熒光探針的制備方法及基于熒光探針的土霉素檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種熒光探針的制備方法及基于熒光探針的土霉素檢測方法，通過對氟硼熒光染料母環(huán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了一種水溶性較強的熒光探針，基于土霉素對該探針具有很好的，高靈敏度的熒光猝滅作用，根據(jù)加入土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液前后熒光探針的熒光強度的變化值和酸土霉素的濃度建立線性公式，再在相同條件下檢測加入含土霉素樣品前后探針的熒光強度，即可根據(jù)熒光強度的變化推算出樣品中土霉素的含量。本發(fā)明避免使用相關(guān)的毒性試劑，無需使用昂貴儀器，同時縮短了檢測時間，提高了檢測靈敏度和特異性，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】
熒光探針的制備方法及基于熒光探針的土霉素檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種熒光探針的制備方法及基于熒 光探針的土霉素檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗生素是一類特殊藥品，可用于人類疾病的感染治療，或作為獸藥以防止牲畜的 細(xì)菌感染和增加它們的增長率。土霉素(〇xytetla CyCline，OTC)，別名地霉素，地靈霉素，氧 四環(huán)素，四環(huán)素等，屬于四環(huán)素類抗生素，廣泛用于動物感染性疾病的治療。在動物飼料中， 其經(jīng)常作為獸藥抗生素和生產(chǎn)促進(jìn)劑而廣泛使用，已經(jīng)導(dǎo)致它在食品，如肉，奶和蛋制品積 累，并已經(jīng)對人體健康造成了嚴(yán)重威脅。我國是抗生素的生產(chǎn)和使用大國，僅2003年我國僅 土霉素產(chǎn)量就達(dá)到了一萬噸，占世界土霉素生產(chǎn)總量的65%。隨著環(huán)境中微量污染物問題 被不斷提出，對這些抗生素的檢測就越來越重要，而抗生素的檢測方法成為相關(guān)研究的重 要因素。
[0003] 用于探測土霉素的傳統(tǒng)方法主要有以下幾種：酶聯(lián)免疫吸附法，色譜法和毛細(xì)管 電泳法，包括色譜質(zhì)譜連用法、高效液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。然而這些方法， 要么是步驟繁瑣，且所用的試劑多是一些環(huán)境不友好型試劑；要么需要使用到復(fù)雜而昂貴 的儀器和較長的檢測時間，實用性差。因此，發(fā)展一種高效快速的土霉素檢測方法具有重要 意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于客服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種合成簡單、成本較低、反應(yīng)條件 溫和的熒光探針的制備方法，并利用該探針對食品、環(huán)境、生物樣品等中的土霉素進(jìn)行熒光 檢測。該檢測方法具有靈敏度高、選擇性好，抗干擾能力強等諸多優(yōu)點。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] -種熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0007] (1)稱取吡咯和戊二酸酐溶于適量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速將混合物加 入到三口燒瓶中，在N 2保護(hù)下，用滴液漏斗向三口燒瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚絡(luò)合物，于 常溫下充分?jǐn)嚢?，反?yīng)8-9小時；
[0008] 所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為2:1:6-8;
[0009] (2)在冰浴的環(huán)境下，用滴液漏斗向三口燒瓶中緩緩加入三乙胺，攪拌3.5-4小時 后停止反應(yīng)；
[0010] 所加入的三乙胺與三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為1:1-1.25;
[0011] (3)將上述步驟得到的反應(yīng)液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集下層 極性較大的二氯甲烷層(黃綠色溶液），所述石油醚和二氯甲烷的體積比為2-2.5:1;
[0012] (4)將萃取得到黃綠色溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，收集固體，所述固體用二氯甲烷溶 解后，用硅膠柱層析分離，收集中間一段亮綠色溶液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，收集固體并干燥后， 得到紅棕色固體，即熒光探針。
[0013] 所述硅膠柱層析分離采用的淋洗劑為甲醇和二氯甲烷的混合液，所述甲醇和二氯 甲烷的體積比為1:3-4。
[0014] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種基于本發(fā)明所述熒光探針的土霉素檢測方法，包 括以下步驟：
[0015] (1)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：制備系列不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，取若干支試管，分 為空白熒光對照組和實驗組，所有試管中加入磷酸鹽緩沖溶液和熒光探針，然后向?qū)嶒灲M 的試管中加入不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白熒光對照組不加土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定所 有試管中溶液的熒光強度；
[0016] 空白熒光對照組的熒光強度為Fo，實驗組的熒光強度為F，計算減弱的熒光強度Λ FI=F〇-F，以不同的土霉素的濃度Co與對應(yīng)減弱的熒光強度AFI作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；
[0017] (2)測定樣品中土霉素濃度:按照步驟（1)的方法，向試管中加入磷酸鹽緩沖溶液 和熒光探針，然后向試管中加入待檢測樣品，測定試管中加入樣品前后溶液的熒光強度并 計算變化值，將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對比，推算出待檢測樣品中土霉素含量。
[0018] 所述熒光探針與磷酸鹽緩沖溶組成的混合物中，熒光探針的摩爾濃度為1.0 X 10- 5mol/L〇
[0019] 所述熒光探針與磷酸鹽緩沖溶組成的混合物中，磷酸鹽緩沖溶液的摩爾濃度為 l〇-15mmol/L，pH=7 · 0〇
[0020] 所述熒光強度測定參數(shù)為:激發(fā)光狹縫為1.5nm，發(fā)射光狹縫為1.5nm，激發(fā)光波長 為358nm。
[0021] 進(jìn)一步，為確保熒光檢測的準(zhǔn)確性，加入土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液或待檢測樣品8-10min后 再測定熒光強度。
[0022]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，使用熒光法檢測土霉素，以氟硼熒光染料(B0DIPY)為 熒光團(tuán)，其結(jié)構(gòu)如下：
[0024]所采用的熒光探針的合成路線如下：
[0026]利用本發(fā)明的熒光探針檢測樣品中土霉素含量的原理為:在激發(fā)波長為358nm的 條件下，焚光探針分子溶解于緩沖溶液(PBS，pH=7.0)中，在502nm左右有很強的發(fā)射峰。當(dāng) 加入土霉素時，由于熒光探針可以在土霉素的作用下發(fā)生反應(yīng)，使熒光大幅降低直至猝滅， 因此探針分子在502nm處的發(fā)射峰明顯降低，熒光強度減弱明顯，溶液由亮綠色逐漸變?yōu)闊o 色，肉眼即可觀察到。
[0027]本發(fā)明所述的熒光探針合成簡單，成本較低，對土霉素的選擇性好、抗干擾能力 強、響應(yīng)速度快，使得該熒光探針在生物化學(xué)，食品科學(xué)等領(lǐng)域具有實際的應(yīng)用價值。利用 本發(fā)明的熒光探針檢測土霉素具有靈敏度高、選擇性好，抗干擾能力強等諸多優(yōu)點。
【附圖說明】
[0028]圖1是熒光探針檢測土霉素的機(jī)理圖；
[0029] 圖2為本發(fā)明的熒光探針與不同濃度土霉素溶液作用前后，熒光強度的變化，橫坐 標(biāo)為波長，縱坐標(biāo)為熒光強度;從a至η方向，土霉素溶液濃度依次增大；
[0030] 圖3為本發(fā)明的熒光探針的熒光強度變化值與土霉素濃度的線性關(guān)系，橫坐標(biāo)為 土霉素濃度，縱坐標(biāo)為熒光強度；
[0031] 圖4為本發(fā)明的熒光探針在不同pH值緩沖溶液中，與土霉素作用前后的熒光強度， 橫坐標(biāo)為pH，縱坐標(biāo)為焚光強度；
[0032] 圖5為本發(fā)明熒光探針在PBS緩沖溶液中，與不同離子作用后的熒光強度，橫坐標(biāo) 為波長，縱坐標(biāo)為熒光強度；
[0033] 圖6為本發(fā)明的熒光探針與土霉素作用過程中，熒光強度隨時間的變化，橫坐標(biāo)為 時間，縱坐標(biāo)為熒光強度。
【具體實施方式】
[0034] 以下實施例便于更好的理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。
[0035] -種熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0036] (1)稱取吡咯和戊二酸酐溶于適量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速將混合物加 入到三口燒瓶中，在N 2保護(hù)下，用滴液漏斗向三口燒瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚絡(luò)合物，于 常溫下充分?jǐn)嚢?，反?yīng)8-9小時；
[0037]所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為2:1:6-8;
[0038] (2)在冰浴的環(huán)境下，用滴液漏斗向三口燒瓶中緩緩加入三乙胺，攪拌3.5-4小時 后停止反應(yīng)；
[0039] 所加入的三乙胺與三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為1:1 -1.25;
[0040] (3)將上述步驟得到的反應(yīng)液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集下層 極性較大的二氯甲烷層(黃綠色溶液），所述石油醚和二氯甲烷的體積比為2-2.5:1;
[0041] (4)將萃取得到黃綠色溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，收集固體，所述固體用二氯甲烷溶 解后，用硅膠柱層析分離，使用體積比為1:3-4的甲醇和二氯甲烷的混合液作為淋洗劑，收 集中間一段亮綠色溶液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，收集固體并干燥后，得到紅棕色固體，即熒光探 針。
[0042] 一種基于本發(fā)明所述熒光探針的土霉素檢測方法，包括以下步驟：
[0043] (1)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：制備系列不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，取若干支試管，分 為空白熒光對照組和實驗組，所有試管中加入磷酸鹽緩沖溶液和熒光探針，然后向?qū)嶒灲M 的試管中加入不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白熒光對照組不加土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定所 有試管中溶液的熒光強度；
[0044] 空白熒光對照組的熒光強度為Fo,實驗組的熒光強度為F，計算減弱的熒光強度Λ FI=F〇-F，以不同的土霉素的濃度Co與對應(yīng)減弱的熒光強度AFI作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；
[0045] (2)測定樣品中土霉素濃度:按照步驟（1)的方法，向試管中加入磷酸鹽緩沖溶液 和熒光探針，然后向試管中加入待檢測樣品，測定試管中加入樣品前后溶液的熒光強度并 計算變化值，將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對比，推算出待檢測樣品中土霉素含量；
[0046] 所述熒光探針與磷酸鹽緩沖溶組成的體系中，熒光探針的摩爾濃度為1.0 X 10_ 5mo 1 /L，磷酸鹽緩沖溶液的摩爾濃度為10-15mmo 1 /L，pH=7.0;
[0047] 本發(fā)明涉及到的熒光強度測定參數(shù)為:激發(fā)光狹縫為1.5nm，發(fā)射光狹縫為1.5nm， 激發(fā)光波長為358nm，另外，為確保熒光檢測的準(zhǔn)確性，加入土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液或待檢測樣品 8-10min后再測定焚光強度。
[0048] 實施例1
[0049] -種熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0050] (1)稱取吡咯和戊二酸酐溶于適量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速將混合物加 入到三口燒瓶中，在N 2保護(hù)下，用滴液漏斗向三口燒瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚絡(luò)合物，于 常溫下充分?jǐn)嚢?，反?yīng)8小時；
[0051 ]所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為2:1:6;
[0052] (2)在冰浴的環(huán)境下，用滴液漏斗向三口燒瓶中緩緩加入三乙胺，攪拌3.5小時后 停止反應(yīng)；
[0053]所加入的三乙胺與三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為1:1;
[0054] (3)將上述步驟得到的反應(yīng)液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集下層 極性較大的二氯甲烷層(黃綠色溶液），所述石油醚和二氯甲烷的體積比為2:1;
[0055] (4)將萃取得到黃綠色溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，收集固體，所述固體用二氯甲烷溶 解后，用硅膠柱層析分離，使用體積比為1:3的甲醇和二氯甲烷的混合液作為淋洗劑，收集 中間一段亮綠色溶液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，收集固體并干燥后，得到紅棕色固體，即熒光探針。
[0056] 實施例2
[0057] 一種熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0058] (1)稱取吡咯和戊二酸酐溶于適量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速將混合物加 入到三口燒瓶中，在N2保護(hù)下，用滴液漏斗向三口燒瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚絡(luò)合物，于 常溫下充分?jǐn)嚢?，反?yīng)9小時；
[0059]所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為2:1:8;
[0060] (2)在冰浴的環(huán)境下，用滴液漏斗向三口燒瓶中緩緩加入三乙胺，攪拌4小時后停 止反應(yīng)；
[0061 ] 所加入的三乙胺與三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為1:1.25;
[0062] (3)將上述步驟得到的反應(yīng)液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集下層 極性較大的二氯甲烷層(黃綠色溶液），所述石油醚和二氯甲烷的體積比為2.5:1;
[0063] (4)將萃取得到黃綠色溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，收集固體，所述固體用二氯甲烷溶 解后，用硅膠柱層析分離，使用體積比為1:4的甲醇和二氯甲烷的混合液作為淋洗劑，收集 中間一段亮綠色溶液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，收集固體并干燥后，得到紅棕色固體，即熒光探針。
[0064] 實施例3
[0065] -種熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0066] (1)探針分子的合成:準(zhǔn)確稱取0.670 lg吡咯和0.503 lg戊二酸酐和25m無水二氯甲 烷，迅速加入到100mL三口燒瓶中，在N2保護(hù)下，于室溫下充分?jǐn)嚢琛?小時后，用滴液漏斗緩 慢的向瓶中逐滴加入6. OmL的三氟化硼乙醚絡(luò)合物，控制滴加速度，滴完大約2h，再讓其攪 拌3h。隨后，在冰浴條件下，用滴液漏斗緩慢的向三口燒瓶反應(yīng)液中逐滴加入5mL的三乙胺， 約1個半小時滴完。此時反應(yīng)劇烈，反應(yīng)液逐漸變?yōu)樯钭厣珟僭S墨綠的的混合溶液，再攪 拌2h，停止反應(yīng)。
[0067] (2)探針分子的純化：用石油醚:二氯甲烷(體積比2:1)萃取上述反應(yīng)液得黃綠色 溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得橘黃色固體結(jié)晶，將固體結(jié)晶溶于少量CH2C12后，直接上樣，硅膠柱層析 分離(淋洗劑:Vflif/Vnwiil/O,收集中間一段淺綠色部分，旋蒸后真空干燥5h，得到橘黃 色固體純品，即熒光探針。
[0068] 實施例4:
[0069] 土霉素含量的檢測方法
[0070]繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在5mL干凈的具塞試管中，將熒光探針（1.0 X l(T5m〇l/L)溶于PBS緩 沖溶液（1 OmM，pH = 7.0)中，再加入不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液(0到135uM)，分別測定加入 土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液前后熒光探針的熒光強度，根據(jù)加入土霉素前后體系的發(fā)射峰處熒光強度 的變化值和土霉素的濃度建立線性公式，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3)。建立的線性公式如下：y = 7.35^5.208(妒=0.9929)，其中7為加入土霉素前后體系的熒光強度的減少值，即厶？13 為鹽酸土霉素的濃度Co。
[0071]測定樣品溶液中土霉素含量：在5mL干凈的具塞試管中，將熒光探針（1.0 X 10- 5mo 1 /L)溶于roS緩沖溶液（1 OmM，pH = 7.0)中，再加入待測樣品溶液(0到135uM)，分別測定 加入待測樣品溶液前后熒光探針的熒光強度，計算加入樣品溶液后體系的發(fā)射峰處熒光強 度的變化值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，推算出樣品溶液中土霉素的含量。
[0072] 實施例5:
[0073]熒光探針在不同pH值緩沖溶液中，與土霉素作用前后的熒光強度 [0074] 將熒光探針（1 · 0 X 10-5mol/L)溶解在不同pH緩沖溶液中（pH = 3，4,5,6,7,8,9， 10 )，記錄l〇min后，焚光探針的熒光強度隨pH的變化，橫坐標(biāo)為pH，縱坐標(biāo)為熒光強度。實驗 結(jié)果如圖4所示，當(dāng)pH值大于7時，探針的熒光強度直線下降。而pH小于7時，探針的熒光強度 基本上能保持在一個穩(wěn)定值。因此，該探針熒光強度在酸性條件下較穩(wěn)定。故在實際測量 中，可通過使用緩沖溶液或維持溶液的酸度以保持較為穩(wěn)定的熒光強度。
[0075] 實施例6:
[0076]熒光探針在PBS緩沖溶液中，與不同離子作用后的熒光強度 [0077] 將熒光探針溶于緩沖溶液(PBS，pH=7.0)中配制成1.5 X ΙθΛιοΙ/L的溶液，向溶液 中加入 Ca2+，Hg2+，Cd2+，Mg2+，Na+，K+，Al 3+，Sn2+，Co2+，Ni2+，Cu2+離子后，沒有明顯的熒光變化， 但加入土霉素后引起了極為明顯的熒光淬滅現(xiàn)象，該熒光探針對土霉素表現(xiàn)出高靈敏度、 高選擇性的識別，當(dāng)土霉素分別與干擾物質(zhì)Ca 2+，Hg2+，Cd2+，Mg2+，Na+，K+，Al 3+，Sn2+，C〇2+，Ni2 +，Cu2+離子共存時，焚光探針不受干擾因素的影響，表現(xiàn)出來很好的抗干擾能力，如圖5所 7Jn 〇
[0078] 實施例7:
[0079] 熒光探針與土霉素作用過程中熒光強度隨時間的變化
[0080] 測定本發(fā)明的熒光探針（1.0X10-5mol/L)在PBS緩沖溶液（10mM，pH=7.0)中，與土 霉素作用過程中熒光強度隨時間的變化，橫坐標(biāo)為時間，縱坐標(biāo)為熒光強度，并設(shè)空白對照 組(不加土霉素的熒光探針隨時間的變化）。如圖6所示，探針在一定時間內(nèi)相對穩(wěn)定，加入 土霉素5min后，探針的熒光強度幾乎已保持不變。
【主權(quán)項】
1. 一種熒光探針的制備方法，其特征在于:其包括以下步驟： (1)稱取吡咯和戊二酸酐溶于適量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速將混合物加入到 三口燒瓶中，在N2保護(hù)下，向三口燒瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚絡(luò)合物，于常溫下充分?jǐn)?拌，反應(yīng)8-9小時； 所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為2:1:6-8; (2 )在冰浴的環(huán)境下，向三口燒瓶中緩緩加入三乙胺，攪拌3.5-4小時后停止反應(yīng)； 所加入的三乙胺與三氟化硼乙醚絡(luò)合物的摩爾比為1:1-1.25; (3) 將上述步驟得到的反應(yīng)液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集黃綠色溶 液，所述石油醚和二氯甲烷的體積比為2-2.5:1; (4) 將萃取得到黃綠色溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，收集固體，所述固體用硅膠柱層析分離，收 集亮綠色溶液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，收集固體并干燥后，得到熒光探針。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光探針的制備方法，其特征在于:所述硅膠柱層析分離采用 的淋洗劑為甲醇和二氯甲烷的混合液，所述甲醇和二氯甲烷的體積比為1:3-4。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光探針的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)的干燥方法 為真空干燥。4. 一種基于權(quán)利要求1至3之一所述的熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于： (1) 繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：制備系列不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，取若干支試管，分為空 白熒光對照組和實驗組，所有試管中加入磷酸鹽緩沖溶液和熒光探針，然后向?qū)嶒灲M的試 管中加入不同濃度的土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白熒光對照組不加土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定所有試 管中溶液的熒光強度； 空白熒光對照組的熒光強度為Fo,實驗組的熒光強度為F，計算減弱的熒光強度AFI = F0- F，以不同的土霉素的濃度Co與對應(yīng)減弱的熒光強度AFI作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線； (2) 測定樣品中土霉素濃度:按照步驟（1)的方法，向試管中加入磷酸鹽緩沖溶液和熒 光探針，然后向試管中加入待檢測樣品，測定試管中加入樣品前后溶液的熒光強度并計算 變化值，將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對比，推算出待檢測樣品中土霉素含量。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于:熒光強度測定 參數(shù)為:激發(fā)光狹縫為1 · 5nm，發(fā)射光狹縫為1 · 5nm，激發(fā)光波長為358nm 〇6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于:加入土霉素標(biāo) 準(zhǔn)溶液或待檢測樣品8-lOmin后再測定熒光強度。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于:所述熒光探 針與磷酸鹽緩沖溶組成的混合物中，熒光探針的摩爾濃度為I. 〇 X l(T5mol /L。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于:所述熒光探針 與磷酸鹽緩沖溶組成的混合物中，磷酸鹽緩沖溶液的摩爾濃度為10-15mmol/L，pH=7.0。
【文檔編號】C09K11/06GK105884806SQ201610451659
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年6月21日
【發(fā)明人】許小平, 胥智群, 歐敏銳, 祝令輝, 谷俊杰
【申請人】福州大學(xué)