組織保護(hù)活性多肽sl6及其應(yīng)用
【專利摘要】組織保護(hù)活性多肽SL6及其應(yīng)用，本發(fā)明公布了一系列用于治療奶牛乳腺炎的多肽。本發(fā)明多肽可作為一種飼料添加劑。本發(fā)明多肽喂飼奶牛，對(duì)奶牛乳腺炎癥，具有良好的治愈和預(yù)防作用。
【專利說(shuō)明】
組織保護(hù)活性多肽SL6及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一組織保護(hù)活性多肽。
【背景技術(shù)】
[0002] 奶牛乳腺炎是當(dāng)前危害奶牛業(yè)發(fā)展，制約奶牛生產(chǎn)的一種重要疾病，值得奶牛生 產(chǎn)者及畜牧工作者的高度重視和關(guān)注。發(fā)病情況及發(fā)病率的發(fā)生已成為一個(gè)世界性的問(wèn) 題。我國(guó)奶牛的發(fā)生更高，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州中研究所對(duì)我國(guó)西北、華北、東北、中南、西 南地區(qū)22個(gè)城市32個(gè)奶牛場(chǎng)的10371頭成年泌乳牛進(jìn)行了調(diào)查，臨床型平均發(fā)病率為 33.41 % (9.7%~55.6%)，并對(duì)其中5個(gè)地區(qū)20個(gè)奶牛場(chǎng)的3384頭泌乳期奶牛進(jìn)行了隱性 檢查。結(jié)果表明隱性頭平均陽(yáng)性檢出率73.91%(62.07%~93.95%)，乳區(qū)平均陽(yáng)性檢出率 為44.74% (35.29 %~72.81 % )，兩類的發(fā)病率均高于國(guó)外報(bào)道。
[0003] 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)牛乳腺炎的治療主要是抗生素和疫苗，但抗生素在治療牛乳腺炎癥 中存在諸多不利的因素。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中，ZL201110235105.1提供了一種對(duì)牛乳腺炎具有治療作用的蛋白，為 了提高蛋白的活性，針對(duì)蛋白的活性位點(diǎn)進(jìn)行特異性的突變和取代，從而尋找活性更高的 變體是常規(guī)的做法。為了進(jìn)一步提高該蛋白的生物活性，
【申請(qǐng)人】通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，針對(duì)該申 請(qǐng)的蛋白氨基酸序列中特定的位點(diǎn)進(jìn)行了點(diǎn)突變，從而獲得了一系列比該多肽本身具有更 高生物學(xué)活性的治療牛乳腺炎的多肽。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明涉及的多肽，具有下列結(jié)構(gòu)： (SLl)：Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val； (SL2)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val； (SL3)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val Ser； (SL 4)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val Pro ； (SL 5)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Pro ； (SL 6)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val； (SL 7)：Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val； (SL 8)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val； (SL 9)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro lie Asp Ala Leu Gly Val Ser； (SL 10)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys lie Pro lie Asp Ala Leu Gly Val Ser； (SL 11)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys lie Pro lie Asp Ala Leu Gly Val； (SL 12)：Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys lie Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser； (SL 13)：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys lie Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser Ser； (SL 14):lie Glu Pro Ser Pro Gly Lys lie Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser Ser； 對(duì)照 1:Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val; 對(duì)照2: Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ala Leu Gly Val 〇
[0006] 本發(fā)明的多肽合成后，可以做成游離態(tài)形式，也可以做成陽(yáng)離子鹽，如:TFA鹽(三 氟乙酸鹽），HC1鹽(鹽酸鹽），醋酸鹽形式。
[0007] 采用本發(fā)明多肽配制奶牛飼料添加劑具有對(duì)于奶牛乳腺的保護(hù)作用和對(duì)乳腺炎 的治療，預(yù)防作用。
[0008] 本發(fā)明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治 療。這些藥物劑型涵蓋:注射溶液、片劑、霜?jiǎng)⒛z囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身 給藥。劑量?jī)?yōu)選在10-5~10-2mg/kg體重的范圍內(nèi)，以0.1%-0.5%的較高濃度全身或局部 給藥。對(duì)于具體治療的最佳劑量的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 實(shí)施例1:多肽的化學(xué)合成及穩(wěn)定性和毒性試驗(yàn)： 采用本領(lǐng)域常用的Fmoc固相法化學(xué)合成SL1-SL14以及對(duì)照1和對(duì)照2所述的多肽。
[0010] 將本發(fā)明多肽于40°c保溫76天和120天測(cè)試其穩(wěn)定性。穩(wěn)定性試驗(yàn)采用HPLC方法 進(jìn)行測(cè)定。水溶液中多肽的濃度為〇? 2% (w/v):柱，Kromasi 1100,5u，250x 4.6mm;流動(dòng)相， 0.1 %三氟乙酸的水/乙睛溶液(0至50vo 1. % )，在25分鐘內(nèi)梯度洗脫，流速lml/min;檢測(cè)： UV，218nm。通過(guò)檢測(cè)可以表明，本發(fā)明多肽穩(wěn)定性非常高。其溶液在40度，120天后依然具有 98%以上的目標(biāo)物質(zhì)。對(duì)照肽1和2也在120天后分別具有96%和90%的目標(biāo)物質(zhì) 采用小鼠灌胃和注射方式測(cè)定本發(fā)明多肽的急性毒性。溶液配制： 采用本發(fā)明多肽25毫克，加滅菌水至20毫升，配置成濃度為1.25毫克/毫升的溶液，供 口服灌胃。
[0011] 采用本發(fā)明多肽25毫克，加滅菌水至10毫升，配置成濃度為2.5毫克/毫升的溶液， 供腹腔注射用。給藥劑量計(jì)算： 小鼠口服灌胃給藥體積為40毫升/公斤體重，故給藥劑量為：1.25mg/ml*40ml/kg = 50m/kg〇
[0012] 小鼠腹腔注射給藥體積為20毫升/公斤體重，故給藥劑量為：2 ? 5mg/ml*20ml/kg = 50mg/kg〇
[0013] 取健康小鼠80只，分四組實(shí)驗(yàn)。給藥后，在第7天和14天，觀察，稱重。并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束 后稱重，處死，解剖觀察內(nèi)部器官。
[0014]結(jié)論： 1、小鼠一日一次口服灌胃給藥，給藥劑量50毫克/公斤體重，未見(jiàn)明顯急性毒性反應(yīng)。 LD50>50mg/kg。
[0015] 2、小鼠一日一次腹腔注射給藥，給藥劑量50毫克/公斤體重，未見(jiàn)明顯急性毒性反 應(yīng)。LD50 > 50mg/kg。
[0016]由上所述，本發(fā)明多肽在50毫克每公斤體重劑量下未見(jiàn)明顯急性毒性表現(xiàn)。對(duì)照 肽同樣也未見(jiàn)明顯急性毒性表現(xiàn)。
[0017] 實(shí)施例2 含本發(fā)明多肽的飼料添加劑的制備。
[0018] 配方如下：
具體實(shí)施過(guò)程中，先把多肽和淀粉或者黃糊精一起噴粉干燥或者冷凍干燥，然后和其 他的配料混合均勻。
[0019] 實(shí)施例3:含本發(fā)明多肽的飼料的制備。
實(shí)施例4:對(duì)牛乳腺炎癥的治療作用 材料和方法： 1.在奶牛飼養(yǎng)場(chǎng)，選取有臨床癥狀的乳腺炎發(fā)病奶牛40頭為一組，共兩組。一組喂飼本 發(fā)明多肽8毫克/頭.天。一共21天。另一組采用常規(guī)治療辦法治療。
[0021] 2.在奶牛飼料廠，選取臨界臨床癥狀的亞健康奶牛40頭為一組，共2組。其中一組 喂飼本發(fā)明多肽，4毫克/頭.天。一共21天。另一組采用常規(guī)喂養(yǎng)。
[0022]喂飼過(guò)程中，觀察臨床癥狀的改善，同時(shí)每次取乳后，計(jì)量牛乳中體細(xì)胞的數(shù)目。 結(jié)果如下：
由上述結(jié)果可以看出，采用本發(fā)明多肽喂飼的奶牛組，在體細(xì)胞數(shù)目上明顯小于對(duì)照 組。在治愈和預(yù)防牛乳腺炎癥狀上，明顯好于對(duì)照組。
[0023]將實(shí)施2和實(shí)施例3制備得到的產(chǎn)品直接添加制作為飼料用于奶牛的飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果與上述結(jié)果相似。說(shuō)明，本發(fā)明的多肽可以用于制備奶牛的飼料以及相應(yīng)的藥物，去用于 乳腺炎的治療。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種多肽，其特征是，該多肽的氨基酸序列如SEQ ID No. 6所示。2. -種藥物制劑，其特征是，權(quán)利要求1記載的多肽，選擇與一種或多種藥物載體組合， 制成多種藥物劑型，所述藥物劑型涵蓋:注射溶液、片劑、霜?jiǎng)?、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等 劑型局部或全身給藥。3. -種飼料，其特征是，權(quán)利要求1或2記載的多肽或藥物制劑，添加入飼料或以飼料添 加劑等各種方式制備的飼料。4. 權(quán)利要求1或2記載的多肽或藥物制劑或飼料在制備用于組織炎癥的治療的藥物中 的應(yīng)用。5. 權(quán)利要求1、2或3記載的多肽、藥物制劑或飼料在制備用于治療奶牛乳腺炎的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23K50/10GK106032389SQ201610312161
【公開(kāi)日】2016年10月19日
【申請(qǐng)日】2014年6月22日
【發(fā)明人】馬恒標(biāo)
【申請(qǐng)人】馬恒標(biāo)