一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)及其制備方法，所述制備方法包括以下依次進(jìn)行的步驟：S1：奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物的制備；S2：奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物柱層析分離提純。本發(fā)明的目的在于制備奧貝膽酸合成以及降解過程中所產(chǎn)生的二聚體雜質(zhì)，可以更好的控制奧貝膽酸的質(zhì)量，提高藥品的安全性。
【專利說明】
一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)及其制備方法，屬于醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 奧貝膽酸(0CA)是一種半合成鵝去氧膽酸，也是法尼酯衍生物X受體(FXR)激動劑， 動物實驗證明其改善胰島素抵抗和減輕肝臟脂肪含量的作用。
[0003] 奧貝膽酸的結(jié)構(gòu)式如下：
[0005] 美國英特賽普特公司擬用于原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)。原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC)適應(yīng)癥的正處于NDA審評階段，非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)適應(yīng)癥處于III期臨床階段。
[0006] 授權(quán)公告號為CN101203526B的中國專利文獻(xiàn)公開了制備3 A ( B )-7 A ( B )-二羥 基-6A(B)-烷基-5 B-膽烷酸（奧貝膽酸）的方法，但沒有公開奧貝膽酸二聚體的制備方 法；申請公布號為CN104781272A的中國專利文獻(xiàn)公開了奧貝膽酸的制備、用途和固體形式 以及二聚體雜質(zhì)的限度的控制，但未公開二聚體雜質(zhì)的制備方法。
[0007] 為了更好地對奧貝膽酸的質(zhì)量研究，非常有必要得該雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品。便于定性及 定量地進(jìn)行雜質(zhì)的分析研究，并將其控制在一個安全、合理的限度范圍之內(nèi)，將直接關(guān)系到 奧貝膽酸的質(zhì)量及安全性。從而可以保證藥品的質(zhì)量，對安全用藥具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于制備奧貝膽酸合成以及降解過程中所 產(chǎn)生的二聚體雜質(zhì)，可以更好的控制奧貝膽酸的質(zhì)量，提高藥品的安全性。
[0009] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種制備奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的方法。
[0010]本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0011] 方案一
[0012] 本發(fā)明的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式如下：
[0014] 方案二
[0015] -種制備奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，包括以下依次進(jìn)行的步驟：
[0016] S1:奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物的制備;其包括以下依次進(jìn)行的子步驟：
[0017] S1-1:將奧貝膽酸加入至20~40體積倍量的有機(jī)溶劑中，并滴加催化劑；
[0018] S1-2:攪拌并加熱回流帶水，在65~120°C下保溫反應(yīng)，稱重收集的水量約為理論 水量的80%時，降溫至30~35°C，所述理論水量=投入奧貝膽酸的重量+ 420.63 + 2X18; 其化學(xué)反應(yīng)式如下：
[0020] S1-3:加入5 %的碳酸氫鈉溶液，攪拌洗滌10分鐘，靜置分層；
[0021] S1-4:有機(jī)層減壓蒸干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物；
[0022] S2:奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物柱層析分離提純;其包括以下依次進(jìn)行的子 步驟：
[0023] S2-1:將步驟S1-4所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物加3~6體積倍量的石油 醚中溶解；
[0024] S2-2:加入200~300目硅膠，旋蒸至固體為流沙狀；
[0025] S2-3:接著再次加入200~300目硅膠作為固定相至石油醚中，攪拌均勻后加入至 玻璃層析柱中；
[0026] S2-4:將步驟S2-3拌好的樣品上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯與石油醚的混合溶 液作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并減壓旋干得到奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)。
[0027] 其中，步驟S1-1的有機(jī)溶劑采用正己烷、甲苯、石油醚中的一種或兩種以上的任意 比例混合。
[0028] 其中，步驟S1-2的反應(yīng)溫度為68-72°C或者110_115°C。
[0029] 其中，步驟S1-1催化劑采用硫酸，磷酸，鹽酸中的一種或兩種以上的任意比例混 合。
[0030] 其中，步驟S1-2的保溫反應(yīng)時間為4~8h。
[0031 ]其中，步驟S2-3的固定相15-20重量倍于樣品量。
[0032] 其中，步驟S2-4中乙酸乙酯與石油醚的混合溶劑的比例為1:1。
[0033]本發(fā)明具有如下有益效果：
[0034] 1)本發(fā)明可以更好的控制奧貝膽酸的質(zhì)量，提高藥品的安全性。
[0035] 2)本發(fā)明制備出奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)純度大于99.0%，高純度的二聚體雜質(zhì)對于 需要采用雜質(zhì)對照品濃度曲線來進(jìn)行雜質(zhì)限度檢測的奧貝膽酸來說，具有非常重要的意 義。
[0036] 3)本發(fā)明的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)產(chǎn)物與雜質(zhì)分離度好，產(chǎn)品純度高。
【附圖說明】
[0037] 圖1為本發(fā)明奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式；
[0038] 圖2為本發(fā)明生成奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)式；
[0039] 圖3為本發(fā)明奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的質(zhì)譜圖；
[0040] 圖4為本發(fā)明奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的氫譜圖；
[0041] 圖5為本發(fā)明奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的碳譜圖。
【具體實施方式】
[0042](一)【具體實施方式】如下：
[0043] -種奧貝膽酸二聚體的制備方法，包括以下依次進(jìn)行的步驟：
[0044] S1:奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物的制備;其包括以下依次進(jìn)行的子步驟：
[0045] S1-1:將奧貝膽酸加入至20~40體積倍量的正己烷或者甲苯或者石油醚中，
[0046] S1-2:攪拌并加熱回流帶水，在65~120 °C下保溫反應(yīng)4~8h，稱重收集的水量約為 理論水量的80 %時，降溫至30~35 °C，所述理論水量=投入奧貝膽酸的重量+ 420.63 + 2 X 18；
[0047] S1-3:加入5 %的碳酸氫鈉溶液，攪拌洗滌10分鐘，靜置分層；
[0048] S1-4:有機(jī)層減壓蒸干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物；
[0049] S2:奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物柱層析分離提純，其包括以下依次進(jìn)行的子 步驟：
[0050] S2-1:將步驟S1-3所得的二聚體的粗制化合物加3~6體積倍量的石油醚中溶解；
[00511 S2-2:加入200~300目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀；
[0052] S2-3:接著再次加入200~300目硅膠作為固定相至石油醚中，攪拌均勻后加入至 玻璃層析柱中；
[0053] S2-4:將拌好的樣品上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯：石油醚=1:1的混合溶劑作 為流動相，收集目標(biāo)點溶液并減壓旋干得到奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)。
[0054] (二)實施例如下：
[0055] 下面結(jié)合附圖和具體實施例來對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0056]實施例1(最佳實施例）：
[0057] 在裝有攪拌器、分水器、溫度計的三口燒瓶中，加入奧貝膽酸12g，正己烷360ml，濃 硫酸1滴，70 ± 2 °C下攪拌下回流脫水6h，冷卻至室溫，加水100ml洗滌，棄去水層，5 %碳酸氫 鈉溶液50ml洗滌，棄去碳酸氫鈉水層，有機(jī)層50°C下減壓至干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制 化合物;將所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物llg加55ml石油醚溶解，加入20g 200~ 300目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀。同時，將250g 200~300目硅膠作為固定相加入至 500ml石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，加壓將玻璃層析柱壓實，將拌好的樣品 上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯：石油醚=1:1的混合溶劑作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并 減壓旋干得到4.0g奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，收率35 %，純度99.5 %。
[0058]實施例2(較佳實施例）：
[0059] 在裝有攪拌器、分水器、溫度計的三口燒瓶中，加入奧貝膽酸12g，甲苯360ml，磷 酸1滴，112 ± 2 °C下攪拌下回流脫水6h，冷卻至室溫，加水100ml洗滌，棄去水層，5 %碳酸氫 鈉溶液50ml洗滌，棄去碳酸氫鈉水層，有機(jī)層55°C下減壓至干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制 化合物;將所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物12g加55ml石油醚溶解，加入20g 200~ 300目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀。同時，將250g 200~300目硅膠作為固定相加入至 500ml石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，加壓將玻璃層析柱壓實，將拌好的樣品 上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯：石油醚=1:1的混合溶劑作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并 減壓旋干得到3.7g奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，收率32 %，純度99.1 %。
[0060] 實施例3:
[00611 在裝有攪拌器、分水器、溫度計的三口燒瓶中，加入奧貝膽酸12g，石油醚360ml，濃 硫酸1滴，70 ± 2 °C下攪拌下回流脫水6h，冷卻至室溫，加水100ml洗滌，棄去水層，5 %碳酸氫 鈉溶液50ml洗滌，棄去碳酸氫鈉水層，有機(jī)層50°C下減壓至干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制 化合物;將所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物llg加55ml石油醚溶解，加入20g 200~ 300目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀。同時，將250g 200~300目硅膠作為固定相加入至 500ml石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，加壓將玻璃層析柱壓實，將拌好的樣品 上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯：石油醚=1:1的混合溶劑作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并 減壓旋干得到4.0g奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，收率35 %，純度99.0 %。
[0062] 實施例4:
[0063] 在裝有攪拌器、分水器、溫度計的三口燒瓶中，加入奧貝膽酸12g，正己烷360ml，濃 硫酸1滴，70 ± 2 °C下攪拌下回流脫水8h，冷卻至室溫，加水100ml洗滌，棄去水層，5 %碳酸氫 鈉溶液50ml洗滌，棄去碳酸氫鈉水層，有機(jī)層50°C下減壓至干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制 化合物;將所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物llg加55ml石油醚溶解，加入20g 200~ 300目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀。同時，將250g 200~300目硅膠作為固定相加入至 500ml石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，加壓將玻璃層析柱壓實，將拌好的樣品 上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯：石油醚=1:1的混合溶劑作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并 減壓旋干得到4.0g奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，收率35 %，純度98.5 %。
[0064] 實施例5:
[0065] 在裝有攪拌器、分水器、溫度計的三口燒瓶中，加入奧貝膽酸12g，甲苯360ml，磷酸 1滴，112 ± 2°C下攪拌下回流脫水8h，冷卻至室溫，加水100ml洗滌，棄去水層，5 %碳酸氫鈉 溶液50ml洗滌，棄去碳酸氫鈉水層，有機(jī)層55°C下減壓至干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化 合物;將所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物12g加55ml石油醚溶解，加入20g 200~300 目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀。同時，將250g 200~300目硅膠作為固定相加入至500ml 石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，加壓將玻璃層析柱壓實，將拌好的樣品上樣至 玻璃層析柱，用乙酸乙酯:石油醚=1:1的混合溶劑作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并減壓旋 干得到3.7g奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，收率32 %，純度98.1 %。
[0066] 實施例6:
[0067] 在裝有攪拌器、分水器、溫度計的三口燒瓶中，加入奧貝膽酸12g，正己烷360ml，濃 硫酸1滴，70 ± 2 °C下攪拌下回流脫水6h，冷卻至室溫，加水100ml洗滌，棄去水層，5 %碳酸氫 鈉溶液50ml洗滌，棄去碳酸氫鈉水層，有機(jī)層50°C下減壓至干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制 化合物;將所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物llg加55ml石油醚溶解，加入20g 200~ 300目硅膠，旋蒸至瓶內(nèi)固體為流沙狀。同時，將250g 200~300目硅膠作為固定相加入至 500ml石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，加壓將玻璃層析柱壓實，將拌好的樣品 上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯：石油醚=1:1的混合溶劑作為流動相，收集目標(biāo)點溶液并 減壓旋干得到4.0g奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，收率35 %，純度95 %。
[0068]經(jīng)過對各實施例的各步驟的測試，實驗數(shù)據(jù)分別如以下內(nèi)容所示：
[0069](一)奧貝膽酸溶解階段各實施例的實驗數(shù)據(jù)(奧貝膽酸密度= 1.091)
[0070] 1、有機(jī)溶劑以及其用量的篩選(正己烷、甲苯和石油醚）
[0071]奧貝膽酸溶解階段對照組分別選取10倍、20倍體積倍量的正己烷；即將奧貝膽酸 分別加入至10、20體積倍量的正己烷中。
[0072]表一一一奧貝膽酸溶解階段各實施例的奧貝膽酸在不同用量(體積倍量）的有機(jī) 溶劑中溶解情況(反應(yīng)效果）
L〇〇74」從表一的實驗數(shù)據(jù)可以明顯看出：溶解階段，在對照組的實驗中，正己烷的用量在 奧貝膽酸的10體積倍量時，反應(yīng)效果為大部分溶解，正己烷的用量在奧貝膽酸的20體積倍 量時，還有小顆粒未溶解;而在各實施例的有機(jī)溶劑(正己烷或者甲苯或者石油醚）的用量 達(dá)到奧貝膽酸的30體積倍量時，反應(yīng)效果為溶清。由此可以得出結(jié)論，在溶解階段，所采用 的有機(jī)溶劑(正己烷或者甲苯或者石油醚)何時的用量為奧貝膽酸的30體積倍量。
[0075](二）回流脫水階段收集到理論水量的實驗數(shù)據(jù)(理論水量=投入奧貝膽酸的重量 + 420.63 + 2X18)
[0076] 表二一一反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度的篩選
[0077] 其中，回流脫水階段對照組反應(yīng)時間分別為3h和4h。
[0078]表2-1:選用正己烷做溶劑時：回流脫水階段收集到理論水量的實驗數(shù)據(jù)
[0080]表2-2:選用甲苯做溶劑時：回流脫水階段收集到理論水量的實驗數(shù)據(jù)
[0082]其中，選用甲苯制備出的產(chǎn)品顏色更深，呈淺黃色。
[0083]從表二的實驗數(shù)據(jù)可以明顯看出：在回流脫水階段，選用正己烷做溶劑時，反應(yīng)溫 度為68-72 °C時，隨著反應(yīng)時間的增長，收集到的水量也隨之上升，當(dāng)反應(yīng)時間達(dá)到6小時的 時候，收集到理論水量的約85%，繼續(xù)延長反應(yīng)時間，當(dāng)反應(yīng)時間達(dá)到8小時的時候，收集到 的水量與6小時的反應(yīng)時間持平，仍為理論水量的約85 %，由表2-1可以看出，在回流脫水階 段，選用正己烷做溶劑時，反應(yīng)溫度為68-72 °C時，最佳反應(yīng)時間為6小時。
[0084](三)柱層析階段各實施例的柱層析效果的實驗數(shù)據(jù)
[0085]柱層析階段對照組1固定相采用200-300目的硅膠，流動相采用二氯甲烷與甲醇1: 1的混合溶液；
[0086] 對照組2固定相采用200-300目的硅膠，流動相采用乙酸乙酯與石油醚2:1的混合 溶液；
[0087] 對照組3固定相采用100-200目的硅膠，流動相采用乙酸乙酯與石油醚1: 1的混合 溶液；
[0088]表三一一步驟2柱層析階段各實施例的柱層析效果
[0089]表3:柱層析過程中固定相和流動相的選擇
[0091]從表三的實驗數(shù)據(jù)可以明顯看出：采用本發(fā)明的優(yōu)化技術(shù)方案，可以制得純度 95.0%以上的二聚體雜質(zhì)對照品。
[0092]本發(fā)明的各個實施例所制備的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)所測得的質(zhì)譜圖、氫譜圖和碳 譜圖分別如附圖3、附圖4和附圖5所示，證明本發(fā)明的各個實施例所制備的奧貝膽酸二聚體 雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下：
[0094]以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā) 明說明書及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關(guān)的技 術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)，其特征在于:結(jié)構(gòu)式如下：2. -種制備奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:包括以下依次進(jìn)行的步驟： S1:奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物的制備;其包括以下依次進(jìn)行的子步驟： S1-1:將奧貝膽酸加入至20~40體積倍量的有機(jī)溶劑中，并滴加催化劑； S1-2:攪拌并加熱回流帶水，在65~120°C下保溫反應(yīng)，稱重收集的水量約為理論水量 的80%時，降溫至30~35°C，所述理論水量=投入奧貝膽酸的重量+ 420.63 + 2X18;其化 學(xué)反應(yīng)式如下：S1-3:加入5 %的碳酸氫鈉溶液，攪拌洗滌10分鐘，靜置分層； 51- 4:有機(jī)層減壓蒸干得奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物； S2:奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物柱層析分離提純;其包括以下依次進(jìn)行的子步驟： 52- 1:將步驟S1-4所得的奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)粗制化合物加3~6體積倍量的石油醚中 溶解； S2-2:加入200~300目硅膠，旋蒸至固體為流沙狀； S2-3:接著再次加入200~300目硅膠作為固定相至石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃 層析柱中； S2-4:將步驟S2-3拌好的樣品上樣至玻璃層析柱，用乙酸乙酯與石油醚的混合溶液作 為流動相，收集目標(biāo)點溶液并減壓旋干得到奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)。3. 如權(quán)利要求2所述的一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:步驟S1-1的 有機(jī)溶劑采用正己烷、甲苯、石油醚中的一種或兩種以上的任意比例混合。4. 如權(quán)利要求2所述的一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:步驟S1-2的 反應(yīng)溫度為68-72°C或者110_115°C。5. 如權(quán)利要求2所述的一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:步驟S1-1催 化劑采用硫酸，磷酸，鹽酸中的一種或兩種以上的任意比例混合。6. 如權(quán)利要求2所述的一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:步驟S1-2的 保溫反應(yīng)時間為4~8h。7. 如權(quán)利要求2-6任一項所述的一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:步 驟S2-3的固定相15-20倍重量于樣品量。8. 如權(quán)利要求7所述的一種奧貝膽酸二聚體雜質(zhì)的制備方法，其特征在于:步驟S2-4中 乙酸乙酯與石油醚的混合溶劑的比例為1:1。
【文檔編號】C07J9/00GK106046094SQ201610370487
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月30日
【發(fā)明人】廖龍輝, 陳國華, 劉燕清, 姚文松, 傅世武, 朱小蘭, 彭珍香, 姚建堤, 伍虹蓉, 馮彬, 陳仕魁
【申請人】福建廣生堂藥業(yè)股份有限公司