苦參堿衍生物、其制備方法及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種苦參堿衍生物、其制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明公開(kāi)的苦參堿衍生物具有良好的抗腫瘤、抗真菌感染和細(xì)菌感染的活性。本發(fā)明公開(kāi)的苦參堿衍生物的制備方法，包括步驟，培養(yǎng)粘性放線菌，收集菌絲體；將菌絲體，懸浮于水中，配制成靜息細(xì)胞懸液，加入苦參堿，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化；生物轉(zhuǎn)化完成后，對(duì)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。本發(fā)明的制備苦參堿衍生物的方法，反應(yīng)條件溫和，方法簡(jiǎn)單可靠，極大的減少了化學(xué)試劑的用量，避免了化學(xué)方法中的環(huán)境污染問(wèn)題。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
苦參堿衍生物、其制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及苦參堿衍生物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 苦參（Radix Sophorae flavescentis)為豆科苦參屬的植物。別名：苦骨、地槐、 水槐、菟槐、驕槐、野槐或白莖。生長(zhǎng)于海拔1，500米的地區(qū)，多生在山坡、沙地、草坡、灌木 林中及田野附近?？捎糜谇鍩嵩餄?、殺蟲(chóng)、利尿。也可用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下， 陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風(fēng)；外治滴蟲(chóng)性陰道炎。
[0003] 苦參堿（Matrine，MT)是由苦參的干燥根、植株、果實(shí)經(jīng)乙醇等有機(jī)溶劑提取制成 的生物堿。是傳統(tǒng)中藥苦參的主要活性成分之一，結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)四元稠環(huán)的喹諾里西啶， 是一類(lèi)結(jié)構(gòu)特異的生物堿?？鄥A的結(jié)構(gòu)如下式所示，
[0004]
[0005] 研究表明，苦參堿具有廣泛的藥理作用，如有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗心律失常、防止肝纖 維化、抗乙型肝炎病毒等，臨床上廣泛用于治療慢性肝炎和肝纖維化。作為一種天然產(chǎn)物藥 品，苦參堿有很多的優(yōu)點(diǎn)，如：毒副作用小，安全有效，藥用資源來(lái)源廣等；此外，研究者對(duì) 苦參堿的抗腫瘤作用進(jìn)行了較為廣泛而深入的研究，結(jié)果顯示，苦參堿具有廣譜抗腫瘤作 用，對(duì)正常細(xì)胞不產(chǎn)生破壞作用，且能升高白細(xì)胞數(shù)、提高機(jī)體免疫功能。但是雖然苦參堿 的應(yīng)用比較廣泛，但是由于活性較低，在一定程度上又限制了它的開(kāi)發(fā)利用。因此本領(lǐng)域技 術(shù)人員致力于對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，以期獲得一種生物活性較強(qiáng)的苦參堿衍生物。申請(qǐng)?zhí)枮?201010188491. 9的中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)，報(bào)道了一類(lèi)苦參堿衍生物，其具有良好的抗腫瘤活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種苦參堿衍生物及其用途。
[0007] 本發(fā)明的第一方面提供了一種苦參堿衍生物：其結(jié)構(gòu)式如式I所示：
[0008]
[0009] 本發(fā)明的另一方面提供了式I所示化合物的用途，用于制備治療腫瘤、真菌感染、 細(xì)菌感染的藥物。
[0010] 本發(fā)明的第另一方面提供了一種式I所示苦參堿的制備方法，包括步驟：
[0011] (1)菌體培養(yǎng)
[0012] 培養(yǎng)粘性放線菌（Actinomyces viscosus)，收集菌絲體；
[0013] ⑵生物轉(zhuǎn)化
[0014] 將步驟（1)獲得的菌絲體，懸浮于水中，配制成靜息細(xì)胞懸液，加入苦參堿，進(jìn)行 生物轉(zhuǎn)化；
[0015] (3)分離純化
[0016] 生物轉(zhuǎn)化完成后，對(duì)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。
[0017] 優(yōu)選地，步驟（1)中的粘性放線菌菌株為粘性放線菌ATCC27044菌株。
[0018] 優(yōu)選地，步驟（2)中的靜息細(xì)胞懸液體積為步驟（1)中培養(yǎng)粘性放線菌發(fā)酵液體 積的 30% -50%。
[0019] 優(yōu)選地，步驟（2)中，生物轉(zhuǎn)化的pH為5. 5-6. 5,更優(yōu)選地pH為6. 0。
[0020] 優(yōu)選地，步驟（2)中，每升靜息細(xì)胞懸液中加入苦參堿0. 2-0. 6g。
[0021] 優(yōu)選地，步驟（2)中，轉(zhuǎn)化溫度為20-35°C，更優(yōu)選地為27°C。
[0022] 優(yōu)選地，步驟（3)中，采用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離純化。
[0023] 本發(fā)明的苦參堿衍生物具有良好的抗腫瘤、抗真菌感染和細(xì)菌感染的活性。而且 本發(fā)明的制備上述苦參堿衍生物的方法，反應(yīng)條件溫和，方法簡(jiǎn)單可靠，極大的減少了化學(xué) 試劑的用量，避免了化學(xué)方法中的環(huán)境污染問(wèn)題。
[0024] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1顯示了本發(fā)明實(shí)施例中各實(shí)驗(yàn)組的摩爾轉(zhuǎn)化率。
[0026] 圖2顯示了標(biāo)準(zhǔn)品共進(jìn)樣的HPLC檢測(cè)圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件或按照制造廠商所建議的條件。
[0028] 除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文 中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0029] 實(shí)施例1
[0030] 發(fā)酵粘性放線菌制備靜息細(xì)胞懸液
[0031] 菌株：粘性放線菌（ATCC27044)購(gòu)自廣東省微生物菌種保藏中心。
[0032] 斜面培養(yǎng)基：酵母粉0.4%，蛋白胨0.7%，葡萄糖1.2%，瓊脂2. 5%，pH 7. 0-7. 2， 30°C培養(yǎng)4-5天。
[0033] 種子培養(yǎng)基：蔗糖2.5%，酵母粉0.3%，1(2冊(cè)040.1 %，1((：10.05%，]\%504.7!120 0· 05%，F(xiàn)eS04 · 7H20 0· 0002%，pH = 6. 8,3(TC 培養(yǎng) 1-2 天。
[0034] 發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖2. 5 %，大豆柏粉1. 2 %，酵母粉0. 1 %，Κ2ΗΡ040. 1 %， MgS04 · 7Η200· 3 %，pH = 6. 8，30 °C 培養(yǎng) 2-3 天。
[0035] 配制2L發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)完成后，離心獲得菌絲體。將菌絲體懸浮于水中，添 加0. 5%的氯化鈉，制成靜息細(xì)胞懸液，靜息細(xì)胞懸液終體積為1L。
[0036] 本發(fā)明實(shí)施例中苦參堿、式I所示的苦參堿衍生物標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自南京標(biāo)科生物科技 有限公司。
[0037] 實(shí)施例2
[0038] 生物轉(zhuǎn)化
[0039] 按照下表配制生物轉(zhuǎn)化體系，并設(shè)置轉(zhuǎn)化條件，轉(zhuǎn)化時(shí)間均為5小時(shí)。
[0040] 表 1
[0041]
[0042]
[0043] 轉(zhuǎn)化完成后，離心，將離心液與甲醇1 : 1體積混合，HPLC定量檢測(cè)，并計(jì)算苦參 堿底物的摩爾轉(zhuǎn)化率；
[0044] HPLC檢測(cè)法的條件如下：
[0045] 流動(dòng)相：0. 1%甲酸水溶液：乙腈=92 : 8 ;
[0046] 柱型號(hào)：C18,150X4. 60mm，3ym;
[0047] 柱溫：40°C ;
[0048] 流速：0· 7ml/min ;
[0049] 檢測(cè)波長(zhǎng)：226nm。
[0050] 摩爾轉(zhuǎn)化率％ =苦參堿衍生物摩爾數(shù)/底物苦參堿摩爾數(shù)X 100%。
[0051] 實(shí)驗(yàn)組A、B、C、D、E、F、G的摩爾轉(zhuǎn)化率如圖1所示，分別為76%、80%、86%、81%、 63%、92%、74%，從該結(jié)果可以看出，pH對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響很大，最優(yōu)化的轉(zhuǎn)化條件為：苦參 堿0. 4g/L，轉(zhuǎn)化體系pH6. 0,轉(zhuǎn)化溫度為27°C。
[0052] 轉(zhuǎn)化完成后，離心，將離心液過(guò)濾，濾液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，所得產(chǎn)品與標(biāo)準(zhǔn)品 按重量1 : 1混合制得檢測(cè)液，HPLC共進(jìn)樣檢測(cè)，所得HPLC圖譜如圖2所示，標(biāo)準(zhǔn)品和本 發(fā)明所得產(chǎn)品的HPLC峰形完全重合，證明本發(fā)明所得產(chǎn)品，結(jié)構(gòu)與標(biāo)準(zhǔn)品一致。經(jīng)質(zhì)譜檢 測(cè)，純化所得產(chǎn)品分子量大小與預(yù)期相符。
[0053] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范 圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種苦參堿衍生物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式如式I所示：2. 如權(quán)利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤、真菌感染、細(xì) 菌感染的藥物。3. -種權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，包括步驟： (1) 菌體培養(yǎng) 培養(yǎng)粘性放線菌（Actinomyces viscosus)，收集菌絲體； (2) 生物轉(zhuǎn)化 將步驟（1)獲得的菌絲體，懸浮于水中，配制成靜息細(xì)胞懸液，加入苦參堿，進(jìn)行生物 轉(zhuǎn)化； (3) 分離純化 生物轉(zhuǎn)化完成后，對(duì)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。4. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（1)中的粘性放線菌菌株為粘性放線菌 ATCC27044 菌株。5. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟⑵中的靜息細(xì)胞懸液體積為步驟（1) 中培養(yǎng)粘性放線菌發(fā)酵液體積的30% -50%。6. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2)中，生物轉(zhuǎn)化的pH為5. 5-6. 5,更 優(yōu)選地pH為6.0。7. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2)中，每升靜息細(xì)胞懸液中加入苦參 喊 0· 2-〇· 6g。8. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2)中，轉(zhuǎn)化溫度為20-35°C。9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟⑵中，轉(zhuǎn)化溫度為27°C。10. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（3)中，采用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離純 化。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105884772SQ201410473178
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2014年9月6日
【發(fā)明人】楊鐘華
【申請(qǐng)人】瑞安市普羅生物科技有限公司