一種紅景天苷的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種紅景天苷的提取方法，采用生物酶結(jié)合連續(xù)逆流提取法提取紅景天苷，同時(shí)采用大孔吸附樹(shù)脂與高速逆流色譜聯(lián)用，分離純化紅景天苷，是一種提取效率高、分離純化效果明顯、提取產(chǎn)物純度高（99%以上）、收率高的紅景天苷提取方法，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】
一種紅景天苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域，涉及一種紅景天苷的提取方法，特別是涉及一種大孔吸附樹(shù)脂聯(lián)用高速逆流色譜分離純化紅景天苷的生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅景天是景天科多年生草木或灌木植物，主要含苯丙酯類和類黃酮類化學(xué)成分。其中紅景天苷是紅景天中的主要有效成分，也是評(píng)價(jià)紅景天及其提取物的最重要指標(biāo)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，紅景天苷具有消除疲勞、抗缺氧、抗腫瘤、抗衰老、抗微波輻射等作用。
[0003]目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)紅景天的化學(xué)成分、藥理作用、主要有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定有較為深入的研究，但對(duì)其提取純化工藝的研究還處于初始階段。常用的提取方法主要有浸泡或熱回流法等。
[0004]專利CN021004897公開(kāi)了一種經(jīng)過(guò)兩次高速逆流色譜提取紅景天苷的方法，提取產(chǎn)物的純度較高，但是收率較低。
[0005]專利CN201310463903.9公開(kāi)了一種從紅景天中提取紅景天苷的方法，采用大孔樹(shù)脂純化與模擬移動(dòng)床純化聯(lián)用的方式進(jìn)行分離純化，雖然提取產(chǎn)物的純度較高，但操作過(guò)程較復(fù)雜，收率也較低。
[0006]為了克服現(xiàn)有方法的缺陷，本申請(qǐng)采用大孔吸附樹(shù)脂與高速逆流色譜聯(lián)用，出乎意料的既保證了產(chǎn)物的純度，同時(shí)也提高了收率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明目的在于提供一種從紅景天中分離純化紅景天苷的方法，本方法是一種提取效率高、分離純化效果明顯、提取產(chǎn)物純度高、收率高。
[0008]本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明所述的紅景天苷純品是指HPLC純度在99%以上的紅景天苷。
[0009]—種紅景天苷的提取方法，包括如下步驟:
(1)將紅景天干燥粉碎后，加入PH=3.8-4.5檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入生物酶進(jìn)行酶解，得酶解液;其中緩沖溶液用量為原料紅景天重量的5-10倍；
(2)將步驟(I)的酶解液轉(zhuǎn)移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入重量為紅景天原料2-5倍的水，回流提取，過(guò)濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物；
(3)將步驟(2)所得紅景天苷粗提物加水溶解，用大孔吸附樹(shù)脂吸附純化，用35-45%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到紅景天苷粗品；
(4)將步驟(3)所得的紅景天苷粗品，用高速逆流色譜法進(jìn)行分離，收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷純品；
作為優(yōu)選的方案:所述步驟(I)的生物酶選自纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶中兩種或三種；用量為原料的0.1-1.5%，優(yōu)選0.5-1.2%。
[0010]進(jìn)一步優(yōu)選，所述的檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液的PH為4.0 進(jìn)一步優(yōu)選，所述大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為48-8、即0100、0-101。
[0011 ]進(jìn)一步地，所述的高速逆流色譜法中的固定相和流動(dòng)相按照如下方法制備:將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動(dòng)相。
[0012]在優(yōu)選的實(shí)施例中，上述環(huán)己烷、正丁醇、甲醇、水的體積比為1.5-3.5:2.0-3.5:
1.0-2.5:3.0-6.0,更優(yōu)選為3.0-3.5:2.5-3.0:1.0-2.0:3.0-4.5，最優(yōu)選3:2.5:1.5:3.5。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果在于:
I)采用高速逆流色譜法與大孔吸附樹(shù)脂相結(jié)合的方法，并采用特定的混合溶劑體系環(huán)己烷-正丁醇-甲醇-水進(jìn)行分離，既保證了提取產(chǎn)品的高純度(99%以上)，也大大提高了提取率。
[0014]2)本發(fā)明將生物酶結(jié)合連續(xù)逆流提取法提取紅景天苷，有助于提高提取率。
[0015]下面將結(jié)合具體的實(shí)施方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1
將干燥的紅景天Ikg粉碎后，加入8倍重量的PH=3.8檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入0.5%的纖維素酶和果膠酶(1:1 )，在45°C下，酶解2h后，轉(zhuǎn)移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入4kg水，回流提取，過(guò)濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物;加水溶解，用大孔吸附樹(shù)脂AB-SKB，用40%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到紅景天苷粗品；用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷純品13.2g，HPLC: 99.15%;其中高速逆流色譜法中的固定相和流動(dòng)相按照如下方法制備:按環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=3: 2.5:1.5:3.5的比例將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動(dòng)相。
實(shí)施例2
將干燥的紅景天Ikg粉碎后，加入5倍重量的PH=4.0檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入0.8%的纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶(1:1:1)，在50°C下，酶解2h后，轉(zhuǎn)移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入5kg水，回流提取，過(guò)濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物;加水溶解，用大孔吸附樹(shù)脂HPD100吸附，用35%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到紅景天苷粗品；用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷純品13.5g，HPLC:99.53%;其中高速逆流色譜法中的固定相和流動(dòng)相按照如下方法制備:按環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=3:2.5:1.5:3.5的比例將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動(dòng)相。
實(shí)施例3
將干燥的紅景天Ikg粉碎后，加入10倍重量的PH=4.5檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入1%的半纖維素酶和果膠酶(1:1)，在55°C下，酶解1.5h后，轉(zhuǎn)移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入2kg水，回流提取，過(guò)濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物;加水溶解，用大孔吸附樹(shù)脂D-101吸附，用45%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到紅景天苷粗品；用高速逆流色譜法進(jìn)行分離，收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷純品12.9g，HPLC: 99.37%;其中高速逆流色譜法中的固定相和流動(dòng)相按照如下方法制備:按環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=3:2.5:
1.5:3.5的比例將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動(dòng)相。
對(duì)比例1:參照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，將環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=3:2.5:1.5:3.5用乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水為高速逆流色譜的溶劑體系，得到紅景天苷9.3g，HPLC: 97.31%;
對(duì)比例2:參照實(shí)施例2的方法進(jìn)行，將環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=3:2.5:1.5:3.5用氯仿-正丁醇-甲醇-水為高速逆流色譜的溶劑體系，得到紅景天苷10.2g，HPLC: 96.56%；
盡管本發(fā)明已進(jìn)行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可進(jìn)行各個(gè)條件的適當(dāng)變化?？梢岳斫?，本發(fā)明不限于所述實(shí)施方案，而歸于權(quán)利要求的范圍，其包括所述每個(gè)因素的等同替換。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種紅景天苷的提取方法，包括如下步驟: (1)將紅景天干燥粉碎后，加入PH=3.8-4.5檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入生物酶進(jìn)行酶解，得酶解液;其中緩沖溶液用量為原料紅景天重量的5-10倍； (2)將步驟(I)的酶解液轉(zhuǎn)移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入重量為紅景天原料2-5倍的水，回流提取，過(guò)濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物； (3)將步驟(2)所得紅景天苷粗提物加水溶解，用大孔吸附樹(shù)脂吸附純化，用35-45%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到紅景天苷粗品； (4)將步驟(3)所得的紅景天苷粗品，用高速逆流色譜法進(jìn)行分離，收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷純品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(I)所述的生物酶選自纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶中兩種或三種；用量為原料的0.1-1.5%，優(yōu)選0.5-1.2%。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的提取方法，其特征在于步驟(3)所述大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)選自八8-8、冊(cè)0100、0-101。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的提取方法，其特征在于所述的檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液的PH為4.0。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的提取方法，其特征在于所述的高速逆流色譜法的固定相和流動(dòng)相按照如下方法制備:按體積比環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=1.5-3.5: 2.0-3.5:.1.0-2.5:3.0-6.0混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動(dòng)相。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于環(huán)己烷:正丁醇:甲醇:水=3:2.5:1.5:.3.5
【文檔編號(hào)】C07H15/18GK105924481SQ201610487353
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】陳阿梅
【申請(qǐng)人】陳阿梅