Trop2嵌合抗原受體修飾的T淋巴細(xì)胞及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種Trop2特異性嵌合抗原受體修飾的T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)Trop2特異性嵌合抗原受體，其中Trop2特異性嵌合抗原受體由人抗Trop2單鏈抗體，人IgG1分子FC區(qū)的CH2CH3，CD28的胞內(nèi)區(qū)，CD137的胞內(nèi)區(qū)，及CD3ζ的胞內(nèi)區(qū)串聯(lián)構(gòu)成。本發(fā)明還公開了上述Trop2特異性嵌合抗原受體的氨基酸序列和核酸序列。本發(fā)明還公開了上述T淋巴細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】
Trop2嵌合抗原受體修飾的T淋己細(xì)胞及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及細(xì)胞免疫技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種Trop2特異性嵌合抗原受體修飾的T 淋己細(xì)胞及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] T淋己細(xì)胞介導(dǎo)的針對腫瘤的特異性免疫反應(yīng)在機(jī)體清除腫瘤細(xì)胞的的反應(yīng)過程 中發(fā)揮重要作用。但是由于宿主的免疫耐受W及腫瘤的局部免疫抑制微環(huán)境等因素的影 響，T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用常常受到限制。研究發(fā)現(xiàn)，嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor ,CAR)修飾的T細(xì)胞技術(shù)能夠有效提高T淋己細(xì)胞在體內(nèi)的增值能力、存 活時間W及對腫瘤的祀向殺傷作用，成為新近熱口的細(xì)胞免疫治療技術(shù)之一。CAR包含胞外 區(qū)即針對腫瘤抗原的特異性受體、跨膜區(qū)及胞內(nèi)共刺激信號區(qū)。W胞內(nèi)共刺激信號區(qū)的演 變，將CAR分為五代:第一代CAR只含有一個胞內(nèi)的信號分子為CD3C或化ERI 丫。第二代CAR增 加了一個協(xié)同共刺激因子;第S代CAR含有兩個協(xié)同共刺激因子;而第四代CAR引入細(xì)胞因 子、自殺基因等;現(xiàn)在的第五代CAR為敲除T淋己細(xì)胞TCR和CD52的通用CAR。
[0003] 目前腫瘤過繼免疫治療主要有NK細(xì)胞，DC-CIK、基因修飾T細(xì)胞等，其中DC-CIK，NK 等治療方法因難W在體外制備、殺瘤效果不理想等因素限制了其在臨床上的應(yīng)用?；蛐?飾技術(shù)改造T淋己細(xì)胞主要有TCR轉(zhuǎn)基因技術(shù)和CAR修飾T細(xì)胞(CART)技術(shù)。TCR轉(zhuǎn)基因技術(shù) 是指將腫瘤特異性的TCR基因通過載體整合到T細(xì)胞中，從而使受體T細(xì)胞表達(dá)腫瘤特異性 TCR，獲得抗原特異性。但是TCR修飾的T細(xì)胞發(fā)揮作用受血1邱良制且只能識別蛋白類抗原，對 糖、糖脂類抗原無作用。另外，轉(zhuǎn)基因TCR可能與T細(xì)胞內(nèi)源性產(chǎn)生的TCR基因發(fā)生錯配，存在 潛在風(fēng)險。CAR修飾T細(xì)胞表達(dá)CAR分子，通過CAR分子識別相關(guān)的腫瘤表面抗原來特異性殺 傷腫瘤細(xì)胞。運種改造的T細(xì)胞除了具有更好祀向性、更強(qiáng)的增值能力、殺傷能力和更長的 存活時間外還不受主要組織相容性復(fù)合體的限制(MHC)，并且能夠W蛋白質(zhì)、糖W及糖脂作 為祀點。
[0004] 人滋養(yǎng)層細(xì)胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2，化〇口- 2)是一種單次跨膜的表面糖蛋白，在人正常組織中不表達(dá)或者低表達(dá)，但是被發(fā)現(xiàn)在多種 上皮癌中過表達(dá)，例如宮頸癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等，是一種與多種腫瘤的侵襲行為 密切相關(guān)的腫瘤相關(guān)抗原，有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，可W作為許多惡性腫瘤祀 向治療的祀點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于【背景技術(shù)】存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種化op2特異性嵌合抗 原受體修飾的T淋己細(xì)胞。
[0006] 本發(fā)明的目的還在于提供上述化op2特異性嵌合抗原受體的氨基酸序列和核酸序 列。
[0007] 本發(fā)明的目的還在于提供上述化op2特異性嵌合抗原受體修飾的T淋己細(xì)胞的應(yīng) 用。
[0008] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出的一種Trop2特異性嵌合抗原受體修飾的T淋己細(xì) 胞，所述T淋己細(xì)胞表面表達(dá)所述化op2特異性嵌合抗原受體。
[0009] 優(yōu)選地，所述TropS特異性嵌合抗原受體由人抗化op2單鏈抗體，人IgGl分子FC區(qū) 的C肥C冊，CD28的胞內(nèi)區(qū)，CD137的胞內(nèi)區(qū)，及CD3C的胞內(nèi)區(qū)串聯(lián)構(gòu)成。
[0010] 優(yōu)選地，所述Trop2特異性嵌合抗原受體的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0011]優(yōu)選地，所述化op2特異性嵌合抗原受體的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0012] 優(yōu)選地，所述人抗化op2單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013] 優(yōu)選地，所述人抗化op2單鏈抗體的核酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0014] 優(yōu)選地，所述人抗化op2單鏈抗體的重鏈分子和輕鏈分子之間有一個連接膚，其氨 基酸序列為Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser。
[001引優(yōu)選地，人IgGl分子FC區(qū)的C肥C冊，CD28的胞內(nèi)區(qū)，CD137的胞內(nèi)區(qū)，及CD3C的胞內(nèi) 區(qū)串聯(lián)構(gòu)成的結(jié)構(gòu)為信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0016] 優(yōu)選地，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0017] 本發(fā)明提出的上述化op2特異性嵌合抗原受體修飾的T淋己細(xì)胞在制備抗腫瘤藥 物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明根據(jù)實驗室從全人源抗體庫篩選出化op2抗體化b，經(jīng)過密碼子優(yōu)化，在5' 端加上信號膚，全基因合成嵌合抗原受體Trop2-ScFv-CH2C冊-CD28-CD3C，并將合成的ScFv 序列克隆到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中，構(gòu)建出抗人化〇p2-CAR表達(dá)質(zhì)粒。再通過Gateway重組克隆 技術(shù)將合成的CD137片段克隆到化op2-ScFv-C肥C冊-CD28-CD3C中，即獲得本發(fā)明的嵌合抗 原受體 Trop2-ScFv-C肥 C冊-CD28-CD137-CD3C。
[0019] 利用該嵌合抗原受體與逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝質(zhì)粒RD114env在GP293T細(xì)胞中對病毒 進(jìn)行包裝，利用此逆轉(zhuǎn)錄病毒感染T淋己細(xì)胞，使T細(xì)胞表達(dá)該嵌合抗原受體。將獲得的CART 細(xì)胞在體外與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測CART細(xì)胞表面抗原表達(dá)情況，CCK8法 檢測該CART細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷活性，W證實該嵌合抗原受體修飾的T淋己細(xì)胞 對腫瘤的特異性殺傷作用。因此本發(fā)明所述的嵌合抗原受體Trop2-ScFv-CH2CH3-CD28- CD137-CD3C可W在相關(guān)腫瘤治療中得到應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明提供的嵌合抗原受體lYopS-ScFy-C肥C冊-CD28-CD137-CD3C采用了逆轉(zhuǎn)錄 病毒技術(shù)，可體外感染人T淋己細(xì)胞，所獲得的CART細(xì)胞可W通過CAR的單鏈抗體部分特異 性識別表達(dá)化〇p2的腫瘤細(xì)胞，同時激活CART細(xì)胞，使其釋放多種細(xì)胞因子，實現(xiàn)對腫瘤細(xì) 胞的特異性殺傷作用。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明實施例1所得化〇p2-scFv可變區(qū)序列條帶的電泳圖，其中1為SOOkD核 酸分子量標(biāo)準(zhǔn)，2為hopS-ScFv Vk序列部分，3為hopS-ScFv VH序列部分。
[0022] 圖2為本發(fā)明實施例1所得Trop2特異性嵌合抗原受體目的片段的電泳圖，其中1為 DLlOOOOkD核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)，2為未酶切的CAR載體，3為CAR載體經(jīng)XbaI和Bam HI酶切釋放的 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，4為CAR載體經(jīng)Xba巧日Bam HI酶切釋放的Trop2-ScFv-CH2畑3-CD28- CD137-CD3G。。
[0023] 圖3為本發(fā)明實施例2中采用Western Blotting檢測本發(fā)明所得化op2特異性嵌合 抗原受體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后的表達(dá)，其中1為轉(zhuǎn)染CD19-CAR的載體的293T細(xì)胞，2為轉(zhuǎn)染 Trop2-CAR的載體的293T細(xì)胞，3為對照的293T細(xì)胞。
[0024] 圖4為Western Blotting檢測不同的對數(shù)生長期腫瘤細(xì)胞中化op2的表達(dá)，其中1 為冊8910細(xì)胞蛋白，2為SK0V3細(xì)胞蛋白，3為A375細(xì)胞蛋白。
[0025] 圖5為本發(fā)明所得Trop2特異性嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷檢 測。
[0026] 圖6為本發(fā)明所得化op2特異性嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞在受到化op2抗原刺激 后IFN-丫的表達(dá)。
【具體實施方式】
[0027] 下面，通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0028] 實施例1:化op2特異性嵌合抗原受體慢病毒載體的構(gòu)建
[0029] 1.根據(jù)本實驗室隧菌體展示技術(shù)篩選到的抗化op2胞外區(qū)的人化b序列的VH鏈和V K鏈的氨基酸序列，利用化timumGeneTM基因設(shè)計軟件優(yōu)化密碼子序列，在不改變氨基酸序 列的情況下使其更適合人的表達(dá)系統(tǒng)。在VH和Vk之間加入連接膚，構(gòu)建獲得的嵌合抗原受 體的5〇。巾部分結(jié)構(gòu)為:￥1〇-(617456')3-￥化對應(yīng)的核酸序列如56〇10^.4)，該片段合成后 克隆在pU巧7載體中，連接處引入甜a巧郵am HI酶切位點，載體命名為:pUC57-Trop2-ScFv
[0030] 2.Trop2-scFv-pUC57用限制性內(nèi)切酶NcoI和BamH I酶切，酶切體系如下：2iig Trop2-scFv-pUC57、化L Ncol、化L BamH I、化L IOX酶切緩沖液，用水補(bǔ)到20化，37°C水浴 中過夜，酶切產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳，在紫外下切取目的條帶，采用DNA凝膠回收試劑 盒(AXYGEN公司）回收目的片段;其結(jié)果如圖1所示，pUC57-Trop2-ScFv載體經(jīng)化Ol和BamH I 酶切釋放目的條帶。
[0031] 用同樣的方法NcoI和BamH I酶切PSFG-CH2C冊-CD28-CD3C載體，用瓊脂糖凝膠電 泳，回收目的片段。將回收后的化〇p2-ScFv與酶切載體通過T4DNA連接酶連接，反應(yīng)體系如 下：2化化op2-ScFv、2化載體酶切產(chǎn)物、化L 10 X連接緩沖液、1化連接酶，用水補(bǔ)到10化， 16°C水浴中過夜。取連接產(chǎn)物加入到DH5a感受態(tài)中[參考《分子克隆》第=版中大腸桿菌感 受態(tài)制備(CaCb法）]，放置37°C細(xì)菌培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。挑取單個菌落，擴(kuò)大培養(yǎng)，提取陽 性克隆的質(zhì)粒，經(jīng)酶切和測序，將正確的載體命名為Trop2-scFv-C肥C冊-CD28-CD3C。.
[0032] 3通過gateway重組技術(shù)將CD137的序列克隆到lYopS-scFy-CHSC冊-CD28-CD3C的 CD28和CD3C分子之間，（技術(shù)方法參考申請?zhí)枮?01310053109的《嵌合抗原受體及其用途》， 【公開日】為2013年06月12日，公開號為103145849A)。質(zhì)粒構(gòu)建完成后用Xba I和Bam HII進(jìn)行 酶切鑒定，其結(jié)果如圖2所示。由圖2可知：陽性克隆能釋放目的條帶。再進(jìn)行測序驗證，其測 序結(jié)果正確。
[0033] 實施例2: Trop2特異性嵌合抗原受體表達(dá)鑒定
[0034] 參照無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒內(nèi)（天根生物）的操作說明書提取逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 Trop2-scFv-CH2C冊-CD28-CD137-CD3C，提取的質(zhì)粒，用PI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染到人胚腎細(xì)胞293T 中，4化后，用PBS洗一遍，用細(xì)胞蛋白提取試劑(RIPA)裂解細(xì)胞，提取轉(zhuǎn)染后的293T細(xì)胞的 蛋白經(jīng)10 %的SDS-PAGE進(jìn)行分離后，恒流(300mA，化)轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，用抗CD3C (1:1000) 抗體解育，4°C解育過夜。用PBST洗涂3遍后，用HRP羊抗小鼠的二抗（1:5000)室溫解育Ih。加 入E化顯色后，用Bio-Rad公司的化emiDoc XRS System進(jìn)行成像，其結(jié)果如圖3所示。
[0035] 由圖3可知：本發(fā)明所構(gòu)建的重組質(zhì)粒能夠檢測到目的條帶的表達(dá)，大小與陽參 CD19-致，而未轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞沒有條帶。
[0036] 實施例3:化op2特異性嵌合抗原受體修飾的T淋己細(xì)胞的制備
[0037] 1.含抗化op2嵌合抗原受體慢病毒的包裝
[0038] 用無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒內(nèi)（天根生物）的操作說明書提取逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝質(zhì) 粒PRD114和lYopS-scFv-CHSCHS-CDSS-CDlSy-CDSC逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒在LB培養(yǎng)基中大量培 養(yǎng)，用無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒內(nèi)（天根生物）的操作說明書大量提取質(zhì)粒。將質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 至化P-293T細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染后4她收集細(xì)胞上清，40(K)rpm離屯、IOmin。收集上清，用0.45皿的濾 膜過濾，-80°C分裝凍存。
[0039] 2. T淋己細(xì)胞的制備
[0040] 采取20mL健康志愿者的新鮮抗凝血，用淋己分離液(GE公司）分立外周血單核細(xì)胞 (PBMC)。分離后的細(xì)胞用CD3和CD28平板刺激4她，用T淋己細(xì)胞培養(yǎng)基GT-T55UTAKARA公 司）加1:5000IL2進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到T淋己細(xì)胞。
[0041 ] 3. CAR-T細(xì)胞的制備
[0042] 用50yg/mL的RetroNectin(TAKARA公司）包被非組織培養(yǎng)板24孔板，每孔加入50化 L，4°C過夜。每孔再加入500化病毒上清，37°C解育30min。去除病毒上清，再加入50化L病毒 上清，37°C解育30min，除病毒上清，每孔加入1. SmL病毒上清，再加入0.5mL稀釋后的T淋己 細(xì)胞。從而獲得化〇p2-scFv-C肥C冊-CD28-CD137-CD3CT細(xì)胞即hops特異性CAR-T細(xì)胞。
[0043] 實施例4:化op2特異性CAR-T細(xì)胞對化op2相關(guān)腫瘤的殺傷作用
[0044] 1.Western Blotting檢測腫瘤細(xì)胞中Trop2的表達(dá)
[0045] 選取對數(shù)生長期的卵巢癌細(xì)胞冊8910、卵巢癌細(xì)胞SK0V3和黑色素瘤細(xì)胞A375,用 細(xì)胞蛋白提取試劑(RIPA)裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞蛋白，進(jìn)行WesternBlotting檢測，檢測結(jié)果 如圖4所示。
[0046] 2. CAR-T細(xì)胞對腫瘤的殺傷力檢測
[0047] 將腫瘤細(xì)胞用培養(yǎng)基調(diào)整到5 XioVmL,每孔50化，按E:T(效應(yīng)細(xì)胞和祀細(xì)胞比） 為16:1、8:1、4:1、2:1，分別加入腫瘤細(xì)胞2.5 X 1〇6個、1.25 X 1〇6個、6.25 X 1〇5個、3.125 X IO5個;待細(xì)胞完全貼壁后，收集T細(xì)胞和CAR-T細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1 X lOVmL，每孔50化， 培養(yǎng)12h。棄上清加入10化L 10倍稀釋的CCK8,解育4~6小時，酶標(biāo)儀檢測0D450的吸光值。 [004引上述腫瘤細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞冊8910、卵巢癌細(xì)胞SK0V3和黑色素瘤細(xì)胞A375。
[0049] 檢測結(jié)果如圖5所示:CAR-T細(xì)胞對化op2高表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞H08910的殺傷率高 于化op2低表達(dá)的的卵巢癌細(xì)胞SK0V3,而對化op2低表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞SK0V3的殺傷率又高 于未能檢測到化〇p2表達(dá)的黑色素瘤細(xì)胞A375。另外CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞殺傷作用高于T 細(xì)胞，高于單純培養(yǎng)基。
[0050] 3.ELISPOT檢測CAR-T細(xì)胞在受至ljTrop2抗原刺激后IFN- 丫的表達(dá)
[0051] 用無菌包被液稀釋IFN-丫抗體后加入化ISP0T(Millipore，Cat.No.MAIPS4510)平 板中，每孔10化L，4°C放置過夜。第二天用無菌的包被液將平板洗涂2遍。每孔加入20化L完 全培養(yǎng)基，室溫封閉比。洗去含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液RPMI-1640,用PBS洗S遍。準(zhǔn)備化op2胞外 區(qū)多膚，稀釋在含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液RPMI-1640,調(diào)至終濃度化g/ml。每孔10化L。調(diào)整待檢 測CAR-T細(xì)胞濃度為1 X lOVmL，每孔加入100化，37°C，5 %C〇2放置2地，棄去細(xì)胞及培養(yǎng)基， 用ELISPOT洗涂液洗涂3遍。每孔加入生物素標(biāo)記的檢測抗體，10化L/孔，4°C放置過夜。再用 ELISPOT洗涂液洗涂4遍。每孔加入HRP標(biāo)記的親和素，100化/孔，室溫放置45min。用化ISPOT 洗涂液洗涂3遍后，用PBS洗涂2遍。每孔加入10化L ACE顯色底物，室溫顯色20~60min。待出 現(xiàn)明顯集落點后，用無菌水洗涂3遍終止反應(yīng)?？諝庵畜@干平板，用化ISPOT讀板機(jī)計算形成 的斑點數(shù)如圖，其結(jié)果如圖6所示。由圖6可知:結(jié)果表明CAR-T細(xì)胞在特異性Trop2抗原刺激 下能夠分泌IFN-丫。
[0052] W上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明掲露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其 發(fā)明構(gòu)思加 W等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種Trop2特異性嵌合抗原受體修飾的T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述T淋巴細(xì)胞表面 表達(dá)所述Trop2特異性嵌合抗原受體。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述Trop2特異性嵌合抗原受體由人抗 Trop2單鏈抗體，人IgGl分子FC區(qū)的CH2CH3，CD28的胞內(nèi)區(qū)，CD137的胞內(nèi)區(qū)，及0)3ζ的胞內(nèi) 區(qū)串聯(lián)構(gòu)成。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述Trop2特異性嵌合抗原受體的 氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述Trop2特異性嵌合抗原受 體的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述人抗Trop2單鏈抗體的氨 基酸序列如SEQ ID NO.3所示。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述人抗Trop2單鏈抗體的核 酸序列如SEQ ID NO.4所示。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述人抗Trop2單鏈抗體的重 鏈分子和輕鏈分子之間有一個連接肽，其氨基酸序列為Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser〇8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，人IgGl分子FC區(qū)的CH2CH3， CD28的胞內(nèi)區(qū)，CD137的胞內(nèi)區(qū)，及CD3G的胞內(nèi)區(qū)串聯(lián)構(gòu)成的結(jié)構(gòu)為信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其氨 基酸序列如SEQ ID NO.5所示。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述T淋巴細(xì)胞，其特征在于，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核酸序列如SEQ ID NO .6所示。10. 如1-9任一項所述T淋巴細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K35/17GK105925536SQ201610483208
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月24日
【發(fā)明人】朱進(jìn), 馮振卿, 許國貞, 劉振云, 唐小軍, 唐奇, 徐亞如
【申請人】安徽未名細(xì)胞治療有限公司