用 正相硅膠分離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4 個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用85%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備保護肝臟的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 上述芐達賴氨酸的藥物組合物在制備保護肝臟的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0019] 本發(fā)明提供的芐達賴氨酸的藥物組合物中含有芐達賴氨酸和一種從延胡索的干 燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，芐達賴氨酸和該天然產(chǎn)物單獨作用時，具有肝 臟作用；二者聯(lián)合作用時，對肝臟的保護作用進一步提高，可以開發(fā)成保護肝臟的藥物。本 發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023]分離方法：（a)將延胡索的干燥塊莖（2kg)粉碎，用85 %乙醇熱回流提?。?5L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個柱體積，再用 85%乙醇洗脫12個柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中85 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1 (12個柱體積）、50:1 (10個 柱體積）、25:1(8個柱體積)和12:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分； (d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1(6個柱體積）、12:1(8個 柱體積)和2:1(6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用 十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集 13~16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (270mg，HPLC歸一化純度大于 98%)〇
[0024] 結(jié)構(gòu)確證：白色固體;HRAPCHMS給出的準分子離子峰m/z 219.1715[M+H] +，表明化 合物分子式為Ci5H22〇2，不飽和度為5。h-NMR譜(CDC1 3，600MHz)中，H-1 (2.56，d，J = 4.3Hz)， H-2(3.17，dd，J = 6.2,4.3Hz)，H-3(5.39，d，J = 6.2Hz)，H-5(2.04，br，d，J=13.2Hz)，H-6a (1.45，m)，H-6b(1.84，m)，H-7(2.11，tt，J=13.5,4.4Hz)，H-8a(1.57，m)，H-8b(1.79，m)，H-9a(1.37，dt，J = 12.6,3.5Hz)，H-9b(2.03，dt，J=12.6,4.0Hz)，H-12(4.83，br，s，2H)，H-13 (1.84,8)，!1-14(0.99,8)，!1-15(1.83，1^，8) ;13(：-匪1?譜(〇)(：13，1501抱）中，顯示有15個碳信 號，01(80.3,0〇,02(52.7,01)，(：-3(121.7,01)，(：-4(136.1，〇，(：-5(47.2,01)，(：-6 (26.1，CH 2)，C-7(43.9，CH)，C-8(26.5，CH2)，C-9(36.2，CH2)，C-10(40.2，C)，C-11(149.2， 個烯烴質(zhì)子信號3!15.39(1!1，(1，1 = 6.2他，!1-3);兩個甲基質(zhì)子信號6!10.99(3!1，8，!1-14)與 1.83(3!1，1^，8，!1-15);-組異丙烯基質(zhì)子信號5!11.84(1!1，8，!1-13)、4.83(2!1，1^，8，!1-12) ; 兩個次甲基質(zhì)子信號δΗ2.04( lH，br，d，J= 13·2Ηζ，Η-5)，2· 11 (lH，tt，J= 13.5，4·4Ηζ，Η- 7);-組環(huán)氧丙基質(zhì)子信號5!12.56(1!1，(1，了 = 4.3!^，!1-1)，3.17(1!1，(1(1，了 = 6.2,4.3!^，!1-2)。13C-NMR譜結(jié)合DEPT譜表明該結(jié)構(gòu)中有三個甲基碳信號，四個亞甲基碳信號(三個飽和碳 和一個烯烴碳），五個次甲基碳信號(兩個飽和碳，兩個連氧碳和一個烯烴碳），三個季碳信 號（一個飽和碳和兩個烯烴碳）。通過HMBC譜分析可知，H-7與C-6，C-8和C-11，以及H 2-12與 C-7和C-13的相關(guān)信號表明異丙烯基與C-7位相連。N0ESY譜中，Me-14與H-l、Me-14與H-2、H-1與H-2、H-5與H-7存在相關(guān)性，同時，Me-14與H-8a之間也存在相關(guān)性，另外H-5與H-7偶合常 數(shù)分別為J = 13.2Hz與J = 13.5Hz，可以確證H-5和H-7的構(gòu)型方向一致，為α構(gòu)型，同時N0ESY 譜中未表明Me-14與Η-5存在相關(guān)性，因此Me-14、H-1與Η-2為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜 和N0ESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下式所示，立體構(gòu)型 進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0025] 該化合物化學式及碳原子編號如下：
〇
[0027] 實施例2:藥理作用 [0028] 1、材料與方法
[0029] 1.1材料與儀器
[0030]芐達賴氨酸購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例1。 ICR雌性小白鼠體重(25 ± 5)g，上海斯萊克實驗動物責任有限公司；考馬斯亮藍G-250、甘油 三脂試劑盒、丙二醛測試盒、谷胱甘肽過氧化物試劑盒、乙醇脫氫酶測定試劑盒南京建成生 物工程研究所;海王金樽，廣東深圳海王藥業(yè)有限公司；56°紅星二鍋頭白酒，北京紅星釀酒 廠。Alpha-D2凍干機德國Christ公司；電子天平，上海天平儀器廠;UV752N紫外可見分光光 度計，上海儀電分析儀器有限公司。
[0031] 1.2動物分組
[0032] 將72只ICR小鼠在（22 ± 1) °C，濕度40 %~60 %，12h日夜交替，自由進食、進水的條 件下適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機分為六組?？瞻讓φ战M12只：實驗過程中不做任何處理，自由 喂養(yǎng);模型組12只：0.9%的生理鹽水;芐達賴氨酸組12只：濃度為100mg/mL;化合物（I)組12 只：濃度為l〇〇mg/mL;芐達賴氨酸與化合物（I)組合物組12只：濃度為50mg/mL芐達賴氨酸+ 50mg/mL化合物（I);陽性對照組12只：濃度為25mg/mL的海王金樽溶液。
[0033] 1.3給藥
[0034]每日經(jīng)口灌胃給予20mL/kg · BW受試樣品?？瞻讓φ战M不做任何灌胃，自由進食、 進水；模型對照組按體重給予生理鹽水，連續(xù)給藥30d。每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整用藥 量。給予受試樣品結(jié)束時，將模型對照組及各樣品組一次灌胃給予白酒5mL/kg · BW，空白對 照組給蒸餾水。
[0035] 1.4肝臟樣品制備
[0036]末次給藥后，禁食不禁水12h，將小鼠頸椎脫白處死，解剖取出完整肝臟，預(yù)冷生理 鹽水清洗至洗液無血色后，吸干肝臟表面水分。剪取〇. lg肝臟組織置于小燒杯中（于冰水）， 準備9倍(0.9mL)于肝臟組織重量的0.9%的生理鹽水，轉(zhuǎn)移總量2/3的生理鹽水于燒杯中， 盡快剪碎組織塊，倒入玻璃勻漿器，再將剩余的1/3生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織 塊，一起倒入勻漿管進行勻漿，充分研磨后制成10 %的組織勻漿，于離心機中以2000r/min 離心15min，取上清液備用。
[0037] 1.5檢測指標
[0038]小鼠體重:每周稱量一次小鼠體重，直到實驗結(jié)束，以考察受試樣品對各組小鼠體 重的影響。肝組織指標測定:各組肝組織中GSH、MDA和TG含量，ADH活性測定根據(jù)各試劑盒說 明書操作步驟進行。
[0039] 1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計
[0040]數(shù)據(jù)均以（平均值土標準偏差）表示，組間差異采用SPSS16.0進行單因素分析 (AN0VA)，以P<0.05或P<0.01確定差異是否有統(tǒng)計學意義。
[0041 ] 2、實驗結(jié)果
[0042] 2.1對谷胱甘肽、丙二醛含量的影響
[0043]肝臟谷胱甘肽(GSH)的總含量是評價藥物醒酒保肝功能的一個重要指標。由表1可 知，與空白組比較，模型組小鼠經(jīng)白酒灌胃后，肝臟GSH含量極顯著降低(P〈0.01)，說明該模 型造模成功。陽性對照組和芐達賴氨酸與化合物（I)組合物組小鼠肝勻漿中GSH含量與模型 組相比極顯著升高(P〈〇.01)，芐達賴氨酸組、化合物（I)組小鼠肝勻漿中GSH含量也明顯升 高(P〈0.05)。組合物能夠維持肝臟GSH含量，對抗乙醇損傷引起的肝臟GSH耗竭，提高機體清 除自由基的能力，從而對小鼠肝臟起到保護作用。由于GSH能在一定程度上阻止肝組織中脂 質(zhì)過氧化反應(yīng)，而丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物之一，因此GSH濃度的降低會間接 導(dǎo)致肝臟MDA含量的增加。由表1可知，與空白組比較，模型組小鼠灌胃后，肝臟MDA含量極顯 著升高(P〈0.01)，說明該模型造模成功。陽性對照組和芐達賴氨酸與化合物（I)組合物組小 鼠肝勻漿中MDA含量與模型組相比顯著下降P(〈0.01)，芐達賴氨酸組、化合物（I)組也表現(xiàn) 出MDA含量明顯下降，顯著性水平(P〈0.05)。
[0044] 表1受試樣品對小鼠肝組織中GSH、MDA含量的影響
[0046] 2.2對甘油三酯含量的影響
[0047]當機體攝入大量乙醇時，乙醇在乙醇脫氫酶的作用下大量氧化，使得三羧酸循環(huán) 和脂肪代謝受阻，使得甘油三酯(TG)在肝臟中不斷堆積，不但會誘發(fā)較為嚴重的心血管疾 病，還會引發(fā)脂肪肝。由表2可知，與空白組比較，模型組小鼠肝臟組織TG含量極顯著升高(P 〈0.01)，說明該模型造模成功。與模型組比較，芐達賴氨酸與化合物（I)組合物組和陽性對 照組小鼠肝勻漿中TG含量極顯著降低(P〈0.01)。本實驗中，各藥物組都表現(xiàn)出降低醉酒小 鼠肝臟TG含量，并且組合物組都達到極顯著水平(P〈0.01)，說明此組合物可降低醉酒小鼠 肝臟組織TG含量，減輕肝臟脂肪堆積，起到保護肝臟的作用。
[0048]表2受試樣品對小鼠肝組織中TG含量的影響
[0050] 上述試驗表明，芐達賴氨酸、化合物（I)可以提高小鼠肝組織中GSH含量，降低MDA 含量，抑制TG的積累，具有一定的保肝作用;芐達賴氨酸和化合物（I)聯(lián)合使用時，治療效果 更好，可開發(fā)成保肝藥物。
[0051] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種芐達賴氨酸的藥物組合物，其特征在于:包括芐達賴氨酸、如權(quán)利要求1所述的 化合物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的芐達賴氨酸的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的載 體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載 體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的芐達賴氨酸的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、 膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射 劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將延 胡索的干燥塊莖粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物；（b)步驟（a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個柱體積，再用 85%乙醇洗脫12個柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中85 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積 比為20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~ 16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用85%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備保護肝臟的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的芐達賴氨酸的藥物組合物在制備保護肝臟的藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號】A61P1/16GK105884715SQ201610260273
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月23日
【發(fā)明人】陳斌
【申請人】陳斌