一種鹽酸半胱氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鹽酸半胱氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的鹽酸半胱氨酸的藥物組合物中含有鹽酸半胱氨酸和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，鹽酸半胱氨酸和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，具有改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷作用；二者聯(lián)合作用時(shí)，改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷作用更強(qiáng)，可以開(kāi)發(fā)成改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說(shuō)明】
一種鹽酸半胱氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸半胱氨酸的新用途，具體涉及一種鹽酸半胱 氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸半胱氨酸為氨基酸類藥物，白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。可用于治療尿道疾病。
[0003] 迄今為止，尚未見(jiàn)鹽酸半胱氨酸及其藥物組合物與改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷 的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸半胱氨酸的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸半胱氨酸和一種天然產(chǎn)物，鹽酸半胱氨酸和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同改善白血病肝臟浸潤(rùn)致 肝損傷。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008] -種鹽酸半胱氨酸的藥物組合物，包括鹽酸半胱氨酸、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011]上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將野馬追粉碎，用75~85%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70% 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到化合物(I)。
[0012]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹(shù)脂為D101型大孔吸附樹(shù)脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 上述鹽酸半胱氨酸的藥物組合物在制備改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷的藥物中 的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明提供的鹽酸半胱氨酸的藥物組合物中含有鹽酸半胱氨酸和一種結(jié)構(gòu)新穎 的天然產(chǎn)物，鹽酸半胱氨酸和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，具有改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷 作用；二者聯(lián)合作用時(shí)，改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷作用更強(qiáng)，可以開(kāi)發(fā)成改善白血病肝 臟浸潤(rùn)致肝損傷的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019] 試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將野馬追(2kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提?。?5LX 3次），合并提取 液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用D101型大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫10 個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1 (10個(gè)柱體積）、30:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (10個(gè) 柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1 (10個(gè)柱體積）、4:1 (8個(gè)柱體積)和2:1 (6個(gè)柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:冊(cè)431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 377.1886，結(jié)合核磁特征可得分子式為 〇21出〇〇7，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)5[1(口口111，口5^(1;[116-(15,5001抱）：11-10(3.88，111)，11-2a(1.66，m)，H-20(1.58，m)，H-3a(1.32，m)，H-30(1.37，m)，H-50(2.Ol，s)，H-90(2.43，d，J = 3.5Hz)，H-ll(5.89，dd，J = 3.5，12.0Hz)，H-12(5.92，d，J = 12.0Hz)，H-13a(2.69，br，s)， H-14a(2.43，m)，H-140(1.85，m)，H-16(2.27，m)，H-17a(3.77，d，J=10.0,4.0Hz)，H-170 (3.66，d，J=10.0,4.0Hz)，H-18(1.22，s)，H-19(1.04，s)，H-20a(5.14，d，J = 9.50Hz)，H-20 0(4.36，d，J = 9.50Hz)，17-0Me(3? 27，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)5C(ppm，pyridine_d5，125MHz): 73.5(CH，1-C)，29.7(CH2,2-C)39.6(CH 2,3-C)，34.3(C，4-C)，64.5(CH，5-C)，215.1(C，6-C)， 101.7(C，7-C)，61.8(C，8-C)，57.4(CH，9-C)，44.1(C，10-C)，136.9(CH，11-C)，129.4(CH， 12-C)，30.1(CH，13-C)，29.5(CH2，14-C)，225.2(C，15-C)，58.9(CH，16-C)，69.1(CH 2，17-C)， 34.4(CH3，18-C)，22.1(CH3，19-C)，66.1(CH2,20-C)，58.2(CH3，17-0CH 3)。在氫譜中可以觀察 到兩個(gè)單峰甲基信號(hào)[Sh1.22(3H，s)和1.04(3H，s)]，一個(gè)甲氧基信號(hào)[S h3.27(3H，s，17- 016)]，兩個(gè)連氧亞甲基質(zhì)子信號(hào)[知3.77(111，(1，1=10.0,4.0泡）與3.66(111，(1，1=10.0， 4.0他），5.14(111，(1，1 = 9.50他）與4.36(111，(1，1 = 9.50他）]，兩個(gè)烯屬次甲基質(zhì)子信號(hào)[5 而.89(111，(1(1，1 = 3.5，12.0抱）與5.92(111，(1，1=12.0抱）]以及一個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)[6 H3.88(lH，m)];在碳譜中顯示該化合物有21個(gè)碳信號(hào)，其中有兩個(gè)羰基碳信號(hào)，一組環(huán)內(nèi)雙 鍵碳信號(hào)，一個(gè)半縮醛碳信號(hào)以及三個(gè)連氧碳信號(hào)。結(jié)合以上信息可以得出該化合物可能 是一個(gè)二萜類化合物，通過(guò)文獻(xiàn)查閱可以發(fā)現(xiàn)該化合物和61^-10，6€ 1，7€[，110-tetrahydroxy-17_methoxy-70，20-epoxy-kauran-15_one具有相似結(jié)構(gòu)。將其核磁數(shù)據(jù)和 ent_10，6a，7a，110_tet;rahyd;roxy_17-methoxy_70，20_epoxy_kauran_15_one 進(jìn) 比車交，發(fā) 現(xiàn)該化合物多出了一個(gè)羰基碳信號(hào)，同時(shí)在已知化合物中的C-6位的羥基也消失，故而推測(cè) 該新化合物和已知化合物的區(qū)別在C-6的羥基氧化成了羰基。進(jìn)一步的對(duì)新化合物的HMBC 譜的解析中，H-5/C-6，H-5/C-7之間的相關(guān)性證實(shí)了C-6位為羰基。同時(shí)，H-9/C-11，H-9/C-12以及H-13/C-11的相關(guān)信號(hào)表明該化合物在C-11和C-12之間有一個(gè)環(huán)內(nèi)雙鍵。ROESY譜 中，H-1/H-卵之間的相關(guān)性表明C-1位的羥基是a構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜， 以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD 試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0022]該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0024] 實(shí)施例2:藥理作用
[0025]本實(shí)例使用尾靜脈移植K562細(xì)胞建立人白血病N0D/SCID小鼠模型，通過(guò)測(cè)定外周 血白細(xì)胞數(shù)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST)活性與總膽紅素 (TBiL)，白蛋白（Alb)升高，抗氧化酶谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px)、超氧化物歧化酶 (S0D)，谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)，觀察藥物減少肝臟內(nèi)白血病細(xì)胞聚集，降低肝功能損 傷和炎癥因子水平，提高肝組織抗氧化能力等方面的抗移植性人白血病方面的作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028]雄性N0D/SCID小鼠，8~10周齡，體重18~23g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提 供。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 鹽酸半胱氨酸購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例 1。3〇〇，1?^，6311，631?^購(gòu)自南京建成生物工程研究所。幾-10，幾-6￡1134試劑盒購(gòu)自武漢 博士德生物工程有限公司。TUNEL試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所。
[0031] 1.3儀器
[0032] 550酶標(biāo)儀（BI0RAD)，CM1950冰凍切片機(jī)（Leica)，IX71-A12FL/PH熒光顯微鏡 (Olympus)，HFX_IIA光學(xué)顯微鏡(Nikcon)。
[0033] 1.4小鼠分組及模型制備
[0034]動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、鹽酸半胱氨酸組(80mg ? kg<)、化合物（I) 組(80mg ? kg^1)、鹽酸半胱氨酸與化合物（I)組合物組【40mg ? kg"1鹽酸半胱氨酸+40mg ? kg 一1化合物（I )】。除正常組注射等量生理鹽水外，其余組建立移植性人白血病N0D/SCID小鼠模 型：即給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺每只2mg，qd，2d，第3天從尾靜脈注射移植對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562 細(xì)胞(2 X 107個(gè)/只），接種K562細(xì)胞30d后模型建立成功。從第31天開(kāi)始按上述劑量分別腹 腔注射鹽酸半胱氨酸、化合物（I)以及鹽酸半胱氨酸與化合物（I)組合物治療各組小鼠，共 14d，接種K562細(xì)胞45d處死小鼠取材。
[0035] 1.5外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類和肝功能檢測(cè)
[0036]各組小鼠取尾靜脈血，自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定白細(xì)胞總數(shù)，血涂片經(jīng)Wright ' s染 色，光鏡下分類計(jì)數(shù)。取小鼠眼球血制備血清，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)ALT，AST，Alb，TBiL等肝功 能指標(biāo)。
[0037] 1.6肝組織抗氧化能力的檢測(cè)
[0038] 各組小鼠分別取0.5g肝組織，制備10%的組織勻漿，留取上清用于后續(xù)檢測(cè)。BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)各組上清液的蛋白濃度，SOD，MDA，GSH，GSH-Px檢測(cè)按照試劑盒說(shuō) 明書(shū)進(jìn)行。
[0039] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0040]運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。
[0041 ] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2.1對(duì)移植性人白血病模型小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)目的影響
[0043] 接種K562細(xì)胞45d，與正常對(duì)照組比，模型對(duì)照組外周血白細(xì)胞數(shù)顯著增加(P< 0.01)。與模型對(duì)照組比，鹽酸半胱氨酸與化合物（I)組合物組白細(xì)胞數(shù)顯著減少（p< 〇.〇1);與模型對(duì)照組比較，鹽酸半胱氨酸組、化合物（I)組白細(xì)胞數(shù)減少(p<0.05)。結(jié)果見(jiàn) 表1。
[0044] 2.2對(duì)移植性人白血病模型小鼠肝功能指標(biāo)的影響
[0045]與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠血清檢測(cè)肝功能指標(biāo)ALT，AST，TBiL以及肝指 數(shù)均增加，Alb含量降低(P<0.05)。與模型對(duì)照組比較，鹽酸半胱氨酸與化合物（I)組合物 組ALT，AST，TBiL以及肝指數(shù)均顯著減少(P<0.01)，Alb含量顯著升高(P<0.01);與模型對(duì) 照組比較，鹽酸半胱氨酸組、化合物（I)組ALT，AST，TBi L以及肝指數(shù)減少(P<0.05)，Alb含 量升高(P<〇.〇5)。
[0046] 試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
[0047] 2.3對(duì)移植性人白血病模型小鼠肝組織抗氧化損傷能力的影響
[0048]與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠抗氧化酶S0D含量，GSH和GSH-Px活性均顯著 降低，MDA含量顯著增高(P<0.05)。與模型對(duì)照組比較，鹽酸半胱氨酸與化合物（I)組合物 組SOD含量，GSH和GSH-Px活性均顯著升高(P<0.01)，MDA含量顯著降低(P<0.01);與模型 對(duì)照組比較，鹽酸半胱氨酸組、化合物（I)組SOD含量，GSH和GSH-Px活性升高(P<0.05)，MDA 含量降低(P<〇.〇5)。
[0049] 試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
[0050] 表1對(duì)移植性人白血病模型小鼠外周血白細(xì)胞、肝功能血清各指標(biāo)以及肝指數(shù)的 影響
[0052] 表2對(duì)移植性人白血病模型小鼠肝組織SOD，MDA，GSH，GSH-Px的影響
[0054]迄今，白血病的治療仍主要采用大劑量聯(lián)合化療，這種方法對(duì)機(jī)體造血系統(tǒng)和免 疫系統(tǒng)破壞最大，對(duì)全身各組織器官損傷也極大，病人最終多死于化療所致全身衰竭。由于 肝臟特殊的解剖結(jié)構(gòu)和生理功能，抗腫瘤藥物很容易造成肝臟損害，且研究表明，抗白血病 藥物在肝臟內(nèi)潴留時(shí)間較短，且藥物濃度相對(duì)較低，這些因素可能使肝臟成為白血病細(xì)胞 的庇護(hù)所。
[0055]上述結(jié)果表明，鹽酸半胱氨酸、化合物（I )、鹽酸半胱氨酸和化合物（I)組合物治療 白血病模型小鼠是通過(guò)抑制白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)，提高肝組織抗氧化損傷能力，降低炎癥細(xì) 胞因子水平，誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡，以此改善白血病肝臟浸潤(rùn)所致的肝損傷，可以開(kāi)發(fā)成改 善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷的藥物。
[0056]上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種鹽酸半脫氨酸的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸半脫氨酸、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸半脫氨酸的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸半脫氨酸的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將野 馬追粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗 脫10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和 2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為D101型 大孔吸附樹(shù)脂。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備改善白血病肝臟浸潤(rùn)致肝損傷的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2~4任一所述的鹽酸半脫氨酸的藥物組合物在制備改善白血病肝臟浸潤(rùn) 致肝損傷的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/198GK105968082SQ201610380365
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月31日
【發(fā)明人】黃芳
【申請(qǐng)人】黃芳