1，5-二-（2，4-二羥基-苯基）-3-（3，4-二羥基-苯基）-戊烷-1，5-二酮的合成方法及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了1，5?二?(2，4?二羥基?苯基)?3?(3，4?二羥基?苯基)?戊烷?1，5?二酮的合成方法及其應(yīng)用，屬于食品、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明通過3，4?二羥基苯甲醛和2，4?二羥基苯乙酮在硼酸和維生素C的催化下于PEG400為溶劑反應(yīng)6小時，綠色合成一種高效的酪氨酸酶抑制劑，再經(jīng)過硅膠柱層析和凝膠柱層析分離，得到該高效酪氨酸酶抑制劑的純品。經(jīng)質(zhì)譜和核磁解析，確定該物質(zhì)為1，5?二?(2，4?二羥基?苯基)?3?(3，4?二羥基?苯基)?戊烷?1，5?二酮[1,5?bis?(2,4?dihydroxy?phenyl)?3?(3,4?dihydroxy?phenyl)?pentane?1,5?dione]。本發(fā)明提供的化合物能夠有效用于果蔬的酶促褐變的抑制、美白化妝品以及制備用于預(yù)防和治療黑色素過多導(dǎo)致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的藥物制劑。
【專利說明】
1 ,5-二-(2,4-二哲基-苯基)-3-(3,4-二哲基-苯基)-戊燒-1 , 5-二酬的合成方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及1,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5-二酬 的合成方法及其應(yīng)用，屬于食品、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 褐變和病原體感染導(dǎo)致的腐敗是引起果蔬采后損失的兩個重要因素。在果蔬加工 和膽藏過程中，由酪氨酸酶化C 1.14.18.1)引起的酶促褐變不僅影響產(chǎn)品的色澤、外觀，而 且會破壞必需產(chǎn)品的氨基酸、降低其營養(yǎng)和消化吸收，并最終嚴(yán)重影響產(chǎn)品的營養(yǎng)價值和 市場價值。許多果蔬由于受到真菌疾病、機(jī)械損傷W及老化等因素影響而導(dǎo)致保質(zhì)期很短。 通常情況下，天然菌群常常存在于果蔬產(chǎn)品中，也可能會存在于人類食用過程中，它們一般 對人類沒什么毒性;但是，在生產(chǎn)、收割、運(yùn)輸、W及進(jìn)一步加工處理過程中，都可能導(dǎo)致果 蔬產(chǎn)品受到微生物污染。機(jī)械損傷和破壞更會加重褐變和微生物的污染。使用酪氨酸酶抑 制劑和殺菌劑可W巧制果疏義后褐變和病害。
[0003] 查爾酬類是黃酬類化合物的一類，具有酪氨酸酶抑制活性，還有抗菌、抗癌、抗炎 和抗氧化等活性。天然的查爾酬廣泛存在于水果、蔬菜、香料、茶、大豆食品和一些中草藥 中。目前查爾酬合成的主要方法是芳香醒和苯乙酬在堿性條件下通過Clasein-Schmidt縮 合反應(yīng)。在過去幾十年中，來自世界各地的研究人員開發(fā)了不少合成查爾酬的方法。然而， 運(yùn)些方法有很多缺陷，如苛刻的反應(yīng)條件、有毒試劑和金屬催化劑、強(qiáng)酸強(qiáng)堿、油狀產(chǎn)物、過 長反應(yīng)時間、低產(chǎn)率、低選擇性W及繁瑣的后處理程序。另外，在大部分情況下，合成徑基查 爾酬衍生物需要保護(hù)和去保護(hù)徑基，不僅增加反應(yīng)步數(shù)和時間，同時也增加使用有毒或有 害試劑的機(jī)會。目前雖然也有一些綠色合成方法，如使用氨氧化巧做催化劑，用乙二醇作為 反應(yīng)溶劑等，但運(yùn)些綠色合成方法同樣存在著低產(chǎn)率、油狀產(chǎn)物和繁瑣后處理等問題。
[0004] 綠色合成方法學(xué)因其環(huán)境友好、減污減排等特性，在科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域具 有深遠(yuǎn)的研究意義和重要的應(yīng)用價值。隨著環(huán)保、經(jīng)濟(jì)和社會要求的日益提高，W采用無毒 無害原料、固體酸/堿催化劑和綠色溶劑為代表的綠色合成化學(xué)已成為國內(nèi)外研究的焦點(diǎn)。 本發(fā)明通過使用溫和的方法，選用無毒溶劑作為反應(yīng)溶劑，并選用無毒催化劑，合成具有較 高酪氨酸酶抑制活性的一種徑基查爾酬類衍生物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種具酪氨酸酶抑制活性的化合物，通過3,4-二徑基苯甲 醒和2,4-二徑基苯乙酬在棚酸和維生素(：的催化制備得到，命名為1，5-613-(2,4- dihydroxy-pheny 1 )-3-( 3,4-dihydroxy-pheny 1) -pent 曰 ne-1,5-dione，其中文名為 1，5- 二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-I，5-二酬，其結(jié)構(gòu)如下：
[0006]
[0007]本發(fā)明的另外一個目的是提供所述I，5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基- 苯基)-戊燒-1,5-二酬的綠色合成方法，通過W下步驟實(shí)現(xiàn)：
[000引 （1)3,4-二徑基苯甲醒和2,4-二徑基苯乙酬在棚酸和維生素 C的催化下，W陽G400 或乙二醇或乙醇或甲醇等為溶劑，于100~130°C反應(yīng)3~6小時；
[0009] (2)反應(yīng)液用乙酸乙醋、二氯甲燒、乙酸或S氯甲燒等萃取3-5次，有機(jī)相濃縮得干 燥樣品；
[0010] (3)干燥樣品上硅膠柱，洗脫劑是W體積比30:1混合的二氯甲燒：甲醇；
[0011] (4)步驟（3)收集的洗脫液樣品濃縮得干燥樣品，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層 析:分離得到1,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5-二酬。
[0012] 本發(fā)明的一種實(shí)施方式，主要包括W下步驟：
[OOU] (1)3,4-二徑基苯甲醒和2,4-二徑基苯乙酬在棚酸和維生素 C的催化下，W陽G400 為溶劑130°C反應(yīng)6小時;3,4-二徑基苯甲醒與2,4-徑基苯乙酬的摩爾比為1:1;
[0014] (2)反應(yīng)液用乙酸乙醋萃取3次，有機(jī)相減壓濃縮至干燥，得干燥樣品；
[0015] (3)干燥樣品上硅膠柱，洗脫劑是W體積比30:1混合的二氯甲燒：甲醇；
[0016] (4)步驟(3)收集的洗脫液樣品經(jīng)濃縮干燥得干燥樣品，經(jīng)S邱hadex LH-20凝膠柱 層析，洗脫劑是W體積比7:3混合的甲醇-水，收集洗脫液，相同流分合并得到產(chǎn)物。
[0017] 本發(fā)明的一種實(shí)施方式，步驟(3)所述硅膠柱是顆粒度為200-300目的硅膠。
[001引本發(fā)明所提供的1,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5- 二酬可應(yīng)用于制備抗果蔬酶促褐變抑制劑、化妝品美白劑、預(yù)防和治療黑色素異常導(dǎo)致的 人體色素沉著性疾病、黑色素瘤W及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病癥的藥物中，可W作 為活性成分，不加或加入食品添加劑輔料、化妝品輔料或藥劑上接受的輔料，按照相應(yīng)劑型 的制備方法制成制劑。
[0019] 所述的劑型包括固體粉末、水溶液、醇溶液、乳液、面膜、己布劑、注射液、滴注液、 粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠 囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩劑、微丸 等。
[0020] 本發(fā)明的有益之處在于：提供一種具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，它具有比陽 性對照物曲酸、2,4-二徑基苯乙酬和3,4-二徑基苯甲醒更強(qiáng)的活性，制成相應(yīng)制劑易于質(zhì) 量控制，可應(yīng)用在抗果蔬酶促褐變抑制劑、化妝品美白劑、預(yù)防和治療黑色素異常導(dǎo)致的人 體色素沉著性疾病、黑色素瘤W及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病癥的藥物中。
【附圖說明】
[0021 ] 圖1為化合物1，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3- (3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬 的Ih NMR譜
[0022 ] 圖2為化合物1，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3- (3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬 的"C NMR譜
[0023 ] 圖3為化合物1，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3- (3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬 的服QC譜
[0024] 圖4為化合物1，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3- (3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬 的HMBC譜
[00巧]圖5為化合物1，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3- (3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬 的ESI-MS譜
【具體實(shí)施方式】
[00%] 實(shí)施例11,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5-二酬的制 備
[0027] 稱取0.04mol 3,4-二徑基苯甲醒、0.04mol 2,4-二徑基苯乙酬、2.1邑棚酸、0.5邑抗 壞血酸于50血圓底燒瓶中，加入25血的陽G400攬拌溶解，置于130°C油浴中攬拌回流化，TLC 跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)液用乙酸乙醋萃取=次，有機(jī)相減壓濃縮至干燥;干燥后的樣品上硅膠 柱(顆粒度:200~300目），采用二氯甲燒：甲醇= 30:l(v/v)洗脫，收集洗脫液，薄層板檢測， 相同流分合并，濃縮干燥，得干燥樣品；通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，確定分子量為392的流分為含 有目標(biāo)物的流分；W上流分干燥樣品甲醇溶解后再用凝膠柱層析(Sephadex LH-20)進(jìn)行分 離，甲醇-水(v/v，7:3)洗脫;收集洗脫液，薄層板檢測，相同流分合并，即得1，5-二-(2，4-二 徑基-苯基)-3- (3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬。
[0028] 反應(yīng)通式為： 「00291
[0030] 1,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5-二酬的核磁共振 光譜數(shù)據(jù)如下：
[0031] ^ NMR(Acetone-d6,400MHz)5：12.736(2H,s,0H-2,2'),7.896(2H,dJ = 9.2Hz,H- 6，6，），7.837(1H，S，H-6")，6.680(2H, S ,overlapped, H-2"，5")，6.428(2H，dd，J = 8.8， 2.4Hz，H-5,5'），6.289(2H，d，J = 2.4Hz，H-3,3'），3.901(lH，m，H-9)，3.374(4H，dd，J = 9.8， 5.4Hz，H-8，8 '）；13c NMR(Acetone-ds，lOOMHz)5: 204.497(C = 0，C-7，7 '），166.461 (C，C-2， 2'),165.640(C,C-4,4'),145.849(C,C-r),144.554(C,C-3"),136.545(C,C-r),133.867 (CH,C-6,6'），119.766(CH,C-護(hù)），116.105(CH，C-5"),115.785(CH，C-3"),114.358(C,C-I， r)，108.848(CH，C-5,5'），103.701(CH，C-3,3'），45.034(CH2，C-8,8'），38.267(CH，C-9)。
[0032] ESI-MS:m/z 423.0[M-H]-(C2抽i9〇8)。結(jié)合二維譜HSQC，HMBC解析表明該化合物為 I，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3-(3，4-二徑基-苯基)-戊燒-I，5-二酬。
[0033] 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測條件：
[0034] (1)儀器:Waters UPLC-質(zhì)譜儀。
[0035] (2)色譜柱:Acquity 邸H C18(50X2.1mm，1.7wii)。
[0036] (3)流動相:A相:含0.2%甲酸的去離子水;B相：乙臘。線性洗脫梯度:0min，10%B; 0.1111111，10%8;18111111，70%6;20111111，100%8;20.1111111，10%8。流速：0.311117111111。
[0037] (4)進(jìn)樣量：1化。
[0038] (5)質(zhì)譜條件：負(fù)離子模式;噴涂電壓：2.8V;離子源溫度：120°C;脫溶劑溫度:350 r。
[0039] 實(shí)施例2酪氨酸酶抑制活性評價方法
[0040] 將1,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5-二酬用DMSO溶 解分別配成50、10、5、2.5、0.化g/mL。取五種濃度的溶液各30化L，用70化L pH6.8的憐酸鹽 緩沖溶液配成ImL,加進(jìn)0.1 mg/血的酪氨酸1血，然后加入由抑值6.8的憐酸鹽緩沖溶液配成 的ImL酪氨酸酶(400U/mL)，在37°C下解育20min，于492nm處測定吸光值。
[0041 ]酶活性抑制率=[(A2-A1)-(B2-B1)]/(A2-A1)X100%
[0042] Al為Omin時候未加抑制劑的吸收值;A2為20min后未加抑制劑的吸收值；
[0043] Bl為Omin時候加抑制劑的吸收值;B2為20min后加了抑制劑的吸收值。
[0044] 實(shí)施例3化合物酪氨酸酶抑制活性評價
[0045] 1，5-二-(2，4-二徑基-苯基)-3-( 3，4-二徑基-苯基)-戊燒-1，5-二酬抑制酪氨酸 酶的ICso為0.167mM，3,4-二徑基苯甲醒的眼〇〉0.3mM，2,4-二徑基苯乙酬的眼〇〉0.2mM。化 合物1,5-二-(2,4-二徑基-苯基)-3-(3,4-二徑基-苯基)-戊燒-1,5-二酬的酪氨酸酶抑制 活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于反應(yīng)原料2，4-二徑基苯乙酬和3，4-二徑基苯甲醒。
[0046] 雖然本發(fā)明已W較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用W限定本發(fā)明，任何熟悉此技 術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范 圍應(yīng)該W權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，其特征在于，所述化合物為1，5-二-(2,4-二 羥基 -苯基)_3_( 3，4_二羥基-苯基)-戊燒_1，5_二酬，其結(jié)構(gòu)式為：2. -種制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，其特征在于，主要包括以下步驟： (1) 3,4_二羥基苯甲醛和2,4_二羥基苯乙酮在硼酸和維生素 C的催化下，以PEG400、乙 二醇、乙醇或甲醇為溶劑，于100~130°C反應(yīng)3~6小時； (2) 反應(yīng)液用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷等萃取3-5次，有機(jī)相濃縮得干燥樣 品； (3) 干燥樣品上硅膠柱，洗脫劑是以體積比30:1混合的二氯甲烷：甲醇； (4) 步驟(3)收集的洗脫液樣品濃縮得到干燥樣品，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析分 離得到所述化合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，主要包括以下步驟： (1) 3,4_二羥基苯甲醛和2,4_二羥基苯乙酮在硼酸和維生素 C的催化下，以PEG400為溶 劑130 °C反應(yīng)6小時;3，4-二羥基苯甲醛與2，4-二羥基苯乙酮的摩爾比為1:1; (2) 反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)相減壓濃縮至干燥，得干燥樣品； (3) 干燥樣品上硅膠柱，洗脫劑是以體積比30:1混合的二氯甲烷：甲醇； (4) 步驟(3)收集的洗脫液樣品經(jīng)濃縮干燥得干燥樣品，經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層 析，洗脫劑是以體積比7:1混合的甲醇-水，收集洗脫液，薄層板檢測，相同流分合并得到產(chǎn) 物。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述硅膠柱是顆粒度為200~ 300目的硅膠。5. 權(quán)利要求1所述化合物的應(yīng)用方法。6. 權(quán)利要求1所述化合物在果蔬的抗酶促褐變、制備化妝品，及制備用于預(yù)防和治療黑 色素過多導(dǎo)致的需要抑制酪氨酸酶活性的病癥的藥物中的應(yīng)用方法。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，不加抗酶促褐變輔料、化妝品配方、藥物制 劑輔料。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，加入抗酶促褐變輔料、化妝品配方、藥物制 劑輔料中的一種或多種。9. 含有權(quán)利要求1所述化合物的化妝品。10.含有權(quán)利要求1所述化合物的用于預(yù)防和治療黑色素過多導(dǎo)致的需要抑制酪氨酸 酶活性的病癥的藥物。
【文檔編號】C07C45/74GK105924342SQ201610330840
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】鄭宗平, 陳潔, 張龍
【申請人】江南大學(xué)