一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑及制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于微生物抗菌劑領(lǐng)域，具體涉及一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑及制備方法。可解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的農(nóng)作物品質(zhì)降低，污染環(huán)境的問(wèn)題，包括以下重量份數(shù)的菌粉：枯草芽孢桿菌ACCC10632，20%?40%、地衣芽孢桿菌ACCC10613，20%?40%、莢膜放線桿菌ACCC11051，20%?40%、側(cè)孢芽孢桿菌ACCC11079，20%?40%。本發(fā)明能夠有效地抑制農(nóng)作物常見(jiàn)由細(xì)菌、真菌及線蟲(chóng)引起的多種土傳病害，且具有使用方法簡(jiǎn)便、安全無(wú)殘留、廣譜抗菌和抑菌的優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于微生物抗菌劑領(lǐng)域，具體涉及一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)施肥特點(diǎn)為偏施化肥，化學(xué)肥料的大量長(zhǎng)期施用使得農(nóng)作物品質(zhì)降低，引起土壤板結(jié)、有機(jī)質(zhì)下降、土壤及作物根系微生態(tài)結(jié)構(gòu)被破壞，更是導(dǎo)致了土傳植物病害泛濫的。常見(jiàn)的土傳植物病害有小麥和水稻的紋枯病、玉米的絲黑穗病和大豆疫病以及瓜豆的枯萎病和灰霉病等。當(dāng)前的病害防控主要依靠化學(xué)防控，但是長(zhǎng)期施用化學(xué)藥劑亦會(huì)造成藥劑殘留和環(huán)境污染等問(wèn)題，土傳病害是以土壤為媒介進(jìn)行傳播的植物病害統(tǒng)稱(chēng)。對(duì)土傳病害生物防治的研究一直是一個(gè)熱點(diǎn)和難點(diǎn)的課題。
[0003]土壤中，特別是植物根際棲息著許多具有生防潛力的微生物資源，雖然它們的作用發(fā)揮受內(nèi)在和外在因素影響很大，但利用微生物繁殖速度快的特點(diǎn)，大量人工繁殖后施入土壤中，可以調(diào)節(jié)根部微生態(tài)環(huán)境、限制土傳病原真菌的繁殖和抑制土傳病害的發(fā)生發(fā)展，顯示出巨大的應(yīng)用潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的農(nóng)作物品質(zhì)降低，污染環(huán)境的問(wèn)題，提供一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑及制備方法。
[0005]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑，包括以下重量份數(shù)的菌粉:枯草芽孢桿菌ACCC10632，20%-40%、地衣芽孢桿菌 ACCC10613，20%-40%、莢膜放線桿菌 ACCCl 1051，20%-40%、側(cè)孢芽孢桿菌 ACCCl 1079，20%_40%。
[0006]—種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，包括步驟如下:
第一步，菌種活化
枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(Brevibaci I Ius laterosporus)ACCCl 1079菌株從保存好的油管中轉(zhuǎn)接于固體培養(yǎng)基平板中，于28°C，培養(yǎng)48h后。取培養(yǎng)好的固體培養(yǎng)基平板，用接種針挑單菌落接種于固體培養(yǎng)基試管中，于25-28 °C，培養(yǎng)24-48h;
第二步，種子發(fā)酵
用接種針挑適量枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接種于裝有150mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間24-28h; 第三步，液體發(fā)酵
使用密封罐發(fā)酵，裝料系數(shù)0.7，將所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079種子培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液按照接種量為0.5%?3%加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度為25°C-30°C，通氣量為0.5-0.8m3/h，轉(zhuǎn)速為130?180r/min，pH值為6.5-7.5,培養(yǎng)時(shí)間24?48h，得到發(fā)酵菌液；
第四步，制作菌粉
將第三步得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的發(fā)酵菌液，離心后去掉上清液得濕菌體，濕菌體與等量的滑石粉混合均勻，50 °C真空烘干到干粉狀，得到干粉菌劑；
第五步，混合菌粉
將上述得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均勻，得到復(fù)合微生物抗菌制劑。
[0007]第一步所述的固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0008]第二步所述的種子培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0009]第三步所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0010]所述的各個(gè)菌種的菌粉的菌數(shù)為:多5 X 109cfu/mL。
[0011]所述的菌粉比例是:枯草芽孢桿菌六00:10632，20%-40%、地衣芽孢桿菌400:10613，20%-40%、莢膜放線桿菌 ACCCl 1051，20%_40%、側(cè)孢芽孢桿菌 ACCCl 1079，20%_40%。
[0012]本發(fā)明典型應(yīng)用案例:
I.復(fù)合微生物抗菌制劑對(duì)小麥病害防治及增產(chǎn)的應(yīng)用效果
試驗(yàn)地點(diǎn):山西省運(yùn)城市垣曲縣;參與單位是垣曲縣科技局;方法是將復(fù)合微生物抗菌制劑與葉面肥復(fù)配液按照1:100的比混合后，噴曬到小麥苗上(與30%毒死蜱可濕性粉劑施藥方式一致)。結(jié)果表明，經(jīng)復(fù)合微生物抗菌制劑處理后，小麥紋枯病發(fā)病率為7%，而化學(xué)農(nóng)藥的發(fā)病率為16%。復(fù)合微生物抗菌制劑對(duì)小麥紋枯病及赤霉病病害防治效果優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥毒死蜱，而且增產(chǎn)了 10%。經(jīng)復(fù)合微生物菌劑處理后，不但能增加產(chǎn)量，而且顯著提高了小麥品質(zhì)。
[0013]2.復(fù)合微生物抗菌制劑對(duì)甜菜病害防治及增產(chǎn)的應(yīng)用效果
試驗(yàn)地點(diǎn):黑龍江省齊齊哈爾市依安縣;參與單位是依安縣工信局；方法是甜菜育苗時(shí)，將復(fù)合微生物抗菌劑產(chǎn)品拌土后均勻撒在苗圃田間，施加量為每平方米苗圃添加復(fù)合微生物抗菌制劑產(chǎn)品2克，然后翻地、整地、播種。復(fù)合微生物抗菌制劑具有提高出苗率、促進(jìn)生長(zhǎng)、縮短育苗時(shí)間的作用，與沒(méi)有添加該產(chǎn)品的對(duì)照相比，能提前一周出苗。移栽到田間后，除了促進(jìn)生長(zhǎng)的作用外，還能比不添加菌劑產(chǎn)品的對(duì)照早10天結(jié)實(shí)，并且延長(zhǎng)生長(zhǎng)周期10-15天，可增產(chǎn)15-20%。本品兌水1:100液噴三次(生長(zhǎng)前、中、后期)具有防治立枯病和線蟲(chóng)病的顯著功效，可減少化學(xué)農(nóng)藥用量的4/5，平均減少用藥1.5次，可節(jié)省藥1.5元/畝。復(fù)合微生物抗菌制劑不但對(duì)甜菜整個(gè)生育期的病害防治效果顯著，而且還能增產(chǎn)和提高品質(zhì)。
[0014]3.復(fù)合微生物抗菌制劑對(duì)橘子樹(shù)病害防治及增產(chǎn)的應(yīng)用效果
試驗(yàn)地點(diǎn):廣西省賀州市鐘山縣;參與單位是金漢威生物科技有限公司;方法在試驗(yàn)組將復(fù)合微生物抗菌制劑與葉面肥復(fù)配液按照1:100的比例混合后，噴曬到橘子樹(shù)葉面上(對(duì)照組不作處理);將復(fù)合微生物抗菌制劑與葉面肥復(fù)配液按照1:50的比例灌根(對(duì)照組不作處理)。結(jié)果表明，經(jīng)復(fù)合微生物抗菌制劑處理后，試驗(yàn)組橘子樹(shù)裂皮病、碎葉病病害比對(duì)照組橘子樹(shù)較少。復(fù)合微生物抗菌制劑對(duì)橘子樹(shù)黃龍病病害防治效果顯著，而且橘子的產(chǎn)量提尚了 21%。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:
1.本發(fā)明能夠有效地抑制農(nóng)作物常見(jiàn)由細(xì)菌、真菌及線蟲(chóng)引起的多種土傳病害；
2.本發(fā)明且具有使用方法簡(jiǎn)便、安全無(wú)殘留、廣譜抗菌和抑菌的優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1，一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，包括步驟如下:
第一步，菌種活化
枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌株從保存好的油管中轉(zhuǎn)接于固體培養(yǎng)基平板中，于28°C，培養(yǎng)48h后。取培養(yǎng)好的固體培養(yǎng)基平板，用接種針挑單菌落接種于固體培養(yǎng)基試管中，于25-28 °C，培養(yǎng)24-48h;
第二步，種子發(fā)酵
用接種針挑適量枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接種于裝有150mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間24-28h;
第三步，液體發(fā)酵
使用密封罐發(fā)酵，裝料系數(shù)0.7，將所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079種子培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液按照接種量為0.5%?3%加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度為25°C-30°C，通氣量為0.5-0.8m3/h，轉(zhuǎn)速為130?180r/min，PH值為6.5-7.5,培養(yǎng)時(shí)間24?48h，得到發(fā)酵菌液；
第四步，制作菌粉將第三步得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的發(fā)酵菌液，離心后去掉上清液得濕菌體，濕菌體與等量的滑石粉混合均勻，50 °C真空烘干到干粉狀，得到干粉菌劑；
第五步，混合菌粉
將上述得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均勻，得到復(fù)合微生物抗菌制劑。
[0017]第一步所述的固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0018]第二步所述的種子培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0019]第三步所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0020]所述的各個(gè)菌種的菌粉的菌數(shù)為:多5Χ 109cfu/mL。
[0021 ] 所述的菌粉比例是:枯草芽孢桿菌ACCC10632，25%、地衣芽孢桿菌ACCC10613，25%、莢膜放線桿菌ACCCl 1051，25%、側(cè)孢芽孢桿菌ACCCl 1079，25%。
[0022]實(shí)施例2，一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，包括步驟如下:
第一步，菌種活化
枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌株從保存好的油管中轉(zhuǎn)接于固體培養(yǎng)基平板中，于28°C，培養(yǎng)48h后。取培養(yǎng)好的固體培養(yǎng)基平板，用接種針挑單菌落接種于固體培養(yǎng)基試管中，于25-28 °C，培養(yǎng)24-48h;
第二步，種子發(fā)酵
用接種針挑適量枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接種于裝有150ml液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間24-28h;
第三步，液體發(fā)酵
使用密封罐發(fā)酵，裝料系數(shù)0.7，將所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079種子培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液按照接種量為0.5%?3%加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度為25°C-30°C，通氣量為0.5-0.8m3/h，轉(zhuǎn)速為130?180r/min，pH值為6.5-7.5,培養(yǎng)時(shí)間24?48h，得到發(fā)酵菌液； 第四步，制作菌粉
將第三步得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的發(fā)酵菌液，離心后去掉上清液得濕菌體，濕菌體與等量的滑石粉混合均勻，50 °C真空烘干到干粉狀，得到干粉菌劑；
第五步，混合菌粉
將上述得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均勻，得到復(fù)合微生物抗菌制劑。
[0023]第一步所述的固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0024]第二步所述的種子培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0025]第三步所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0026]所述的各個(gè)菌種的菌粉的菌數(shù)為:多5Χ 109cfu/mL。
[0027]所述的菌粉比例是:枯草芽孢桿菌ACCC10632，20%、地衣芽孢桿菌ACCC10613，30%、莢膜放線桿菌ACCCl 1051，30%、側(cè)孢芽孢桿菌ACCCl 1079，20%。
[0028]實(shí)施例3，一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，包括步驟如下:
第一步，菌種活化
枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌株從保存好的油管中轉(zhuǎn)接于固體培養(yǎng)基平板中，于28°C，培養(yǎng)48h后。取培養(yǎng)好的固體培養(yǎng)基平板，用接種針挑單菌落接種于固體培養(yǎng)基試管中，于25-28 °C，培養(yǎng)24-48h;
第二步，種子發(fā)酵
用接種針挑適量枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接種于裝有150mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間24-28h;
第三步，液體發(fā)酵
使用密封罐發(fā)酵，裝料系數(shù)0.7，將所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、莢膜放線桿菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079種子培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液按照接種量為0.5%?3%加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度為25°C-30°C，通氣量為0.5-0.8m3/h，轉(zhuǎn)速為130?180r/min，pH值為6.5-7.5,培養(yǎng)時(shí)間24?48h，得到發(fā)酵菌液；
第四步，制作菌粉
將第三步得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的發(fā)酵菌液，離心后去掉上清液得濕菌體，濕菌體與等量的滑石粉混合均勻，50 °C真空烘干到干粉狀，得到干粉菌劑；
第五步，混合菌粉
將上述得到的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、莢膜放線桿菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、側(cè)抱芽抱桿菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均勻，得到復(fù)合微生物抗菌制劑。
[0029]第一步所述的固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0030]第二步所述的種子培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0031]第三步所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο
[0032]所述的各個(gè)菌種的菌粉的菌數(shù)為:多5Χ109cfu/mL。
[0033]所述的菌粉比例是:枯草芽孢桿菌ACCC10632，20%、地衣芽孢桿菌ACCC10613，20%、莢膜放線桿菌ACCCl 1051，20%、側(cè)孢芽孢桿菌ACCCl 1079，40%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑，其特征在于:包括以下重量份數(shù)的菌粉:枯草芽孢桿菌 ACCC10632，20%-40%、地衣芽孢桿菌 ACCC10613，20%-40%、莢膜放線桿菌 ACCCl 1051，20%-40%、側(cè)孢芽孢桿菌 ACCCl 1079，20%_40%。2.一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，其特征在于:包括步驟如下: 第一步，菌種活化 枯草芽孢桿菌ACCC10632、地衣芽孢桿菌ACCC10613、莢膜放線桿菌ACCCl 1051、側(cè)孢芽孢桿菌ACCC11079菌株從保存好的油管中轉(zhuǎn)接于固體培養(yǎng)基平板中，于28°C，培養(yǎng)48h后，3.取培養(yǎng)好的固體培養(yǎng)基平板，用接種針挑單菌落接種于固體培養(yǎng)基試管中，于25-28Γ，培養(yǎng)24-48h; 第二步，種子發(fā)酵 用接種針挑適量枯草芽孢桿菌ACCC10632、地衣芽孢桿菌ACCC10613、莢膜放線桿菌ACCC11051、側(cè)孢芽孢桿菌ACCC11079菌苔接種于裝有150ml液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中放于25-28°(:，130-18(^/111丨11恒溫?fù)u床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間24-2811; 第三步，液體發(fā)酵 使用密封罐發(fā)酵，裝料系數(shù)0.7，將所述枯草芽孢桿菌ACCC10632、地衣芽孢桿菌ACCC10613、莢膜放線桿菌ACCC11051、側(cè)孢芽孢桿菌ACCC11079種子培養(yǎng)得到的種子培養(yǎng)液按照接種量為0.5%?3%加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度為25 °030°C，通氣量為0.5?0.8m3/h，轉(zhuǎn)速為130~180r/min，PH值為6.5-7.5,培養(yǎng)時(shí)間24?48h，得到發(fā)酵菌液； 第四步，制作菌粉 將第三步得到的枯草芽孢桿菌ACCC10632、地衣芽孢桿菌ACCC10613、莢膜放線桿菌ACCCl 1051、側(cè)孢芽孢桿菌ACCCl 1079的發(fā)酵菌液，離心后去掉上清液得濕菌體，濕菌體與等量的滑石粉混合均勻，50°C真空烘干到干粉狀，得到干粉菌劑； 第五步，混合菌粉 將上述得到的枯草芽孢桿菌ACCC10632、地衣芽孢桿菌ACCC10613、莢膜放線桿菌ACCCl 1051、側(cè)孢芽孢桿菌ACCCl 1079的菌粉，按照一定比例混合均勻，得到復(fù)合微生物抗菌制劑。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，其特征在于:第一步所述的固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl 5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水 1.0L、pH 7.0ο4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，其特征在于:第二步所述的種子培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl 5.0g、蒸餾水1.0L、pH7.0。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，其特征在于:第三步所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl 5.0g、蒸餾水1.0L、pH7.0。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，其特征在于:所述的各個(gè)菌種的菌粉的菌數(shù)為??彡5 X 109cfu/mL。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種種植用復(fù)合微生物抗菌制劑的制備方法，其特征在于:所述的菌粉比例是:枯草芽孢桿菌ACCC10632，20%-40%、地衣芽孢桿菌ACCC10613，20%_40%、莢 膜放線桿菌 ACCCl 1051，20%-40%、側(cè)孢芽孢桿菌 ACCCl 1079，20%_40%。
【文檔編號(hào)】C12R1/10GK106047766SQ201610602137
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年7月28日 公開(kāi)號(hào)201610602137.3, CN 106047766 A, CN 106047766A, CN 201610602137, CN-A-106047766, CN106047766 A, CN106047766A, CN201610602137, CN201610602137.3
【發(fā)明人】唐清池, 程雅珍, 郭銀保, 王學(xué)賓, 武彪, 鄭曉東
【申請(qǐng)人】唐清池