一類白藜蘆醇衍生物、其制備方法及作為lsd1抑制劑的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開一類白藜蘆醇類衍生物、合成方法及其作為組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶1抑制劑的應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明所述的化合物具有如下通式：通式III中，R優(yōu)選氫、羥基、甲氧基、硝基或鹵素，X 代表N原子、C原子。該類化合物對組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶1具有很好的抑制作用，可作為進一步開發(fā)的候選或者先導(dǎo)化合物用于開發(fā)抗腫瘤、抗艾滋病等疾病治療藥物。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明具體涉及一類白藜蘆醇類衍生物、制備方法及其作為組蛋白賴氨酸特異性 去甲基化酶1抑制劑的應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。 一類白藜蘆醇衍生物、其制備方法及作為LSD1抑制劑的應(yīng)用
【背景技術(shù)】
[0002] 組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶l(Histone Lysine Specific Demethylase 1， LSD1)是第一個被發(fā)現(xiàn)的組蛋白賴氨酸去甲基化酶（Y.Shi et al，Cell，2004,29,941-953) 1SD1是一個黃素腺嘌呤二核苷酸依賴性的去甲基化酶，通過與不同的分子伴侶結(jié)合 作用于不同的底物，從而產(chǎn)生不同的生物學(xué)功能。LSD1通過CoREST與靶基因結(jié)合，能夠特異 性的去除H3K4(Histone 3，Lysine 4)的單或雙甲基化，導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄抑制。當(dāng)LSD1和雄激 素受體或者雌激素受體結(jié)合時，能特異性的去除H3K9(Histone 3，Lysine 9)的單或雙甲基 化，引起激素受體依賴的基因轉(zhuǎn)錄激活。LSD1通過調(diào)節(jié)組蛋白與其他蛋白的相互作用，影響 基因轉(zhuǎn)錄的激活與抑制，染色體失活等重要生命過程(Lee MG et al，Nature，2005,437， 432-435)。
[0003] 目前的研究發(fā)現(xiàn)LSD1與腫瘤、病毒性感染、代謝性疾病、炎癥等疾病的發(fā)生發(fā)展均 有著密切的關(guān)系。LSD1在胃癌、前列腺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中均是過度表達并異常激 活，導(dǎo)致抑癌基因異常沉默，抑制其活性或下調(diào)表達量可抑制腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，是 目前抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點靶標(biāo)。西班牙Oryzon公司報道的苯環(huán)丙胺類LSD1抑制劑，目前 正在進行Π 期臨床試驗，用于治療白血病(Zheng YC et al，Med Res Rev，2015,35，1032-1071);LSD1/C〇REST復(fù)合物可以通過去甲基化Tat蛋白K51位點激活HIV病毒的轉(zhuǎn)錄，用小分 子抑制劑抑制LSD1活性可以抑制感染T細胞內(nèi)HIV病毒的激活（Sakane N et al，PLoS Pathog，2011，7，e100 2184)。在水痘帶狀皰疹病毒和單純皰疹病毒感染的人細胞中，降低 LSD1的表達量或者抑制其活性，可以降低病毒mRNA和病毒蛋白的表達量(Liang Y et al， Nat Med，2009,15,1312-1317) ;LSD1通過與組蛋白去乙?；窰DACs相互協(xié)同作用，抑制 ILla、IL10，IL6等促炎細胞因子的表達(Janzer A et al，Biochem Biophys Res Commun， 2012,18,665-670)〇
[0004] 目前報道的LSD1類型總體而言依然匱乏，并且大部分仍然停留在實驗室研究和臨 床研究階段，因此，獲得新型、高活性的LSD1抑制劑，對于研究LSD1的生物學(xué)功能、開發(fā)新型 的抗腫瘤、抗病毒等疾病治療藥物，具有十分重要意義。
[0005] 白藜蘆醇(Resveratrol)是來源于葡萄、桑椹等植物中的天然多酚類化合物，由于 其具有抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性，引起了人們的廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇對LSD1 具有一定的抑制活性。在酶水平的活性評價實驗中，白藜蘆醇能夠抑制LSD1對甲基化p53以 及H3K4me2底物的去甲基化，IC 5Q為15μΜ，活性強于陽性對照苯環(huán)丙胺。
[0006] 為了發(fā)現(xiàn)新型LSD1小分子抑制劑，通過對白藜蘆醇的進一步結(jié)構(gòu)優(yōu)化，得到一類 白藜蘆醇衍生物，該類化合物具有顯著的LSD1抑制活性，目前尚未見有該類化合物的合成 及LSD 1抑制活性的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的一個目的在于提供一類白藜蘆醇衍生物，為新藥物篩選提供可能。
[0008] 本發(fā)明的另一個目的在于提供此類白藜蘆醇衍生物的制備方法及其作為組蛋白 賴氨酸特異性去甲基化酶1 (LSD1)抑制劑的應(yīng)用。
[0009] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一類白藜蘆醇衍生物結(jié)構(gòu)通式為：
[0011] 通式III中，R位于A環(huán)上除去連接位置的其它任何位置，在A環(huán)上為單取代或多取 代，取代基指:氫、羥基、甲氧基、硝基或鹵素，其中，鹵素包括F、Cl、Br、I。
[0012] 通式III中，取代基 在B環(huán)上為單取代。 >
[0013] 通式III中，X代表N原子或者C原子。
[0014] 優(yōu)選地，R代表的取代基和取代位置、X代表的原子如下所示：
[0015] (1汴基團為3,4-乜0!1，8環(huán)為3位取代，乂 =(：;
[0016] (2)R 基團為 3,4-di0H，B 環(huán)為 4 位取代，X = C;
[0017] (3)R基團為4_0H，B環(huán)為3位取代，X = C;
[0018] (4)R基團為4-OH，B環(huán)為4位取代，X = C;
[0019] (5)R 基團為 3,4_diF，B 環(huán)為 4 位取代，X = C;
[0020] (6)R 基團為 2-F-4,5-di0H，B 環(huán)為 3 位取代，X = C;
[0021] (7)R 基團為 2-F-4,5-di0H，B 環(huán)為 4 位取代，X = C;
[0022] (8) R基團為 2-Br-4，5-d iOH，B環(huán)為 3 位取代，X = C;
[0023] (9) R基團為 2-Br-4，5-d iOH，B環(huán)為 4位取代，X = C;
[0024] (10汴基團為3,5-乜0!1，8環(huán)為3位取代，父=(：;
[0025] (11)R 基團為 3-F-4_0H，B 環(huán)為 3 位取代，X = C;
[0026] (12) R基團為 3-F-4-OH，B環(huán)為 4位取代，X = C;
[0027] (13)R基團為H，B環(huán)為3位取代，X = N;
[0028] 為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明化合物的合成反應(yīng)流程如下圖所示：
[0030] 具體步驟為：
[0031] 苯甲醛或取代苯甲醛和氰基取代芐基膦酸二乙酯，在無水DMF中，強堿性化合物存 在下，室溫攪拌反應(yīng)，生成化合物I，其中，所述強堿性化合物選自叔丁醇鉀、甲醇鈉、氫化 鈉、叔丁醇鈉;如化合物I中沒有甲氧基取代，則化合物I在甲醇溶液中，三乙胺存在下，與鹽 酸羥氨回流反應(yīng)得R不為羥基的化合物III。
[0032]將含甲氧基取代的化合物I溶于二氯甲烷中，-20~-80°C低溫條件下，加入三溴化 硼，脫甲基得R為羥基的化合物II?；衔颕I在甲醇溶液中，三乙胺存在下，與鹽酸羥氨回流 反應(yīng)得結(jié)構(gòu)中含有羥基的化合物III。
[0033]本發(fā)明優(yōu)點：本發(fā)明合成的化合物均具有很強的LSD1抑制活性，大部分化合物的 LSD1抑制IC5Q均小于ΙμΜ，活性均強于陽性對照藥物苯環(huán)丙胺。本發(fā)明的化合物代表著一類 結(jié)構(gòu)全新的LSD1抑制劑，為LSD1抑制劑類藥物的研發(fā)提供了基礎(chǔ)，為LSD1的生物學(xué)功能研 究提供了有效工具?？勺鳛檫M一步開發(fā)的候選或者先導(dǎo)化合物用于開發(fā)抗腫瘤、抗艾滋病 等疾病治療藥物，且合成方法簡單，收率高，總收率達62 %以上，有利于推廣應(yīng)用。
【附圖說明】
[0034]圖1為本發(fā)明化合物細胞水平LSD1抑制活性評價柱狀圖，圖中* *代表ρ〈0.05,具 有統(tǒng)計學(xué)意義。
【具體實施方式】
[0035]下面舉實施例對本發(fā)明技術(shù)方案作詳細說明。
[0036]實施例1(Ε)-4_(3,4-二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-1)的制備
[0038] 將化合物3，4-二甲氧基苯甲醛（1 · 66g，1 Ommo 1)和4-氰基芐基膦酸二乙酯(2 · 79g， 1 lmmol)溶于無水DMF(lOmL)中，冰浴攪拌下慢慢加入叔丁醇鉀（2.24g，20mmol)，加畢室溫 反應(yīng)3小時，將反應(yīng)體系慢慢加入到冰水中（40mL)，有白色固體洗出，抽濾，水洗，收集固體， 用丙酮重結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得白色固體2.21g，收率83.4% Jp :102-1031^?匪R (400MHz,CDCl3)57.64(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.58(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.19(d,lH,J=16.4Hz), 7.10(m,2H),6.98(d,lH ,J=16.4Hz),6.90(d,lH ,J = 8.0Hz),3.97(s,3H),3.93(s,3H).13C 匪R(101MHz，CDC13)S149.76,149.22,142.11,132.48,132.22,129.36,126.59,124.74, 120·76，119·17，111·19，110·10，108·88，55·98，55·93·HRMS(ESI)calcd for Ci7Hi6N〇2[M+ H] +:266.1176，F(xiàn)ound:266.1179.
[0039]實施例2(E)-4-(2-氟-4,5-二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-2)的制備
[00411 按實施例1的方法，用2-氟-4,5-二甲氧基苯甲醛（1.84g，10mmol)替換3,4_甲氧基 苯甲醛，得白色固2.128，收率74.9%。]\^:130-131°(：。1!1匪1?(4001!^，〇)(：13)37.66((1，2!1，了 = 8.0Hz),7.61(d,2H ,J = 8.0Hz) ,7.36(d, 1H ,J= 16.0Hz) ,7.06(d, 1H ,J = 8.0Hz), 7.04(d, lH，J=16.0Hz),6.69(d，lH，J = 12.0Hz)，3.95(s，3H)，3.92(s，3H).13C NMR(101MHz,CDC13) 5156.68,154.24,150.50,150.40,145.64,145.62,142.00,132.51,126.37,126.32, 124.47,124.44,119.09,115.29,115.16,110.44,108.35,108.30,100.30,100.02,56.46, 56.24. HRMS(ESI) ca 1 cd for C17H15FNO2 [M+H]+: 284.1081, Found: 284.1081.
[0042]實施例3(E)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-3)的制備
[0044] 按實施例1的方法，用2-溴-4，5-二甲氧基苯甲醛（1.23g，5mmol)替換3，4-二甲氧 基苯甲醛，得白色固體 1.31g，收率76.3%。]\^:149-151°(： ,Η NMR(400MHz，CDC13)S7.67((1, 2H,J = 8.0Hz) ,7.63(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.55(d,lH,J=16.0Hz) ,7.16(s,lH) ,7.08(s,lH), 6.95(d, 1H,J= 16.0Hz) ,3.97( s,3H) ,3.92( s,3H) ,13C NMR( 101MHz , CDCb) δ150.10 , 148.74,141.70,132.55,130.93,128.19,127.31,126.97,119.04,115.74,115.54,110.69, 108.68,56.25,56.16 . HRMS (ESI )calcd for Ci7Hi4BrNNa〇2 [M+Na] +: 366.0106 , Found: 366.0101.
[0045] 實施例4(E)-4-(3-氟-4-甲氧基苯乙烯基)苯甲氰(1-4)的制備
[0047]按實施例1的方法，用3-氟-4-甲氧基苯甲醛（1.54g，lOmmo 1)替換3，4-二甲氧基苯 甲醛，得白色固體2.02g，收率80.1% Jp: 103-1041:.? NMR(400MHz，DMS0)S7.82(d，2H，J = 8.0Hz),7.74(d,2H ,J = 8.0Hz) ,7.59(d, 1H ,J= 16.4Hz) ,7.41 (d, 1H ,J = 8.0Hz), 7.37(s, 1H) ,7.27(d，lH，J= 16.4Hz) ,7.21(t，lH, J = 8.8Hz) .13C 匪R(101MHz,DMS0)S153.34， 150.91，147.89，147.79，142.36，133.06，131.38，130.26，130.20，127.37，126.37，124.80， 124.77,119.53,114.27,113.93,113.75,109.72,56.48.HRMS(ESI)calcd for CieHnFNO [M-H]-:252.0830,Found:252.0830.
[0048]實施例5(E)-4_(4-甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-5)的制備
[0050] 按實施例1的方法，用4-甲氧基苯甲醛（1.36g，10mmol)替換3,4_二甲氧基苯甲醛， 得白色固體 1.70g，收率72.7% Jp: 113-114Γ</Η 匪R(400MHz，CDC13)S7.64((1,2H，J = 8·0Ηζ)，7·58(d，2H，J = 8.0Hz)，7.51(d，2H，J = 8.8Hz)，7.21(d，lH，J= 16·4Ηζ) ,6.93-6.99 (m，3H)，3.87(s，3H) .13C 匪R(101MHz，CDC13)160.09,142.24,132.48,131.97,129.07, 128.30,126.58,124.55,119.21,114.32,110.04,55.39.HRMS(ESI)calcd for CieHisNNaO [M+Na]+:258.0889,Found:258.0893.
[00511實施例6(E)-3-(3,4-二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-6)的制備
[0053]按實施例1的方法，用3-氰基芐基膦酸二乙酯替換4-氰基芐基膦酸二乙酯，得白色 固體2.34g，收率88.3% Jp :147-148t^HRMSCESDcalcd for Ci7Hi6N〇2[M+H] + : 266.1176， Found :266.1177.
[0054]實施例7(E)-3-(3,5-二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-7)的制備
[0056] 將化合物3，5-二甲氧基苯甲醛（1.66g，1 Ommo 1)和3-氰基芐基膦酸二乙酯(2.79g， 1 lmmol)溶于無水DMF(lOmL)中，冰浴攪拌下慢慢加入叔丁醇鉀（2.24g，20mmol)，加畢室溫 反應(yīng)3小時，將反應(yīng)體系慢慢加入到冰水中（40mL)，有白色固體洗出，抽濾，水洗，收集固體， 用丙酮重結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得白色固體2.10g，收率79.2 % Jp : 114-115 °C。4 NMR (400MHz，CDCl3)S7.78(s，lH)，7.73(d，lH，J = 8.0Hz)，7.56(d，lH，J = 8.0Hz)，7.49(t，lH，J = 8.0Hz),7.12(d,lH ,J=16.0Hz) ,7.06(d,lH ,J=16.0Hz) ,6.69(d, 2H ,J = 2.4Hz) ,6.46 (t，lH，J = 2.4Hz)，3.86(s，6H).13C NMR(101MHz，CDC13)S161.07，138.41，138.34，131.29， 130.81,130.60,129.93,129.50,126.69,118.81,112.93,104.87,100.64,55.43.HRMS (ESI)calcd for Ci7Hi6N02[M+H] +:266.1176,Found:266.1179.
[0057] 實施例8(E)-3_(2-氟-4,5_二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-8)的制備
[0059] 按實施例7的方法，用2-氟-4,5-二甲氧基苯甲醛（1.84g，10mmol)替換3,5_甲氧基 苯甲醛，得白色固體2.148，收率75.5%。]\^:130-132°(：。1!1匪1?(40冊!^，〇0(：13)37.78(8， lH)，7.75(d，lH，J = 8.0Hz)，7.55(d，lH，J = 8.0Hz)，7.49(t，lH，J = 8.0Hz)，7.30(d，lH，J = 16.0Hz),7.05(d,lH ,J = 8.0Hz),7.01(d,lH ,J=16.0Hz),6.96(d,lH ,J=12.0Hz),3.95(s, 3H),3.91(s,3H),13C NMR(101MHz,CDC13)δ 156.53,154.10,150.27,150.17,145.61, 145.58,138.76,130.63,130.31,129.83,129.49,125.92,125.87,123.43,123.40,118.82, 115.32,115.19,112.93,108.36,108.31,100.31,100.02,56.45,56.23.HRMS(ESI)calcd for C17H15FNO2 [M+H] +: 284.1081, Found: 284.1081.
[0060] 實施例9(E)-3-(2-溴-4,5-二甲氧基苯乙烯基)苯甲氰(1-9)的制備
[0062] 按實施例7的方法，用2-溴-4，5-二甲氧基苯甲醛（1.23g，5mmol)替換3，5-二甲氧 基苯甲醛，得白色固體2.388，收率69.1%。]\^:138-140°(：。1!1匪1?(4001抱，0)(：13)57.80(8， lH)，7.78(d，lH，J = 8.0Hz)，7.57(d，lH，J = 8.0Hz)，7.50(t，lH，J = 8.0Hz)，7.48(d，lH，J = 16·4Ηζ)，7·14(s，1H)，7.07(s，1H)，6.91(d，lH，J=16.4Hz)，3.97(s，3H)，3.92(s，3H). 13C 匪R(101MHz，CDC13)S149· 94,148.72,138.47,130.84,130.52,130.07,129.88,129.55， 128.26,126.84,118.80,115.52,115.49,112.98,108.64,56.24,56.15.HRMS(ESI)calcd for Ci7Hi4BrNNa〇2[M+Na] +: 366.0106,found: 366.0109.
[0063]實施例10(E)-3-(3-氟-4-甲氧基苯乙烯基)苯甲氰（1-10)的制備
[0065] 按實施例7的方法，用3-氟-4-甲氧基苯甲醛（1.54g，10mm〇l)替換3,5_二甲氧基苯 甲醛，，得白色固體2.03 8，收率80.3%。]\^:9〇-92°(：。1!1匪1?(40冊!^，0150)58.04(8，1!〇， 7.88(d,lH,J = 2.0Hz) ,7.71 (d,lH,J = 2.0Hz), 7.59( t,lH,J = 8.0Hz) ,7.55(d,lH,J = 16.4Hz),7.35-7.39(m，2H),7.17-7.22(m,2H),3.87(s,3H) .13C 匪R(101MHz,DMS0)S 153.36,150.94,147.70,147.59,138.96,131.39,131.08,130.39,130.17,130.15,129.95, 125.88,124.48,124.45,119.26,114.39,114.37,113.77,113.59,112.35,56.51.HRMS (ESI)calcd for Ci6HnFN0[M-H]_:252.0830,Found:252.0830.
[0066] 實施例ll(E)-3_(4-甲氧基苯乙烯基)苯甲氰(1-11)的制備
[0068] 按實施例7的方法，用4-甲氧基苯甲醛（1.36g，10mmol)替換3,5-二甲氧基苯甲醛， 得白色固體2.1(^，收率89.2%。]\^:137-139°(：。 1!1匪1?(4001抱，0)(：13)37.76(8，1!〇,7.72 (d，lH，J = 8.0Hz)，7.44-7.53(m，4H)，7.15(d，lH，J= 16.0Hz) ,6.92-6.96(m，3H)，3.86(s， 3H) .13C 匪R(101MHz，CDC13)S159·92,138.95,130.84,130.29,129.60,129.44,129.14， 128.12,124.03,118.93,114.29,112.85,55.38.HRMS(ESI)calcd for Ci6Hi3NNaO[M+Na]+: 258.0889，F(xiàn)ound:258.0891.
[0069] 實施例12(R)-3-(2-(吡啶-4-某）乙烯基)-苯甲氰（1-12)的制備
[0071] 將3-氰基芐基膦酸二乙酯(2.79g，llmmol)溶于叔丁醇（10mL)中，冰浴攪拌下慢慢 加入叔丁醇鉀(2.24g，20mmol)，加畢冰浴下攪拌20分鐘，然后，慢慢加入吡啶-4-甲醛的叔 丁醇溶液（1. 〇7g，lOmmol，5mL)，加畢改為室溫反應(yīng)1小時。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系慢慢加 入到冰水中（40mL)，有白色固體洗出，抽濾，水洗，收集固體，用丙酮重結(jié)晶，抽濾，真空干 燥，得白色固體 1.88g，收率91.2%。]\^:144-145°(： ,Η MMR(400MHz，CDC13)S8.65((1,2H，J = 6.0Hz) ,7.83(s,lH) ,7.78(d, 1H,J = 8.0Hz) ,7.63(d, 1H,J = 8.0Hz) ,7.54(t, 1H,J = 8.0Hz) ,7.40(d,2H,J = 6.0Hz) ,7.30(d,lH,J=16.4Hz) ,7.12(d,lH,J=16.4Hz) ,13C NMR (101MHz,CDC13)5150.45,143.57,137.44,131.77,131.01,130.61,130.34,129.72, 128.72,121.00,118.49,113.23.HRMS(ESI)calcd for Ci4HiiN2[M+H] +:207.0917,Found: 207.0918
[0072] 實施例13(E)-4_(3,4-二氟-苯乙烯基)苯甲氰(1-13)的制備
[0074] 按實施例1的方法，用3，4-二氟苯甲醛（1.42g，1 Ommo 1)替換3，4-二甲氧基苯甲醛， 得白色固體2.0g,收率83.3%。]\^:103-105°(： ,Η NMR(400MHz，CDC13)S7.74-7 ·85(ι?，5H)， 7.41-7.53(m，3H) ,7.37(d，lH，J=16.0Hz) .13C 匪R(101MHz，DMS0)δ 151.52,151.37， 151.08,150.92,149.06,148.91,148.58,148.42,141.86,134.89,134.86,134.79,133.12, 130.48,128.63,128.04,127.66,124.83,124.79,124.76,124.73,119.41,118.38,118.21, 115.59,115.42,110.27.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi〇F2N[M+H]+:242.0776, Found : 242.0773.
[0075] 實施例14(E)-4_(3,4-二羥基苯乙烯基)苯甲氰(II-l)的制備
[0077] 將化合物1-1 (398mg，1.5mmol)用無水二氯甲烷（10mL)溶解，氮氣保護，-35 °C攪拌 下，慢慢加入三溴化硼的二氯甲燒溶液(2.25g，9mmo 1，5mL)，加畢，反應(yīng)體系慢慢升至室溫， 室溫攪拌過夜反應(yīng)。將反應(yīng)體系慢慢加入到冰水中（30mL)，有黃白色固體析出，過濾，水洗， 收集固體，真空干燥，得黃白色固體。 1H MMR(400MHz，DMS0)S9.28(br，lH)，9.03(br，lH)， 7.79(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.74(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.32(d,lH,J=16.4Hz) ,7.05(d,lH,J = 2.0Hz) ,7.03(d,lH,J= 16.4Hz) ,6.95(dd,lH,Ji = 2.0Hz, J2 = 8.0Hz) ,6.77 (d,lH,J = 8.0Hz).13C NMR(101MHz，DMS0)Sl46.96，145.97，142.96，133.23，132.97，128.44，127.11, 123.75，119.87，119.66，116.21，114.26，109.05.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi〇N〇2[M-H]-: 236.0717,Found:236.0716.
[0078] 實施例15 (E) -4-( 2-氟-4，5-二羥基苯乙烯基)苯甲氰（I1-2)的制備
[0080]按實施例14的方法，用化合物I - 2替換化合物I -1，得黃白色固體2 8 6 m g，收率 74.7% 〇Mp: 234-235 °0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.84(br, 1H) ,8.98(br, 1H), 7.80(d, 2H ,J = 8.0Hz),7.76(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.35(d,lH,J=16.0Hz) ,7.11(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.09(d, 1H ,J=16.0Hz),6.63(d,lH ,J=12.0Hz) ,13C NMR( 101MHz ,DMS0)5l55.50,153.11,147.96, 147.85,142.68,142.66,142.60,133.02,127.33,126.07,126.02,125.03,119.57,114.51, 114.38，113.14，113.09，109.54，103.72，103.46.HRMS(ESI)calcd for Ci5H9FN〇2[M-H]-: 254.0623，F(xiàn)ound:254.0622.
[0081 ]實施例16 (E) -4- (2-溴-4，5-二羥基苯乙烯基)苯甲氰(II -3)的制備
[0083]按實施例14的方法，用化合物I - 3替換化合物I -1，得黃白色固體3 9 5 m g，收率 83.3%〇1?:196-197〇0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.88(br, 1H) ,9.37(br, 1H), 7.83(d, 2H ,J = 8.0Hz) ,7.75(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.42(d,lH,J= 16.0Hz) ,7.24(s,lH) ,7.07(d,lH,J = 16.0Hz),7.00(s，lH).13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl48.10,146.06,142.25,133.15,130.60， 127.46,127.10,126.81,119.51,119.46,113.81,113.28,109.85.HRMS(ESI)calcd for Ci5H9BrN〇2 [M-H]-: 313 · 9822，F(xiàn)ound: 313 · 9822 ·
[0084]實施例17(E)-4-(3-氟-4-羥基苯乙烯基)苯甲氰(II-4)的制備
[0086] 按實施例14的方法，用化合物I -4替換化合物I -1，得黃白色固體2 7 6mg，收率 76.9%〇1?:162-163〇0〇^ NMR(400MHz ,DMSO)5l〇. 18(br, 1H) ,7.81 (d, 2H ,J = 8,4Hz), 7.73 (d,2H,J = 8.4Hz) ,7.52(dd,lH,Ji = 2.0Hz j2 = 8.4Hz),7.38(d,lH,J=16.4Hz),7.28(dd, 1H,Ji = 1.6Hz,J2 = 8.4Hz) ,7.20(d,lH,J= 16.4Hz) ,6.99( t,lH,J = 8.8Hz) ,13C NMR (101MHz,DMS0)5152.87,150.47,145.98,145.86,142.55,133.05,131.77,131.75,128.93, 128.86,127.26,125.47,124.65,124.63,119.57,118.33,118.30,114.52,114.34， 109·51·HRMS(ESI)calcd for Ci5H9FN0[M-H] -:238·0674，F(xiàn)ound:238·0669·
[0087] 實施例18(E)-4_(4-羥基苯乙烯基)苯甲氰（II-5)的制備
[0089] 按實施例14的方法，用化合物I - 5替換化合物I -1，得黃白色固體2 6 5 m g，收率 79.8% 〇Mp: 180-181 °0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.76(br, 1H), 7.80(d, 2H ,J = 8.0Hz), 7.73 (d,2H, J = 8.0Hz) ,7.49(d,2H, J = 8.4Hz) ,7.39(d, 1H, J=16.4Hz) ,7.12(d, 1H, J = 16.4Hz),6.81(d,2H ,J = 8.4Hz).13C NMR( 101MHz ,DMS0)5l58.57,142.95,133.01,132.81, 129.03,127.89,127.09,123.87,119.64,116.14,109.13.HRMS(ESI)calcd for C15H10NO [M-H]-:220.0768,Found:220.0769.
[0090] 實施例19(E)-3_(3,4-二羥基苯乙烯基)苯甲氰(II-6)的制備 I
[0092] 按實施例14的方法，用化合物1-6替換化合物1-1，得土黃色固體294mg，收率 82.6% Jp: 142-143°C ,Η NMR(400MHz，DMS0)S9.11(br，2H)，8.03(s，lH)，7.88((1,1H，J = 8.0Hz),7.66(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.55(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.28(d,lH,J = 16.0Hz) ,7.03(d, 1H ,J = 2.0Hz) ,6.98(d,lH ,J=16.0Hz) ,6.91 (dd, 1H ,Ji = 2.0Hz ,J2 = 8.0Hz) ,6.77(d, 1H ,J =8·0Hz).13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl46.66,145.93,139.48,131.88,131.05,130.50, 130.26,129.76,128.54,123.19,119.53,119.38,116.20,114.07,112.25.HRMS(ESI)calcd for C15H10NO2[M-H]-: 236.0717,Found: 236.0709.
[0093] 實施例20(E)-3-(3,5-二羥基苯乙烯基)苯甲氰（II-7)的制備
[0095] 按實施例14的方法，用化合物I -7替換化合物I -1，得土黃色固體2 71 mg，收率 76.187-189°C ,Η NM7R(400MHz，DMS0)S9.34(br，2H)，8.09(s，lH)，7.93(d，lH，J = 8.0Hz),7.71(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.58(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.28(d,lH,J = 16.0Hz) ,7.11(d, 1H ,J=16.0Hz),6.47(s,2H),6.20(s,1H).13C NMR( 101MHz ,DMS0)5l59.05,138.93,138.67, 131.97.131.53.131.14.130.30.130.25.126.18.119.31.112.29.105.44.103.33. HRMS (ESI)calcd for Ci5Hi〇N〇2[M-H] -:236.0717，F(xiàn)ound:236.0712.
[0096] 實施例21(E)-3_(2-氟-4,5_二羥基苯乙烯基)苯甲氰(II-8)的制備
[0098] 按實施例14的方法，用化合物1-8替換化合物1-1，得白色固體317mg，收率82.7%。 ΜριΙδθ-ΙδΤΓο^ NMR(400MHz,DMS0)59.77(br,lH) ,9.06(br,lH) ,8.07(s,lH),7.91(d, 1H,J = 8.0Hz) ,7.69(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.57(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.32(d,lH,J=16.0Hz), 7.07(d,lH,J = 8.0Hz),7.05(d,lH,J=16.0Hz),6.62(d,lH,J=12.0Hz).13C NMR(101MHz, DMS0)5155.34,152.95,147.62,147.51,142.62,142.60,139.18,131.18,130.97,130.31, 130.10,125.65,125.60,123.89,119.30,114.60,114.47,113.10,113.05,112.32,103.74, 103 · 48 ·HRMS(ESI)calcd for Ci5H9FN〇2[M-H]-: 254· 0623，F(xiàn)ound: 254· 0619 ·
[0099] 實施例22 (E) -3- (2-溴-4，5-二羥基苯乙烯基)苯甲氰(II -9)的制備
[0101] 按實施例14的方法，用化合物1-9替換化合物1-1，得白色固體361mg，收率76.2%。 Μρ:168-16%~</Η NMR(400MHz，DMS0)S9.81(br，lH)，9.38(br，lH)，8.01(s，lH)，7.90(d， 1H ,J = 8.0Hz) ,7.71 (d,lH,J = 8.0Hz) ,7.58( t,lH,J = 8.0Hz) ,7.36(d,lH,J= 16.0Hz), 7.19(s,lH),7.00(m,3H).13C NMR(101MHz,DMS0)5l47.83,146.00,138.82,131.28,131.12, 130.41,130.37,129.49,127.03,126.72,119.45,119.23,113.75,112.96,112.39.HRMS (ESI)calcd for Ci5H9BrN〇2[M-H]_:313.9822,Found:313.9822.
[0102] 實施例23(E)-3-(3-氟-4-羥基苯乙烯基)苯甲氰(11-10)的制備
[0104]按實施例14的方法，用化合物I-10替換化合物I-1，得白色固體264mg，收率 73.7% 〇Mp: 127-129 °0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)5l0.13(s, 1H) ,8.02(s, 1H) ,7.85(d, 1H ,J = 8.0Hz) ,7.69 (d,lH,J = 8.0Hz) , 7.58( t,lH,J = 8.0Hz) ,7.44(dd, 1H,Ji = 2.0Hz, Ji = 12.8Hz) ,7.35(d,lH,J=16.0Hz) ,7.25(dd,lH,Ji = 2.0Hz,Ji = 8.0Hz) ,7.15(d,lH,J = 16.0Hz),6.99(t,lH ,J = 8.0Hz).13C NMR( 101MHz ,DMS0)5l52.87,150.47,145.72,145.59, 139.11.131.26.130.89.130.50.130.48.130.35.129.84.129.05.128.99.124.94.124.33, 124.30,119.30,118.34,118.31,114.31,114.13,112.32.HRMS(ESI)calcd for C15H9FNO [M-H]-:238.0674,Found:238.0667.
[0105]實施例24(E)-3-(4-羥基苯乙烯基)苯甲氰（II-11)的制備
[0107]按實施例14的方法，用化合物I-11替換化合物I-1，得黃白色固體259mg，收率 77.8% 〇Mp: 189-191 °0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.70(br, 1H) ,8.02(s, 1H) ,7.87(d, 1H ,J = 8.0Hz),7.67(d,lH,J = 8.0Hz),7.54(t,lH,J = 8.0Hz),7.46(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.35(d,lH, J = 16.0Hz) ,7.07((1,1H，J= 16.0Hz) ,6.81((1,2H，J = 8.0Hz) .13C 匪R(101MHz，DMS0)S 158.30,139.48,131.49,131.07,130.56,130.30,129.72,128.74,128.00,123.32,119.36， 116·10，112·28·HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi〇NO[M-H]-:220·0768，F(xiàn)ound:220·0766·
[0108] 實施例25(Z)-4-((E)-3,4-二羥基苯乙烯基)-Ν'-羥基苯甲脒（III-l)的制備
[0110]將化合物11-1(23711^，11111]1〇1)和鹽酸輕胺（20911^，31]11]1〇1)用甲醇（1〇111〇溶解，室溫 攪拌下加入三乙胺(303mg，3mmol)，加畢，回流反應(yīng)6個小時。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系真空 濃縮，濃縮物用乙酸乙酯、水溶解，分取乙酸乙酯層，依次用水(2 X 20mL)，飽和食鹽水（1 X 20mL)洗滌。無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾后，粗品用硅膠柱層析分離純化(石油醚:丙酮=1: 1)，得白色固體化合物16911^，收率62.5%。]\^:167-168°(：。1!1匪1?(4001抱，0150) 59.65(1^， lH)，9.09(br，2H)，7.66(d，2H，J = 8.0Hz)，7.54(d，2H，J = 8.0Hz)，7.14(d，lH，J= 16.4Hz)， 7.01(s,lH),6.95(d,lH ,J=16.4Hz) ,6.89(d, 1H ,J = 8.0Hz) ,6.75(d, 1H ,J = 8.0Hz) ,5.81 (s，2H).13C NMR(101MHz，DMS0)Sl51.06，146.22，145.91，138.55，132.07，129.76，129.02, 126·17，126·02，124·86，119·20，116·19，113·83·HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi4N2〇2[M-H]-: 269.0932,Found :269.0931.
[0111] 實施例26(Z)-4-((E)-2-氟-4,5-二羥基苯乙烯基)4'-羥基苯甲脒（111-2)的制 備
[0113]按實施例2 5的方法，用化合物II -2替換化合物11 -1，得白色固體2 0 2mg，收率 70.4%〇1?:193-194〇0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.68(br, 2H) ,9.01(br, 1H) ,7.68(d,2H ,J = 8.0Hz),7.57(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.19(d,lH,J=16.0Hz) ,7.08(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.02(d, lH，J=16.0Hz)，6.61(d，lH，J=12.0Hz)，5.84(s，2H) .13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl55.11, 152.73,151.04,147.14,147.03,142.59,138.27,132.48,127.23,127.18,126.36,126.09， 121.57,115.03,114.90,112.81,112.76,103.71,103.45.HRMS(ESI)calcd for C15H12FN2O3 [M-H]-:287.0837,Found:287.0832.
[0114] 實施例27(Z)-4-((E)-2-溴-4,5-二羥基苯乙烯基)4'-羥基苯甲脒（111-3)的制 備
[0116] 按實施例25的方法，用化合物II-3替換化合物11-1，得白色固體288mg，收率 82.5%〇1?:184-185 〇0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.69(br, 2H) ,9.34(br, 1H), 7.70(d, 2H ,J = 8.0Hz),7.56(d,2H ,J = 8.0Hz),7.29(d,lH ,J=16.0Hz) ,7.21 (s, 1H) ,6.98(s, 1H) ,6.94(d, lH，J=16.0Hz)，5.83(s，2H) .13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl50.98，147.45，146.01，137.96, 132.80,128.23,127.39,127.36,126.49,126.19,119.42,113.48,112.71.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi5BrN2〇3 [M+H]+ :349.0183, Found: 349.0187.
[0117] 實施例28(Z)-4-((E)-3-氟-4-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-4)的制備、
[0119] 按實施例25的方法，用化合物II-4替換化合物11-1，得白色固體201mg，收率 73.6% Jp: 184-186Γ</Η NMR(400MHz，DMS0)S9.69(br，2H)，7.36-7.67(m，5H) ,6.95-7.23 (m，4H)，5.83(s，2H).13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl68.02，152.90，151.03，150.51，145.32， 145.20,138.20,132.46,129.54,129.47,128.40,126.58,126.34,126.08,123.95,118.31， 114.12,113.94.HRMS(ESI)calcd for C15H14FN2O2[M+H]+ :273.1034,Found:273.1031.
[0120] 實施例29(Z)-4-((E)-4-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-5)的制備
[0122] 按實施例2 5的方法，用化合物II -5替換化合物11 -1，得白色固體2 0 8mg，收率 81.9%〇1?:192-194〇0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.66(br, 1H) ,9.62(br, 1H) ,7.67(d,2H ,J = 8.0Hz),7.55(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.45(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.21(d,lH,J = 16.4Hz) ,7.05(d, lH，J=16.4Hz)，6.79(d，2H，J = 8.0Hz)，5.83(s，2H) .13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl57.90, 151.10,138.58,132.10,129.40,128.44,126.16,126.06,124.99,116.05.HRMS(ESI)calcd for C15H15N2O2[M+H]+ :255.1128,Found: 255.1127.
[0123] 實施例30(Z)-3-((E)-3,4-二羥基苯乙烯基)-Ν'-羥基苯甲脒（III-6)的制備
[0125]按實施例2 5的方法，用化合物II -6替換化合物11 -1，得白色固體19 2mg，收率 71.0% dp: 210-211〇0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.65(br, 1H) ,9.08(br,2H),7.84(s, 1H), 7.54(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.35(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.14(d,lH,J= 16.0Hz) ,7.01 (d,lH,J = 2.0Hz) ,6.95(d,lH, J=16.0Hz) ,6.90(dd,lH,Ji = 2.0Hz,j2 = 8.0Hz) ,6.75(d,lH,J = 8.0Hz)，5.87(s，2H).13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl51.24，146.19，145.91，137.85，134.15, 129.67,128.99,128.87,127.16,125.18,124.47,123.25,119.13,116.20,113.80.HRMS (ESI)calcd for Ci5Hi4N2〇2[M-H] -:269.0932，F(xiàn)ound:269.0925.
[0126] 實施例31(Z)-3-((E)-3,5-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-7)的制備
[0128] 按實施例2 5的方法，用化合物II -7替換化合物11 -1，得白色固體217mg，收率 80.4% 〇Mp:85-87°0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.67(br, 1H) ,9.30(br,2H),7.88(s, 1H),7.58 (d,2H,J = 8.0Hz),7.38(t,lH,J = 8.0Hz),7.14(d,lH,J=16.4Hz),7.07(d,lH,J = 16.4Hz) ,6.46(d，2H，J = 2.4Hz) ,6.19(t,lH,J = 2.4Hz) ,5.89(s,2H) .13C 匪R(101MHz, DMS0)5159.04,151.16,139.12,137.35,134.18,129.81,128.92,128.09,127.62,125.05, 123.63,105.18,102.90.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi5N2〇3[M+H]+:271·1077,Found: 271.1079.
[0129] 實施例32(z)-3-((E)-2-氟-4,5-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-8)的制備
[0131] 按實施例2 5的方法，用化合物II -8替換化合物11 -1，得白色固體2 2 3mg，收率 77.4% Jp: 171-172Γ ,Η NMR(400MHz，DMS0)S9.66(br，2H)，9.02(br，1H) ,7.87(s，lH)， 7.58(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.53(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.37(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.22(d,lH,J = 16.0Hz),7.08(d,lH ,J = 8.0Hz),7.02(d,lH ,J=16.0Hz),6.62(d,lH ,J=12.0Hz),5.89(s, 2H).13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl55.10，152.72，151.14，147.13，147.01，142.61，137.61, 134.17,128.96,127.49,124.86,123.20,121.52,114.99,114.86,112.73,112.68,103.71, 103 · 45 ·HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi2FN2〇3[M-H] -: 287 ·0837，F(xiàn)ound: 287 ·0832 ·
[0132] 實施例33(Z)-3-((E)-2-溴-4,5-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-9)的制備
[0134]按實施例2 5的方法，用化合物II -9替換化合物11 -1，得白色固體3 0 3mg，收率 86.7^01^:66-681^? 匪R(400MHz，DMS0)S9.67(br，3H)，7.87(s，lH)，7.59(d，lH，J = 8.0Hz),7.54(d,lH,J = 8.0Hz) ,7.40(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.30(d,lH,J = 16.0Hz) ,7.21(s, 1H)，6.98(s，lH)，6.94(d，lH，J = 16.0Hz)，5.89(s，2H) .13C 匪R(101MHz，DMS0)Sl51.19, 147.46,146.02,137.30,134.31,129.08,128.55,127.70,127.39,127.36,125.17,123.34， 119.41，113.52,112.64.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi5BrN2〇3[M+H]+:349.0183,Found 349.0180.
[0135] 實施例34(Z)-3-((E)-3-氟-4-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（ΙΠ -10)的制備
[0137] 按實施例25的方法，用化合物11-10替換化合物11-1，得白色固體204mg，收率 75.1 %〇Mp:189-190°0〇^ NMR(400MHz,DMSO)5l〇.〇5(br,1H),9.67(br,1H),7.87(s,1H), 7.57(t,2H ,J = 8.0Hz),7.47(dd,lH ,Ji = 1.6Hz j2 = 12.4Hz),7.38(t,lH ,J = 8.0Hz) ,7.25 (dd,lH ,Ji = 2.0Hz ,J2 = 8.0Hz) ,7.20(d, 1H ,J=16.4Hz) ,7.13(d, 1H ,J=16.4Hz) ,6.98(t, 1H，J = 8.0Hz)，5.88(s，2H).13CM1R(101MHz，DMS0)S152.90，151.24，150.51，145.25， 145.13,137.51,134.24,129.55,129.49,128.94,128.28,127.31,126.95,124.86,123.91, 123.51，118.31，118.28,114.12,113.93.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi4FN2〇2[M+H] + : 273.1034,Found:273.1030.
[0138] 實施例35(Z)-3-((E)-4-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-ll)的制備
[0140] 按實施例25的方法，用化合物II-ll替換化合物11-1，得白色固體171mg，收率 67.6% Jp:184-186°C ,Η NMR(400MHz，DMS0)S9.65(br，lH)，9.62(br，1H),7.86(s，lH)， 7.54(d,2H,J = 8.0Hz) ,7.45(d,2H,J = 8.0Hz),7.36(t,lH,J = 8.0Hz) ,7.21 (d,lH,J = 16.0Hz) ,7.05((1,1H，J= 16.0Hz) ,6.80(d，2H，J = 8.0Hz) ,5.87(s，2H) .13C 匪R(101MHz, DMS0)5157.87,151.26,137.86,134.18,129.29,128.89,128.45,128.40,127.14,125.32, 124.52,123.30,116.06.HRMS(ESI)calcd for Ci5Hi5N2〇2[M+H]+:255.1128,Found: 255.1126.
[0141] 實施例36(Z)-3-((E)-4-羥基苯乙烯基)-N'_羥基苯甲脒（III-12)的制備 I
[0143] 按實施例2 5的方法，用化合物I -12替換化合物11 -1，得白色固體2 0 7mg，收率 86.7^01^:185-1871^4^^(40010^,0150)39.71(8,111),8.57((1,2^ = 6.01^),7.98 (s，1H)，7.56-7.67(m，5H)，7.42(t，lH，J = 8.0Hz)，7.32(d，lH，J= 16.4Hz)，5.92(s，2H).13C 匪R(101MHz，DMS0)S151.07,150.53,144.63,136.49,134.38,133.29,129.11,128.15， 126.81,126.13,124.35,121.38.HRMS(ESI)calcd for Ci4Hi4N30[M+H]+240.1131,Found 240.1139
[0144] 實施例37(Z)-4-((E)-3,4-二氟-苯乙烯基)-Ν'-羥基苯甲脒（III-13)的制備
[0146] 按實施例25的方法，用化合物II-13替換化合物II-1，得白色固體193mg，收率 70.4% 〇Mp: 192-194°0〇^ NMR(400MHz ,DMS0)59.71 (br, 1H),7.70-7.75(m,3H),7.70(d, 2H，J = 8.0Hz) ,7.42-7.46(m，2H) ,7.29(s,2H) ,5.84(s,2H) .13C 匪R(101MHz,DMS0)S 151.50,151.38,150.94,149.07,148.94,148.15,148.03,137.58,135.48,133.13,129.77, 127.20,126.76,126.12,124.17,118.28,118.10,115.18,115.01.HRMS(ESI)calcd for C15H13F2N2O [M+H]+ :275.0990, Found: 275.0997.
[0147] 實施例38本發(fā)明所合成的白藜蘆醇衍生物的LSD1抑制活性評價
[0148] (一)酶水平LSD1抑制活性評價：
[0149] 1、實驗方法:樣品為實施例所合成的上述化合物、純化而得;樣品儲備液:稱取3-5mg樣品置于1.5mL EP管中，然后用DMS0配制成濃度是20mM的溶液，4液，保存放置，實驗時 根據(jù)所需濃度用DMS0稀釋。將待測樣品與LSD1蛋白于室溫孵育后，加入LSD1反應(yīng)底物 H3K4me2并孵育反應(yīng)，最后加入熒光染料Amplex和辣根過氧化酶HRP室溫孵育，在酶標(biāo)儀上 激發(fā)光530nm，發(fā)射光590nm檢測熒光數(shù)值：
[0151] 試驗結(jié)果采用SPSS軟件計算IC5〇值。
[0152] 2、實驗結(jié)果
[0153] LSD1抑制活性測定結(jié)果
[0155] a數(shù)據(jù)表示為:平均值土標(biāo)準(zhǔn)差;bn.t.:未測定
[0156]從上表實驗結(jié)果可以看出，大部分的化合物均具有很強的LSD1抑制活性，大部分 化合物的LSD1抑制IC5Q均小于ΙμΜ，活性均強于陽性對照藥物苯環(huán)丙胺。其中活性最強的化 合物III-3和III-9，LSD1抑制活性是2-PCPA的230倍。本發(fā)明的化合物代表著一類結(jié)構(gòu)全新 的LSD1抑制劑，為LSD1抑制劑類藥物的研發(fā)提供了基礎(chǔ)，為LSD1的生物學(xué)功能研究提供了 有效工具。
[0157] (二)細胞水平LSD1抑制活性評價：
[0158] 1、實驗方法
[0159] 將胃癌細胞系MGC-803細胞2000個/孔接種于黑壁底透96孔板，加入不同濃度化合 物III-9后培養(yǎng)5天;利用H3K4me2抗體及綠色熒光二抗做免疫熒光染色，同時用DAPI染細胞 核作為內(nèi)參統(tǒng)計細胞數(shù);利用高內(nèi)涵每孔選取16個視野，分別用4倍鏡明廠拍照和綠色熒光 拍照統(tǒng)計，其中H3K4me2熒光強度/細胞數(shù)即為該孔單個細胞H3K4me2熒光強度參數(shù)。以 Control作為對照，計算藥物處理組單個細胞H3K4me2熒光強度做圖。
[0160] 2、實驗結(jié)果
[0161]從附圖可以看出，化合物III -9在不同濃度作用下可劑量依賴性上調(diào)MGC-803細胞 內(nèi)LSD1底物H3K4me2的量，2.5ymol/L的化合物III-9可以使H3K4me2的量提高5倍多，說明化 合物III-9在細胞水平亦能顯著的抑制LSD1的活性。
【主權(quán)項】
1. 一類白藜蘆醇衍生物，其特征在于，具有通式(III)所示結(jié)構(gòu)：R在A環(huán)上為單取代或多取代，取代基選:氫、羥基、甲氧基、硝基或鹵素；在B環(huán)上單取代；X代表N原子或C原子。2. 如權(quán)利要求1所述的一類白藜蘆醇類衍生物，其特征在于，通式（III)中優(yōu)選:R為氫、 羥基或？、(：1、8^1?在4環(huán)上為單取代或多取代3代表~原子或(：原子。3. 如權(quán)利要求2所述的一類白藜蘆醇類衍生物，其特征在于，優(yōu)選以下化合物： III-l: R基團為3,4-diOH，B環(huán)為4位取代，X = C的衍生物； III-2: R基團為2-F-4,5-diOH，B環(huán)為4位取代，X = C的衍生物； III-3: R基團為2-Br-4,5-diOH，B環(huán)為4位取代，X = C的衍生物； III-4: R基團為3-F-4-OH，B環(huán)為4位取代，X = C的衍生物； III-5: R基團為4-OH，B環(huán)為4位取代，X = C的衍生物； III-6: R基團為3,4-diOH，B環(huán)為3位取代，X = C的衍生物； III-7: R基團為3,5-diOH，B環(huán)為3位取代，X = C的衍生物； III-8: R基團為2-F-4,5-diOH，B環(huán)為3位取代，X = C的衍生物； III-9: R基團為2-Br-4,5-diOH，B環(huán)為3位取代，X = C的衍生物； III-10: R基團為3-F-4-OH，B環(huán)為3位取代，X = C的衍生物； III-ll: R基團為4-OH，B環(huán)為3位取代，X = C的衍生物； III-12: R基團為3,4-diF，B環(huán)為4位取代，X = C的衍生物； III-13: R基團為H，B環(huán)為3位取代，X= N的衍生物。4. 制備如權(quán)利要求1或2所述的一類白藜蘆醇類衍生物的方法，其特征在于，通過如下 步驟實現(xiàn)：苯甲醛或取代苯甲醛和氰基取代芐基膦酸二乙酯，在無水DMF中，強堿性化合物存在 下，室溫攪拌反應(yīng)，生成化合物I，其中，所述強堿性化合物選自叔丁醇鉀、甲醇鈉、氫化鈉、 叔丁醇鈉;若化合物I中沒有甲氧基取代，則化合物I在甲醇溶液中，三乙胺存在下，與鹽酸 羥氨回流反應(yīng)得R不為羥基的化合物III; 將含甲氧基取代的化合物I溶于二氯甲烷中，_20-80°C低溫條件下，加入三溴化硼，脫 甲基得R為羥基的化合物II;化合物II在甲醇溶液中，三乙胺存在下，與鹽酸羥氨回流反應(yīng) 得含有羥基的化合物III。5. 如權(quán)利要求1-3其中之一所述的一類白藜蘆醇類衍生物在藥物制備中的應(yīng)用，其特 征在于，將其作為活性成分用于LSD1抑制劑類藥物的制備。
【文檔編號】A61P31/18GK106045881SQ201610357637
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月26日
【發(fā)明人】段迎超, 關(guān)圓圓, 翟曉雨, 鄭超, 鄭一超, 劉巍
【申請人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院