一種水稻抗病相關(guān)基因OsXBP1的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一個(gè)水稻抗病相關(guān)基因OsXBP1的DNA片段及其應(yīng)用，具體利用RNA干擾原理的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將OsXBP1基因的RNAi載體轉(zhuǎn)入水稻品種中花11，抑制水稻中OsXBP1基因的表達(dá)。OsXBP1基因表達(dá)量顯著下降的遺傳轉(zhuǎn)化水稻對(duì)白葉枯病菌的抗性明顯增強(qiáng)，證明OsXBP1基因在水稻抗白葉枯病中發(fā)揮重要作用。
【專利說(shuō)明】
-種水稻抗病相關(guān)基因 OsXBPI的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了一個(gè)水稻抗病相關(guān)基因 OsXBPi的功能 驗(yàn)證，OsXBPI基因表達(dá)量顯著降低的遺傳轉(zhuǎn)化水稻對(duì)白葉枯病菌的抗性明顯增強(qiáng)。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物在生長(zhǎng)的過(guò)程中，受到多種病原物的侵害。植物病原物的種類繁多，包括病 毒、細(xì)菌、真菌和線蟲(chóng)等。病原物侵入植物導(dǎo)致兩種結(jié)果：（1)病原體成功的在寄主植物內(nèi)繁 殖，引起相關(guān)病癥；（2)寄主植物產(chǎn)生抗病反應(yīng)，殺死病原物或阻止其生長(zhǎng)。利用抗性基因資 源改良植物的抗病性，是預(yù)防病害同時(shí)又保護(hù)環(huán)境的根本出路。
[0003] 植物的抗病反應(yīng)是多基因參與調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程。參與植物抗病反應(yīng)的基因分為兩 類：（1)抗病基因，又稱R(resistance)基因和(2)抗病相關(guān)基因。
[0004] 根據(jù)目前人們對(duì)抗病基因功能的認(rèn)識(shí)，運(yùn)類基因的產(chǎn)物主要是作為受體，直接或 間接與病原蛋白相互作用，啟動(dòng)植物體內(nèi)的抗病信號(hào)傳導(dǎo)路徑（Tang等，1996, Science 274: 2060-2063 ; Baker等，1997，Science 276 : 726-733 ; Jia等，2000 ,ΕΜΒΟ J. 19 :4004- 4014;Dang1和Jones,2001，Nature 411:826-833;Nimchuk等，2001iCurr.Opin.Plant Biol.4:288-294)?？共』蚪閷?dǎo)的抗病反應(yīng)強(qiáng)，是很好的基因資源。但由于下述原因，使利 用抗病基因改良植物抗性受到限制：（1)抗病基因的資源有限，如目前知道的抵抗水稻重要 病害白葉枯病的抗病基因少于30個(gè)，抵抗另一水稻重要病害-稻攝病的抗病基因也只有大 約40個(gè)；（2)抗病基因具有病原種類和病原生理小種特異性，抗病范圍有限；（3)因?yàn)椴≡?快速突變，一個(gè)抗病基因的作用往往幾年或者十幾年后就喪失了。
[0005] 抗病相關(guān)基因是指除抗病基因外所有參與抗病反應(yīng)的基因，它們的編碼產(chǎn)物參與 合成植物體內(nèi)抗病信號(hào)分子、參與信號(hào)傳導(dǎo)或參與防衛(wèi)反應(yīng)等。運(yùn)類基因的共同特點(diǎn)是病 原誘導(dǎo)后它們的表達(dá)量升高或減少，因此人們可W根據(jù)病原誘導(dǎo)前后基因的表達(dá)量的差異 大規(guī)模地鑒定植物抗病相關(guān)基因（Maieck等，2000，化1:ure Genet. 26:403-410; Schenk等， 2000，P;roc.化tl.Acad.Sci.USA 97:11655-11660;Zhou等，2002，Science in Qiina 45: 449-467)。目前，人們對(duì)抗病相關(guān)基因的認(rèn)識(shí)有限。根據(jù)已有報(bào)道，絕大多數(shù)抗病相關(guān)基因 單獨(dú)作用時(shí)的抗性能力可能比抗病基因小。但根據(jù)下述原因，它們是值得大力開(kāi)發(fā)的基因 資源：（1)由于絕大多數(shù)抗病相關(guān)基因的產(chǎn)物不需要直接與病原物相互作用，運(yùn)類基因是具 有持久抗性的基因資源；（2)大多數(shù)抗病相關(guān)基因參與的抗病反應(yīng)沒(méi)有病原特異性，因此它 們是具有廣譜抗性的基因資源；（3)運(yùn)類基因的資源豐富。但是，水稻中雖然鑒定了很多抗 病相關(guān)基因（Zhou等，2002;化U等，2004)，運(yùn)些基因在水稻抗病反應(yīng)中的作用機(jī)理、W及單 個(gè)抗病相關(guān)基因是否會(huì)引起水稻抗病表型的改變都不清楚。
[0006] 水稻是世界上重要的糧食作物，但病害的影響常常造成其產(chǎn)量和品質(zhì)的下降。因 此，了解病害的發(fā)病機(jī)制，有助于利用高效途徑改良水稻品種的抗性，控制病害的發(fā)生，減 少或避免植物病害所帶來(lái)的損失。分離克隆抗病相關(guān)基因是對(duì)水稻抗病機(jī)理研究的前提。 目前已報(bào)道多種抗病基因通過(guò)與抗病相關(guān)基因互作來(lái)調(diào)控植物的免疫反應(yīng)，例如水稻中抗 水稻白葉枯病菌基因 Xa21，目前采用酵母雙雜交技術(shù)已鑒定出XB3、XB10、XB15、XB24、BiP3 和0SSERK2等Xa21的互作蛋白，運(yùn)些互作蛋白與Xa21的結(jié)合在抗病反應(yīng)中發(fā)揮重要作用 (Wang et al.,2006;化ng et al.,2008;化rk et al.,2008;Qien et al.,2010;化rk et al. ,2010;化en et al. ,2014)。另外，與抗病基因的應(yīng)用相比，抗病相關(guān)基因的應(yīng)用能提供 植物更為廣譜及長(zhǎng)效的抗性。通過(guò)抑制作為抗病反應(yīng)負(fù)調(diào)控因子的抗病相關(guān)基因的功能進(jìn) 行水稻品種的改良，將進(jìn)一步增強(qiáng)植物的抗病性，拓寬植物的抗譜。運(yùn)些方面是采用常規(guī)植 物育種和改良技術(shù)所不能達(dá)到的。因此如何利用水稻抗病基因的克隆獲得抗病植株成為亟 待解決的問(wèn)題之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的發(fā)明人針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的情況，提供了一個(gè)水稻抗病相關(guān)基因 OsXBPl 的DNA片段及其應(yīng)用，具體利用RNA干擾原理的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將OsXBPl基因的RNAi載體轉(zhuǎn)入 水稻品種中花11，抑制水稻中OsXBP 1基因的表達(dá)。OsXBP 1基因表達(dá)量顯著下降的遺傳轉(zhuǎn)化 水稻對(duì)白葉枯病菌的抗性明顯增強(qiáng)，證明OsXBPl基因在水稻抗白葉枯病中發(fā)揮重要作用。
[0008] 發(fā)明人提供了一個(gè)水稻中抗病相關(guān)基因 OsXBPl完整編碼區(qū)段的核巧酸序列，該基 因參與負(fù)調(diào)控水稻對(duì)白葉枯病的抗性，其核巧酸序列如序列表SEQ ID NO. 1所示，或者基本 上相當(dāng)于SEQ ID NO. 1所示的DNA序列，或者其功能相當(dāng)于SEQ ID NO. 1所示序列的亞片段； 其編碼的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。
[0009] 該基因片段OsXBPl表達(dá)量顯著降低的遺傳轉(zhuǎn)化水稻對(duì)白葉枯病菌的抗性明顯增 強(qiáng)，可見(jiàn)采用抑制表達(dá)之后可W賦予植物對(duì)由白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. ory zae)所引起的病害產(chǎn)生抗病反應(yīng)，獲得高抗病植株。
[0010] 獲得了運(yùn)一片段之后，將運(yùn)一序列與合適的載體連接，可W轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞，產(chǎn)生轉(zhuǎn) 基因植物，發(fā)現(xiàn)抑制OsXBPl基因表達(dá)的遺傳轉(zhuǎn)化水稻對(duì)白葉枯病的抗性顯著增強(qiáng)，證明了 OsXBPl基因在水稻抗白葉枯病中發(fā)揮重要作用，因此證實(shí)了抑制該基因表達(dá)后可W賦予植 物對(duì)由白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)所引起的病害產(chǎn)生抗病反應(yīng)，獲得高 抗病植株。采用運(yùn)種轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)造抗病植物是傳統(tǒng)育種技術(shù)所不能達(dá)到的。
[0011] 綜上所述，本發(fā)明的發(fā)明人在國(guó)際上首次提供了一個(gè)從水稻中分離克隆出的抗病 相關(guān)基因完整編碼區(qū)段的DM片段，并命名為OsXBPl，并利用RM干擾技術(shù)（RM interference, RNAi)抑制目標(biāo)基因在植物體內(nèi)的表達(dá)，來(lái)鑒定該基因在抗病反應(yīng)過(guò)程中所 起作用，最終發(fā)現(xiàn)抑制該基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株抗病能力顯著提高，獲得高抗病植株。
【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1.用定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)水稻材料IR24(對(duì)PX099感?。┖虸RBB13(對(duì)PX099抗 病)接種白葉枯病菌PX099后OsXBPl基因的表達(dá)模式結(jié)果示意圖；
[001引圖中黑色柱形圖表示對(duì)IR24接種PX099后OsXBPl基因的相對(duì)表達(dá)量，灰色柱形圖 表示對(duì)IRBB13接種PX099后OsXBPl基因的相對(duì)表達(dá)量，可W看到在接種后0h、4h、化、24h和 4她OsXBPl基因的相對(duì)表達(dá)水平，可見(jiàn)在感病材料IR24中，接種后4h和化，OsXBPl基因表達(dá) 量顯著提高；
[0014] 圖2.抑制OsXBPl基因表達(dá)的轉(zhuǎn)化材料(OsXBPl-RNAi)接種白葉枯病菌PX099兩周 的發(fā)病結(jié)果示意灰度圖，
[001引其中"WT"為野生型中花11，圖中抑制OsXBPl基因表達(dá)的轉(zhuǎn)化材料接種白葉枯病菌 PX099兩周后的病斑面積顯著低于野生型中花11材料；
[0016] 圖3.用定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)抑制OsXBPl基因表達(dá)的遺傳轉(zhuǎn)化水稻中OsXBPl基因 在對(duì)照材料中花11和To代遺傳轉(zhuǎn)化植株中的表達(dá)量結(jié)果示意圖；
[0017] 圖中縱坐標(biāo)為OsXBPl基因在每份水稻材料中的相對(duì)表達(dá)量(對(duì)照材料WT的表達(dá)量 定為1);
[001引圖4.抑制OsXBPl基因表達(dá)的遺傳轉(zhuǎn)化植株Zrai4Ti代接種白葉枯病菌PX099兩周 后發(fā)病結(jié)果示意圖；
[0019] 圖中縱坐標(biāo)表示每個(gè)單株接種PX099兩周后的發(fā)病面積，"WT"為遺傳轉(zhuǎn)化受體野 生型中花11，"**"表示與對(duì)照中花11的發(fā)病面積相比，轉(zhuǎn)化材料發(fā)病面積極顯著降低(T檢 驗(yàn)，P<0.01)，"*"表示與對(duì)照中花11的發(fā)病面積相比，轉(zhuǎn)化材料發(fā)病面積顯著降低(T檢驗(yàn)，P <0.05)，圖中瓊脂糖凝膠電泳照片中條帶是每個(gè)單株中抗潮霉素基因化t的PCR擴(kuò)增示意 圖，能擴(kuò)增出化t基因的即為陽(yáng)性轉(zhuǎn)化材料；
[0020] 圖5.抑制OsXBPl基因表達(dá)的遺傳轉(zhuǎn)化植株ZDH23T1代接種白葉枯病菌PX099兩周 后發(fā)病結(jié)果示意圖；
[0021] 圖6.抑制OsXBPl基因表達(dá)的遺傳轉(zhuǎn)化植株ZDH29T1代接種白葉枯病菌PX099兩周 后發(fā)病結(jié)果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] W下實(shí)施例中進(jìn)一步定義本發(fā)明，根據(jù)W上的描述和運(yùn)些實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可W確定本發(fā)明的基本特征，并且在不偏離本發(fā)明精神和范圍的情況下，可W對(duì)本發(fā)明 作出各種改變和修改，W使其適用各種用途和條件。除特殊注明外，本發(fā)明所采用的均為本 領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)；
[0023] 實(shí)施例1: OsXBPl基因的結(jié)構(gòu)分析和分離克隆
[0024] 1.從水稻品種中分離克隆OsXBPl基因
[0025] 采用SIGAMA公司的TRIZ化REAGENT試劑抽提水稻感白葉枯病品種IR24的RNA，用 康為世紀(jì)公司HiFiScript cDNA Synthesis試劑盒的進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNAdW該cDNA為模 板，通過(guò)PCR技術(shù)，利用引物0sXBP 1-F (5' -ATGAAGGGGGCCAAATCCAAGG-3'，其序列如序列表 569 10^.3所示）和03乂8?1-3(5'-(：1'〔61'〔41'〔61'(：1'1^4了〇：1'(：1'1'(：-3'，其序列如序列表569 ID NO. 4所示)擴(kuò)增獲得OsXBPl基因的DNA片段。
[00%] 其PCR反應(yīng)程序?yàn)轭A(yù)變性94°C3min，變性94°C30s，退火55°C30s，延伸72°C45s，反 應(yīng)30個(gè)循環(huán)，后延伸72°C5min。所獲得的基因命名為OsXBPl基因，其核巧酸序列如SEQ N0.1 所示，該基因含7個(gè)內(nèi)含子區(qū)，其中第514-557位、第677-790位、第870-927位、第1085-1129 位、第1229-1309位、第1397-1507位和第1806-1826位堿基為編碼堿基，編碼一種含HMG盒的 高遷移率蛋白，由157個(gè)氨基酸組成，其氨基酸序列如SEQ NO. 2所示。
[0027] 實(shí)施例2: OsXBP 1基因在水稻品種中的表達(dá)模式分析
[0028] 為了證實(shí)OsXBPl基因參與抗病反應(yīng)的調(diào)控，我們采用定量RT-PCR技術(shù)分析了感病 材料IR24和抗病材料IRBB13中OsXBPl基因在白葉枯病菌PX099誘導(dǎo)后的表達(dá)模式。白葉枯 病菌接種采用剪葉法化auffman等，1973，An improved technique for evaluating resistance of rice varieties to Xanthomonas oryzae,Plant Dis.Rep.57,537-541) 對(duì)成株期的水稻進(jìn)行接種。分別在接種后化、地、化、24h和4她取接種葉片，抽提總RNA。利用 iQ?5定量PCR儀(Bio-Rad公司）、SYBR Green巧光嵌入染料做定量RT-PCR分析，接種后不同 時(shí)間點(diǎn)OsXBPl基因的表達(dá)差異。定量RT-PCR技術(shù)中的OsXBPl基因特異PCR引物是引物1，5/- 1'1'仇6了4466461'1^44664644-3'其序列如序列表569 10^.5所示和引物2,5'- CACCTATCACCGGCTGCTTT-3/其序列如序列表SEQ ID ^.6所示。^水稻肌動(dòng)蛋白的1^斗0?產(chǎn) 物作為樣品量一致性對(duì)照，肌動(dòng)蛋白PCR引物序列是ActinF巧/ -TGCTATGTACGTCGCCATCCAG- 3/其序列如序列表沈0 10側(cè).13所示)和4(：^誠(chéng)(5/-44了646了44〇：4〔6口'〇：61^4-3/，其序列 如序列表SEQ ID NO. 14所示）。
[0029] 分析結(jié)果顯示白葉枯病菌接種后，感病材料IR24中OsXBPl基因被誘導(dǎo)表達(dá)，而抗 病材料IRBB13中OsXBPl則沒(méi)有顯著變化（圖1)，說(shuō)明OsXBPl基因參與抗白葉枯病反應(yīng)的負(fù) 調(diào)控。
[0030] 實(shí)施例3: OsXBPl基因的植物表達(dá)載體構(gòu)建
[0031] 本發(fā)明采用RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)，通過(guò)抑制水稻品種中花11中 OsXBPl基因的表達(dá)，驗(yàn)證該基因的功能。運(yùn)個(gè)技術(shù)途徑的主要機(jī)理:將目標(biāo)基因的部分片段 W反向重復(fù)的形式與能夠表達(dá)雙鏈RNA(double strand RNA，dsRNA)的載體連接，通過(guò)遺傳 轉(zhuǎn)化將該載體導(dǎo)入植物中。獲得的轉(zhuǎn)化植株大量表達(dá)與目標(biāo)基因部分片段同源的dsRNA。運(yùn) 些dsRNA迅速形成短干擾RNA(sho;rt inte;rfe;ring RNA，s iRNA)。運(yùn)些S iRNA與目標(biāo)基因的 轉(zhuǎn)錄子(mRNA)互補(bǔ)配對(duì)，在細(xì)胞內(nèi)特殊酶的作用下使目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄子降解，從而在mRNA 水平上抑制目標(biāo)基因的功能。研究者可W通過(guò)轉(zhuǎn)基因植株表型的改變，驗(yàn)證目標(biāo)基因的功 能。RNA干擾技術(shù)已被廣泛用于基因功能的驗(yàn)證(Smith等，2000，Na化re 407:319-320)。
[0032] 本發(fā)明用引物3巧/ -AAGACTAGTGGTACCGGAATCTGACAAGTCCAAGT-3^，帶下劃線堿基 為限制性內(nèi)切酶5口61和牡111識(shí)別位點(diǎn)，其序列如序列表56〇10^).7所示）和引物4(5/- AAGGAGCTCGGATCCTCTAACATACGCAAACTGAT-3^，帶下劃線堿基為限制性內(nèi)切酶SacI 和BamHI 識(shí)別位點(diǎn)，其序列如序列表SEQ ID NO. 8所示），實(shí)施例1中分離克隆的OsXBPl基因片段為模 板，PCR擴(kuò)增待轉(zhuǎn)化的DNA片段，PCR反應(yīng)程序如下:預(yù)變性94°C 3min，變性94°C 30s，退火55°C 30s，延伸72°C30s，反應(yīng)30個(gè)循環(huán)，后延伸72°C5min。
[0033] 構(gòu)建OsXBPl基因片段的第一重復(fù)鏈(正向鏈）：用ΚρηΙ和BamHr消化部分PCR產(chǎn)物及 載體dsl301，消化完全后在75°C水浴lOmin滅活限制性內(nèi)切酶，置于冰上，用T4DNA連接酶進(jìn) 行連接反應(yīng)。熱激后獲得的克隆質(zhì)粒用引物3和4擴(kuò)增篩選陽(yáng)性克隆。
[0034] 構(gòu)建OsXBPl基因片段的第二重復(fù)鏈(反向鏈）：用Spel和SacI消化剩余的PCR產(chǎn)物 和上述篩選出的連接了第一重復(fù)鏈的陽(yáng)性克隆質(zhì)粒，消化完全后再75°C水浴lOmin滅活限 制性內(nèi)切酶，置于冰上，用T4DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)。熱激后獲得的克隆質(zhì)粒用SacI和 Spel雙酶切消化反應(yīng)篩選陽(yáng)性克隆，命名為dsl301: :0sXBPl，作為抑制表達(dá)載體，然后電擊 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞EHA105,保存菌株用作農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化。
[00巧]實(shí)施例4:0sXBPl基因的功能驗(yàn)證
[0036] 采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法化in和Zhang,Opt imis ing the t issue culture conditions for high efficiency tr曰nsform曰tion of indie曰 rice，2005， Plant Cell Rep.23:540-547)將抑制表達(dá)載體導(dǎo)入感病水稻品種中花11，獲得的轉(zhuǎn)基因材 料命名為ZDH。本發(fā)明共獲得獨(dú)立轉(zhuǎn)化植株40株。用dsl301載體上二鏈克隆位點(diǎn)的側(cè)翼序列 設(shè)計(jì)引物52。2(5'-1'1'機(jī)44^(：此441'此444-3'，其序列如序列表56〇10^.9所示）/52尺2 (5'-TAGGCGTCTCGCATATCTC-3'，其序列如序列表沈Q ID顯.10所示）^及載體的篩選標(biāo)記 Hpt基因側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物HptF巧/-GATCGTTATGTTTATCGGCACTTTG-3/，其序列如序列表SEQ 10側(cè).11所示)/化11?(5'-6了4(：1'1'(：了4〔4〔46〇：41^；6了〇：4-3'，其序列如序列表沈9 10側(cè).12 所示)分別對(duì)獲得轉(zhuǎn)化材料進(jìn)行陽(yáng)性鑒定，W兩對(duì)引物鑒定均為陽(yáng)性的材料作為陽(yáng)性植株， 進(jìn)行陽(yáng)性鑒定的PCR反應(yīng)程序如下:預(yù)變性94°C3min，變性94°C30s，退火55°C30s，延伸72°C 45s，反應(yīng)30個(gè)循環(huán)，后延伸72°C5min。對(duì)獲得轉(zhuǎn)化材料在孕穗期接種白葉枯病菌PX099，每 個(gè)單株接種5片完全伸展的葉片，接種后14天進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，W野生型中花11作為對(duì)照材 料，進(jìn)行T檢驗(yàn)分析。發(fā)現(xiàn)抑制OsXBP 1表達(dá)的植株對(duì)PX099的抗性明顯增強(qiáng)（表1)(如圖2所 示)。
[0037]表1部分To代轉(zhuǎn)化植株對(duì)白葉枯病菌PX099的反應(yīng) [00；3 引
[0039]
[0040] 為進(jìn)一步驗(yàn)證轉(zhuǎn)化植株的抗病能力是否與OsXBPl基因的表達(dá)量相關(guān)，本發(fā)明從表 1中所列轉(zhuǎn)化植株中選取5個(gè)株系，抽提總RNA，利用iQ?5定量PCR儀(Bio-Rad公司）、SYBR Green巧光嵌入染料做定量RT-PCR分析，比較轉(zhuǎn)化植株和對(duì)照材料中OsXBPl基因表達(dá)量。 PCR反應(yīng)引物是引物1和引物2。W水稻肌動(dòng)蛋白的RT-PCR產(chǎn)物作為樣品量一致性對(duì)照。該實(shí) 施例中引物與實(shí)施例2中的引物相同。
[0041] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示OsXBPl基因的表達(dá)量與植株的抗性密切相關(guān)（圖2和圖3所示）。 OsXBP 1基因表達(dá)量顯著降低的轉(zhuǎn)化植株對(duì)PX099的抗性顯著增強(qiáng)，說(shuō)明OsXBP 1基因的編碼 產(chǎn)物在水稻對(duì)白葉枯病的抗病反應(yīng)中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。為進(jìn)一步證實(shí)OsXBP 1基因在水稻對(duì) 白葉枯病抗性中的作用，本發(fā)明從To代轉(zhuǎn)化植株中選取了3個(gè)株系進(jìn)行Τι代的重復(fù)接種驗(yàn) 證。結(jié)果顯示，3個(gè)Τι代株系中，OsXBPl基因抑制表達(dá)的轉(zhuǎn)化植株(含載體dsl301: :0sXBPl) 抗性顯著高于對(duì)照中花11 (P<〇. 05)，而不含dsl301::OsXBPl載體的植株對(duì)PX099的抗性與 對(duì)照中花11無(wú)顯著差異（圖4、圖5和圖6)。運(yùn)進(jìn)一步說(shuō)明了基因 OsXBPl在水稻對(duì)白葉枯病抗 性中的作用?？梢?jiàn)采用抑制OsXBPl表達(dá)之后可W賦予植物對(duì)由白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)所引起的病害產(chǎn)生抗病反應(yīng)，從而可W改良水稻對(duì)白葉枯病的抗性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種水稻抗病相關(guān)基因 OsXBPl，其基因的序列如序列表SEQ ID N0.1所示，其編碼的 氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。2. 權(quán)利要求1所述水稻抗病相關(guān)基因 OsXBP 1在增加水稻對(duì)白葉枯病抗性中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07K14/415GK106011147SQ201610523239
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月5日
【發(fā)明人】?jī)?chǔ)昭輝, 丁新華, 巨延虎, 孔令廣
【申請(qǐng)人】山東農(nóng)業(yè)大學(xué)