一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針及試劑盒。所述引物和探針的序列如SEQ ID NO:1?4，和SEQ ID NO:5?8，和SEQ ID NO:9?12，和SEQ ID NO:13?15，和SEQ ID NO:16?18，和SEQ ID NO:19?21，和SEQ ID NO:22?25；其中SEQ ID NO:3?4,7?8,11?12,15,18,21,24?25的5’端和3’端分別連接不同熒光標(biāo)記。還公開了利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法。了解客戶皮膚皺紋產(chǎn)生的內(nèi)因和外因，為其提供個性化美容健康解決方案，使抗皺美容產(chǎn)品效果最大化。
【專利說明】
一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針及試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及美容領(lǐng)域，尤其涉及一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針及試劑 盒。
【背景技術(shù)】
[0002] SNP(單核苷酸多態(tài)性)是指在基因組上單個核苷酸的變異，包括轉(zhuǎn)換、顛換、缺失 和插入，是一種最常見的遺傳標(biāo)記，在人群中的攜帶頻率大于1%，廣泛應(yīng)用于人類疾病診 斷、藥物個體化使用、生物學(xué)基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域。隨著對不同SNP位點研究的深入，通過多個 SNP位點的組合檢測以及后續(xù)的數(shù)據(jù)分析，可以針對不同人群的基因信息制定個性化健康 解決方案。
[0003] 人體的皮膚外觀受到內(nèi)因和外因的影響，外因包括紫外線、環(huán)境污染、不當(dāng)美容產(chǎn) 品使用等，內(nèi)因則體現(xiàn)在與皮膚相關(guān)的生化變化，包括蛋白活性、荷爾蒙水平等，這些變化 大多是由遺傳基因決定的。現(xiàn)階段的皮膚保養(yǎng)方法多是根據(jù)外因采取的，如使用防曬霜、保 濕劑等，然而這些無針對性的保養(yǎng)方法大多效果甚微，治標(biāo)不治本。隨著生活水平的提高， 對于提高皮膚光滑和緊固度的需求越來越大，結(jié)合內(nèi)外因進(jìn)行針對性美容護(hù)膚將比傳統(tǒng)方 法更具優(yōu)勢，因此準(zhǔn)確了解內(nèi)因顯得至關(guān)重要。
[0004] 皮膚皺紋的產(chǎn)生受到多個基因影響，每個基因又存在多個SNP位點，這些位點會影 響相關(guān)基因的酶活性。通過相關(guān)基因的SNP位點檢測可以評測不同個體的皮膚抗皺能力，還 可以評估相關(guān)美容產(chǎn)品是否適用于檢測者，使產(chǎn)品效果達(dá)到最大化，在此基礎(chǔ)上結(jié)合日常 生活習(xí)慣調(diào)整，使美容效果進(jìn)一步提升。對于這種檢測方法，選取準(zhǔn)確的位點組合以及后續(xù) 數(shù)據(jù)分析尤為重要。國內(nèi)外已有專利/專利申請文獻(xiàn)報道利用SNP位點基因型判斷美容產(chǎn)品 適用皮膚類型，但仍存在著易感SNP位點選取不準(zhǔn)確、檢測結(jié)果未能量化綜合分析問題。當(dāng) 前未見結(jié)合不同基因 SNP位點組合檢測和量化算法評估皮膚抗皺能力的報道。
[0005] 中國實用新型專利201320009798.7公開了一種基因芯片，利用該基因芯片檢測美 白和老化相關(guān)基因 SNP位點，美白基因的SNP位點包括SLC45A2(re35391 )、KITLG (rs642742)、ASIP(rsl015362)、TYR(rsl042602)、0CA2(rsl800414)、DCT(rs2031526)、MClR (rs885479)，老化基因的SNP包括MMPl(rsl799750)、TIMPl(rs4898)、SIRT6(rsl07251)、 S0D2(rs4880)、NQ01(rsl800566)、TNFA(rsl800629)、EPHX(rsl051740)，但該專利采用的基 因芯片方法較繁瑣，難以適用大量檢測。中國發(fā)明專利申請201180056031.3篩選到了一組 與皮膚老化相關(guān)的基因（LPL、ADIP0Q、PLN等），并根據(jù)該組基因篩選到一種抗老化新材料， 該專利申請中未提及基因相關(guān)SNP位點。中國專利申請201080044917.1提供了一種利用天 然反義多核苷酸或化合物用于調(diào)控FLG基因表達(dá)，從而達(dá)到預(yù)防或治療與FLG相關(guān)的疾病。
[0006] 美國專利US200812286033通過單萜類物質(zhì)誘導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)以達(dá)到改善皺紋的 效果。美國專利US200912512368通過含有異戊烯異黃酮的化妝品誘導(dǎo)ELN和C0L3A1基因的 表達(dá)，從而達(dá)到改善皮膚外觀的效果。美國專利US201514618080和US201313932565通過在 皮膚衰老位置使用朝鮮薊提取物和橄欖油提取物，使包括ELN和C0L3A1在內(nèi)的相關(guān)基因受 到調(diào)控上調(diào)表達(dá)，從而達(dá)到改善衰老皮膚的功效。
[0007] 以上專利/專利申請均利用外來物質(zhì)來調(diào)控體內(nèi)基因的表達(dá)，但每個個體的基因 中卻存在差異SNP位點，這種方法難以達(dá)到個性化保養(yǎng)或治療。英國專利GB20110021917檢 測了與美容產(chǎn)品成分生物學(xué)途徑相關(guān)的靶基因 SNP位點，進(jìn)而判斷該產(chǎn)品是否適用于使用 者，該專利涉及的 SNP 位點有 MMP-l(rsl799750)、NQ01(rsl800566)、GSTPl(rsl695)、hGPXl (rsl0504)〇

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針。
[0009] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針，其特征 在于，所述序列如SEQIDN0:1-4，和SEQIDN0:5-8，和SEQIDN0:9-12，和SEQIDN0:13-15，和SEQIDN0:16-18，和SEQIDN0:19-21，和SEQIDN0:22-25 ;其中SEQIDN0:3-4,7-8,11-12,15,18,21,24-25的5'端和3'端分別連接不同熒光標(biāo)記。
[0010] 本發(fā)明還提供一種用于評估皮膚抗皺情況的試劑盒，其特征在于，含有所述的引 物和探針。
[0011] 本發(fā)明還提供一種利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在 于，使用所述的引物和探針，或使用所述的試劑盒
[0012] 進(jìn)一步，步驟為：
[0013] 1)使用所述的引物和探針或所述的試劑盒對客戶進(jìn)行SNP位點檢測；
[0014] 2)根據(jù)易感SNP位點組合計算出客戶的皮膚抗皺能力值;所述易感SNP位點組合為 ELNrs2071307、EMILINlrs2011616、FLGrsl46466242、rs200519781、MMP3rs3025058、 MMPlrsl799750、C0L3Alrsl800255;
[0015] 3)結(jié)合1)的SNP位點檢測結(jié)果及2)的皮膚抗皺能力值，進(jìn)行結(jié)果判斷。
[0016]進(jìn)一步，所述步驟1)為，
[0017] 提取客戶的DNA樣本；
[0018] 采用所述引物和探針或所述試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增;優(yōu)選的，PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序為 50Γ2π?η，95Γ?0π?η，95Γ?58、60-(：1π?η 循環(huán) 40 次。
[0019]進(jìn)一步，所述步驟2)為，
[0020]根據(jù)已知易感SNP位點組合的各個位點基因型的致病風(fēng)險比值比計算出綜合風(fēng)險 比值比〇R(C)，計算方程式為：
[0021]通過已知中國人群不同年齡段皮膚皺紋產(chǎn)生平均風(fēng)險比值odds(D)，計算出檢測 個體的皮膚皺紋產(chǎn)生風(fēng)險值比值〇dds(X)，計算式為odds(X)=0R(C) Xodds(D);
[0023]根據(jù)已知正?；蛐腿巳猴L(fēng)險值F(N)，計算出個體皮膚抗皺能力值。
[0025] 進(jìn)一步，所述步驟3)的結(jié)果判斷為，
[0026] 1)若個體皮膚抗皺能力值低于100%，則表示該個體的皮膚抗皺能力低于該年齡 段人群的正常值，抗皺能力差，屬于易產(chǎn)生皺紋的體質(zhì);值越低，抗皺能力越差；
[0027] 2)若個體皮膚抗皺能力值等于100%，則表示該個體的皮膚抗皺能力與該年齡段 人群的正常值一樣，抗皺能力一般；
[0028] 3)若個體皮膚抗皺能力值高于100%，則表示該個體的皮膚抗皺能力高于該年齡 段人群的正常值，抗皺能力較好，屬于不易產(chǎn)生皺紋的體質(zhì);值越高，抗皺能力越好；
[0029]同時；
[0030]若基因 ELN的SNP位點rs2071307為A/A，表明攜帶純合突變，減弱皮膚的彈性和拉 伸能力，促進(jìn)慢性老化;若為A/G，表明攜帶雜合突變，減弱皮膚的彈性和拉伸能力，促進(jìn)慢 性老化;若為G/G，則為正?；蛐?；
[0031] 若基因 EMILIN1的SNP位點rs2011616為A/A，表明攜帶純合突變，但皮膚褶皺風(fēng)險 正常;若為A/G，表明攜帶G，彈性纖維質(zhì)量降低，真皮結(jié)構(gòu)強(qiáng)度減弱，容易褶皺;若為G/G，則 為正?；蛐?，但由于攜帶G，彈性纖維質(zhì)量降低，真皮結(jié)構(gòu)強(qiáng)度減弱，容易褶皺；
[0032]若基因 FLG的SNP位點rsl46466242為A/T，表明攜帶雜合突變，皮膚機(jī)械強(qiáng)度較弱， 皮膚容易受到外界傷害;若為T/T，則為正?；蛐?；
[0033] 若基因 FLG的SNP位點rs200519781為T/-，表明為缺失基因型，絲聚合蛋白活性較 弱，皮膚容易淺紋過多;若為T/T，則為正常基因型；
[0034] 若基因 MMP3的SNP位點rs3025058為-/A，表明為缺失基因型，酶活降低，增加膠原 纖維損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降；若為-/_，則為缺失基因型，酶活降低，增加膠原纖 維損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降;若為A/A，則為正?；蛐?；
[0035] 若基因 MMP1的SNP位點rsl799750為C/C，表明為插入基因型，酶活降低，增加膠原 纖維損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降；若為_/C，表明為插入基因型，酶活降低，增加膠原 纖維損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降;若為-/_，則為正常基因型；
[0036] 若基因⑶L3A1的SNP位點rsl800255為A/G，表明為攜帶雜合突變，無相關(guān)風(fēng)險;若 為A/A，表明為攜帶純合突變，III型膠原蛋白減弱或消失，使得皮膚更容易形成皺紋;若為 G/G，則為正?；蛐?。
[0037]本發(fā)明（1)篩選出一組分子機(jī)制清晰，可用于全面準(zhǔn)確評估皮膚抗皺能力的SNP位 點組合；（2)采用特異性強(qiáng)、靈敏度高的TaqMan-MGB探針檢測方法進(jìn)行檢測，可同時檢測多 個樣本；（3)通過算法精確量化皺紋產(chǎn)生風(fēng)險以評估皮膚抗皺能力，為檢測者提供個性化的 皮膚抗皺方案。
[0038]本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:結(jié)合分子機(jī)制研究、文獻(xiàn)檢索和臨床數(shù)據(jù)篩選，得到一 組皮膚抗皺相關(guān)的易感SNP位點組合，所述組合位點分別為ELN(rs2071307)、EMILINl (rs2011616)、FLG(rsl46466242、rs200519781)、MMP3(rs3025058)、MMPl(rsl799750)、 C0L3Al(rsl800255)，所述組合的位點信息見表1，該組合位點可以準(zhǔn)確評估不同個體的皮 膚抗皺能力。
[0039] 表1易感SNP位點信息表
[0041]為了檢測所述位點，
【申請人】設(shè)計了檢測所需的引物和探針，所述引物及熒光探針 如下（下劃線為SNP位點）：
[0042] ELN(rs2071307)引物及熒光探針序列：
[0044] EMILINl(rs2011616)引物及熒光探針序列：
[0046] FLG(rsl46466242)引物及熒光探針序列：
[0048] FLG(rs200519781)引物及熒光探針序列：
[0052] MMP3(rs3025058)引物及熒光探針序列：
[0056] MMPl(rsl799750)引物及熒光探針序列：
[0060] C0L3Al(rsl800255)引物及熒光探針序列：
[0062]所述位點檢測方法具體步驟如下：
[0063] 1、人體唾液樣本采集。采用無創(chuàng)唾液自動流出采集方式，在唾液采集前30min需用 飲用水清理口腔中雜物，采集2mL唾液存放于唾液保存液(購自廈門致善生物科技股份有限 公司）以供檢測。
[0064] 2、人體全基因組DNA提取。采用碘化鉀法，參考具體步驟為：取0 . lmL唾液于1.5mL 離心管中，加入500yL 0.01mol/L PBS溶液反復(fù)吹打，lOOOOrpm離心5min;去上清，沉淀加入 50yL5mol/L KI溶液，震蕩混勻，再加入 100yL 0.9%NaCl溶液、150yL酚/氯仿（25:24，V/V) 混合液，震蕩30s，lOOOOrpm離心5min;取200yL上清，加入200yL異丙醇，混勾，lOOOOrpm離心 5min;去上清，沉淀加入lmL無水乙醇洗滌，lOOOOrpm離心5min;棄無水乙醇，沉淀在超凈臺 中吹干，加50yL TE緩沖液溶解，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0065] 3、PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序。10yL反應(yīng)體系含TaqMar^Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems，美國應(yīng)用生物技術(shù)有限公司）5yL、DNA模板lyL、熒光探針(每個SNP 位點的檢測對應(yīng)探針混合在一起）（2.5μΜ)和引物混合液(每個SNP位點的檢測其對應(yīng)引物 混合在一起）1.5yL、ddH 20 2.5yL。反應(yīng)程序為50°C2min，95°C10min，95°C15s、60°Clmin循 環(huán)40次。檢測儀器為StepOnePlus實時焚光定量PCR儀(Applied Biosystems，美國應(yīng)用生物 技術(shù)有限公司）。
[0066] 4、實驗結(jié)果分析。米用StepOnePlus?Software v2.3(Applied Biosystems，美國 應(yīng)用生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行分析，根據(jù)不同的熒光信號，得出對應(yīng)SNP位點的基因型。 [0067]皮膚抗皺能力量化方法如下：1、皮膚皺紋產(chǎn)生綜合風(fēng)險比值比計算。已知檢測所 得的各個位點基因型的致病風(fēng)險比值比分別為OR^ORfORd文獻(xiàn)查詢得知，結(jié)果見表3)， 可以計算出個體皮膚皺紋產(chǎn)生綜合風(fēng)險比值比〇R(C)，計算方程式如下：
[0069] 2、通過步驟1計算出的個體皮膚皺紋產(chǎn)生綜合風(fēng)險比值比0R(C)，通過文獻(xiàn)或其它 統(tǒng)計途徑可以獲得中國人群不同年齡段皮膚皺紋產(chǎn)生平均風(fēng)險比值odds(D)(已知中國人 群不同年齡段皮膚皺紋產(chǎn)生平均風(fēng)險比值〇dds(D)分別為：20-35歲：0.08，36-45歲：0.30， 46-55歲：0.62)，通過比值比計算公式可以計算出檢測個體皮膚皺紋產(chǎn)生風(fēng)險值比值odds (X)，計算方程式如下：
[0071] 3、通過步驟2計算出的個體皮膚皺紋產(chǎn)生風(fēng)險比值odds(X)，即可以通過風(fēng)險值推 算公式可以計算出綜合風(fēng)險值F(X)，計算方程式如下：
[0073] 4、通過步驟3計算得到的綜合風(fēng)險值可以評估不同個體的皮膚抗皺能力，已知正 常基因型人群風(fēng)險值F(N)(已知正?；蛐腿巳猴L(fēng)險值F(N)分別為:20-35歲：7.4%，36-45 歲：23%，46-55歲：38.3%)，可以計算出個體皮膚抗皺能力V，計算方程式如下：
[0075] 檢測結(jié)果個性化分析及解決方案：
[0076] 根據(jù)抗皺能力量化計算結(jié)果，結(jié)合相關(guān)位點的功能及分子機(jī)制，判斷皮膚問題的 可能性，評估檢測者可以使用含有何種成分的美容產(chǎn)品，并為其調(diào)整有利于護(hù)膚的日常生 活飲食習(xí)慣。相關(guān)基因的分子機(jī)制如下:如果ELN攜帶突變，則皮膚容易松弛;FLG攜帶突變， 容易造成皮炎、皮膚淺紋過多、過敏等癥狀;MMP1和MMP3攜帶突變，容易造成皮膚老化； EMILIN1攜帶突變，易造成皮膚松弛;C0L3A1攜帶突變，則III型膠原蛋白減弱或消失，使得 皮膚更容易形成皺紋。
[0077] 有益效果:可以充分了解皮膚皺紋產(chǎn)生的內(nèi)因和外因，為用戶提供個性化美容健 康解決方案，使抗皺美容產(chǎn)品使用效果最大化。此外，還可以為檢測者調(diào)整有利于護(hù)膚的日 常生活飲食習(xí)慣。
【具體實施方式】
[0078] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在旨在用于解釋本發(fā)明，而不 能理解為對本發(fā)明的限制。實施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描 述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以 通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0079]實施例1:引物和探針設(shè)計
[0080] 1、設(shè)計并合成以下引物和探針，合成單位:Applied Biosystems，美國應(yīng)用生物技 術(shù)有限公司。
[0081 ] ELN(rs2071307)引物及熒光探針序列：
[0083] EMILINl(rs2011616)引物及熒光探針序列：
[0085] FLG(rsl46466242)引物及熒光探針序列：
[0087] FLG(rs200519781)引物及熒光探針序列：
[0091] MMP3(rs3025058)引物及熒光探針序列：
[0095] MMPl(rsl799750)引物及熒光探針序列：
[0099] C0L3Al(rsl800255)引物及熒光探針序列：
[0102] 2、SNP位點檢測
[0103] 1)樣本采集。本實施例中的檢測樣本采用人體唾液，在唾液采集前30min需用飲用 水清理口腔中雜物，采集2mL唾液存放于唾液保存液(購自廈門致善生物科技股份有限公 司）以供檢測。
[0104] 2)人體全基因組DNA提取。采用碘化鉀法，參考具體步驟為：取0 . lmL唾液于1.5mL 離心管中，加入500yL 0.01mol/L PBS溶液反復(fù)吹打，lOOOOrpm離心5min;去上清，沉淀加入 50yL5mol/L KI溶液，震蕩混勻，再加入 100yL 0.9%NaCl溶液、150yL酚/氯仿（25:24，V/V) 混合液，震蕩30s，lOOOOrpm離心5min;取200yL上清，加入200yL異丙醇，混勾，lOOOOrpm離心 5min;去上清，沉淀加入lmL無水乙醇洗滌，lOOOOrpm離心5min;棄無水乙醇，沉淀在超凈臺 中吹干，加50yL TE緩沖液溶解，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0105] 3)反應(yīng)體系及反應(yīng)程序：10yL反應(yīng)體系含Ta_an?Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems，美國應(yīng)用生物技術(shù)有限公司）5yL、DNA模板lyL、熒光探針(每個SNP 位點的檢測對應(yīng)探針混合在一起）（2.5μΜ)和引物混合液1.5yL、ddH20 2.5yL。反應(yīng)程序為 501€2111丨11，95°(：10111丨11，95°(：158、60°(：1111丨11循環(huán)40次。檢測儀器為3丨印0116?1118實時熒光定量 PCR儀(Applied Biosystems，美國應(yīng)用生物技術(shù)有限公司）。
[0106] 4、檢測程序運行結(jié)束后，采用 StepOnePl us?Sof twar e v2 · 3 (App 1 i ed Biosystems，美國應(yīng)用生物技術(shù)有限公司）對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，得出對應(yīng)SNP的基因型（見 表2)。
[0107]表2SNP位點檢測結(jié)果表
[0109] 3、抗皺能力量化評估及個性化解決方案
[0110] 1)皺紋產(chǎn)生綜合風(fēng)險值計算。通過文獻(xiàn)查詢得知，不同位點的比值如表3所示。
[0111] 表3相關(guān)位點基因型的風(fēng)險比值比(0R)表
[0112]
[0113] (1)個體皮膚皺紋產(chǎn)生綜合風(fēng)險比值比0R(C)計算。不同位點的0R值如表2所示，則
[0114] (2)通過步驟（1)計算出個體皮膚皺紋產(chǎn)生綜合風(fēng)險比值比0R(C)，綜合文獻(xiàn)和調(diào) 查數(shù)據(jù)得知中國人群20-35年齡段皮膚皺紋的比值odds (D)約為0.08 (本實施例的檢測樣本 屬于該年齡段，故選擇該年齡段的數(shù)據(jù)），通過比值比計算公式可以計算出檢測個體皮膚皺 紋產(chǎn)生風(fēng)險值比值〇dds(X)=OR(C) Xodds(D) = 10.13X0.08 = 0.81。
[0115] (3)通過步驟(2)計算出的檢測個體皮膚皺紋產(chǎn)生風(fēng)險比值odds(X)，綜合風(fēng)險值
[0117] (4)已知正?；蛐腿巳猴L(fēng)險值F(N)為7.4%，可以計算出皮膚抗皺能力值
[0119] 2)、檢測結(jié)果綜合分析。該個體的皮膚抗皺能力值僅為16.53%，皮膚抗皺能力較 差，屬于易產(chǎn)生皺紋的體質(zhì)。同時結(jié)合相關(guān)基因的分子機(jī)制，由表2可知該檢測個體中的 EMILIN1、MMP3攜帶易感位點純合突變，F(xiàn)LG、MMP1攜帶易感位點雜合突變，這些突變會影響 絲聚合蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶活性，影響皮膚彈性，這意味著該個體的皮膚彈性較一般人 差，皮膚易松弛。
[0120] 3)、個性化解決方案:該個體皮膚抗皺能力較差，多個相關(guān)基因的突變使得該個體 先天易產(chǎn)生皺紋，需應(yīng)特別注意化妝品的選擇，使用可提高絲聚合蛋白、彈性蛋白活性的化 妝品；保持皮膚清潔干凈，卸妝應(yīng)徹底，減少皮膚毛孔堵塞。注意補充天然維生素 C，如西紅 柿，胡蘿卜等;可選擇膠原蛋白和彈性蛋白含量豐富的食物，忌暴飲暴食;過度節(jié)食減肥也會 造成皮膚營養(yǎng)過快流失而得不到有效補充，導(dǎo)致皮膚凹陷松弛;不良情緒和表情會造成皮 膚因勞累過度得不到有效休息而形成松弛。
[0121] 盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例 性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨 的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項】
1. 一種用于評估皮膚抗皺情況的引物和探針，其特征在于，所述序列如SEQ ID N0:1-4,和SEQ ID NO:1-4,和SEQ ID NO:5-8,和SEQ ID NO:9-12,和SEQ ID NO:13-15,和SEQ ID N0:16-18,和SEQ ID N0:19-21，和SEQ ID N0:22-25;其中SEQ ID N0:3-4,7-8，ll-12，15， 18，21，24-25的5 '端和3 '端分別連接不同熒光標(biāo)記。2. -種用于評估皮膚抗皺情況的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的引物和探 針。3. -種利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1 的引物和探針，或使用權(quán)利要求2的試劑盒。4. 權(quán)利要求3所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，步驟 為： 1) 使用權(quán)利要求1的引物和探針或權(quán)利要求2的試劑盒對客戶進(jìn)行SNP位點檢測； 2) 根據(jù)易感SNP位點組合計算出客戶的皮膚抗皺能力值；所述易感SNP位點組合為 ELNrs2071307、EMILINlrs2011616、FLGrsl46466242、rs200519781、MMP3rs3025058、 MMPlrsl799750、C0L3Alrsl800255; 3) 結(jié)合1)的SNP位點檢測結(jié)果及2)的皮膚抗皺能力值，進(jìn)行結(jié)果判斷。5. 權(quán)利要求4所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，所述 步驟1)為， 提取客戶的DNA樣本； 采用權(quán)利要求1所述引物和探針或權(quán)利要求2所述試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增;優(yōu)選的，PCR擴(kuò) 增的反應(yīng)程序為 501€2111丨11，95°(：10111丨11，95°(：158、60°(：1111丨11循環(huán)40次。6. 權(quán)利要求4所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，所述 步驟2)為，根據(jù)已知易感SNP位占扭各的欠+你占其田刑的致病風(fēng)險比值比計算出綜合風(fēng)險比值 比OR(C)，計算方程式為 通過已知中國人群，I、F」千附_ BU又/K 3;又廠τ別風(fēng)險比值O d d S (D)，計算出檢測個體 的皮膚皺紋產(chǎn)生風(fēng)險值化彳畝。.計笪式為〇dds(X) =OR(C) Xodds(D); 計算出綜合風(fēng)險值：根據(jù)已知正?；蛐腿巳猴L(fēng)險值F(N)，計算出個體皮膚抗皺能力值，7. 權(quán)利要求4所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，所述 步驟3)的結(jié)果判斷為， 1) 若個體皮膚抗皺能力值低于100%，則表示該個體的皮膚抗皺能力低于該年齡段人 群的正常值，抗皺能力差，屬于易產(chǎn)生皺紋的體質(zhì);值越低，抗皺能力越差； 2) 若個體皮膚抗皺能力值等于100%，則表示該個體的皮膚抗皺能力與該年齡段人群 的正常值一樣，抗皺能力一般； 3) 若個體皮膚抗皺能力值高于100 %，則表示該個體的皮膚抗皺能力高于該年齡段人 群的正常值，抗皺能力較好，屬于不易產(chǎn)生皺紋的體質(zhì);值越高，抗皺能力越好； 同時； 若基因 ELN的SNP位點rs2071307為A/A，表明攜帶純合突變，減弱皮膚的彈性和拉伸能 力，促進(jìn)慢性老化;若為A/G，表明攜帶雜合突變，減弱皮膚的彈性和拉伸能力，促進(jìn)慢性老 化;若為G/G，則為正?；蛐停? 若基因 EMILIN1的SNP位點rs2011616為A/A，表明攜帶純合突變，但皮膚褶皺風(fēng)險正常； 若為A/G，表明攜帶G，彈性纖維質(zhì)量降低，真皮結(jié)構(gòu)強(qiáng)度減弱，容易褶皺;若為G/G，則為正常 基因型，但由于攜帶G，彈性纖維質(zhì)量降低，真皮結(jié)構(gòu)強(qiáng)度減弱，容易褶皺； 若基因 FLG的SNP位點rsl46466242為A/T，表明攜帶雜合突變，皮膚機(jī)械強(qiáng)度較弱，皮膚 容易受到外界傷害;若為T/T，則為正?；蛐?； 若基因 FLG的SNP位點rs200519781為T/-，表明為缺失基因型，絲聚合蛋白活性較弱，皮 膚容易淺紋過多;若為T/T，則為正?；蛐?； 若基因 MMP3的SNP位點rs3025058為-/A，表明為缺失基因型，酶活降低，增加膠原纖維 損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降;若為-/_，則為缺失基因型，酶活降低，增加膠原纖維損 傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降;若為A/A，則為正?；蛐?； 若基因 MMPl的SNP位點rsl799750為C/C，表明為插入基因型，酶活降低，增加膠原纖維 損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降;若為_/C，表明為插入基因型，酶活降低，增加膠原纖維 損傷和破壞的風(fēng)險，皮膚彈性下降;若為-/_，則為正?；蛐?； 若基因 C0L3A1的SNP位點rs 1800255為A/G，表明為攜帶雜合突變，無相關(guān)風(fēng)險；若為A/ A，表明為攜帶純合突變，III型膠原蛋白減弱或消失，使得皮膚更容易形成皺紋;若為G/G， 則為正?；蛐?。
【文檔編號】C12N15/11GK105886645SQ201610367685
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】紀(jì)志梁, 王毛陽, 楊志云, 劉曉瑜
【申請人】福建愛我健康生物科技有限公司