冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型及其建立方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型，如下式(5)所示，并提供了該預(yù)測(cè)模型的建立方法。本發(fā)明通過(guò)模型驗(yàn)證證實(shí)該模型能準(zhǔn)確、客觀、定量的反應(yīng)冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌的死亡情況，為草莓風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型研究提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，有利于草莓的品質(zhì)控制和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警、評(píng)估。Yred＝logNt?logN0＝?0.220?0.012×t (5)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型及其建立方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型及其建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鼠傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonella Typhimurium)為革蘭氏陰性腸桿菌，屬于沙門(mén)氏菌 乙組，能導(dǎo)致多種宿主動(dòng)物腸道疾病，可以通過(guò)被污染的飲用水及食物進(jìn)入人體，引起腹 瀉、嘔吐、腸炎等疾病，嚴(yán)重時(shí)可致人死亡，其致病機(jī)理在于鼠傷寒沙門(mén)氏菌進(jìn)入人體腸道 后，通過(guò)入侵小腸上皮細(xì)胞及在腸毒素、內(nèi)毒素的作用下，能夠引起腸膜水腫、充血、組織炎 癥。沙門(mén)氏菌普遍存在動(dòng)物糞便中，并通過(guò)農(nóng)業(yè)設(shè)施中的灌溉水、施肥等途徑傳播。2015年9 月，美國(guó)因沙門(mén)氏菌污染緊急召回墨西哥進(jìn)口黃瓜事件再次引起公眾對(duì)食源性微生物疾病 的關(guān)注，該次事件已造成超過(guò)285人患病，其中53人入院，1人死亡。2008年美國(guó)爆發(fā)鼠傷寒 沙門(mén)氏菌中毒事件，原因是西紅柿污染。2012年2月英國(guó)出現(xiàn)西瓜大規(guī)模中毒事件，也與沙 門(mén)氏菌感染有關(guān)[2]。
[0003] 我國(guó)草莓種植面積從1985年的0.33萬(wàn)平方公頃增加至2009年的9.01萬(wàn)平方公頃， 總產(chǎn)量達(dá)到220.6萬(wàn)噸，占世界總產(chǎn)量的35.7%，是世界草莓生產(chǎn)第一大國(guó)[2]。居民草莓消 費(fèi)量近年來(lái)逐漸增加，2007年鮮果消費(fèi)總量約為177萬(wàn)噸，2009年初步估計(jì)已超過(guò)200噸，按 13億人口計(jì)算，人均消費(fèi)量接近1.5kg[3]。然而，成熟后草莓果實(shí)嬌嫩，含水量達(dá)到95%，采 摘、加工、運(yùn)輸、銷(xiāo)售過(guò)程中極易受機(jī)械傷害而滲出汁液，為有害微生物生長(zhǎng)提供豐富的營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)，常溫條件下草莓儲(chǔ)藏期僅1-2天[4]。
[0004] 近年來(lái)，我國(guó)各省市生食果蔬類(lèi)的沙門(mén)氏菌陽(yáng)性率調(diào)查結(jié)果顯示，果蔬中沙門(mén)氏 菌的陽(yáng)性率平均值為3.38%，個(gè)別地區(qū)沙門(mén)氏菌污染較為嚴(yán)重達(dá)到10% [5-8]。雖然我國(guó)尚 缺少草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌污染率和污染水平的相關(guān)報(bào)道，但施肥、灌溉等過(guò)程可能造 成細(xì)菌污染，且春季草莓成熟季節(jié)較溫暖的溫度可造成果實(shí)表面的細(xì)菌增長(zhǎng)，對(duì)居民健康 造成風(fēng)險(xiǎn)。目前國(guó)內(nèi)鮮見(jiàn)有關(guān)草莓表面沙門(mén)氏菌的定量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究，也缺少根據(jù)科學(xué)研 究結(jié)果對(duì)消費(fèi)者家庭環(huán)節(jié)提出的健康消費(fèi)指導(dǎo)。
[0005] 預(yù)測(cè)微生物模型是風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重要數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌的預(yù)測(cè)模 型是風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中的數(shù)據(jù)缺陷，因此，本發(fā)明對(duì)春季冷藏儲(chǔ)藏條件下鼠傷寒沙門(mén)氏菌的數(shù)量 變化規(guī)律進(jìn)行模型擬合，建立微生物預(yù)測(cè)方程，為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型研究提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供一種冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型及其建立方法，可 以通過(guò)模型預(yù)測(cè)冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌的死亡情況，模型預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 偏差較小，可較好的擬合細(xì)菌死亡與時(shí)間關(guān)系。
[0007] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0008] -種冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型的建立方法，所述方法包括以 下步驟：
[0009] (1)鼠傷寒沙門(mén)氏菌活化培養(yǎng)，得到細(xì)菌培養(yǎng)液
[0010] (2)新鮮草莓用體積分?jǐn)?shù)75 %的酒精浸泡滅菌，滅菌后的草莓浸泡于細(xì)菌培養(yǎng)液 中接種；
[0011] (3)接種后的草莓于冷藏溫度下儲(chǔ)藏，測(cè)定不同儲(chǔ)藏時(shí)間下草莓上的菌株數(shù);所述 冷藏溫度為4°C;
[0012] (4)將細(xì)菌計(jì)數(shù)后進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，用式(2)的線性模型進(jìn)行細(xì)菌死亡曲線擬合
[0013] Yred = logio Nt-logio No = c+dXt (2)
[0014] 其中，t為冷藏溫度下儲(chǔ)藏時(shí)間，單位為小時(shí)，且t小于72小時(shí);Nt(CFU/g)為t時(shí)的 細(xì)菌數(shù)，N0(CFU/g)為樣品初始帶菌量;Yred為t時(shí)細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量，a，b分別為線性方程 待擬合的參數(shù)；
[0015] 線性擬合求出c、d。
[0016] 線性擬合求出c、d后，可以得到細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量與時(shí)間的關(guān)系如下式(5)，即為 冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型
[0017] Yred = log Nt-log No = -〇.220-0.012Xt (5)
[0018] 進(jìn)一步，本發(fā)明使用鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Salmone 11 a Typhimur ium)，編號(hào) ATCC14028，由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所提供。
[0019] 所述步驟（1)中，鼠傷寒沙門(mén)氏菌活化培養(yǎng)的步驟是：鼠傷寒沙門(mén)氏菌株保存于 lml冷凍管中，儲(chǔ)存于-80°C冰箱，使用前取出，融化后吸取lml菌液培養(yǎng)于300mL NB肉湯培 養(yǎng)基中，37°C條件下震蕩培養(yǎng)12h，得到細(xì)菌濃度為108CFU/ml的細(xì)菌培養(yǎng)液備用。
[0020] 所述步驟(2)中，新鮮草莓用體積分?jǐn)?shù)75%的酒精浸泡滅菌，一般將新鮮無(wú)傷口的 草莓浸泡于體積分?jǐn)?shù)75%的酒精溶液中2分鐘，以殺滅表面微生物，取出后用無(wú)菌水反復(fù)沖 洗，直至無(wú)酒精味后置于無(wú)菌燒杯中備用。
[0021] 所述步驟(2)中，滅菌后的草莓浸泡于細(xì)菌培養(yǎng)液中接種，具體步驟一般為:滅菌 后的草莓用細(xì)菌培養(yǎng)液浸沒(méi)浸泡30分鐘后將草莓取出置于無(wú)菌塑料盤(pán)上，于生物安全柜中 靜置30分鐘，確保菌液接種至草莓表面，得到接種后的草莓。
[0022] 所述步驟(3)中，冷藏溫度下儲(chǔ)藏，本發(fā)明選取冰箱冷藏溫度4°C模擬草莓表面鼠 傷寒沙門(mén)氏菌數(shù)量變化過(guò)程。
[0023]儲(chǔ)藏時(shí)間考慮消費(fèi)者日常儲(chǔ)存草莓的平均最長(zhǎng)時(shí)間，選取72小時(shí)為最長(zhǎng)時(shí)間周 期。
[0024]所述步驟(3)中，測(cè)定不同儲(chǔ)藏時(shí)間下草莓上的菌株數(shù)，一般每隔一段時(shí)間取出草 莓樣品，采用平板計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。
[0025]更具體的，按以下方法進(jìn)行計(jì)數(shù):取出草莓樣品后，迅速轉(zhuǎn)移至含有20ml生理鹽水 的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打均質(zhì)袋中的草莓l_2min，制成樣品勻液，使用無(wú)菌槍頭吸 取lml樣品勻液加入9mL生理鹽水試管稀釋?zhuān)鰷u混勻后制成1:10的樣品勻液，再用生理鹽 水稀釋2次，分別制成1:100、1:1000的樣品勻液，用無(wú)菌槍頭吸取0. lmL不同稀釋度樣品勻 液，分別對(duì)應(yīng)均勻涂布在10-1、10-2、10-3稀釋度編號(hào)的XLD瓊脂平板上，將涂布后的平板平 放于桌上20-30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，36 ± 1°C培養(yǎng)24± 2h后計(jì)數(shù)。 這是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的平板計(jì)數(shù)法。
[0026] -般每個(gè)時(shí)間點(diǎn)做3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，取3次實(shí)驗(yàn)平均值。
[0027] 本發(fā)明所述方法還可以包括以下步驟(5)
[0028] (5)線性擬合求出c、d后，對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步，模型驗(yàn)證包括內(nèi)驗(yàn)和外驗(yàn)，所 述內(nèi)驗(yàn)采用相關(guān)系數(shù)(R2)及標(biāo)準(zhǔn)誤平方根(RMSE)作為內(nèi)驗(yàn)結(jié)果來(lái)驗(yàn)證模型擬合度;所述外 驗(yàn)是利用預(yù)測(cè)模型預(yù)測(cè)冷藏溫度下不同儲(chǔ)藏時(shí)間下草莓上的菌株數(shù)對(duì)數(shù)值變化量，然后進(jìn) 行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，將實(shí)際測(cè)量值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行比較，利用方程(3)及(4)計(jì)算Ross提出的偏差因 子Bf及精確因子Af，用于模型外驗(yàn)結(jié)果，以評(píng)價(jià)模型的準(zhǔn)確性。
[0029] (3)
[0030] (4)
[0031] 兵干，Π 73頭紐·雙，pred73線?王力桎?貝測(cè)得出細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量；obs為驗(yàn)證試驗(yàn) 中細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量的觀測(cè)值。Bf用于檢驗(yàn)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確度，若Bf>l，表示預(yù)測(cè)結(jié)果大于實(shí)際 結(jié)果，反之亦然。Af用于檢驗(yàn)預(yù)測(cè)的精確度，即預(yù)測(cè)值與觀測(cè)值偏差的絕對(duì)值。
[0032] 本研究中細(xì)菌的變化量以平均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示，以Microsoft Excel 20 10(微軟公司，雷德蒙，華盛頓州）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。本研究以O(shè)r iginPro 8. 1軟件 (OriginLab，北安普敦，馬薩諸塞州）中的線性擬合功能對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。
[0033] 本發(fā)明還提供冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型，如下式(5)所示：
[0034] Yred = log Nt-log N〇 = -〇.220-0.012Xt (5)
[0035] 其中，t為冷藏溫度下儲(chǔ)藏時(shí)間，Nt (CFU/g)為t時(shí)的細(xì)菌數(shù)，NO (CFU/g)為樣品初始 帶菌量;Yred為t時(shí)細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量。
[0036] 本發(fā)明在建立模型時(shí)發(fā)現(xiàn)，在冷藏條件下，隨時(shí)間延長(zhǎng)，草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌 死亡速率呈現(xiàn)線性規(guī)律，細(xì)菌較少趨勢(shì)十分平緩，冷藏溫度下果蔬表面沙門(mén)氏菌的存活能 力較強(qiáng)，尤其是成熟度較高的草莓樣品。本發(fā)明中利用線性方程擬合細(xì)菌對(duì)數(shù)值減少量 (log Nt-l〇gN0)與時(shí)間（t)關(guān)系，兩者呈現(xiàn)較為顯著的的線性關(guān)系，模型的校正相關(guān)系數(shù)R2 為0.93，殘差平方和較低，表明模型預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)偏差較小，可較好的擬合細(xì)菌對(duì)數(shù)值 變化量與時(shí)間關(guān)系。
[0037] 利用本發(fā)明提供的預(yù)測(cè)模型預(yù)測(cè)冷藏下不同儲(chǔ)藏時(shí)間下草莓上的菌株數(shù)，然后進(jìn) 行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，將細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量的實(shí)際測(cè)量值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行比較，計(jì)算得出偏差因子為 1.002,位于Ross提出的可接受范圍0.9-1.05內(nèi)。模型精度因子為1.13,表示預(yù)測(cè)值與觀測(cè) 值間僅誤差13%。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該線性方程可用于冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏 菌對(duì)數(shù)值變化量的預(yù)測(cè)。
[0038] 本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明提供了一種冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌 預(yù)測(cè)模型，并通過(guò)模型驗(yàn)證證實(shí)該模型能準(zhǔn)確、客觀、定量的反應(yīng)冷藏條件下草莓表面鼠傷 寒沙門(mén)氏菌的變化情況，為草莓風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型研究提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，有利于草莓的品質(zhì)控制 和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警、評(píng)估。
【附圖說(shuō)明】
[0039] 圖1草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌在冷藏條件下的死亡趨勢(shì)圖。
[0040] 圖2冷藏儲(chǔ)藏時(shí)草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌對(duì)數(shù)值變化量隨時(shí)間變化的線性方程擬 合圖。
【具體實(shí)施方式】
[0041 ]下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)的介紹：
[0042] 1、材料與方法
[0043] (1)菌株和細(xì)菌培養(yǎng)
[0044] 本實(shí)驗(yàn)使用鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella Typhimurium)，編號(hào)ATCC14028,由浙江 省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所提供。
[0045] 菌株保存于lml冷凍管中，儲(chǔ)存于-80°C冰箱，使用前取出，融化后吸取lml菌液培 養(yǎng)于300mlNB肉湯培養(yǎng)基(購(gòu)于陸橋技術(shù)股份有限公司）中，37°C條件下震蕩培養(yǎng)12h，得到 細(xì)菌濃度為l〇8CFU/ml的細(xì)菌培養(yǎng)液備用。
[0046] (2)樣品準(zhǔn)備和接種
[0047]新鮮草莓購(gòu)于附近超市，去除蒂頭后逐一稱重，選取大小均一的草莓（7 ±0.3g/ 個(gè))進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將草莓浸泡于體積分?jǐn)?shù)75%的酒精溶液中2分鐘以殺滅表面微生物，取出后 用無(wú)菌水反復(fù)沖洗，直至無(wú)酒精味后置于無(wú)菌燒杯中備用。
[0048]量取200ml細(xì)菌培養(yǎng)液倒至放置草莓的燒杯中，浸泡30分鐘后將草莓取出置于無(wú) 菌塑料盤(pán)上，于生物安全柜中靜置30分鐘以確保菌液接種至草莓表面。
[0049] (3)冷藏條件儲(chǔ)藏
[0050]本實(shí)驗(yàn)選取冰箱冷藏溫度4 °C模擬草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌數(shù)量變化過(guò)程，儲(chǔ)存 時(shí)間考慮消費(fèi)者日常儲(chǔ)存草莓的平均最長(zhǎng)時(shí)間，選取72小時(shí)為周期，每隔8小時(shí)取出2個(gè)草 莓樣品為平行試驗(yàn)，分別迅速轉(zhuǎn)移至含有20ml生理鹽水的均質(zhì)袋中。整個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取3 次實(shí)驗(yàn)平均值。
[0051 ] (4)微生物分析
[0052]用拍擊式均質(zhì)器拍打均質(zhì)袋中的草莓l_2min，制成樣品勻液，使用無(wú)菌槍頭吸取 lml樣品勻液加入9mL生理鹽水試管稀釋?zhuān)鰷u混勻后制成1:10的樣品勻液，再次稀釋2次， 制成1:100、1:1000的樣品勻液，用無(wú)菌槍頭吸取0. lmL不同稀釋度樣品勻液對(duì)號(hào)接種在10_ 1、10-2、10-3稀釋度編號(hào)的XLD瓊脂平板上(每個(gè)編號(hào)設(shè)三個(gè)重復(fù)）。將玻璃涂布棒用酒精灼 燒，冷卻后再用玻璃涂布棒將菌液在平板上均勻涂布，從低濃度向高濃度涂布，將涂布好的 平板平放于桌上20_30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，36 ± 1°C培養(yǎng)24 ± 2h 后計(jì)數(shù)。
[0053] (5)模型建立
[0054] 本研究中的細(xì)菌模擬生長(zhǎng)條件較簡(jiǎn)單，僅考慮固定溫度下的細(xì)菌數(shù)量變化，因此 可考慮運(yùn)用常用初級(jí)預(yù)測(cè)模型中的指數(shù)方程進(jìn)行擬合，指數(shù)方程對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后即為線性方 程。因此，可將細(xì)菌計(jì)數(shù)后進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，按照線性方程(1)計(jì)算細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量(Ygro)
[0055] Yred= l〇gl〇Nt-l〇gl〇N〇 (1)
[0056] 其中，Nt(CFU/g)為t時(shí)的細(xì)菌數(shù)，N0(CFU/g)為樣品初始帶菌量。
[0057]以線性模型進(jìn)行生長(zhǎng)曲線擬合，如方程(2)所示。
[0058] Yred = logioNt-logioNo = c+d X t (2)
[0059] 其中，t為細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間，c，d分別為線性方程參數(shù)。
[0060] (6)模型驗(yàn)證
[0061]相關(guān)系數(shù)(R2)及標(biāo)準(zhǔn)誤平方根(RMSE)作為內(nèi)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證模型擬合度。另外，如方 程(3)及(4)所示，再做4組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果用于計(jì)算Ross提出的偏差因子Bf及精確因子Af，用 于模型外驗(yàn)結(jié)果[12]。
[0062] (3)
[0063] (4)
[0064]其中，η為實(shí)驗(yàn)組數(shù)，pred為線性方程預(yù)測(cè)得出細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量;obs為驗(yàn)證試驗(yàn) 中細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量的觀測(cè)值。Bf用于檢驗(yàn)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確度，若Bf>l，表示預(yù)測(cè)結(jié)果大于實(shí)際 結(jié)果，反之亦然。Af用于檢驗(yàn)預(yù)測(cè)的精確度，即預(yù)測(cè)值與觀測(cè)值偏差的絕對(duì)值。
[0065] (7)數(shù)據(jù)分析
[0066] 本研究中細(xì)菌的生長(zhǎng)量以平均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示，以Microsoft Excel 20 10(微軟公司，雷德蒙，華盛頓州）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。本研究以O(shè)r iginPro 8. 1軟件 (OriginLab，北安普敦，馬薩諸塞州）中的線性擬合功能對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。
[0067] 2、結(jié)果與討論
[0068] (1)冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌的死亡規(guī)律
[0069]對(duì)照試驗(yàn)顯示草莓樣品初始帶菌量約為4.5log CFU/g。圖1為草莓表面鼠傷寒沙 門(mén)氏菌在冷藏儲(chǔ)藏條件下的死亡曲線圖，如圖1所示，在72小時(shí)儲(chǔ)藏時(shí)間內(nèi)，草莓表面細(xì)菌 減少量?jī)H為1.Slog CFU/g，六組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的誤差區(qū)間較大，細(xì)菌較少趨勢(shì)十分平緩，但可以 發(fā)現(xiàn)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌死亡速率呈現(xiàn)線性規(guī)律。對(duì)比相關(guān)文獻(xiàn)可發(fā) 現(xiàn)，成熟草莓表面沙門(mén)氏菌在4°C下的死亡速率較慢，Nguyen等人[13]同樣發(fā)現(xiàn)4 °C情況下 26小時(shí)內(nèi)草莓表面沙門(mén)氏菌僅減少1 log CFU/g，且細(xì)菌較少速率在儲(chǔ)存后期趨于平緩。Hsu 等人[14]也發(fā)現(xiàn)綠葉香菜表面沙門(mén)氏菌在冷藏溫度下24天內(nèi)的減少量?jī)H為0.Slog CFU/g。 結(jié)合本研究結(jié)果，可看出冷藏溫度下果蔬表面沙門(mén)氏菌的存活能力較強(qiáng)，尤其是成熟度較 尚的草每樣品。
[0070] 利用線性方程擬合細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量（log Nt-logNO)與時(shí)間（t)關(guān)系，如圖2所 示，可觀察到較為顯著的線性關(guān)系。方程(5)為線性擬合結(jié)果，描述細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量與時(shí) 間關(guān)系。方差分析結(jié)果如表1所示。模型的校正相關(guān)系數(shù)為0.93,殘差平方和較低，表明模型 預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)偏差較小，可較好的擬合細(xì)菌減少量與時(shí)間關(guān)系。
[0071] Yred = logioNt-logioNo = -ο. 220-0.012 X t (5)
[0072] 表1死亡模型方差分析結(jié)果
[0073]
[0074] (2)模型驗(yàn)證
[0075]同樣條件下再做4組驗(yàn)證，將細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量的預(yù)測(cè)值與實(shí)際觀測(cè)值比較，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果如表2所示。計(jì)算得出偏差因子為1.002,位于Ross提出的可接受范圍0.9-1.05內(nèi)。模型 精度因子為1.13,表示預(yù)測(cè)值與觀測(cè)值間僅誤差13%。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該線性方程可用 于冷藏4°C條件下儲(chǔ)藏72小時(shí)內(nèi)草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌對(duì)數(shù)值變化量的預(yù)測(cè)。
[0076]表2 4組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的觀測(cè)值和模型預(yù)測(cè)值
[0077]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模型的建立方法，其特征在于所述方 法包括以下步驟： (1) 鼠傷寒沙門(mén)氏菌活化培養(yǎng)，得到細(xì)菌培養(yǎng)液 (2) 新鮮草莓用體積分?jǐn)?shù)75 %的酒精浸泡滅菌，滅菌后的草莓浸泡于細(xì)菌培養(yǎng)液中接 種； (3) 接種后的草莓于冷藏溫度下儲(chǔ)藏，測(cè)定不同儲(chǔ)藏時(shí)間下草莓上的菌株數(shù)； (4) 將細(xì)菌計(jì)數(shù)后進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，用式(2)的線性模型進(jìn)行生長(zhǎng)曲線擬合 Yred= l〇gl〇Nt-l〇gl〇N〇 = C+d X t (2) 其中，t為冷藏溫度下儲(chǔ)藏時(shí)間，單位為小時(shí);Nt為t時(shí)的細(xì)菌數(shù)，單位為CFU/g;NO為樣 品初始帶菌量，單位為CFU/g; Yred為t時(shí)細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量，a，b分別為線性方程待擬合的 參數(shù)； 線性擬合求出c、d。2. 按權(quán)利要求1所述的方法建立得到的冷藏條件下草莓表面鼠傷寒沙門(mén)氏菌預(yù)測(cè)模 型，其特征在于如下式(5)所示： Yred = IogioNf IogioNo = -O · 220-0 ·012 X t (5) 其中，t為冷藏溫度下儲(chǔ)藏時(shí)間，Nt為t時(shí)的細(xì)菌數(shù)，單位為CFU/g;N0為樣品初始帶菌 量，單位為CFU/g; Yred為t時(shí)細(xì)菌對(duì)數(shù)值變化量。
【文檔編號(hào)】C12Q1/06GK105907838SQ201610504880
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年6月27日
【發(fā)明人】汪雯, 周育, 楊桂玲, 王強(qiáng), 趙慧宇, 蔡錚
【申請(qǐng)人】浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院