藥食用真菌的果蔬培養(yǎng)及益生菌發(fā)酵的制作方法
【專利摘要】本文涉及大型真菌的果蔬培養(yǎng)產(chǎn)物,其中的果蔬不另外添加蛋白質(zhì)成分。本文還涉及該產(chǎn)物進(jìn)一步益生菌發(fā)酵的產(chǎn)品,以及所述產(chǎn)物和產(chǎn)品的生產(chǎn)方法。
【專利說明】
藥食用真菌的果蔬培養(yǎng)及益生菌發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及大型真菌的果蔬培養(yǎng)及益生菌發(fā)酵。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)已有多種大型真菌能通過液體發(fā)酵,在短時間(例如約5~45天)內(nèi)獲得大量的 菌絲體,并在發(fā)酵液中包含其多種藥用成分。但所用的培養(yǎng)基一般都要求特別添加氮源例 如蛋白質(zhì)成分,例如靈芝的培養(yǎng)基常常要添加豆餅或蛋白腺,蟲草菌的培養(yǎng)基添加蠶蛹粉 和酵母膏等。
[0003] 有關(guān)用果蔬制作酵素的文獻(xiàn)比較多,有利用果蔬自帶的菌種進(jìn)行自然發(fā)酵的,也 有將果蔬滅菌后添加益生菌來發(fā)酵的,更有在酵素產(chǎn)品中另外添加中草藥或其提取液W獲 得更多樣化營養(yǎng)的。運(yùn)些酵素的制備過程大都比較復(fù)雜,周期也較長。迄今為止,
【申請人】未 發(fā)現(xiàn)有僅僅用果蔬作為培養(yǎng)基來培養(yǎng)大型真菌,并進(jìn)一步通過益生菌發(fā)酵來制作包含大型 真菌及其活性成分的酵素的。本申請?jiān)谶\(yùn)些方面進(jìn)行了改進(jìn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 除非另行指明,否則本文使用的所有術(shù)語具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的 含義相同的含義。
[0005] 本文中"大型真菌"是指,食用后不造成人體中毒的、能形成肉眼可見的子實(shí)體的 真菌。所述大型真菌的范疇內(nèi)包括食用真菌和藥用真菌,所W本文的大型真菌也可W稱為 藥食用真菌。本文的藥用真菌例如是,各國藥典中所列的大型真菌。
[0006] 在具體實(shí)施方案中,本文所述大型真菌是破壁真菌,即在本文所述大型真菌中,能 對植物細(xì)胞壁或昆蟲體壁等堅(jiān)硬的表面結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壁效果的真菌。運(yùn)里提到的破壁效果, 并不要求使壁完全破裂,只要使壁上出現(xiàn)漏桐,內(nèi)含物更容易向外釋放即可。
[0007] 已知植物細(xì)胞壁的主要成分有纖維素、半纖維素和果膠。相應(yīng)地,能產(chǎn)生纖維素 酶、半纖維素酶、和/或果膠酶的大型真菌,都是能對植物細(xì)胞壁造成本文所述破壁效果的, 因此都屬于本文所述的破壁真菌。
[000引事實(shí)上,有不少大型真菌能在木質(zhì)如樹木上生長,它們能突破堅(jiān)硬的木質(zhì)表面,固 著于其中,說明它們都具有本文所述的破壁效果,因此,運(yùn)些能在木質(zhì)上生長的多細(xì)胞真菌 (簡稱"木生真菌")屬于本文所述的破壁真菌,具體例子有:靈芝(Ganoderma)、巧等(Poria cocos)、豬等(Grifola umbella化),等等。木生真菌包括木寄生真菌和木腐生真菌,木寄生 真菌的例子如豬等,木腐生真菌的例子如靈芝、巧等。
[0009]除了樹木等植物細(xì)胞有堅(jiān)硬表面W外,昆蟲及其幼蟲在體壁中也有堅(jiān)硬的纖維 素、幾下質(zhì)成分,大部分真菌無法生長。但有些真菌,能感染昆蟲(如鱗翅目)的幼蟲或蛹,使 得本來要經(jīng)歷幼蟲^蛹^成蟲生長階段的昆蟲終止于幼蟲或蛹的階段,該類真菌則利用昆 蟲幼蟲或蛹的身體為營養(yǎng)進(jìn)行生長。蟲草菌就是運(yùn)樣的真菌。在本文中,"蟲草菌"是指廣義 上的蟲草屬(Cordyceps)真菌,它們寄生于昆蟲,把蟲體變成充滿菌絲的僵蟲,從僵蟲前端 生出柄頭狀或棍棒狀的子座。蟲草屬真菌目前已報(bào)道的超過400多種,最廣為人知的包括冬 蟲夏草(Cordyceps sinensis)、蛹蟲草(Cordyceps militaris)等。蟲草菌能突破昆蟲體 壁,說明能產(chǎn)生相應(yīng)的破壁物質(zhì),例如纖維素酶、幾下質(zhì)酶等等,因此也屬于本文所述的破 壁真菌。
[0010] 相應(yīng)地,在具體實(shí)施方案中,本文所述大型真菌包括木生真菌和蟲草菌,更具體 地,本文所述破壁真菌包括木生真菌和蟲草菌。
[0011] 在更優(yōu)選的實(shí)施方案中,本文所述大型真菌選自靈芝、巧等、豬等、冬蟲夏草、和/ 或蛹蟲草。在還更優(yōu)選的實(shí)施方案中,本文所述破壁真菌選自靈芝、巧等、豬等、冬蟲夏草、 和/或蛹蟲草。
[0012] 已知大型真菌大都有抱子、菌絲體、子實(shí)體=個階段,其中菌絲體是進(jìn)行營養(yǎng)生長 的多細(xì)胞體,表現(xiàn)為由眾多顯微水平可見的長絲狀細(xì)胞聚集而成的肉眼可見的菌體。菌絲 體一般是積極地從環(huán)境吸收營養(yǎng),為后續(xù)子實(shí)體生長做膽備。因此,大型真菌的菌絲體生長 對環(huán)境的營養(yǎng)要求常常比較高。當(dāng)環(huán)境條件不適于生長時,有些大型真菌的菌絲體就可能 轉(zhuǎn)化成休眠體,例如由菌絲體緊密纏繞的、內(nèi)松外硬的"菌核",豬等、巧等等都有菌核階段。 當(dāng)菌核遇到合適的環(huán)境條件,能萌生新的營養(yǎng)菌絲或長成子實(shí)體。
[0013] 具體就靈芝而言,中國藥典所述的靈芝主要是指其子實(shí)體,常見為傘狀。子實(shí)體釋 放出靈芝抱子,運(yùn)其實(shí)是靈芝的生殖細(xì)胞。靈芝抱子遇到合適的環(huán)境會萌發(fā)菌絲。眾多菌絲 聚集排列,形成菌絲體。運(yùn)些菌絲像植物的根系一樣,不斷從周圍環(huán)境吸收和儲存營養(yǎng),為 后續(xù)的子實(shí)體生長做必要的積累。靈芝菌絲體的營養(yǎng)物含量一般會比子實(shí)體高出3-5倍,甚 至更多。W靈芝多糖為例,菌絲體的多糖含量高達(dá)15%左右,子實(shí)體的多糖含量僅有大概 3%。而且,靈芝菌絲體柔軟,細(xì)胞膜較薄,其內(nèi)含的豐富營養(yǎng)成分較易為人體吸收。相比之 下,靈芝子實(shí)體較堅(jiān)硬,其營養(yǎng)相對不易被人體吸收。
[0014] 至于蟲草菌,如上文已述,其在蟲體內(nèi)寄生時,是菌絲體,當(dāng)其突破蟲體而成草時, 就進(jìn)入子實(shí)體階段了。
[0015] 本文中"果蔬"是指一或多種水果、一或多種蔬菜、或者一或多種水果與一或多種 蔬菜的混合物,其中的"水果"和"蔬菜"都是指日常生活中的一般含義。
[0016] 本文中"發(fā)酵(fermen化tion)"是指在植物或其果實(shí)、莖葉等材料中接種微生物進(jìn) 行培養(yǎng)的過程。由于微生物的生命活動,可W將碳水化合物轉(zhuǎn)化為醇和有機(jī)酸等物質(zhì),也可 W使植物所含的成分(例如營養(yǎng)成分)發(fā)生變化,例如更容易釋放,活性更強(qiáng),或成為更有利 于被人體吸收的形式。
[0017] 本文中"酵素(ferment nutrients)"是指植物經(jīng)益生菌發(fā)酵而得到的多種生物活 性物質(zhì)的混合體,其包括:發(fā)酵參與菌、用于發(fā)酵的食材、發(fā)酵參與菌或食材的活性成分,例 如多種酶(enzyme),還包括因發(fā)酵而被改良的成分,例如活性更強(qiáng)或更有利于吸收的成分, 等等。在具體實(shí)施方案中,在由水果和/或蔬菜組成的培養(yǎng)基中進(jìn)行益生菌發(fā)酵,得到"果蔬 酵素"。運(yùn)里所述的"果蔬",是指日常生活中所說的水果和蔬菜,并無另外的特殊含義。
[001引大型真菌的果蔬培養(yǎng)
[0019]在本申請之前,大型真菌可W進(jìn)行液體培養(yǎng),但未見僅W水果和/或蔬菜為培養(yǎng)基 的,至少都要添加富含蛋白質(zhì)的成分,例如蛋白腺、豆餅等。運(yùn)可能是因?yàn)?,如上文已述,?型真菌的菌絲體生長對環(huán)境的營養(yǎng)要求常常比較高,環(huán)境不適合時會休眠,故,如果不額外 添加蛋白營養(yǎng)成分,單純果蔬的營養(yǎng)水平(例如蛋白含量)可能不滿足大型真菌菌絲體的高 營養(yǎng)要求。
[0020] 另一方面,在本文之前,大型真菌無論是液體培養(yǎng)還是固體培養(yǎng),目標(biāo)一般都是要 獲得子實(shí)體,未見有單純培養(yǎng)菌絲體直接用作最終產(chǎn)品的。但是子實(shí)體生長花費(fèi)的時間往 往較長,例如,靈芝的子實(shí)體生長要比菌絲體生長常常多出大約5倍的時間,蟲草菌由蟲體 變?yōu)椴蒹w也需要耗費(fèi)9~10個月左右的時間。
[0021] 本發(fā)明人將大型真菌接種到由水果和/或蔬菜組成的、不另外添加蛋白質(zhì)的培養(yǎng) 基中培養(yǎng),意外發(fā)現(xiàn)大型真菌能進(jìn)行良好的生長,尤其是菌絲體生長。(技術(shù)人員憑經(jīng)驗(yàn)?zāi)?夠很容易地根據(jù)培養(yǎng)時間和/或形態(tài)學(xué)特征來確定:所培養(yǎng)的大型真菌僅處于菌絲體階段、 未達(dá)到子實(shí)體階段)。經(jīng)測試,所得培養(yǎng)物具有大型真菌各自的特定活性成分;更為有利的 是,所得培養(yǎng)物能進(jìn)一步進(jìn)行益生菌發(fā)酵,產(chǎn)生營養(yǎng)成分多樣且易于人體吸收的酵素產(chǎn)品。
[0022] 本文所述的果蔬培養(yǎng)基由一或多種水果、一或多種蔬菜、或者一或多種水果與一 或多種蔬菜的混合物組成。培養(yǎng)基中水果和/或蔬菜的品種數(shù)不限。在【具體實(shí)施方式】中,針 對同一種大型真菌,嘗試了少至巧巾和多達(dá)16種果蔬的混合物來制作培養(yǎng)基,結(jié)果都檢測到 了多種活性指標(biāo),從而指示大型真菌的良好生長。因此,在無反例的前提下,本文的果蔬培 養(yǎng)基可W依據(jù)當(dāng)?shù)禺?dāng)季能獲得的水果和蔬菜的任意組合來制備,也可W組合不同地域同一 時間能獲得的多種水果和蔬菜的任意組合來制備。
[0023] 本文所述的果蔬培養(yǎng)基可W通過添加食用醋或食用氨氧化鋼溶液等食用抑調(diào)節(jié) 劑,將培養(yǎng)基的抑調(diào)整到適于所接種的菌種生長的最適范圍內(nèi),所述最適范圍是本領(lǐng)域已 知的相應(yīng)菌種的最適抑范圍。例如,對于靈芝、蟲草的培養(yǎng)而言,可W是抑5.0~8.0。
[0024] 本文所述的大型真菌的果蔬培養(yǎng),在該大型真菌的最適生長溫度范圍內(nèi)進(jìn)行,所 述最適生長溫度范圍是本領(lǐng)域已知的相應(yīng)菌種的最適生長溫度范圍。例如7~30°C,優(yōu)選18 ~28°C。
[0025] 本文所述的大型真菌的果蔬培養(yǎng),其培養(yǎng)時間的長短取決于各個菌種生長所需的 時間,尤其是菌絲體生長所需的時間,但無需特別精確。例如,所述果蔬培養(yǎng)可W進(jìn)行3~45 天,優(yōu)選5~15天,或是所述范圍內(nèi)的任何天數(shù)。所述培養(yǎng)時間相差1~3天,對最終產(chǎn)品的活 性成分含量影響不大(數(shù)據(jù)未顯示)。
[0026] 本文所述的大型真菌的果蔬培養(yǎng),可W用發(fā)酵罐攬拌的形式進(jìn)行,在運(yùn)種情況下, 發(fā)酵罐攬拌的速度也是本領(lǐng)域技術(shù)人員基于所選菌種的特性能夠確定的,例如50~ 250巧m,優(yōu)選90~180巧m。
[0027] 本申請的大型真菌的果蔬培養(yǎng)產(chǎn)物,既包含大型真菌的活性成分,也包含果蔬的 活性成分。例如,當(dāng)本申請的大型真菌是破壁真菌時,由于破壁真菌的破壁效果,使得破壁 真菌的果蔬培養(yǎng)產(chǎn)物,不僅有真菌的菌絲體及其營養(yǎng)成分,而且果蔬也因被破壁而更多地 釋放其活性物質(zhì)。與接種非破壁的真菌的果蔬培養(yǎng)相比,本申請的果蔬培養(yǎng)產(chǎn)物在還未進(jìn) 行益生菌發(fā)酵之前就已經(jīng)表現(xiàn)出果蔬成分的更高活性,因此成為對人體更有營養(yǎng)的產(chǎn)品。
[0028] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中,本文所述的大型真菌是靈芝。
[0029] 在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中,本文所述的大型真菌是蛹蟲草。
[0030] 益生菌(probiotics)發(fā)酉奉
[0031] 在本申請之前,用益生菌進(jìn)行食品發(fā)酵是比較常見的。為此常用的益生菌有,酵母 菌(yeast)、乳酸桿菌化actobacillus)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、明串珠菌 (Leuconostoc)、鏈球菌(Streptococcus)、乳球菌(Lactococcus),醋酸桿菌 (Acetobacterium)等等D所述酵母菌例如釀酒酵母(Saccharomyces cereviSiae)和欄圓酵 母(Saccharomyes eereviSiae)等糖酵母屬(Saccharomyces)的酵母、己斯德畢赤酵母 (Pichia pastoris)、奧默畢赤酵母(Pichia ohm eri)、膜壤畢赤酵母(Pichia membranaefaciens)等畢赤酵母屬(Pichia)的酵母、異常漢遜酵母化ansenula anomala)等 漢遜酵母屬(Hansenula)的酵母。所述乳酸桿菌例如,布氏乳桿菌化actobaci Ilus buchneri)、面包乳桿菌化actobacillus panis)、嗜酸乳桿菌化actobacillus acidophilus)、植物乳桿菌化actobaciIlus PIantarum)、發(fā)酵乳桿菌化actobaciIlus f ermenti )、唾液乳桿菌化actobaci 1 Ius sal ivarius)、短乳桿菌化actobacillus brevis)、淡綠色乳桿菌化actobaci Ilus veridescens)、德氏乳桿菌保加利亞亞種 (Lactobacillus delbrueckii bulg過ricus)、歷1^李|1|季[本干菌(Lactobacillus rhamnosus)、 纖維二糖乳桿菌化actobacillus cellobiosus)、干酷乳桿菌干酷亞種(Xactobacillus casei subsp casei)、瑞i 乳桿菌約古特亞種化actobacillus helveticus subsp.jugurti)、詹森乳桿菌化 acticum Jansen)、戊糖乳桿菌化 actobacillus pentosus),等等D所述雙歧桿菌例如,青春雙歧桿菌(Bif idobacterium adolescents)、分 叉雙歧桿菌(Bif idobacterium bif idum)、嬰兒雙歧桿菌(Bif idobacterium infantis)、長 雙歧桿菌(Bif idobacterium Iongum),等等。所述醋酸桿菌例如己氏醋酸桿菌 (Acetobacter pasteuranus)、惡臭醋酸桿菌(Acetobacter rancens)等D其他益生菌還有: 腸膜明串珠球菌化euconostoc mesentero ides aureus)、唾液鏈球菌嗜熱亞種 (Streptococcus salivarius subsp . thermophilus)、季L球菌季L月旨亞種(Lactococcus Iactis subsp.Cremoris),等等D
[0032] 相應(yīng)地,本申請還涉及一種發(fā)酵方法,其是將大型真菌的發(fā)酵和益生菌的發(fā)酵組 合。在更具體的實(shí)施方案中,本申請涉及先進(jìn)行大型真菌的發(fā)酵,再進(jìn)行益生菌的發(fā)酵。在 更具體的實(shí)施方案中,本申請的益生菌發(fā)酵用酵母菌、乳酸桿菌和醋酸桿菌進(jìn)行。在更具體 的實(shí)施方案中,本申請的益生菌發(fā)酵是分步驟進(jìn)行,優(yōu)選地,先進(jìn)行酵母菌和乳酸桿菌的纔 合發(fā)酵,再進(jìn)行醋酸桿菌的發(fā)酵。本申請的酵母菌、乳酸桿菌、和醋酸桿菌可^一起加入,進(jìn) 行一步發(fā)酵,而不是分批加入,分批發(fā)酵,這樣可^大大節(jié)省酵素制作時間。在更具體的實(shí) 施方案中,本申請的益生菌是釀酒酵母菌、布氏乳桿菌、和己氏醋酸桿菌。
[0033] 本申請^上述的大型真菌的果蔬培養(yǎng)產(chǎn)物作為培養(yǎng)基,進(jìn)一步接種上述常見的益 生菌進(jìn)行培養(yǎng),可得到大型真菌-果蔬酵素,例如夷芝-酵素或蟲草酵素。本
【申請人】發(fā)現(xiàn),相 比于未接種大型真菌的果蔬直接接種益生菌進(jìn)行發(fā)酵,本申請先接種大型真菌培養(yǎng)后的果 蔬在益生菌發(fā)酵時,對培養(yǎng)條件的要求并無明顯變化。
[0034] 在優(yōu)選實(shí)施方案中,能共享相同或相似培養(yǎng)條件的大型真菌還可W-起在果蔬培 養(yǎng)基中培養(yǎng),優(yōu)選進(jìn)一步進(jìn)行益生菌發(fā)酵,使得最終的產(chǎn)品中包含不止一種大型真菌和/或 其活性成分。
[0035] 在另一實(shí)施方案中,用于益生菌發(fā)酵的果蔬中包含大型真菌和/或其成分。在又一 實(shí)施方案中,對包含大型真菌和/或其成分的果蔬接種益生菌進(jìn)行酵素發(fā)酵。所W,本文的 另一實(shí)施方案涉及酵素發(fā)酵的方法,是在果蔬培養(yǎng)基中,先接種大型真菌進(jìn)行生長,例如菌 絲體生長,再接種益生菌進(jìn)行發(fā)酵。優(yōu)選地,所述方法不設(shè)及提取大型真菌活性成分的步 驟,即,所述方法無需在大型真菌生長步驟之后提取大型真菌活性成分,而是大型真菌的生 長和益生菌的發(fā)酵可W在同一個培養(yǎng)系統(tǒng)或發(fā)酵裝置中依次進(jìn)行。
[0036] 本申請的果蔬培養(yǎng)基制作簡便,所有的水果和/或蔬菜原料只需洗凈,無需進(jìn)行消 毒或滅菌,運(yùn)至少部分是由于本文的果蔬培養(yǎng)是通過人工接種菌種進(jìn)行定向培養(yǎng),并不是 像現(xiàn)有技術(shù)那樣,僅利用果蔬中天然自帶的菌種進(jìn)行發(fā)酵,在優(yōu)勢生長的情況下,不怕果蔬 原材料中自帶菌種的污染。
[0037] 在一個具體舉例的實(shí)施方式中,本申請的方法包括如下步驟:
[0038] 1、將洗干凈的水果和/或蔬菜,切塊、勻漿,倒入發(fā)酵罐內(nèi);
[0039] 2、用食用醋或者食用氨氧化鋼溶液調(diào)整pH值至5.0~7.0,;
[0040] 3、冷卻后,接入大型真菌菌種,控制攬拌速度為90~18化pm、溫度為18~28°C、發(fā) 酵5~15天;
[0041] 4、接入1~3%〇(m/m)酵母菌(百萬級活菌數(shù))、加入1~3%〇(m/m)乳酸菌(百萬級活 菌數(shù))、加入1~3%〇(m/m)醋酸桿菌(百萬級活菌數(shù)),密封,于25~38°C環(huán)境下靜置培養(yǎng)5~ 15天;
[0042] 5、過濾,調(diào)味,常溫避光保存,即得大型真菌-果蔬酵素產(chǎn)品。
[0043] 更具體舉例地,本申請?jiān)O(shè)及
[0044] 1. -種組合物,是經(jīng)果蔬培養(yǎng)的大型真菌產(chǎn)物,其中的果蔬培養(yǎng)基由水果和/或蔬 菜組成、且不含另外添加的蛋白質(zhì)成分。
[0045] 2.項(xiàng)1的組合物,其中產(chǎn)物中的大型真菌是菌絲體形式。
[0046] 4.在先任一項(xiàng)的組合物,其中的大型真菌是破壁真菌。
[0047] 5.在先任一項(xiàng)的組合物,其中的大型真菌是木生真菌和/或蟲草菌。
[004引6.在先任一項(xiàng)的組合物,其中的大型真菌是人工培養(yǎng)的。
[0049] 7.在先任一項(xiàng)的組合物,其中的大型真菌選自靈芝、豬等、巧等、冬蟲夏草、和/或 蛹蟲草。
[0050] 8.-種組合物,是將項(xiàng)1-7之一所述的組合物進(jìn)一步進(jìn)行益生菌發(fā)酵得到的產(chǎn)物。
[0051] 9.項(xiàng)8的組合物,其中的益生菌選自W下的一或多種:糖酵母、畢赤酵母、漢遜酵 母、乳酸桿菌、雙歧桿菌、明串珠菌、鏈球菌、乳球菌,醋酸桿菌。
[0052] 10.項(xiàng)8的組合物,其中的益生菌選自W下的一或多種:釀酒酵母、楠圓酵母、己斯 德畢赤酵母、奧默畢赤酵母、膜壤畢赤酵母、異常漢遜酵母、布氏乳桿菌、面包乳桿菌、嗜酸 乳桿菌、植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、唾液乳桿菌、短乳桿菌、淡綠色乳桿菌、德氏乳桿菌保加 利亞亞種、鼠李糖乳桿菌、纖維二糖乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、瑞±乳桿菌約古特亞種、 詹森乳桿菌、戊糖乳桿菌)、己氏醋酸桿菌、惡臭醋酸桿菌、青春雙歧桿菌、分叉雙歧桿菌、嬰 兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、腸膜明串珠球菌、唾液鏈球菌嗜熱亞種、和乳球菌乳脂亞種。
[0053] 11.項(xiàng)8的組合物,其中的益生菌是釀酒酵母,乳酸桿菌和醋酸桿菌。
[0054] 12.項(xiàng)8-11之一的組合物,所述的益生菌每一種都選用百萬級活菌數(shù)的菌液、并按 總原料質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1~3%。的量接種。
[0055] 13.培養(yǎng)大型真菌的方法,是用僅由水果和/或蔬菜組成、且不含另外添加的蛋白 質(zhì)成分的果蔬培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
[0化6] 14.項(xiàng)13的方法,其培養(yǎng)條件為:W90~18化pm的攬拌速度,在18~28°C,培養(yǎng)5~ 15天。
[0057] 15.酵素制作方法,是在果蔬培養(yǎng)基中,先接種大型真菌進(jìn)行培養(yǎng),再接種益生菌 進(jìn)行發(fā)酵,所述的果蔬培養(yǎng)基由水果和/或蔬菜組成、且不含另外添加的蛋白質(zhì)成分。
[005引16.項(xiàng)13-15之一的方法,其中不設(shè)及提取大型真菌活性成分的步驟。
[0059] 17.項(xiàng)13-16之一的方法,其中的大型真菌培養(yǎng)是菌絲體生長。
[0060] 18.項(xiàng)13-17之一的方法,其中的大型真菌是破壁真菌。
[0061] 19.項(xiàng)13-18之一的方法,其中的大型真菌是木生真菌或蟲草菌。
[0062] 20.項(xiàng)13-19之一的方法,其中的大型真菌是人工培養(yǎng)的。
[0063] 21.項(xiàng)13-20之一的方法,其中的大型真菌選自靈芝、豬等、巧等、冬蟲夏草、和/或 蛹蟲草。
[0064] 22.項(xiàng)13-21之一的方法,其中的益生菌選自W下的一或多種:糖酵母、畢赤酵母、 漢遜酵母、乳酸桿菌、雙歧桿菌、明串珠菌、鏈球菌、乳球菌,醋酸桿菌。
[0065] 23.項(xiàng)22的方法,其中的益生菌選自W下的一或多種:釀酒酵母、楠圓酵母、己斯德 畢赤酵母、奧默畢赤酵母、膜壤畢赤酵母、異常漢遜酵母、布氏乳桿菌、面包乳桿菌、嗜酸乳 桿菌、植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、唾液乳桿菌、短乳桿菌、淡綠色乳桿菌、德氏乳桿菌保加利 亞亞種、鼠李糖乳桿菌、纖維二糖乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、瑞±乳桿菌約古特亞種、詹 森乳桿菌、戊糖乳桿菌)、己氏醋酸桿菌、惡臭醋酸桿菌、青春雙歧桿菌、分叉雙歧桿菌、嬰兒 雙歧桿菌、長雙歧桿菌、腸膜明串珠球菌、唾液鏈球菌嗜熱亞種、和乳球菌乳脂亞種。
[0066] 24.項(xiàng)22的方法,其中的益生菌是釀酒酵母,乳酸桿菌和醋酸桿菌。
[0067] 25.項(xiàng)22-24之一的方法,所述的益生菌每一種都選用百萬級活菌數(shù)的菌液、并按 總原料質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1~3%。的量接種。
[0068] 下面的實(shí)施例是對本申請的具體描述,運(yùn)些實(shí)施例旨在對本申請進(jìn)行進(jìn)一步說 明,不能理解為對發(fā)明的保護(hù)范圍有任何限制,本領(lǐng)域的技術(shù)人員基于本申請的內(nèi)容作出 的改進(jìn)和調(diào)整也屬于受保護(hù)的范圍。 實(shí)施例
[0069] 檢測方法
[0070] 脂肪酶活力:按照中國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23535-2009進(jìn)行檢測。
[0071 ]淀粉酶活力:將a-淀粉酶抑制劑與等量的a-淀粉酶溶液在37°C保溫15分鐘,加入 2%的可溶性淀粉溶液反應(yīng)5分鐘,再加入DNS( 3,5-二硝基水楊酸)試劑,沸水浴5分鐘后迅 速用流水冷卻,用470nm波長進(jìn)行比色法測定(趙蓉等,中成藥,2013,35(3): 573-576)。
[0072] 抗氧化能力:DPKl清除能力、超氧陰離子清除能力、徑自由基清除能力按《火龍果 酵素生物活性的初步研究》,董銀卯等,食品科技,2009,34(3) :192-196所述方法進(jìn)行檢測。
[0073] 靈芝=祗:將樣品溶液加熱使溶劑揮發(fā)后,加入新鮮配置的5 %香草醒-高氯酸溶 液,70°C水浴15分鐘,隨后用流水冷卻至室溫,測定550nm波長的吸光度(弓曉峰等,天然產(chǎn) 物研究與開發(fā),2006,18:825-829)。
[0074] 蟲草素:按照中國農(nóng)業(yè)部關(guān)于蟲草制品中蟲草素和腺巧的高效液相色譜法測定標(biāo) 準(zhǔn)NY/T2116-2012進(jìn)行檢測。
[0075] 蟲草酸:又名D-甘露醇,故按照中國農(nóng)業(yè)部關(guān)于食用菌產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)NY/T 2279-2012中甘露醇的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。
[0076] 實(shí)施例1
[0077]果蔬培養(yǎng):稱取藍(lán)替50g、梅子lOg、樹替50g、奇異果lOOg、楊梅lOOg、草替150g、樓 桃80g、紅要lOOg、西瓜200g、芒果150g、火龍果200g、雜猴桃200g、蘋果200g、香蕉lOOg、李子 200g、哈密瓜300g,勻漿,W食用氨氧化鋼溶液調(diào)抑為6.8,滅菌,得巧果蔬培養(yǎng)基。接入1號 靈芝菌(紫光靈芝,CGMCC編號5.160,屬于紫芝)經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化的菌絲,置于12化pm、20 °〇搖床培養(yǎng)15天。測定結(jié)果見表1。
[007引益生菌發(fā)酵:加入1%。(重量)釀酒酵母(CGMCC編號2.3888,百萬級活菌數(shù))、1%0(重 量)布氏乳桿菌(CGMCC編號1.3114,百萬級活菌數(shù))、和1%。(111/111)醋酸桿菌(醋酸桿菌滬釀 1.01,購自上海釀造一廠,百萬級活菌數(shù)),28°C密閉靜置7天。測定結(jié)果見表1。
[0079] 濾去果蔬渣及未溶解的菌絲體,得清澈濾液,為靈芝-水果酵素產(chǎn)品1,常溫避光保 存。
[0080] 實(shí)施例2
[0081] 果蔬培養(yǎng):稱取蘋果1200g、火龍果800g、蓮截400g,勻漿,W食用氨氧化鋼溶液調(diào) pH為6.8,滅菌,得果蔬培養(yǎng)基2。接入2號靈芝菌(湘赤芝1號,湖南省非主要農(nóng)作物品種登記 證書編號XPD010-2013,得自國家中醫(yī)藥管理局亞健康干預(yù)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室)經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化 的菌絲,置于12化pm, 20 °C搖床上培養(yǎng)15天,測定結(jié)果見表1。
[0082] 益生菌發(fā)酵同實(shí)施例1。測定結(jié)果見表1。
[0083 ]過濾,得靈芝-水果酵素產(chǎn)品2,常溫避光保存。
[0084] 表 1
[0085]
[00化]實(shí)施例3
[0087]果蔬培養(yǎng):稱取葡萄200g、胡蘿h200g、帶葉芹菜lOOg、渡菜150g、巧白300g、白蘿h 200g、白菜300g、茄子lOOg、黃花菜lOOg、魏豆苗50g、馬鈴馨l(fā)OOg、黃瓜lOOg、窩算80g、海帶 50g、紫菜50g、金針茹200g、芥藍(lán)200g、油菜200g、紅豆300g,勻漿,食用氨氧化鋼溶液調(diào)抑為 6.8,滅菌。接入湘北蟲草1號(湖南省非主要農(nóng)作物品種登記證書編號乂?0009-2013,得自國 家中醫(yī)藥管理局亞健康干預(yù)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室)經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化的菌絲,120rpm、2(TC搖床培養(yǎng) 15天。測定結(jié)果見表3。
[008引益生菌發(fā)酵:加入1%。(重量)釀酒酵母(CGMCC編號2.3888,百萬級活菌數(shù))、1%0(重 量)布氏乳桿菌(CGMCC編號1.3114,百萬級活菌數(shù))、1%。(重量)醋酸桿菌(醋酸桿菌滬釀 1.01,購自上海釀造一廠,百萬級活菌數(shù)),密封,于28°C環(huán)境下靜置培養(yǎng)7天。測定結(jié)果見表 2。
[0089] 濾去果蔬渣及未溶解的菌絲體,得清澈濾液,為蟲草-果蔬酵素產(chǎn)品3,常溫避光保 存。
[0090] 實(shí)施例4
[0091] 果蔬培養(yǎng):稱取馬鈴馨l(fā)OOOg、柿子600g、鳳梨700g,勻漿,W食用氨氧化鋼溶液調(diào) 抑為6.8,滅菌。接入蛹蟲草(CGMCC編號5.856)經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化的菌絲,120rpm、20°C搖床 培養(yǎng)15天。測定結(jié)果見表3。
[0092] 益生菌發(fā)酵同實(shí)施例3。測定結(jié)果見表2。
[0093] 濾去果蔬渣及未溶解的菌絲體,得清澈濾液,為蟲草-果蔬酵素產(chǎn)品4,常溫避光保 存。
[0094] 表 2
[0095]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物,是大型真菌經(jīng)果蔬培養(yǎng)的產(chǎn)物,其中的果蔬培養(yǎng)基由水果和/或蔬菜組 成、且不含另外添加的蛋白質(zhì)成分。2. 權(quán)利要求1的組合物,其中產(chǎn)物中的大型真菌是菌絲體形式。3. 在先任一權(quán)利要求的組合物,其中的大型真菌是破壁真菌。4. 在先任一權(quán)利要求的組合物,其中的大型真菌選自靈芝、豬苓、茯苓、冬蟲夏草、和/ 或蛹蟲草。5. -種組合物,是將權(quán)利要求1-4之一的組合物進(jìn)一步進(jìn)行益生菌發(fā)酵得到的產(chǎn)物。6. 培養(yǎng)大型真菌的方法,是用僅由水果和/或蔬菜組成、且不含另外添加的蛋白質(zhì)成分 的果蔬培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。7. 酵素制作方法,是在果蔬培養(yǎng)基中,先接種大型真菌進(jìn)行培養(yǎng),再接種益生菌進(jìn)行發(fā) 酵,所述的果蔬培養(yǎng)基由水果和/或蔬菜組成、且不含另外添加的蛋白質(zhì)成分。8. 權(quán)利要求6或7的方法,其中不涉及提取大型真菌活性成分的步驟。9. 權(quán)利要求6-8之一的方法,其中的大型真菌是破壁真菌。10. 權(quán)利要求6-8之一的方法,其中的大型真菌選自靈芝、豬苓、茯苓、冬蟲夏草、和/或 蛹蟲草。
【文檔編號】C12P1/02GK105925616SQ201610285374
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月29日
【發(fā)明人】劉東波, 王蕾, 康信聰, 陳曉明, 張思
【申請人】遼寧晟啟昊天生物醫(yī)藥科技有限公司