鑒定或輔助鑒定具有不同籽粒性狀小麥的方法及其專用引物對(duì)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了鑒定或輔助鑒定具有不同籽粒性狀小麥的方法及其專用引物對(duì)。本發(fā)明所提供的引物對(duì)，由引物甲和引物乙組成；所述引物甲為如下a1)或a2)：a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；a2)將序列1經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物乙為如下a3)或a4)：a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；a4)將序列2經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明提供的引物對(duì)可鑒定或輔助鑒定具有不同粒重或粒長(zhǎng)的小麥，在小麥育種中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】
鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥的方法及其專用引 物對(duì)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥的方 法及其專用引物對(duì)。
【背景技術(shù)】
[0002] 小麥?zhǔn)钱?dāng)今世界上最主要的糧食類作物，全世界超過了35%的人把小麥作為主 食，在農(nóng)業(yè)類生產(chǎn)W及國(guó)民經(jīng)濟(jì)中均占有及其重要的地位。我國(guó)是世界上小麥栽種面積最 大的國(guó)家之一，但是，由于我國(guó)一直W來(lái)地少人多的現(xiàn)實(shí)狀況，致使我國(guó)也是當(dāng)今世界上最 大的小麥進(jìn)口國(guó)，平均每年進(jìn)口小麥總量高達(dá)10000000噸，因此我國(guó)急需提高小麥產(chǎn)量。小 麥產(chǎn)量受單位面積穗數(shù)、穗粒數(shù)和千粒重=個(gè)因素的影響，=者關(guān)系的協(xié)調(diào)是取得小麥高 產(chǎn)的關(guān)鍵。而在小麥產(chǎn)量構(gòu)成因素中受遺傳效應(yīng)的影響最大是小麥的千粒重，廣義遺傳力 要高達(dá)59%-80%，而小麥巧粒大小相關(guān)指標(biāo)粒長(zhǎng)、粒寬是決定千粒重的重要因子。因此， 建立快速、準(zhǔn)確W及高通量的鑒定或輔助鑒定小麥千粒重性狀的方法，能夠縮短小麥育種 所需年限并且選育出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的小麥品種。
[0003] 高分辨率溶解曲線分析技術(shù)巧igh Resolution Melting Qirve Analysis，HRM) 是一項(xiàng)應(yīng)用于檢測(cè)單核巧酸多態(tài)性的分析性新技術(shù)，該技術(shù)是根據(jù)不同堿基序列進(jìn)行PCR 擴(kuò)增反應(yīng)后形成的雙鏈DNA分子的溶解溫度存在差異的運(yùn)一物理性質(zhì)，在同一反應(yīng)容器中 對(duì)堿基序列進(jìn)行高分辨率溶解，利用可與雙鏈DNA分子結(jié)合的飽和巧光染料運(yùn)行HRM程序： 即將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物從低到高W每次不到0. rC逐步升溫(在60°C~95°C范圍內(nèi)），雙鏈DNA分 子在運(yùn)一過程中達(dá)到一定溫度后解鏈，巧光染料隨其解鏈會(huì)脫落，并停止發(fā)出巧光信號(hào)。W 巧光強(qiáng)度變化為縱坐標(biāo)，解鏈溫度為橫坐標(biāo)，得到相應(yīng)的特征性溶解曲線，再根據(jù)特征性溶 解曲線形態(tài)變化即可判斷雙鏈DNA分子性質(zhì)的差異。HRM還具有高通量、高靈敏度、特異性 好、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便和適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了引物對(duì)。
[0006] 本發(fā)明所提供的引物對(duì)，可由引物甲和引物乙組成；
[0007] 所述引物甲可為如下al)或曰2):
[000引 a 1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
[0009] a2)將序列1經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相 同功能的DNA分子；
[0010] 所述引物乙可為如下日3)或曰4):
[00川日3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
[0012] a4)將序列2經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相 同功能的DM分子。
[001引所述引物對(duì)中，所述引物甲和所述引物乙的摩爾比可化：1。
[0014] 所述引物對(duì)的用途為鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥。所述巧粒性狀可為 粒重和/或粒長(zhǎng)。所述粒重可為千粒重。
[0015] 所述引物對(duì)在制備用于鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥的試劑盒或鑒定 具有不同巧粒性狀小麥中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；所述巧粒性狀可為粒重和/或 粒長(zhǎng)。
[0016] 上述應(yīng)用中，所述粒重可為千粒重。
[0017] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥的 試劑盒。
[0018] 本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定具有不同巧粒性狀小麥的試劑盒，包括所述引物 對(duì);所述巧粒性狀可為粒重和/或粒長(zhǎng)。
[0019] 上述試劑盒中，所述粒重可為千粒重。
[0020] 所述試劑盒在鑒定具有不同巧粒性狀小麥中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；所 述巧粒性狀可為粒重和/或粒長(zhǎng)。
[0021] 上述應(yīng)用中，所述粒重可為千粒重。
[0022] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了所述試劑盒的制備方法。
[0023] 本發(fā)明所提供的所述試劑盒的制備方法，可為如下（I)或（n):
[0024] (I)所述引物對(duì)中各條引物分別單獨(dú)包裝；
[002引（n)所述引物對(duì)中各條引物按照所述比例混合在一起。所述引物甲和所述引物乙 的摩爾比具體可為1:1。
[0026] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的 方法。
[0027] 本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的方法，可包括如下步驟：
[00%] 1)W待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到樣本溶解 曲線；W標(biāo)準(zhǔn)小麥甲的基因組DNA為模板，采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到b型溶解曲線； W標(biāo)準(zhǔn)小麥乙的基因組DNA為模板，采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得至Ija型溶解曲線；
[0029] 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥甲為老麥、紅皮小麥、紅粒當(dāng)年老、麻花板、假紅麥、紅麥、有芒白釋、 紅皮冬麥、白秋麥、原冬822、農(nóng)大311、線麥、早五天、豬毛元字頭、水里站、蘭溪早小麥、婪源 麥、和尚麥、懦麥、芒小麥、蘇麥3號(hào)、恩麥4號(hào)、鄂麥6號(hào)、安徽3號(hào)、敦化春麥、火球、赤小麥、 化no、鄭引4號(hào)、潮安小麥、赤穗早深根、上林小麥、抗誘10號(hào)、晉麥2418、豐產(chǎn)3號(hào)、百農(nóng)3217、 西農(nóng)6028、12040冀麥2號(hào)、濟(jì)南17、小偃6號(hào)、陜農(nóng)7859、溫麥6號(hào)、萊州953、鄭州741、白芒麥、 半截芒、平原50、白扁穗、紅和尚頭、大口麥、葛家鄉(xiāng)、葛爾紅麥、大春白四棱麥（2)、白朗灰 麥、本地黃花麥、扎紅、墨脫小麥、邊己春麥-6、白芒小麥、烏江卓、木宗卓嗔、日喀則8號(hào)、巧 老漢、火里炎、白大頭、白媽昨、甘麥8號(hào)、畢麥26、去麥34、鳳麥11、醬麥、小S月黃、白芒麥、 紅芒子、豬尿麥、扁頭光殼麥、豬狗麥、濱西紅殼洋麥、紅春麥、托克遜1號(hào)、中國(guó)春、鄭麥9023 或偃展1號(hào)；
[0030] 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥乙為京紅5號(hào)、內(nèi)麥11、晉麥3號(hào)、梁來(lái)友白皮小麥、畢紅穗、小白麥、 大白皮、小紅皮、定興寨、春小麥、火瞭麥、大紅麥、陜西白麥、牛趾甲、紅金麥、白齊麥、小口 紅、蘭花麥、帶芒紅麥、緑鹿冬麥、紅老麥、磐石無(wú)芒、有芒白釋、小白芒、中優(yōu)9507、晉麥8號(hào)、 豐抗2號(hào)、長(zhǎng)治6406、北京8號(hào)、呂旱328、延安11、農(nóng)大183、農(nóng)大139、銘賢169、東方紅3號(hào)、江 西早、紅花早、江東口、大黃皮、崇陽(yáng)紅麥1、六柱頭、贈(zèng)不知、黃水白、白蒲、早小麥、望水白、 車銅子、立顆寸、泡子麥、華東6號(hào)、麵英5號(hào)、揚(yáng)麥158、浙麥1號(hào)、白油麥、洋麥、大青芒、光頭、 新克旱9號(hào)、克豐3號(hào)、克潰4號(hào)、新曙光1號(hào)、東農(nóng)101、新曙光6號(hào)、吉春1016、KaBka3、南大 2419、0;rofen、農(nóng)林10號(hào)、水原86、錢交麥、Early Premium、T;riumph、Lov;rin 10、教德薩3號(hào)、 l'anori、Villa Glori2甜112、Atlas66、甘肅96、赤殼、松蕊麥、臺(tái)中23、敵誘早、徑陽(yáng)60、石特 14、復(fù)壯30、碧媽1號(hào)、碧媽4號(hào)、石家莊54、平陽(yáng)27、泰山1號(hào)、濟(jì)南2號(hào)、蝴包、煙農(nóng)15、石家莊 407、內(nèi)鄉(xiāng)5號(hào)、鄭州6號(hào)、咸農(nóng)39、矮豐3號(hào)、魯麥1號(hào)、黃瓜先、老來(lái)瞎、峻姑腦、西山扁穗、紅狗 豆、白火麥、立月黃、紅搶場(chǎng)、蝴子麥、白齊麥、白秀子頭、有芒掃谷旦、阜陽(yáng)紅、媽昨麥、搶場(chǎng) 麥、火麥、霉前五、堿麥、S月黃、小佛手、秀芒麥、白條魚、白芒麥、大玉花、府麥、老齊麥、出 山豹、紫賴紅、大粒半芒、六月黃、康定小麥、藏冬4號(hào)、日喀則54號(hào)、一枝麥、大白麥、紅秀子、 金黃麥、紅芒麥、大白麥、白齊頭、老秀頭、高原506、青春28、寧春4號(hào)、互助紅、金麥4號(hào)、定西 24、會(huì)寧10號(hào)、蜀萬(wàn)8號(hào)、繁6、貴農(nóng)10號(hào)、興義4號(hào)、同家巧小麥、紅花麥、白麥子、成都光頭、白 花麥、換香果、漢中白、梭條紅麥、紅須麥、紫皮、魚餓麥、陽(yáng)麥、洋麥、長(zhǎng)芒石扁頭、白冬麥、紅 春麥、春麥、紅冬麥、紅金包銀、新冬2號(hào)、喀什1號(hào)或喀什白皮；
[0031] 2)比較樣本溶解曲線、a型溶解曲線和b型溶解曲線，如果樣本溶解曲線與a型溶解 曲線一致、待測(cè)小麥為L(zhǎng)基因型，如果樣本溶解曲線與b型溶解曲線一致、待測(cè)小麥為H基因 型;然后進(jìn)行如下dl)或d2)的判斷：
[0032] dl)H基因型的待測(cè)小麥的粒重大于L基因型的待測(cè)小麥；
[0033] d2)H基因型的待測(cè)小麥的粒重大于非H基因型的待測(cè)小麥。
[0034] 上述方法中，所述粒重可為千粒重。
[0035] 上述方法中，所述大于為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的大于。
[0036] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種鑒定或輔助鑒定具有不同粒長(zhǎng)小麥的 方法。
[0037] 本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定具有不同粒長(zhǎng)小麥的方法，可包括如下步驟：
[0038] 1)W待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到樣本溶解 曲線；W標(biāo)準(zhǔn)小麥甲的基因組DNA為模板，采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到b型溶解曲線； W標(biāo)準(zhǔn)小麥乙的基因組DNA為模板，采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得至Ija型溶解曲線；
[0039] 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥甲為老麥、紅皮小麥、紅粒當(dāng)年老、麻花板、假紅麥、紅麥、有芒白釋、 紅皮冬麥、白秋麥、原冬822、農(nóng)大311、線麥、早五天、豬毛元字頭、水里站、蘭溪早小麥、婪源 麥、和尚麥、懦麥、芒小麥、蘇麥3號(hào)、恩麥4號(hào)、鄂麥6號(hào)、安徽3號(hào)、敦化春麥、火球、赤小麥、 化no、鄭引4號(hào)、潮安小麥、赤穗早深根、上林小麥、抗誘10號(hào)、晉麥2418、豐產(chǎn)3號(hào)、百農(nóng)3217、 西農(nóng)6028、12040冀麥2號(hào)、濟(jì)南17、小偃6號(hào)、陜農(nóng)7859、溫麥6號(hào)、萊州953、鄭州741、白芒麥、 半截芒、平原50、白扁穗、紅和尚頭、大口麥、葛家鄉(xiāng)、葛爾紅麥、大春白四棱麥（2)、白朗灰 麥、本地黃花麥、扎紅、墨脫小麥、邊己春麥-6、白芒小麥、烏江卓、木宗卓嗔、日喀則8號(hào)、巧 老漢、火里炎、白大頭、白媽昨、甘麥8號(hào)、畢麥26、去麥34、鳳麥11、醬麥、小S月黃、白芒麥、 紅芒子、豬尿麥、扁頭光殼麥、豬狗麥、濱西紅殼洋麥、紅春麥、托克遜1號(hào)、中國(guó)春、鄭麥9023 或偃展1號(hào)；
[0040] 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥乙為京紅5號(hào)、內(nèi)麥11、晉麥3號(hào)、梁來(lái)友白皮小麥、畢紅穗、小白麥、 大白皮、小紅皮、定興寨、春小麥、火瞭麥、大紅麥、陜西白麥、牛趾甲、紅金麥、白齊麥、小口 紅、蘭花麥、帶芒紅麥、緑鹿冬麥、紅老麥、磐石無(wú)芒、有芒白釋、小白芒、中優(yōu)9507、晉麥8號(hào)、 豐抗2號(hào)、長(zhǎng)治6406、北京8號(hào)、呂旱328、延安11、農(nóng)大183、農(nóng)大139、銘賢169、東方紅3號(hào)、江 西早、紅花早、江東口、大黃皮、崇陽(yáng)紅麥1、六柱頭、贈(zèng)不知、黃水白、白蒲、早小麥、望水白、 車銅子、立顆寸、泡子麥、華東6號(hào)、麵英5號(hào)、揚(yáng)麥158、浙麥1號(hào)、白油麥、洋麥、大青芒、光頭、 新克旱9號(hào)、克豐3號(hào)、克潰4號(hào)、新曙光1號(hào)、東農(nóng)101、新曙光6號(hào)、吉春1016、KaBka3、南大 2419、0;rofen、農(nóng)林10號(hào)、水原86、錢交麥、Early Premium、T;riumph、Lov;rin 10、教德薩3號(hào)、 l'anori、Villa Glori2甜112、Atlas66、甘肅96、赤殼、松蕊麥、臺(tái)中23、敵誘早、徑陽(yáng)60、石特 14、復(fù)壯30、碧媽1號(hào)、碧媽4號(hào)、石家莊54、平陽(yáng)27、泰山1號(hào)、濟(jì)南2號(hào)、蝴包、煙農(nóng)15、石家莊 407、內(nèi)鄉(xiāng)5號(hào)、鄭州6號(hào)、咸農(nóng)39、矮豐3號(hào)、魯麥1號(hào)、黃瓜先、老來(lái)瞎、峻姑腦、西山扁穗、紅狗 豆、白火麥、立月黃、紅搶場(chǎng)、蝴子麥、白齊麥、白秀子頭、有芒掃谷旦、阜陽(yáng)紅、媽昨麥、搶場(chǎng) 麥、火麥、霉前五、堿麥、S月黃、小佛手、秀芒麥、白條魚、白芒麥、大玉花、府麥、老齊麥、出 山豹、紫賴紅、大粒半芒、六月黃、康定小麥、藏冬4號(hào)、日喀則54號(hào)、一枝麥、大白麥、紅秀子、 金黃麥、紅芒麥、大白麥、白齊頭、老秀頭、高原506、青春28、寧春4號(hào)、互助紅、金麥4號(hào)、定西 24、會(huì)寧10號(hào)、蜀萬(wàn)8號(hào)、繁6、貴農(nóng)10號(hào)、興義4號(hào)、同家巧小麥、紅花麥、白麥子、成都光頭、白 花麥、換香果、漢中白、梭條紅麥、紅須麥、紫皮、魚餓麥、陽(yáng)麥、洋麥、長(zhǎng)芒石扁頭、白冬麥、紅 春麥、春麥、紅冬麥、紅金包銀、新冬2號(hào)、喀什1號(hào)或喀什白皮；
[0041] 2)比較樣本溶解曲線、a型溶解曲線和b型溶解曲線，如果樣本溶解曲線與a型溶解 曲線一致、待測(cè)小麥為L(zhǎng)基因型，如果樣本溶解曲線與b型溶解曲線一致、待測(cè)小麥為H基因 型;然后進(jìn)行如下d3)或d4)的判斷：
[0042] d3)H基因型的待測(cè)小麥的粒長(zhǎng)大于L基因型的待測(cè)小麥；
[0043] d4)H基因型的待測(cè)小麥的粒長(zhǎng)大于非H基因型的待測(cè)小麥。
[0044] 上述方法中，所述大于為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的大于。
[0045] 上述方法中，所述"采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)"的HRM反應(yīng)體系由待測(cè)小麥品種 的葉片的基因組DNA、所述引物甲、所述引物乙、Light切cler HRM Master Mix、MgCl2和水 組成;其中Li曲tCycler HRM Master Mix為Roche公司的產(chǎn)品。
[0046] 12.5化的所述HRM反應(yīng)體系中，待測(cè)小麥品種的葉片的基因組DM為60ng，所述引 物甲的濃度為0.325皿ol/L，所述引物乙的濃度為0.325皿ol/L，MgCl2的濃度為1.5mol/L， LightCycler HRM Master Mix為6.25化。
[0047] 上述方法中，所述"采用所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到樣本溶解曲線"的步驟具體 如下：
[0048] (1)制備所述HRM反應(yīng)體系，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；
[0049] (2)取完成步驟(1)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，依次進(jìn)行如下反應(yīng):95 °C作用30s;降低到50°C 作用30s;逐漸升高溫度到95°C，期間每升高rC收集巧光信號(hào)25次;迅速降溫至37°C作用 5s。W巧光強(qiáng)度變化為縱坐標(biāo)，解鏈的溫度為橫坐標(biāo)，得到特征性溶解曲線。所述步驟（1) 中，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)的儀器可為Roche LightCycler 96。
[0050] 所述步驟（1)中，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)的PCR程序可為:94°C變性5min;94°C變性30s， 58°C退火29s，72°C延伸6s，45個(gè)循環(huán)；72°C延伸2min。
[0051] 上述任一所述引物對(duì)、上述任一所述試劑盒或上述任一所述方法在小麥育種中的 應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0052] 實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明提供的引物對(duì)可鑒定或輔助鑒定具有不同粒重或粒長(zhǎng)的小 麥，在小麥育種中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
【附圖說明】
[0053] 圖1為特征性溶解曲線。
[0054] 圖2為特征性溶解曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0055] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0056] 下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0057] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0058] W下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置=次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。
[0059] 小麥核屯、種質(zhì)就是用最小的小麥種質(zhì)數(shù)量和遺傳重復(fù)，最大程度地代表了整個(gè)小 麥種質(zhì)資源的多樣性，而小麥微核屯、種質(zhì)則是從小麥核屯、種質(zhì)中進(jìn)一步選擇一個(gè)核屯、子 集，也即小麥核屯、種質(zhì)的核屯、種質(zhì)，使用更小的種質(zhì)資源代表了整個(gè)種質(zhì)庫(kù)的遺傳多樣性。 我國(guó)共有23090份小麥種質(zhì)資源，針對(duì)運(yùn)些小麥種子資源構(gòu)建了 1160份的小麥核屯、種質(zhì)，W 5.0 %的樣本量代表了小麥種質(zhì)資源90.1 %的遺傳多樣性。進(jìn)一步從1160份的小麥核屯、種 質(zhì)中篩選出表1所示的262個(gè)種質(zhì)材料，作為我國(guó)的小麥微核屯、種質(zhì)。262個(gè)小麥品種的冬春 性和產(chǎn)地見表1。表1中所示的262個(gè)小麥品種均記載與如下文獻(xiàn)中：郝晨陽(yáng)等2008,我國(guó)普 通小麥核屯、種質(zhì)的構(gòu)建及遺傳多樣性分析，科學(xué)通報(bào)，2008,53(8) ,908-915。
[0060] Light切cler HRM Master Mix和Roche Light切cler 96儀器均為Roche公司產(chǎn) 品。
[0061] 實(shí)施例1、測(cè)定不同小麥品種的性狀
[0062] 1、小麥巧粒的獲得
[0063] 2013~2014年，將262個(gè)小麥品種的種子分別種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地(位 于北京市），獲得不同小麥品種的小麥巧粒。
[0064] 2013~2014年，將262個(gè)小麥品種的種子分別種植于洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地(位 于河南省洛陽(yáng)市），獲得不同小麥品種的小麥巧粒。
[0065] 2014~2015年，將262個(gè)小麥品種的種子分別種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地 (位于陜西省楊凌示范區(qū)），獲得不同小麥品種的小麥巧粒。
[0066] 2、測(cè)量不同小麥品種的小麥巧粒的平均粒長(zhǎng)、平均粒寬和平均千粒重
[0067] A、采用手工測(cè)量法測(cè)量種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地的不同小麥品種的小麥 巧粒的粒長(zhǎng)、粒寬和千粒重
[0068] (1)隨機(jī)取種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥品種的小麥巧粒100粒，計(jì)算粒 長(zhǎng)和粒寬。
[0069] 粒長(zhǎng):根據(jù)長(zhǎng)度方向進(jìn)行緊密排列，記錄100粒巧粒的總粒長(zhǎng)，取平均值。
[0070] 粒寬:根據(jù)寬度方向進(jìn)行緊密排列，記錄100粒巧粒的總粒寬，取平均值。
[0071] 每個(gè)小麥品種需重復(fù)=次，=次結(jié)果取平均值，得到種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn) 基地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒長(zhǎng)和粒寬。
[0072] (2)隨機(jī)取種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥品種的小麥巧粒200粒，稱重并 計(jì)算千粒重。
[0073] 每個(gè)小麥品種需重復(fù)=次，=次結(jié)果取平均值，得到種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn) 基地的不同小麥品種的小麥巧粒的千粒重。
[0074] B、采用手工測(cè)量法測(cè)量種植于洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地的不同小麥品種的小麥 巧粒的粒長(zhǎng)、粒寬和千粒重
[0075] 按照步驟A的方法，將中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地替換為洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地， 其它步驟均不變，獲得種植于洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒 長(zhǎng)、粒寬和千粒重。
[0076] C、采用萬(wàn)深SC-G自動(dòng)考種分析及千粒重儀測(cè)量種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基 地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒長(zhǎng)、粒寬和千粒重
[0077] 粒長(zhǎng):隨機(jī)取種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地的小麥品種的小麥巧粒100粒，采 用萬(wàn)深SC-G自動(dòng)考種分析及千粒重儀測(cè)量粒長(zhǎng)，取平均值；
[0078] 粒寬：隨機(jī)取種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地的小麥品種的小麥巧粒100粒，采 用萬(wàn)深SC-G自動(dòng)考種分析及千粒重儀測(cè)量粒寬，取平均值；
[0079] 千粒重:隨機(jī)取種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地的小麥品種的小麥巧粒200粒， 采用萬(wàn)深SC-G自動(dòng)考種分析及千粒重儀稱重，并計(jì)算千粒重。
[0080] 每個(gè)小麥品種需重復(fù)=次，=次結(jié)果取平均值，獲得種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試 驗(yàn)基地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒長(zhǎng)、粒寬和千粒重。
[0081] D、不同小麥品種的小麥巧粒的平均粒長(zhǎng)、平均粒寬和平均千粒重的獲得
[0082] (1)將同一小麥品種的種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥巧粒的粒長(zhǎng)、種植 于洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥巧粒的粒長(zhǎng)和種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地的小 麥巧粒的粒長(zhǎng)取平均值，得到該小麥品種的平均粒長(zhǎng)。
[0083] (2)將同一小麥品種的種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥巧粒的粒寬、種植 于洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥巧粒的粒寬和種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地的小 麥巧粒的粒寬取平均值，得到該小麥品種的平均粒寬。
[0084] (3)將同一小麥品種的種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥巧粒的千粒重、種 植于洛陽(yáng)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)基地的小麥巧粒的千粒重和種植于西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)基地 的小麥巧粒的千粒重取平均值，得到該小麥品種的平均千粒重。
[0085] 不同小麥品種的平均粒長(zhǎng)、平均粒寬和平均千粒重的測(cè)量結(jié)果見表1。
[00化]表1





[0093]
[0094] 實(shí)施例2、特征性溶解曲線與小麥巧粒性狀的關(guān)聯(lián)分析 [00巧]一、引物對(duì)的制備
[0096] 由寶生物工程化連)有限公司合成引物甲和引物乙，引物甲的核巧酸序列為:5'- ACAATTGTTACCATACTTTGTTCTTC-3 '（序列表中序列1所示），引物乙的核巧酸序列為：5 ' - CGGTGTCCTTGAGCTTCTC-3 '（序列表中序列2所示）。引物甲和引物乙的純化級(jí)別均為HPLC。
[0097] 引物對(duì)由引物甲和引物乙組成。
[009引二、基因分型的方法
[0099] 1、基因組DNA的提取
[0100] 提取待測(cè)小麥的葉片的基因組DNA。待測(cè)小麥為表1中的262個(gè)小麥品種。
[0101] 2、制備HRM反應(yīng)體系
[0102] HRM反應(yīng)體系（12.扣L)由待測(cè)小麥品種的葉片的基因組DNA(6化g)、引物甲、引物 乙、6.2扣L Light切cler HRM Master Mix、MgCl2和水組成；其中引物甲的濃度為0.32扣 mol/L，引物乙的濃度為0.325皿ol/L，MgCl2的濃度為1.5mol/L。
[0103] 3、HRM 反應(yīng)
[0104] (1)取步驟2制備的反應(yīng)體系，置于Roche Li曲tCycler 96儀器，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反 應(yīng)，PCR程序?yàn)椋?4°C變性5min;94°C變性3〇3,58°(：退火293,72°(：延伸63,45個(gè)循環(huán)；72°(：延 伸2min。
[0105] (2)完成步驟（1)后，進(jìn)行如下反應(yīng):首先95°C作用30s(目的為與巧光染料結(jié)合）； 然后降低到50°C作用30s(目的為使解旋的DNA單鏈再重新結(jié)合為雙鏈結(jié)構(gòu)）；再然后逐漸升 高溫度到95°C(目的為解鏈），期間每升高rC收集巧光信號(hào)25次;最后迅速降溫至37°C作用 5s。W巧光強(qiáng)度變化為縱坐標(biāo)，解鏈的溫度為橫坐標(biāo)，得到特征性溶解曲線。采用IBM SPSS Statistics 22軟件分析特征性溶解曲線。
[0106] 部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖l(a為松蕊麥（四號(hào)）和內(nèi)麥11，b為紅皮小麥和晉麥2418)結(jié)果 表明，待測(cè)小麥品種進(jìn)行HRM反應(yīng)獲得的特征性溶解曲線分為a型和b型兩種。
[0107] 根據(jù)HRM反應(yīng)的特征性溶解曲線結(jié)果，得出如下結(jié)論：W待測(cè)小麥的基因組DNA為 模板，用引物甲和引物乙組成的特異引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到特征性溶解曲線，之后進(jìn)行 如下評(píng)判:如果所述特征性溶解曲線呈現(xiàn)b型，則所述待測(cè)小麥的基因型為H;如果所述特征 性溶解曲線呈現(xiàn)a型，則所述待測(cè)小麥的基因型為L(zhǎng)。
[0108] 按照上述方法對(duì)262個(gè)小麥品種的基因型進(jìn)行分型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1和圖2(a為基 因型為L(zhǎng)的待測(cè)小麥，b為基因型為H的待測(cè)小麥）。結(jié)果表明，85個(gè)小麥品種的基因型為H， 177個(gè)小麥品種的基因型為L(zhǎng)。
[0109] =、特征性溶解曲線與小麥相關(guān)性狀的關(guān)聯(lián)分析
[0110] 對(duì)基因型H和基因型L兩種類型小麥巧粒的千粒重、粒長(zhǎng)和粒寬進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見 表2。結(jié)果表明，基因型H的小麥品種的千粒重極顯著高于基因型L的小麥品種(P<0.01)，基 因型H的小麥品種的粒長(zhǎng)顯著高于基因型L的小麥品種(P<0.05)，而基因型H的小麥品種的 粒寬和基因型L的小麥品種的粒寬則無(wú)顯著差異。
[0111]表2
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 引物對(duì)，由引物甲和引物乙組成； 所述引物甲為如下al)或a2): al)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子； a2)將序列1經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功 能的DNA分子； 所述引物乙為如下a3)或a4): a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子； a4)將序列2經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功 能的DNA分子。2. 如權(quán)利要求1所述的引物對(duì)，其特征在于:所述引物對(duì)中，所述引物甲和所述引物乙 的摩爾比為1:1。3. 權(quán)利要求1或2所述引物對(duì)在制備用于鑒定或輔助鑒定具有不同籽粒性狀小麥的試 劑盒或鑒定具有不同籽粒性狀小麥中的應(yīng)用;所述籽粒性狀為粒重和/或粒長(zhǎng)。4. 鑒定或輔助鑒定具有不同籽粒性狀小麥的試劑盒，包括權(quán)利要求1或2所述引物對(duì)； 所述籽粒性狀為粒重和/或粒長(zhǎng)。5. 權(quán)利要求4所述試劑盒在鑒定具有不同籽粒性狀小麥中的應(yīng)用；所述籽粒性狀為粒 重和/或粒長(zhǎng)。6. 權(quán)利要求4所述試劑盒的制備方法，為如下（I)或（Π ): (I)所述引物對(duì)中各條引物分別單獨(dú)包裝； (Π )所述引物對(duì)中各條引物按照權(quán)利要求2所述比例混合在一起。7. -種鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的方法，包括如下步驟： 1)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到樣本 溶解曲線；以標(biāo)準(zhǔn)小麥甲的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得 至Ijb型溶解曲線；以標(biāo)準(zhǔn)小麥乙的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反 應(yīng)，得到a型溶解曲線； 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥甲為老麥、紅皮小麥、紅粒當(dāng)年老、麻花板、假紅麥、紅麥、有芒白稃、紅皮 冬麥、白秋麥、原冬822、農(nóng)大311、線麥、早五天、豬毛元字頭、水里站、蘭溪早小麥、婺源麥、 和尚麥、懦麥、芒小麥、蘇麥3號(hào)、恩麥4號(hào)、鄂麥6號(hào)、安徽3號(hào)、敦化春麥、火球、赤小麥、Funo、 鄭引4號(hào)、潮安小麥、赤穗早深根、上林小麥、抗銹10號(hào)、晉麥2418、豐產(chǎn)3號(hào)、百農(nóng)3217、西農(nóng) 6028、12040冀麥2號(hào)、濟(jì)南17、小偃6號(hào)、陜農(nóng)7859、溫麥6號(hào)、萊州953、鄭州741、白芒麥、半截 芒、平原50、白扁穗、紅和尚頭、大口麥、葛家鄉(xiāng)、葛爾紅麥、大春白四棱麥(2)、白朗灰麥、本 地黃花麥、扎紅、墨脫小麥、邊巴春麥-6、白芒小麥、烏江卓、木宗卓嘎、日喀則8號(hào)、尕老漢、 火里炎、白大頭、白螞蚱、甘麥8號(hào)、畢麥26、去麥34、鳳麥11、醬麥、小三月黃、白芒麥、紅芒 子、豬屎麥、扁頭光殼麥、豬狗麥、滇西紅殼洋麥、紅春麥、托克遜1號(hào)、中國(guó)春、鄭麥9023或偃 展1號(hào)； 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥乙為京紅5號(hào)、內(nèi)麥11、晉麥3號(hào)、梁來(lái)友白皮小麥、畢紅穗、小白麥、大白 皮、小紅皮、定興寨、春小麥、火燎麥、大紅麥、陜西白麥、牛趾甲、紅金麥、白齊麥、小口紅、蘭 花麥、帶芒紅麥、涿鹿冬麥、紅老麥、磐石無(wú)芒、有芒白稃、小白芒、中優(yōu)9507、晉麥8號(hào)、豐抗2 號(hào)、長(zhǎng)治6406、北京8號(hào)、呂旱328、延安11、農(nóng)大183、農(nóng)大139、銘賢169、東方紅3號(hào)、江西早、 紅花早、江東門、大黃皮、崇陽(yáng)紅麥1、六柱頭、蟬不知、黃水白、白蒲、早小麥、望水白、車锎 子、三顆寸、泡子麥、華東6號(hào)、_英5號(hào)、揚(yáng)麥158、浙麥1號(hào)、白油麥、洋麥、大青芒、光頭、新克 旱9號(hào)、克豐3號(hào)、克澇4號(hào)、新曙光1號(hào)、東農(nóng)101、新曙光6號(hào)、吉春1016、KaBka3、南大2419、 Orof en、農(nóng)林10號(hào)、水原86、錢交麥、Early Premium、Triumph、Lovrin 10、敷德薩3號(hào)、 Tanori、Villa Glori25H112、Atlas66、甘肅96、赤殼、松蕊麥、臺(tái)中23、敵銹早、徑陽(yáng)60、石特 14、復(fù)壯30、碧螞1號(hào)、碧螞4號(hào)、石家莊54、平陽(yáng)27、泰山1號(hào)、濟(jì)南2號(hào)、蚰包、煙農(nóng)15、石家莊 407、內(nèi)鄉(xiāng)5號(hào)、鄭州6號(hào)、咸農(nóng)39、矮豐3號(hào)、魯麥1號(hào)、黃瓜先、老來(lái)瞎、峻蛄腚、西山扁穗、紅狗 豆、白火麥、三月黃、紅搶場(chǎng)、蚰子麥、白齊麥、白秀子頭、有芒掃谷旦、阜陽(yáng)紅、螞蚱麥、搶場(chǎng) 麥、火麥、霉前五、堿麥、三月黃、小佛手、禿芒麥、白條魚、白芒麥、大玉花、府麥、老齊麥、出 山豹、紫猜紅、大粒半芒、六月黃、康定小麥、藏冬4號(hào)、日喀則54號(hào)、一枝麥、大白麥、紅秀子、 金黃麥、紅芒麥、大白麥、白齊頭、老禿頭、高原506、青春28、寧春4號(hào)、互助紅、金麥4號(hào)、定西 24、會(huì)寧10號(hào)、蜀萬(wàn)8號(hào)、繁6、貴農(nóng)10號(hào)、興義4號(hào)、同家壩小麥、紅花麥、白麥子、成都光頭、白 花麥、換香果、漢中白、梭條紅麥、紅須麥、紫皮、魚鰍麥、陽(yáng)麥、洋麥、長(zhǎng)芒石扁頭、白冬麥、紅 春麥、春麥、紅冬麥、紅金包銀、新冬2號(hào)、喀什1號(hào)或喀什白皮； 2)比較樣本溶解曲線、a型溶解曲線和b型溶解曲線，如果樣本溶解曲線與a型溶解曲線 一致、待測(cè)小麥為L(zhǎng)基因型，如果樣本溶解曲線與b型溶解曲線一致、待測(cè)小麥為Η基因型;然 后進(jìn)行如下dl)或d2)的判斷： dl )H基因型的待測(cè)小麥的粒重大于L基因型的待測(cè)小麥； d2)H基因型的待測(cè)小麥的粒重大于非Η基因型的待測(cè)小麥。8. -種鑒定或輔助鑒定具有不同粒長(zhǎng)小麥的方法，包括如下步驟： 1)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得到樣本 溶解曲線；以標(biāo)準(zhǔn)小麥甲的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反應(yīng)，得 至Ijb型溶解曲線；以標(biāo)準(zhǔn)小麥乙的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行HRM反 應(yīng)，得到a型溶解曲線； 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥甲為老麥、紅皮小麥、紅粒當(dāng)年老、麻花板、假紅麥、紅麥、有芒白稃、紅皮 冬麥、白秋麥、原冬822、農(nóng)大311、線麥、早五天、豬毛元字頭、水里站、蘭溪早小麥、婺源麥、 和尚麥、懦麥、芒小麥、蘇麥3號(hào)、恩麥4號(hào)、鄂麥6號(hào)、安徽3號(hào)、敦化春麥、火球、赤小麥、Funo、 鄭引4號(hào)、潮安小麥、赤穗早深根、上林小麥、抗銹10號(hào)、晉麥2418、豐產(chǎn)3號(hào)、百農(nóng)3217、西農(nóng) 6028、12040冀麥2號(hào)、濟(jì)南17、小偃6號(hào)、陜農(nóng)7859、溫麥6號(hào)、萊州953、鄭州741、白芒麥、半截 芒、平原50、白扁穗、紅和尚頭、大口麥、葛家鄉(xiāng)、葛爾紅麥、大春白四棱麥(2)、白朗灰麥、本 地黃花麥、扎紅、墨脫小麥、邊巴春麥-6、白芒小麥、烏江卓、木宗卓嘎、日喀則8號(hào)、尕老漢、 火里炎、白大頭、白螞蚱、甘麥8號(hào)、畢麥26、去麥34、鳳麥11、醬麥、小三月黃、白芒麥、紅芒 子、豬屎麥、扁頭光殼麥、豬狗麥、滇西紅殼洋麥、紅春麥、托克遜1號(hào)、中國(guó)春、鄭麥9023或偃 展1號(hào)； 所述標(biāo)準(zhǔn)小麥乙為京紅5號(hào)、內(nèi)麥11、晉麥3號(hào)、梁來(lái)友白皮小麥、畢紅穗、小白麥、大白 皮、小紅皮、定興寨、春小麥、火燎麥、大紅麥、陜西白麥、牛趾甲、紅金麥、白齊麥、小口紅、蘭 花麥、帶芒紅麥、涿鹿冬麥、紅老麥、磐石無(wú)芒、有芒白稃、小白芒、中優(yōu)9507、晉麥8號(hào)、豐抗2 號(hào)、長(zhǎng)治6406、北京8號(hào)、呂旱328、延安11、農(nóng)大183、農(nóng)大139、銘賢169、東方紅3號(hào)、江西早、 紅花早、江東門、大黃皮、崇陽(yáng)紅麥1、六柱頭、蟬不知、黃水白、白蒲、早小麥、望水白、車锎 子、三顆寸、泡子麥、華東6號(hào)、_英5號(hào)、揚(yáng)麥158、浙麥1號(hào)、白油麥、洋麥、大青芒、光頭、新克 旱9號(hào)、克豐3號(hào)、克澇4號(hào)、新曙光1號(hào)、東農(nóng)101、新曙光6號(hào)、吉春1016、KaBka3、南大2419、 Orof en、農(nóng)林10號(hào)、水原86、錢交麥、Early Premium、Triumph、Lovrin 10、敷德薩3號(hào)、 Tanori、Villa Glori25H112、Atlas66、甘肅96、赤殼、松蕊麥、臺(tái)中23、敵銹早、徑陽(yáng)60、石特 14、復(fù)壯30、碧螞1號(hào)、碧螞4號(hào)、石家莊54、平陽(yáng)27、泰山1號(hào)、濟(jì)南2號(hào)、蚰包、煙農(nóng)15、石家莊 407、內(nèi)鄉(xiāng)5號(hào)、鄭州6號(hào)、咸農(nóng)39、矮豐3號(hào)、魯麥1號(hào)、黃瓜先、老來(lái)瞎、峻蛄腚、西山扁穗、紅狗 豆、白火麥、三月黃、紅搶場(chǎng)、蚰子麥、白齊麥、白秀子頭、有芒掃谷旦、阜陽(yáng)紅、螞蚱麥、搶場(chǎng) 麥、火麥、霉前五、堿麥、三月黃、小佛手、禿芒麥、白條魚、白芒麥、大玉花、府麥、老齊麥、出 山豹、紫猜紅、大粒半芒、六月黃、康定小麥、藏冬4號(hào)、日喀則54號(hào)、一枝麥、大白麥、紅秀子、 金黃麥、紅芒麥、大白麥、白齊頭、老禿頭、高原506、青春28、寧春4號(hào)、互助紅、金麥4號(hào)、定西 24、會(huì)寧10號(hào)、蜀萬(wàn)8號(hào)、繁6、貴農(nóng)10號(hào)、興義4號(hào)、同家壩小麥、紅花麥、白麥子、成都光頭、白 花麥、換香果、漢中白、梭條紅麥、紅須麥、紫皮、魚鰍麥、陽(yáng)麥、洋麥、長(zhǎng)芒石扁頭、白冬麥、紅 春麥、春麥、紅冬麥、紅金包銀、新冬2號(hào)、喀什1號(hào)或喀什白皮； 2)比較樣本溶解曲線、a型溶解曲線和b型溶解曲線，如果樣本溶解曲線與a型溶解曲線 一致、待測(cè)小麥為L(zhǎng)基因型，如果樣本溶解曲線與b型溶解曲線一致、待測(cè)小麥為Η基因型;然 后進(jìn)行如下d3)或d4)的判斷： d3 )H基因型的待測(cè)小麥的粒長(zhǎng)大于L基因型的待測(cè)小麥； d4 )H基因型的待測(cè)小麥的粒長(zhǎng)大于非Η基因型的待測(cè)小麥。9.權(quán)利要求1或2所述引物對(duì)，或，權(quán)利要求4所述試劑盒，或，權(quán)利要求7或8所述方法在 小麥育種中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK106048075SQ201610696294
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年8月19日
【發(fā)明人】高欣, 梁園園, 王中華, 李學(xué)軍
【申請(qǐng)人】西北農(nóng)林科技大學(xué)