西尼地平的藥物組合物及其心肌保護(hù)的醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了西尼地平的藥物組合物及其心肌保護(hù)的醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的西尼地平的藥物組合物中含有西尼地平和一種從黃芩的干燥根中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，西尼地平和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，可以降低心肌缺血再灌注損傷；二者聯(lián)合作用時(shí)，對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用更優(yōu)，可以開發(fā)成保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
西尼地平的藥物組合物及其心肌保護(hù)的醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及西尼地平的新用途，具體涉及西尼地平的藥物組 合物及其心肌保護(hù)的醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 西尼地平即1，4_二氫-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5_吡啶二羧酸2-甲氧基乙 酯肉桂醇酯。
[0003] 西尼地平為親脂性的二氫吡啶類鈣拮抗劑，能與血管平滑肌細(xì)胞膜上L型鈣通道 的二氫吡啶位點(diǎn)結(jié)合，抑制Ca 2+通過L型鈣通道的跨膜內(nèi)流，從而松弛、擴(kuò)張血管平滑肌，起 到降壓作用。它還可通過抑制Ca2+通過交感神經(jīng)細(xì)胞膜上N型鈣通道的跨膜內(nèi)流而抑制交感 神經(jīng)末梢去甲腎上腺素的釋放和交感神經(jīng)活動。
[0004] 迄今為止，尚未見西尼地平及其藥物組合物與心肌缺血再灌注損傷的相關(guān)性報(bào) 道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種西尼地平的藥物組合物，該藥物組合物中含有西尼地 平和一種從草本中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，西尼地平和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同保護(hù) 心肌。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -種西尼地平的藥物組合物，包括西尼地平、如上所述的化合物（I)和藥學(xué)上可以 接受的載體。
[0010]如上所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將黃芩的干燥根粉碎， 用60~70 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽 和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫15個(gè)柱 體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃縮 物用正相硅膠分離，依次用體積比為55:1、25:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到 4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和1:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅 膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫 液減壓濃縮得到化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，步驟(a)中用65%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012]進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制備心肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 如上所述的西尼地平的藥物組合物在制備心肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明提供的西尼地平的藥物組合物中含有西尼地平和一種從草本中分離得到 的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，西尼地平和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，可以降低心肌缺血再灌注損 傷;二者聯(lián)合作用時(shí)，對心肌缺血再灌注損傷的防治作用更優(yōu)，可以開發(fā)成防治心肌缺血再 灌注損傷的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將黃芩的干燥根(2kg)粉碎，用65 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水飽和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70%乙醇 洗脫15個(gè)柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為55:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè)柱體積)和1:1(5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組 分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1(8個(gè)柱體積）、15:1(10個(gè)柱體積)和1:1(5 個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個(gè)柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (345mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:淡黃色粉末，HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 253.1761，結(jié)合核磁特征可 得分子式為C15H24〇3，不飽和度為4。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ Η(ΡΡπι，CDC13，500MHz): H-3 (2.54， m)，H-4a(1.82，m)，H-4b(1.62，m)，H-5a(1.77，m)，H-5b(1.69，m)，H-6(2.07，m)，H-7(2.66， br，d，J = 8.7Hz)，H-8(3.54，d，J = 9.2Hz)，H-10a(2.37，d，J=15.4Hz)，H-10b(1.90，d，J = 15.4Hz)，H-ll(9.87，s)，H-12a(3.93，dd，J = 9.2,4.5Hz)，H-12b(3.58，dd，J = 9.2,2.7Hz)， !1-13(0.88，(1，了 = 7.4抱），!1-14(0.86,8)，!1-15(1.05,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯111，〇)(：1 3， 125MHz):171.2(C，1-C)，128.3(C，2-C)51.2(CH，3-C)，24.5(CH2,4-C)，32.1(CH2,5-C)，29.3 (CH，6-C)，53.5(CH，7-C)，83.1(CH，8-C)，39.6(C，9-C)，43.7(CH2，10-C)，194.3(CH，11-C)， 51.4(CH2，12-C)，12.5(CH 3，13-C)，19.5(CH3，14-C)，25.8(CH3，15-C)。紅外波譜表明該化合 物含有羥基(3340cm- 1)，羰基（1735cm-1)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有15個(gè)碳信號，包括 三個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基(一個(gè)連氧碳），五個(gè)次甲基(一個(gè)醛基碳和一個(gè)連氧碳），以及三個(gè)季 碳(兩個(gè)烯烴碳），以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為雙環(huán)結(jié)構(gòu)。1H-匪R譜結(jié)合 HSQC譜顯示三個(gè)甲基質(zhì)子信號δΗ 0.88(3!1，(1，1 = 7.4!^)、0.86(3!1，8)、1.05(3!1，8)，三組亞 甲基質(zhì)子信號 δΗ 1.82(lH，m)與 1.62(1!1，111)、1.77(1!1，111)與1.69(1!1，111)、2.37(1!1，(1，了 = 15.4抱）與1.90(1!1，(1，1=15.4抱），一組羥甲基質(zhì)子信號5[13.93(1!1，(1(1，1 = 9.2,4.5抱）與 3.58(1!1，(1(1，了 = 9.2,2.7!^)，三個(gè)次甲基質(zhì)子信號5[12.54(1!1，111)，2.07(1!1，111)與2.66(1!1， 1^，^ = 8.7抱），一個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號6(13.54(1!1，(1，1 = 9.2抱），一個(gè)醛基質(zhì)子信號611 9 · 87 (1H，s)。4-? COSY譜中存在H-3/H2-12、H-3/H2-4/H2-5/H-6/H-7/H-8相關(guān)信號，同時(shí) HMBC 譜中顯示有 H2-4 與 C-2 和 C-3，H2-5 與 C-3，H-6 與 C-8，H-7 與 C-1，H2-10 與 C-1、C-2、C-7、C-8 和 C-14，H-11 與 C-l、C-2 和 C-3，H2-12 與 C-2，H3-13 與 C-5 和 C-7，H3-14 與 C-8、C-9 和 C-10，H3-15與C-9和C-10相關(guān)信號，通過上述NMR譜中的相關(guān)信息可以構(gòu)建該化合物的連接方式，并 且上述波譜數(shù)據(jù)表明該化合物為tremulane型倍半萜。HMBC譜中H 3-14與C-8和C-9的相關(guān)性 表明C-8位連有一個(gè)羥基。在tremulane型倍半萜中，H-6與H-7位為β構(gòu)型，H 3-14構(gòu)型通常處 是β位，Η3-15構(gòu)型為α位。在該化合物的Ν0Ε試驗(yàn)中體現(xiàn)的Η-6與Η-7以及Η-7與Η 3-14相關(guān)信號 符合tremulane型倍半萜的構(gòu)型關(guān)系。同時(shí)，N0ESY譜中Η2-12與Η-7以及Η 3-15與Η-8的相關(guān)性 表明羥甲基為β構(gòu)型，H-8為α構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類 型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與 實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0022]化學(xué)結(jié)構(gòu)式及碳原子編號如下：
[0023]
[0024] 實(shí)施例2:對大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的保護(hù)作用
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動物
[0027] SD大鼠70只，體重180~200g，雌雄各半，清潔級，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有 限公司提供。清潔級動物房飼養(yǎng)，定時(shí)給予全價(jià)營養(yǎng)飼料喂食，室溫22~25°C，濕度50%~ 70% 〇
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029]西尼地平購自上海極威生物科技有限公司?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。 丹紅注射液(原兒茶醛0.05g · Γ1，約相當(dāng)于生藥lg 由山東濟(jì)南步長制藥有限公司 生產(chǎn)。肌f丐蛋白T(Cardiac troponin T，cTnT)試劑盒由美國Rapid Bio Lab公司生產(chǎn)，北京 萊博特利生物醫(yī)學(xué)科技公司提供;肌酸激酶同工酶(CK-MB)試劑盒由北京中生北控生物科 技股份有限公司提供;硝基四氮唑藍(lán)(NBT)，上海前進(jìn)試劑廠生產(chǎn)。血栓素(TXB2)和6-酮-前 列腺素 Fla(6-ket〇-PGFla)放射免疫試劑盒，由北京普爾偉業(yè)生物技術(shù)有限公司提供;二磷 酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)，由美國CHRO-NOLOG公司生產(chǎn)，北京現(xiàn)代威士達(dá)醫(yī)療 器械有限公司提供，濃度〇.2mmol · L一、
[0030] 1.3儀器
[0031] SC-3人工呼吸機(jī)（上海醫(yī)療設(shè)備廠）；ECG-6511心電圖機(jī)（上海光電儀器有限公 司）；RX-2000全自動生化儀(美國Technicon公司）；LBY-NJ2血小板聚集儀(北京普利生公 司）；SN-682放射免疫γ計(jì)數(shù)儀(上海核輻射儀器有限公司）。
[0032] 1.4大鼠分組及模型制備
[0033] 20%氨基甲基乙酯（烏拉坦)腹腔注射麻醉(0.7mL · kg-1)，大鼠固定在專用木板 上，氣管插管，人工呼吸(潮氣量為20mL · kg<，呼吸頻率為50次/min)吸入室內(nèi)空氣，開胸， 剪開心包膜，輕輕擠壓大鼠胸腔右側(cè)壁，將心臟擠出。在左心耳下緣，肺動脈圓錐左緣與左 心耳之間進(jìn)針，以冠狀靜脈主干為標(biāo)志，左心耳下方2~3mm處用絲線結(jié)扎（墊1個(gè)半圓形硅 膠管）冠狀動脈前降支造成大鼠心肌缺血，心電監(jiān)護(hù)顯示結(jié)扎冠狀動脈成功(持續(xù)2min)后 lOmin經(jīng)股靜脈iv給藥。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，注射等劑量生理鹽水;模型組結(jié)扎后，給予 等劑量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)過程中動物處置方法符合動物倫理學(xué)要求標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)分組分別作空 白對照(假手術(shù))組、模型對照組、西尼地平組(80mg · kg^1)、化合物（I)組(80mg · kg^1)、西 尼地平與化合物（I)組合物組【40mg · kg<西尼地平+40mg · kg<化合物（I)】及陽性藥對照 組。陽性藥物對照組:丹紅注射液(50mg · kg"1)。
[0034] 1.5標(biāo)本采集
[0035] 大鼠造模缺血后40min，剪斷絲線再灌注60min。記錄結(jié)扎前、結(jié)扎后40min及剪開 絲線后(再灌注)60min Π 導(dǎo)心電圖。觀察60min后，腹主動脈取血，一部分放入3.8%枸櫞酸 鈉溶液1:9抗凝真空管和消心痛+2%EDTANa 2溶液抗凝管后離心，測定血小板聚集性和TXB2， 6-ket〇-PGFla含量。另一部分不抗凝放入真空管后離心測定血清cTnT，CK-MB含量。然后，取 出心臟，生理鹽水沖洗，稱量全心重，在心臟結(jié)扎線以下，平行于冠狀溝均勻地將左心室部 分橫斷切成5片，置于NBT溶液37°C染色15min。用DeltaPix(丹麥）圖像分析系統(tǒng)測量每片心 肌面積、心室面積和梗死區(qū)面積，然后求出梗死區(qū)占心室和全心區(qū)面積的百分比。
[0036] 1.6指標(biāo)檢測方法
[0037]放射免疫法測定TXB2,6-ket〇-PGFal;全自動生化儀電化學(xué)發(fā)光法和速率法測定 測定cTnT，CK-MB;比濁法測定血小板聚集率，誘導(dǎo)劑為ADP，濃度為0.2mmol · I/1，取其1、3、 5min及最大聚集率。
[0038] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0039]所有數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較為單因素方差分析，組間比較采用LSD方法，P〈 〇. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
[0040] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0041 ] 2.1對大鼠 MI面積和I/R損傷后CK-MB和cTnT的影響
[0042] 大鼠心肌I/R損傷后，模型組血清CK-MB活性明顯升高，和假手術(shù)組比較有顯著差 異(P〈0.01)。模型組cTnT水平亦有一定升高，但與假手術(shù)組比較無顯著差異，穿刺對心肌組 織也是一種損傷。與模型對照組比較，西尼地平與化合物（I)組合物組及陽性對照組均能顯 著降低大鼠 MI面積及動物血清CK-MB水平和cTnT含量(P〈0.01);與模型對照組比較，西尼地 平組、化合物（I)組大鼠 MI面積及血清CK-MB水平和cTnT含量降低(P<0.05)。
[0043] 結(jié)果見表1。
[0044] 2.2對大鼠心肌1/^損傷后血小板聚集性、6-1?^〇-?6?14町乂82的影響 [0045]與正常對照組比較，模型對照組小鼠血小板聚集性升高(P<0.05)，TXB2升高(P< 0.05)，（P<0.05)，6-ket〇-PGF la降低；與模型對照組比較，西尼地平與化合物（I)組合物組 和陽性對照組血小板最大聚集率和TXB2顯著降低斤<0.01)，6-1^丨〇-?6? 1〇1顯著升高（？< 〇.〇1);與模型對照組比較，西尼地平組、化合物（I)組血小板最大聚集率和TXB 2降低（P< 0.05)，6-ket〇-PGFia 升高(Ρ<0·05)。結(jié)果見表 2。
[0046] 表1對大鼠 ΜΙ面積和I/R損傷后CK-MB和cTnT的影響
[0047]
[0048] 表2對大鼠心肌I/R損傷后血小板聚集性、e-keto-PGFic^PTXB〗的影響
[0049]
[0050] 上述結(jié)果表明，西尼地平或化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對心肌缺血/再灌注損傷具有 保護(hù)作用；西尼地平和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用更為明 顯，可以開發(fā)成保護(hù)心肌缺血/再灌注損傷的藥物。
[0051] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種西尼地平的藥物組合物，其特征在于:包括西尼地平、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將黃 琴的干燥根粉碎，用60~70 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、 乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取 物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70% 乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中 70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為55:1、25:1、15:1和1:1的二氯甲燒- 甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 20:1、15:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個(gè)柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用65%乙醇熱 回流提取，合并提取液。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。6. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備屯、肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求2所述的西尼地平的藥物組合物在制備屯、肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P9/10GK105906494SQ201610250520
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月20日
【發(fā)明人】宋曉梅
【申請人】宋曉梅