一種復(fù)合微生物制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。由以下重量份的原料組成：糞腸球菌菌粉0.1~15份、釀酒酵母菌粉0.1~15份、枯草芽孢桿菌菌粉0.1~10份、酵母多糖0.1份、玉米淀粉59.9~74.9份。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明將糞腸球菌、釀酒酵母和枯草芽孢桿菌進(jìn)行有機(jī)組合，充分發(fā)揮各菌種的優(yōu)勢(shì)，能夠適應(yīng)不同宿主和多種條件，具有部分甚至完全替代抗生素、調(diào)整胃腸道生態(tài)平衡、促進(jìn)生長(zhǎng)、提高飼料轉(zhuǎn)化率及增強(qiáng)免疫力等多種功能，可改善動(dòng)物腸道微生物環(huán)境，抑制有害菌生長(zhǎng)，促進(jìn)有益菌增殖；提高動(dòng)物免疫力，增強(qiáng)抗病能力；為動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高飼料利用率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。
【專利說(shuō)明】
一種復(fù)合微生物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于微生物飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)合微生物制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗生素作為藥物或飼料添加劑，大大推動(dòng)了畜牧業(yè)的發(fā)展，但抗生素大規(guī)模使用 于畜牧業(yè)，特別是作為飼料添加劑，其種種弊端越來(lái)越明顯，具有藥物殘留、出現(xiàn)耐藥菌株、 破壞動(dòng)物腸道正常菌群等缺點(diǎn)。為克服抗生素的弊端，世界各國(guó)加強(qiáng)了新型綠色飼料添加 劑的研究和應(yīng)用，特別是微生物飼料添加劑受到了人們的重視，快速發(fā)展起來(lái)。
[0003] 糞腸球菌/'aecaJis)是革蘭氏陽(yáng)性菌，1994年出版的《伯杰氏細(xì) 菌鑒定手冊(cè)》將該菌列為腸球菌屬。糞腸球菌存在于人和大多數(shù)動(dòng)物的腸道內(nèi)，是人體腸道 內(nèi)的重要菌群，能耐受胃酸和膽汁酸。糞腸球菌作為微生物制劑，可以對(duì)宿主胃腸道進(jìn)行微 生態(tài)調(diào)節(jié)，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力。
[0004] 釀酒酵母ce/wisiae)屬于真菌，兼性厭氧的一類微生物。酵母 菌在人或動(dòng)物胃腸道中所占比例較小，但其有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。酵母菌菌體蛋白占干物質(zhì) 的32%~75%，酵母細(xì)胞中含有20多種氨基酸，4. 5%~8. 5%的核糖核酸，和多種維生素，其中B 族維生素含量極其豐富。酵母細(xì)胞壁主要成分有甘露寡糖(6.6%)、β-葡聚糖（57%)、糖蛋 白22%，還有少量的其他蛋白質(zhì)、幾丁質(zhì)、脂類和灰分等。酵母菌細(xì)胞內(nèi)還有豐富的酶類，如 淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、植酸酶、葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶等。釀酒酵母作為微生物制劑，可以 為宿主提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)有益菌的增殖，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，提供動(dòng)物消化能力，促進(jìn) 動(dòng)物的生長(zhǎng)。
[0005] 枯草芽孢桿菌屬于芽孢桿菌類有益菌，具有其它益生菌沒(méi) 有的特點(diǎn)，（1)當(dāng)芽孢桿菌以芽孢的形式存在時(shí)，進(jìn)入人或動(dòng)物胃腸道時(shí)可以耐受胃酸和膽 鹽，且保持高活性；（2)由于芽孢的存在可以耐受100 °C的高溫，在生產(chǎn)制劑制粒的過(guò)程中 損失率比較小，活性高，保存時(shí)間長(zhǎng)；（3)芽孢桿菌類可以產(chǎn)生活性很強(qiáng)的淀粉酶、蛋白酶、 脂肪酶、纖維素酶等多種酶類物質(zhì)，還可以產(chǎn)生某些小環(huán)肽類細(xì)菌素或者一些多肽類物質(zhì)， 其對(duì)腸道中的致病菌均有拮抗作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是抗生素作為藥物或飼料添加劑，具有藥物殘留、出現(xiàn) 耐藥菌株、破壞動(dòng)物腸道正常菌群等缺點(diǎn)，為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種復(fù)合微生物制 劑及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明的目的是以下述方式實(shí)現(xiàn)的： 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0008] 由以下重量份的原料組成：糞腸球菌菌粉0. 1~15份、釀酒酵母菌粉0. 1~15份、枯 草芽孢桿菌菌粉〇. 1~1〇份、酵母多糖〇. 1份、玉米淀粉59. 9~74. 9份。
[0009] 具體步驟如下： (1) 糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7.1 ±0.1，121 °C滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 18-20 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨30~34 g/L，酵母粉9.0~11 g/L， 葡萄糖26~30 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸鈣10 g/L ;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7. 1±0. 1，121°C下滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照2. 5~5. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為34~37 °C，振蕩速度為120~150 r/min的條件下發(fā)酵12~14 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵 液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:20~40的比例混合，得到糞腸球 菌菌粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0±0.1，121 °C滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)22~24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖110~120 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋 白胨 28~32 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0±0. 1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. (FdO%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為27~30 °C，振蕩速度為180~200 r/min下發(fā)酵16~18 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:5~10的比例混合，得到釀酒酵母 菌粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (3) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 g/L，NaCl 5.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7·0±0·2，121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)18~24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮80. 5~85. 5份，玉米粉10~15份，葡 萄糖0. 5份，蛋白胨2份，NaCl 0. 5份，硫酸錳0. 5份，硫酸鎂0. 5份，碳酸鈣0. 5份，料水 比1:0. 8,121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以2. 5°Ρ5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層 紗布封口，35~38°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (4)將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均 勻，即為復(fù)合微生物制劑。
[0010] 相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明將糞腸球菌、釀酒酵母和枯草芽孢桿菌進(jìn)行有機(jī)組合，充 分發(fā)揮各菌種的優(yōu)勢(shì)，能夠適應(yīng)不同宿主和多種條件，具有部分甚至完全替代抗生素、調(diào)整 胃腸道生態(tài)平衡、促進(jìn)生長(zhǎng)、提高飼料轉(zhuǎn)化率及增強(qiáng)免疫力等多種功能，可改善動(dòng)物腸道微 生物環(huán)境，抑制有害菌生長(zhǎng)，促進(jìn)有益菌增殖；提高動(dòng)物免疫力，增強(qiáng)抗病能力；為動(dòng)物提 供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高飼料利用率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。
[0011] 本發(fā)明所使用的菌種糞腸球菌、釀酒酵母和枯草芽孢桿菌均為從健康豬腸道中自 主分離、篩選，具有優(yōu)良益生特性和發(fā)酵特性，功能明確，功效明顯，穩(wěn)定性好。所用菌種均 為農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》所列菌種，可安全用于畜禽、水產(chǎn)動(dòng)物。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 實(shí)施例1 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0013] 由以下重量份的原料組成：糞腸球菌菌粉0. 1~15份、釀酒酵母菌粉0. 1~15份、枯 草芽孢桿菌菌粉〇. 1~1〇份、酵母多糖〇. 1份、玉米淀粉59. 9~74. 9份。
[0014] 具體步驟如下： (1)糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7.1 ±0.1，121 °C滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 18-20 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨30~34 g/L，酵母粉9.0~11 g/L， 葡萄糖26~30 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸鈣10 g/L ;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7. 1±0. 1，121°C下滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照2. 5~5. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為34~37 °C，振蕩速度為120~150 r/min的條件下發(fā)酵12~14 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵 液； f.將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:20~40的比例混合，得到糞腸球 菌菌粉，其活菌數(shù)在2. Ο X 101° cfu/g以上； (2) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6·0±0·1，121 °C滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)22~24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖110~120 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋 白胨 28~32 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0±0. 1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. (FdO%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為27~30 °C，振蕩速度為180~200 r/min下發(fā)酵16~18 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:5~10的比例混合，得到釀酒酵母 菌粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (3) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 g/L，NaCl 5.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7·0±0·2，121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)18~24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮80. 5~85. 5份，玉米粉10~15份，葡 萄糖0. 5份，蛋白胨2份，NaCl 0. 5份，硫酸錳0. 5份，硫酸鎂0. 5份，碳酸鈣0. 5份，料水 比1:0. 8,121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以2. 5°Ρ5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層 紗布封口，35~38°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g,芽孢數(shù)達(dá) 1.4 X 101° cfu/g; (4) 將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均 勻，即為復(fù)合微生物制劑。
[0015] 實(shí)施例2: 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、酵母多糖和玉米淀粉。
[0016] 具體步驟如下： (1)糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7.0,121 °C滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 18 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨30 g/L，酵母粉9.0 g/L，葡萄糖 26 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸 鈣10 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照2. 5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 34 °C，振蕩速度為120 r/min的條件下發(fā)酵12 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:20的比例混合，得到糞腸球菌菌 粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 9,121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)22 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖110 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋白胨 28 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用 氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 9,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即為發(fā)酵培 養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. (FdO%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為27 °C，振蕩速度為180 r/min下發(fā)酵16 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:5的比例混合，得到釀酒酵母菌 粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (3) 將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微生物 制劑。
[0017] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉0. 1kg、釀酒酵母菌粉0. 1 kg、酵 母多糖0. 1 kg、玉米淀粉59. 9 kg。
[0018] 實(shí)施例3: 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、酵母多糖和玉米淀粉。
[0019] 具體步驟如下： (1)糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a.菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0· 05 g/L，乙酸鈉2. 0 g/L ;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7. 1，121 °C滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 19 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨32 g/L，酵母粉10 g/L，葡萄糖 28 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸 鈣10 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照4. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 36 °C，振蕩速度為135 r/min的條件下發(fā)酵13 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:30的比例混合，得到糞腸球菌菌 粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0,121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)23 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖115 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋白胨 30 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用 氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即為發(fā)酵培 養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照7. 5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 28°C，振蕩速度為190 r/min下發(fā)酵16 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:7. 5的比例混合，得到釀酒酵母 菌粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (3) 將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微生物 制劑。
[0020] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉3kg、釀酒酵母菌粉3 kg、酵母多 糖0.1 kg、玉米淀粉63 kg。
[0021] 實(shí)施例4: 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、酵母多糖和玉米淀粉。
[0022] 具體步驟如下： (1)糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7.2,121 °C滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 20 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨34 g/L，酵母粉11 g/L，葡萄糖 30 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸 鈣10 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.2,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 37 °C，振蕩速度為150 r/min的條件下發(fā)酵14 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:40的比例混合，得到糞腸球菌菌 粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.〇8/1，硫酸鎂0.58/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至6.1，1211：滅菌2〇1^11，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖120 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋白胨 32 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用 氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即為發(fā)酵培 養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照10%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 30 °C，振蕩速度為200 r/min下發(fā)酵18 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:10的比例混合，得到釀酒酵母菌 粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (3) 將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微生物 制劑。
[0023] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉6kg、釀酒酵母菌粉6 kg、酵母多 糖0.1 kg、玉米淀粉66 kg。
[0024] 實(shí)施例5 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、酵母多糖和玉米淀粉。
[0025] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉9kg、釀酒酵母菌粉9 kg、酵母多 糖0.1 kg、玉米淀粉69 kg。
[0026] 其他同實(shí)施例2。
[0027] 實(shí)施例6 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、酵母多糖和玉米淀粉。
[0028] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉12kg、釀酒酵母菌粉12 kg、酵母 多糖0. 1 kg、玉米淀粉72 kg。
[0029] 其他同實(shí)施例2。
[0030] 實(shí)施例7 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、酵母多糖和玉米淀粉。
[0031] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉15kg、釀酒酵母菌粉15kg、酵母多 糖0· 1 kg、玉米淀粉74. 9 kg。
[0032] 其他同實(shí)施例2。
[0033] 實(shí)施例8 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0034] 具體步驟如下： (1) 糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7.0,121 °C滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 18 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨30 g/L，酵母粉9. Og/L，葡萄糖 26 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸 鈣10 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照2. 5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 34 °C，振蕩速度為120 r/min的條件下發(fā)酵12 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:20的比例混合，得到糞腸球菌菌 粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 8/1，似(：15.〇8/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至6.8，1211：滅菌2〇1^11，待培養(yǎng)基 冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)18 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮80. 5kg，玉米粉10 kg，葡萄糖0. 5 kg,蛋白胨2 kg,NaCl 0.5 kg,硫酸猛0.5 kg,硫酸鎂0.5 kg,碳酸?丐0.5 kg,料水比1:0. 8， 121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以2. 5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層紗布 封口，35°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f.將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (3)將糞腸球菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微 生物制劑。
[0035] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉0. 1 kg、枯草芽孢桿菌菌粉0. 1 kg、酵母多糖0. 1 kg、玉米淀粉59. 9 kg。
[0036] 實(shí)施例9 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0037] 具體步驟如下： (1) 糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0· 05 g/L，乙酸鈉2. 0 g/L ;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7. 1，121 °C滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 19 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨32 g/L，酵母粉10 g/L，葡萄糖 28 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸 鈣10 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照4%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為35 °C，振蕩速度為135 r/min的條件下發(fā)酵13 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:30的比例混合，得到糞腸球菌菌 粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 8/1，似(：15.08/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至7.0，1211：滅菌2〇1^11，待培養(yǎng)基 冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)21 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮83kg，玉米粉12 kg，葡萄糖0. 5 kg,蛋白胨2 kg,NaCl 0.5 kg,硫酸猛0.5 kg,硫酸鎂0.5 kg,碳酸?丐0.5 kg,料水比1:0. 8， 121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以4%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層紗布封 口，36°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f.將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (3)將糞腸球菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微 生物制劑。
[0038] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉3 kg、枯草芽孢桿菌菌粉2 kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉63 kg。
[0039] 實(shí)施例10 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0040] 具體步驟如下： (1) 糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7. 2,121 °C滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 20 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨34 g/L，酵母粉11 g/L，葡萄糖 30 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸 鈣10 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.2,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 37 °C，振蕩速度為150 r/min的條件下發(fā)酵14 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:40的比例混合，得到糞腸球菌菌 粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 8/1，似(：15.08/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至7.2，1211：滅菌2〇1^11，待培養(yǎng)基 冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮85. 5 kg，玉米粉15 kg，葡萄糖0. 5 kg,蛋白胨2 kg,NaCl 0.5 kg,硫酸猛0.5 kg,硫酸鎂0.5 kg,碳酸?丐0.5 kg,料水比1:0. 8， 121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層紗布封 口，38°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (3)將糞腸球菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微 生物制劑。
[0041] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉6 kg、枯草芽孢桿菌菌粉4kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉66 kg。
[0042] 實(shí)施例11 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0043] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉9 kg、枯草芽孢桿菌菌粉6kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉69 kg。
[0044] 其他同實(shí)施例8。
[0045] 實(shí)施例12 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0046] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉12 kg、枯草芽孢桿菌菌粉8kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉72 kg。
[0047] 其他同實(shí)施例8。
[0048] 實(shí)施例13 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0049] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉15 kg、枯草芽孢桿菌菌粉10kg、 酵母多糖0. 1 kg、玉米淀粉74. 9 kg。
[0050] 其他同實(shí)施例8。
[0051] 實(shí)施例14: 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0052] 具體步驟如下： (1)釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 9,121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)22 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖110 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋白胨 28 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用 氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 9,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即為發(fā)酵培 養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 27 °C，振蕩速度為180 r/min下發(fā)酵16 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f.將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:5的比例混合，得到釀酒酵母菌 粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (2) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 8/1，似(：15.〇8/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至6.8，1211：滅菌2〇1^11，待培養(yǎng)基 冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)18 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮80. 5kg，玉米粉10 kg，葡萄糖0. 5 kg，蛋白胨2份，NaCl 0. 5 kg，硫酸錳0. 5 kg，硫酸鎂0. 5 kg，碳酸鈣0. 5 kg，料水比1:0. 8， 121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以2. 5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層紗布 封口，35°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (3) 將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均 勻，即為復(fù)合微生物制劑。
[0053] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：釀酒酵母菌粉0. 1 kg、枯草芽孢桿菌菌粉0. 1 kg、酵母多糖0. 1 kg、玉米淀粉59. 9 kg。
[0054] 實(shí)施例15 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0055] 具體步驟如下： (1)釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0,121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)23 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖115 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋白胨 30 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用 氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0,121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即為發(fā)酵培 養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照7. 5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 28 °C，振蕩速度為190 r/min下發(fā)酵17 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:7. 5的比例混合，得到釀酒酵母 菌粉，其活菌數(shù)在1. ο X 101° Cfu/g以上； (2) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 8/1，似(：15.08/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至7.0，1211：滅菌2〇1^11，待培養(yǎng)基 冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)21 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮83kg，玉米粉12 kg，葡萄糖0. 5 kg,蛋白胨2 kg,NaCl 0.5 kg,硫酸猛0.5 kg,硫酸鎂0.5 kg,碳酸?丐0.5 kg,料水比1:0. 8， 121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以4%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層紗布封 口，37°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4 X 101° cfu/g; (3) 將釀酒酵母菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微 生物制劑。
[0056] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：釀酒酵母菌粉3kg、枯草芽孢桿菌菌粉2 kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉63 kg。
[0057] 實(shí)施例16 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0058] 具體步驟如下： (1) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.〇8/1，硫酸鎂0.58/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至6.1，1211：滅菌2〇1^11，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖120 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋白胨 32 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用 氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即為發(fā)酵培 養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照10%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為 30 °C，振蕩速度為200 r/min下發(fā)酵18 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:10的比例混合，得到釀酒酵母菌 粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (2) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 8/1，似(：15.08/1;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)？!1至7.2，1211：滅菌2〇1^11，待培養(yǎng)基 冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮85. 5 kg，玉米粉15 kg，葡萄糖0. 5 kg,蛋白胨2 kg,NaCl 0.5 kg,硫酸猛0.5 kg,硫酸鎂0.5 kg,碳酸?丐0.5 kg,料水比1:0. 8， 121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層紗布封 口，38°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (3)將釀酒酵母菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均勻，即為復(fù)合微 生物制劑。
[0059] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：釀酒酵母菌粉6 kg、枯草芽孢桿菌菌粉4 kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉66 kg。
[0060] 實(shí)施例17 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0061] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：釀酒酵母菌粉9 kg、枯草芽孢桿菌菌粉6 kg、酵 母多糖0.1 kg、玉米淀粉69 kg。
[0062] 其他同實(shí)施例14。
[0063] 實(shí)施例18 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0064] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：釀酒酵母菌粉12 kg、枯草芽孢桿菌菌粉8 kg、 酵母多糖o.l kg、玉米淀粉72 kg。
[0065] 其他同實(shí)施例14。
[0066] 實(shí)施例19 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、酵母多糖和玉米 淀粉。
[0067] 步驟（3)中各組分的重量份數(shù)為：釀酒酵母菌粉15 kg、枯草芽孢桿菌菌粉10 kg、 酵母多糖0. 1 kg、玉米淀粉74. 9 kg。
[0068] 其他同實(shí)施例14。
[0069] 實(shí)施例2〇 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0070] 步驟（4)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉0. 1 kg、釀酒酵母菌粉0. 1 kg、枯 草芽孢桿菌菌粉o.l kg、酵母多糖0.1 kg、玉米淀粉59. 9 kg。
[0071] 其他同實(shí)施例1。
[0072] 實(shí)施例21 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0073] 步驟（4)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉3 kg、釀酒酵母菌粉3 kg、枯草芽 孢桿菌菌粉2 kg、酵母多糖0.1 kg、玉米淀粉63 kg。
[0074] 其他同實(shí)施例1。
[0075] 實(shí)施例22 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0076] 步驟（4)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉6 kg、釀酒酵母菌粉6 kg、枯草芽 孢桿菌菌粉4 kg、酵母多糖0.1 kg、玉米淀粉66 kg。
[0077] 其他同實(shí)施例1。
[0078] 實(shí)施例23 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0079] 步驟（4)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉9 kg、釀酒酵母菌粉9 kg、枯草芽 孢桿菌菌粉6 kg、酵母多糖0.1 kg、玉米淀粉69 kg。
[0080] 其他同實(shí)施例1。
[0081] 實(shí)施例24: 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0082] 步驟（4)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉12 kg、釀酒酵母菌粉12 kg、枯草 芽孢桿菌菌粉8 kg、酵母多糖0.1 kg、玉米淀粉72 kg。
[0083] 其他同實(shí)施例1。
[0084] 實(shí)施例25 : 一種復(fù)合微生物制劑，包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的至 少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。
[0085] 步驟（4)中各組分的重量份數(shù)為：糞腸球菌菌粉15 kg、釀酒酵母菌粉15 kg、枯草 芽孢桿菌菌粉10 kg、酵母多糖0. 1 kg、玉米淀粉74. 9 kg。
[0086] 其他同實(shí)施例1。
[0087] 臨床試驗(yàn) 試驗(yàn)例1 :復(fù)合微生物制劑在肉雞中的應(yīng)用 本次試驗(yàn)的復(fù)合微生物制劑為實(shí)施例7制備的產(chǎn)品，選用1日齡健康肉雞雛3000只， 隨機(jī)分為3組，每組1000只。對(duì)照組為日糧中不添加任何添加劑；試驗(yàn)組為全程日糧中添 加0. 1%微生物制劑，飼用管理和飼料變更均相同。于28日齡時(shí)，每組隨機(jī)抽取體重相近的 雞8只(每組重復(fù)4只)，空腹稱個(gè)體體重后屠宰，摘取胸腺、脾臟和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮 重。計(jì)算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，免疫器官指數(shù)以免疫器官鮮重（g)占每1 kg 體重的此例表示，即：免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量+體重X 100%。于42日齡稱重、結(jié)料， 計(jì)算日采食量、日增重和飼料轉(zhuǎn)化率；記錄全期試驗(yàn)雞只死亡情況。
[0088] 如表1和表2所示，試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組肉雞的日增重和日采食量高于對(duì)照組肉 雞，而料肉比較低；試驗(yàn)組的肉雞死亡率也低于對(duì)照組肉雞；在免疫器官指數(shù)方面，對(duì)照組 肉雞的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)均高于對(duì)照組肉雞。說(shuō)明復(fù)合微生物制劑可改善 肉雞腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)有益菌的增殖，增強(qiáng)了肉雞的抗病能力，提高飼料利用率，降低 料肉比。
[0089] 表1復(fù)合微生物制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響
表2復(fù)合微生物制劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響
試驗(yàn)例2 :復(fù)合微生物制劑在豬中的應(yīng)用 本次試驗(yàn)的復(fù)合微生物制劑為實(shí)施例25制備的產(chǎn)品，選用50日齡體重相近、健康的 杜-長(zhǎng)-大三元雜種豬100頭，隨機(jī)分為2組，每組50頭。對(duì)照組為日糧中不添加任何添 加劑；試驗(yàn)組為日糧中添加0. 1%的復(fù)合微生物制劑。分別在65、80、95日齡時(shí)采血，測(cè)定血 清中的IgA、IgG和外周淋巴細(xì)胞變化情況。
[0090] 如表3所示，試驗(yàn)表明，試驗(yàn)組豬血清中IgA、IgG及T淋巴細(xì)胞0D值均均高于對(duì) 照組，說(shuō)明復(fù)合微生物制劑可以提高豬的免疫力，原因在于復(fù)合微生物制劑中的益生菌在 豬腸道內(nèi)增殖并產(chǎn)生細(xì)菌素等有益物質(zhì)，改善腸道內(nèi)微生態(tài)平衡，抑制了病原菌的生長(zhǎng)，從 而增強(qiáng)豬的免疫能力。
[0091] 表3復(fù)合微生物制劑對(duì)豬免疫性能的影響
以上所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不 脫離本發(fā)明整體構(gòu)思前提下，還可以作出若干改變和改進(jìn)，這些也應(yīng)該視為本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)合微生物制劑，其特征在于：包括以下活性組分：糞腸球菌、釀酒酵母、枯草 芽孢桿菌中的至少兩種，以及酵母多糖和玉米淀粉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物制劑，其特征在于：由以下重量份的原料組 成：糞腸球菌菌粉〇. 1~15份、釀酒酵母菌粉0. 1~15份、枯草芽孢桿菌菌粉0. 1~10份、酵母 多糖〇. 1份、玉米淀粉59. 9~74. 9份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種復(fù)合微生物制劑的制備方法，其特征在于：具體步 驟如下： (1) 糞腸球菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，37°C下培養(yǎng)24 h ; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨20 g/L，酵母粉5.0 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1. 0 mL/L，磷酸氫二鉀2. 0 g/L，檸檬酸三銨2. 0 g/L，硫酸鎂0. 2 g/L，硫酸 錳0.05 g/L，乙酸鈉2.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)pH至7.1 ±0.1，121 °C滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，37°C下靜置培養(yǎng) 18-20 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨30~34 g/L，酵母粉9.0~11 g/L， 葡萄糖26~30 g/L，吐溫-80 1.0 mL/L，檸檬酸三銨2.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.05 g/L，碳酸鈣10 g/L ;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7. 1±0. 1，121°C下滅菌20 min， 待培養(yǎng)基冷卻后，即為液體發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照2. 5~5. 0%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為34~37 °C，振蕩速度為120~150 r/min的條件下發(fā)酵12~14 h，即得到糞腸球菌發(fā)酵 液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:20~40的比例混合，得到糞腸球 菌菌粉，其活菌數(shù)在2. 0 X 101° cfu/g以上； (2) 釀酒酵母菌種培養(yǎng)： a. 將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5. 0 g/L，磷酸氫二鉀 1.0 g/L，硫酸鎂0.5 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0±0.1，121 °C滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為30°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)22~24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備液體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖110~120 g/L、紅砂糖20 g/L、蛋 白胨 28~32 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2P04 1.0 g/L、K2HP04 10 g/L、MgS04 1.0 g/L、NaCl 1.0 g/L，用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 0±0. 1，121°C下滅菌20 min，待培養(yǎng)基冷卻后， 即為發(fā)酵培養(yǎng)基； e. 液體發(fā)酵：按照5. (FdO%的接種量，將一級(jí)種子液接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫 度為27~30 °C，振蕩速度為180~200 r/min下發(fā)酵16~18 h，即得到釀酒酵母發(fā)酵液； f. 將發(fā)酵液離心，棄上清液，將沉淀與玉米淀粉按1:5~10的比例混合，得到釀酒酵母 菌粉，其活菌數(shù)在1. 〇 X 101° cfu/g以上； (3) 枯草芽孢桿菌菌種培養(yǎng)： a. 菌種活化：將甘油冷凍保存的菌種在斜面培養(yǎng)基上活化，34 °C培養(yǎng)24 h; b. 制備種子培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：葡萄糖10 g/L，蛋白胨1.0 g/L，酵母粉3.0 g/L，NaCl 5.0 g/L;用氫氧化鈉溶液或稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7·0±0·2，121 °C滅菌20 min，待 培養(yǎng)基冷卻后，即可作為一級(jí)種子培養(yǎng)基； c. 制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)挑取活化的菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在溫度為35°C， 振蕩速度為150 r/min的條件下培養(yǎng)18~24 h，即得一級(jí)種子液； d. 制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的組分包括：麩皮80. 5~85. 5份，玉米粉10~15份，葡 萄糖0. 5份，蛋白胨2份，NaCl 0. 5份，硫酸錳0. 5份，硫酸鎂0. 5份，碳酸鈣0. 5份，料水 比1:0. 8,121 °C滅菌25 min，待培養(yǎng)基冷卻后，即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)； e. 發(fā)酵：以2. 5°Ρ5%的接種量，將一級(jí)種子液接種至固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，用8層 紗布封口，35~38°C下靜置發(fā)酵48 h，每12 h翻勻一次； f. 將固體發(fā)酵物經(jīng)烘干干燥，粉碎，得到枯草芽孢桿菌菌粉，其活菌數(shù)達(dá)2. OX 101° cfu/g，芽孢數(shù)達(dá) 1.4X101Q cfu/g; (4) 將糞腸球菌菌粉、釀酒酵母菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、酵母多糖和玉米淀粉混合均 勻，即為復(fù)合微生物制劑。
【文檔編號(hào)】C12R1/125GK105985916SQ201510040788
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年1月28日
【發(fā)明人】張要齊, 宋志元, 張新蕾, 朱靜靜
【申請(qǐng)人】河南惠通天下動(dòng)物藥業(yè)有限公司