新型微生物及其用圖
【專利摘要】將選自于由Bacillus sp.ITB090株(NITE BP?01725)、Bacillus sp.ITB100株(NITE BP?01726)和Bacillus sp.ITB105株(NITE BP?01727)所組成的組中的微生物或者由這些微生物株誘導(dǎo)而來的突變株用于植物病害的防治、線蟲防治和植物生長促進(jìn)等。NITE BP-0172520131017NITE BP-0172620131017NITE BP-0172720131017
【專利說明】
新型微生物及其用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種對(duì)植物病害防治、線蟲防治和植物生長促進(jìn)有用的新型微生物。 本發(fā)明進(jìn)一步設(shè)及作為用于提高新型微生物對(duì)植物病原菌的耐受性、線蟲防治和植物生長 促進(jìn)的微生物制劑的使用。
【背景技術(shù)】
[0002] 作為使用除了現(xiàn)有的化學(xué)農(nóng)藥W外的植物病害的防治方法，使用從自然界分離的 微生物的生物性防治技術(shù)受到了矚目，一些微生物農(nóng)藥實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)品化。然而，已知的微生物 農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥相比，存在效果不穩(wěn)定、或適用病害少的缺點(diǎn)。從運(yùn)種情況考慮，期待著有 新適用病害且顯示出穩(wěn)定的防治效果的新型微生物農(nóng)藥。
[0003] 作為使用微生物的植物病害防治劑，黃藍(lán)狀菌(Talaromyces flavus)劑、巧光假 單胞菌"3611(1〇111〇]1日3；1^1110'63。6]13)劑、非病原性胡蘿^軟腐歐文氏菌化1'￥；[]11曰 carotovora)劑、深綠木霉（Trichoderma atroviride)劑、簡單芽抱桿菌（Baci 1 lus simplex)劑、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtil is)劑等作為微生物農(nóng)藥被注冊并得到使用。
[0004] 作為使用微生物的線蟲防治劑，侵入己斯德氏芽菌(Pasteuria pene化ans)劑、瘤 捕單頂抱菌(Monacrospori皿地ymato地ag皿)劑作為微生物農(nóng)藥被注冊并得到使用。
[0005] 日本專利第2955655號(hào)說明書（專利文獻(xiàn)1)中公開了使用屬于解淀粉芽抱桿菌 (Bacillus amylolique化ciens)的細(xì)菌的植物病害防治劑。該植物病害防治劑的有效成分 是微生物的產(chǎn)物，細(xì)菌本身不被用作農(nóng)藥。此外，關(guān)于植物生長促進(jìn)或線蟲防治沒有任何記 載。 另外，日本專利第5198690號(hào)說明書（專利文獻(xiàn)2)中公開了使用屬于解淀粉芽抱桿菌 (Bacillus amylolique化ciens)的細(xì)菌的植物病害防治劑，但與本發(fā)明的菌株在分類上不 同。 此外，日本專利特開2009-247302號(hào)公報(bào)(專利文獻(xiàn)3)中公開了能夠同時(shí)防治絲狀真菌 性病害和細(xì)菌性病害且活菌體本身有效的微生物農(nóng)藥，但是關(guān)于植物生長促進(jìn)或線蟲防治 沒有記載。
[0006] 日本專利第3471815號(hào)說明書(專利文獻(xiàn)4，W098/050422)中公開了使用能夠用于 廣泛的植物病害且對(duì)玉米根蟲（Corn Rootworm)有效的芽抱桿菌屬細(xì)菌的植物病害防治 劑，但關(guān)于植物生長促進(jìn)或線蟲防治沒有記載。 另外，日本專利第4071036號(hào)說明書(專利文獻(xiàn)5，US2004/265292)中公開了能夠用于防 治植物病害和防治害蟲的Bacillus SP.D747株，但關(guān)于植物生長促進(jìn)或線蟲防治沒有記 載。
[0007] 日本專利第3471811號(hào)說明書（專利文獻(xiàn)6，W096/032840)中公開了使用芽抱桿菌 屬細(xì)菌的線蟲防治劑。該線蟲防治劑的有效成分是具有抗線蟲活性的堅(jiān)強(qiáng)芽抱桿菌 (Baci 1 lus firmus)株的細(xì)菌或者抱子，但關(guān)于植物生長促進(jìn)或防治植物病害沒有記載。 另外，日本專利第4359653號(hào)說明書(專利文獻(xiàn)7，W01997/012980)中公開了利用蘇云金 芽抱桿菌(Bacillus thuringiensis)的新型株所產(chǎn)生的抗線蟲性毒素的線蟲控制方法，但 關(guān)于植物生長促進(jìn)或植物病害防治沒有記載。
[0008] 另一方面，在農(nóng)業(yè)上，化學(xué)肥料是對(duì)農(nóng)作物產(chǎn)量產(chǎn)生影響的重要農(nóng)業(yè)材料，但所使 用的化學(xué)肥料成分的30~50%沒有被農(nóng)作物利用而擴(kuò)散到環(huán)境中，成為河川富營養(yǎng)化、地 下水水質(zhì)污染等的原因。此外，生產(chǎn)化學(xué)肥料時(shí)會(huì)使用大量的化石燃料，與化石燃料的價(jià)格 高漲相輔相成，化學(xué)肥料的成本也在增高。進(jìn)一步，作為氮肥料的分解物的氮氧化物(M)x) 被認(rèn)為與二氧化碳?xì)怏w相比具有約300倍的溫室效應(yīng)，對(duì)地球變暖的擔(dān)憂正在成為問題。另 夕h預(yù)計(jì)今后由于世界性的人口增加而食物不足，使用用于提高農(nóng)作物生產(chǎn)率的材料是不 可缺少的，因此代替已有的化學(xué)肥料的、對(duì)環(huán)境更友好的材料的必要性日益提高。
[0009] 與運(yùn)些情況相對(duì)，利用±壤微生物來提高農(nóng)農(nóng)作物的產(chǎn)量方面的研究主要針對(duì)根 瘤菌屬細(xì)菌(根瘤菌）、假單胞菌屬細(xì)菌、芽抱桿菌屬細(xì)菌廣泛進(jìn)行，但是由于其效果低而得 到實(shí)用化的極少。
[0010] 如上所述，強(qiáng)烈期望不依靠化學(xué)農(nóng)藥和化學(xué)肥料、環(huán)境負(fù)荷少、可W進(jìn)行植物病害 防治和線蟲防治、同時(shí)也具有植物生長促進(jìn)的微生物。 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)
[0011] 專利文獻(xiàn)1:日本專利第2955655號(hào)說明書 專利文獻(xiàn)2:日本專利第5198690號(hào)說明書 專利文獻(xiàn)3:日本專利特開2009-247302號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)4:日本專利第3471815號(hào)說明書 專利文獻(xiàn)5:日本專利第4071036號(hào)說明書 專利文獻(xiàn)6:日本專利第3471811號(hào)說明書 專利文獻(xiàn)7:日本專利第4359653號(hào)說明書
【發(fā)明內(nèi)容】
發(fā)明要解決的問題
[0012] 本發(fā)明的目的在于，提供一種具有植物病害防治作用、線蟲防治作用和植物生長 促進(jìn)作用的新型微生物。 本發(fā)明的另一目的在于，提供含有上述微生物作為有效菌、可用作生物農(nóng)藥(微生物制 劑)的植物病害防治劑、線蟲防治劑和植物生長促進(jìn)劑。 解決問題的手段
[0013] 本發(fā)明人為了解決上述課題進(jìn)行了反復(fù)深入研究，結(jié)果成功分離出Bacillus sp.ITB090(NITE BP-01725)'Bacillus sp.口B100(WTE BP-01726)'Bacillus sp.口B105 (WTE BP-01727)和Bacillus sp. 口B117株(WTE P-01728KW下有時(shí)將運(yùn)些微生物、也包 括其突變體稱為本發(fā)明的微生物），發(fā)現(xiàn)它們具有多種植物病害的防治作用、線蟲防治作用 和植物生長促進(jìn)作用，基于該發(fā)現(xiàn)完成了本發(fā)明。
[0014] 即本發(fā)明包含如下：
[1 ]一種微生物或由運(yùn)些微生物的菌株誘導(dǎo)而來的突變株，其特征在于，所述微生物選 自于由Bacillus SP.ITB090株（WTE BP-01725)、Bacillus sp. 口B100株（N口E BP-01726) 和Bacillus sp. 口B105株(WTE BP-01727)所組成的組。
[2] 如[1]所述的微生物或由運(yùn)些微生物的菌株誘導(dǎo)而來的突變株，其特征在于， Bacillus SP.ITB090株（MTE BP-01725)具有序列號(hào)1的堿基序列所示的16S rDNA， Bacillus sp. 口B090株(N口E BP-01725)的突變株具有與序列號(hào)1的堿基序列有99.5% W 上同源性的堿基序列所示的16S rDNA，Bacillus sp. 口B100株(WTE BP-01726)具有序列 號(hào)2的堿基序列所示的16S rDNA，Bacillus sp. 口B100株(WTE BP-01726)的突變株具有與 序列號(hào)2的堿基序列有99.5 % W上同源性的堿基序列所示的16S rDNA，Bac i 1 lus SP.ITB105株（N口E BP-01727)具有序列號(hào)3的堿基序列所示的16S rDNA，Bacillus SP.ITB105株(NITE BP-01727)的突變株具有與序列號(hào)3的堿基序列有99.5%W上同源性的 堿基序列所示的16S rDNA。
[3] -種菌體或其培養(yǎng)物，其特征在于，所述菌體或其培養(yǎng)物是[1]或[2]所述的微生物 或其突變株的菌體或其培養(yǎng)物。
[4] 一種微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑含有[1]或[2]所述的微生物或其突 變株、或者[3 ]所述的菌體或其培養(yǎng)物。
[引如[4]所述的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是植物生長促進(jìn)劑。
[6巧日[4]所述的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是植物病害防治劑。
[7巧日[4]所述的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是線蟲防治劑。
[引一種植物生長促進(jìn)方法，其特征在于，包括用[3]所述的菌體或其培養(yǎng)物或者[引所 述的微生物制劑對(duì)植物或±壤進(jìn)行處理的步驟。
[9] 一種植物病害防治方法，其特征在于，包括用[3]所述的菌體或其培養(yǎng)物或者[6]所 述的微生物制劑對(duì)植物或±壤進(jìn)行處理的步驟。
[10] -種線蟲防治方法，其特征在于，包括用[3]所述的菌體或其培養(yǎng)物或者[7]所述 的微生物制劑對(duì)植物或±壤進(jìn)行處理的步驟。
[11] 一種植物的栽培方法，其特征在于，包括用[3]所述的菌體或其培養(yǎng)物或者[4]~ [7]中任一項(xiàng)所述的微生物制劑對(duì)植物進(jìn)行處理的步驟。 發(fā)明效果
[0015] 本發(fā)明的微生物由于具有多種植物病害的防治作用、線蟲防治作用和植物生長促 進(jìn)作用，因此可W作為不依靠化學(xué)農(nóng)藥和化學(xué)肥料、環(huán)境負(fù)荷少的有效的微生物制劑使用。
【具體實(shí)施方式】
[0016] W下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明的微生物是ITB090株(NITE BP-01725)、 口B100株(NITE BP-01726)、ITB105株(NITE BP-01727)、ITB117株(NITE P-01728)或者它 們的突變株。
[0017] 口B090株(OTTE BP-01725)是根據(jù)leSrRNA基因的序列分析(序列號(hào)1)，被鑒定為 Bacillus sp.。該株在2013年10月17日被保藏于獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)生物 資源中屯、NBRC(Biological Resource Center，NITE)(日本國千葉縣木更津市上總鑲足2- 5-8)，保藏編號(hào)為NITE P-01725,隨后，移交至基于布達(dá)佩斯條約的國際保藏單位，賦予保 藏編號(hào)為NITE BP-01725。 該菌株具有如下所示的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)。 (1) 形態(tài)學(xué)性質(zhì) 形態(tài):桿菌 大?。簩?.0皿、長1.5~2.5皿 運(yùn)動(dòng)性:+ 有無抱子:+ (2) 培養(yǎng)性質(zhì) 培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊脂(nutrient agar)培養(yǎng)基(30°C) 形狀:圓形 色調(diào):奶油色 (3) 生理學(xué)性質(zhì) 革蘭氏染色:+
[0018] ITB100株（NITE BP-01726)根據(jù)leSrRNA基因的序列分析（序列號(hào)2)被鑒定為 Bacillus sp.。該株在2013年10月17日被保藏于獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)生物 資源中屯、NBRC(Biological Resource Center，NITE)(日本國千葉縣木更津市上總鑲足2- 5-8)，保藏編號(hào)為NITE P-01726,隨后，移交至基于布達(dá)佩斯條約的國際保藏單位，賦予保 藏編號(hào)為NITE BP-01726。 該菌株具有如下所示的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)。 (1) 形態(tài)學(xué)性質(zhì) 形態(tài):桿菌 大小：寬0.8~0.9皿、長1.5~2.0皿 運(yùn)動(dòng)性:+ 有無抱子:+ (2) 培養(yǎng)性質(zhì) 培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊脂(nutrient agar)培養(yǎng)基(30°C) 形狀:圓形 色調(diào):奶油色 (3) 生理學(xué)性質(zhì) 革蘭氏染色:+
[0019] ITB105株（NITE BP-01727)根據(jù)leSrRNA基因的序列分析（序列號(hào)3)被鑒定為 Bacillus sp.。該株在2013年10月17日被保藏于獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)生物 資源中屯、NBRC(Biological Resource Center，NITE)(日本國千葉縣木更津市上總鑲足2- 5-8)，保藏編號(hào)為NITE P-01727,隨后，移交至基于布達(dá)佩斯條約的國際保藏單位，賦予保 藏編號(hào)為NITE BP-01727。 該菌株具有如下所示的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)。 (1)形態(tài)學(xué)性質(zhì) 形態(tài):桿菌 大小：寬0.8~0.9皿、長1.5~2.0皿 運(yùn)動(dòng)性:+ 有無抱子:+ (2) 培養(yǎng)性質(zhì) 培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊脂(nutrient agar)培養(yǎng)基(30°C) 形狀:圓形 色調(diào):奶油色 (3) 生理學(xué)性質(zhì) 革蘭氏染色:+
[0020] ITB117株（NITE P-01728)根據(jù)leSrRNA基因的序列分析（序列號(hào)4)被鑒定為 Bacillus sp.。該株在2013年10月17日被保藏于獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)生物 資源中屯、NBRC(Biological Resource Center，NITE)(日本國千葉縣木更津市上總鑲足2- 5-8)，保藏編號(hào)為NITE P-01728。 該菌株具有如下所示的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)。 (1) 形態(tài)學(xué)性質(zhì) 形態(tài):桿菌 大小：寬0.8~0.9皿、長1.5~2.5皿 運(yùn)動(dòng)性:+ 有無抱子:+ (2) 培養(yǎng)性質(zhì) 培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊脂(nutrient agar)培養(yǎng)基(30°C) 形狀:圓形 色調(diào):奶油色 (3) 生理學(xué)性質(zhì) 革蘭氏染色:+
[0021] 由ITB090(NITE BP-01725)JTB100(NITE BP-01726)、ITB105(NITE BP-01727)、 ITB117株(NITE P-01728)誘導(dǎo)的突變株是指:例如可列舉出利用它們的自然突變體、紫外 線照射、X射線照射、誘發(fā)突變劑(例如，N-甲基-N-硝基-N-亞硝基脈等）等的誘發(fā)突變處理 體、多倍體。具體而言，可適宜地使用與16S rDNA的同源性保持在99.5 % W上的突變株。運(yùn) 些突變株只要保持植物病害防治作用、線蟲防治作用和植物生長促進(jìn)作用，就包括在本發(fā) 明的微生物。此處，保持植物病害防治作用、線蟲防治作用和植物生長促進(jìn)作用是指，其中 任一個(gè)作用與母本菌株相比較，在80 % W上。
[0022] 本發(fā)明的微生物的培養(yǎng)方法可W使用在固形培養(yǎng)基上靜置培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等公知 方法，關(guān)于可利用的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)條件等，只要本申請(qǐng)的細(xì)菌能夠生存并繁殖，就沒有 特別限制。例如除了肉湯培養(yǎng)基等普通培養(yǎng)基W外，還可列舉含有葡萄糖、蛋白腺、酵母提 取物的培養(yǎng)基等。此外，除了液體培養(yǎng)基W外，也可使用含有瓊脂的斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng) 基等固形培養(yǎng)基。也可W分為菌種培養(yǎng)與主培養(yǎng)兩個(gè)階段進(jìn)行培養(yǎng)。 作為培養(yǎng)基的碳源，可利用上述株所能同化(資化)的所有物質(zhì)，具體而言可列舉:葡萄 糖、半乳糖、乳糖、薦糖、麥芽糖、麥芽提取物、廢糖漿、糖稀、淀粉水解物等。 作為培養(yǎng)基的氮源，也同樣地W蛋白腺、肉湯、酵母提取物、大豆粉、玉米漿等含氮有機(jī) 物為代表，可利用該菌株能夠利用的各種合成或者天然物。 此外，按照微生物培養(yǎng)的通常方法，還可根據(jù)需要添加食鹽、憐酸鹽等無機(jī)鹽類、巧、 儀、鐵等金屬的鹽類、維生素、氨基酸等微量營養(yǎng)源。 培養(yǎng)可在振蕩培養(yǎng)、通氣培養(yǎng)等需氧條件下進(jìn)行。培養(yǎng)溫度為20~40°C、優(yōu)選25~35 °C，抑為5~8、優(yōu)選6~7,培養(yǎng)期為1~4日、優(yōu)選2~3日。
[0023] 本發(fā)明中的"培養(yǎng)物"可例示為培養(yǎng)本發(fā)明的微生物后得到的含有菌體的培養(yǎng)基 或培養(yǎng)液、或者它們的濃縮物。
[0024] 含有本發(fā)明的微生物或其培養(yǎng)物的微生物制劑，例如可用作植物病害防治劑、線 蟲防治劑和/或者植物生長促進(jìn)劑。
[0025] 作為本發(fā)明的微生物制劑的適用對(duì)象，優(yōu)選為植物，具體地可列舉:谷物，例如水 稻、小麥、玉米;蔬菜類，例如胡蘿h黃瓜、蘿h南瓜、生菜、茄子、番茄、卷屯、菜、馬鈴馨、白 菜、商葛、油菜、青椒、蔥、洋蔥、生姜、大蒜、草替;磨茹類，例如香茹;果樹類，例如柿、梨、橘 子、葡萄、蘋果、桃;花弁類，例如菊花、郁金香、玫瑰;豆類，例如大豆、芝麻、花生等。
[0026] 本發(fā)明中的"植物病害防治"是指對(duì)植物的病害進(jìn)行預(yù)防或者治愈的效果。 運(yùn)里所述的"預(yù)防植物病害"是指在±壤病害的情形時(shí)，在含有病原菌的±壤中栽培一 定期間可能被其感染的植物時(shí)，施用防治劑植物的發(fā)病率比未施用防治劑植物的發(fā)病率 低。此外，在莖葉病害的情形時(shí)，在接種病原菌并栽培一定期間可能被其感染的植物時(shí)，施 用防治劑植物的發(fā)病率比未施用防治劑植物的發(fā)病率低。進(jìn)一步地，"治愈植物病害"是指 在栽培一定期間被病害感染的植物時(shí)，施用防治劑的植物的發(fā)病程度比未施用防治劑的植 物的發(fā)病程度降低。
[0027] 本發(fā)明中的"植物病害"，只要是本發(fā)明的微生物發(fā)揮防治效果的植物病害，就沒 有特別限制，優(yōu)選通過病原菌感染植物而引起的植物病害，更優(yōu)選莖葉病害和±壤病害。 本發(fā)明中作為防治對(duì)象的莖葉病害，可列舉:苗立枯病、斑點(diǎn)落葉病、炭痘病、稻攝病、 灰霉病、白粉病等，但并不限于運(yùn)些。 本發(fā)明中作為防治對(duì)象的±壤病害是指，優(yōu)選為±壤傳染性病害，更詳細(xì)地是源于如 下任一 1種W上的±壤病害:鑲刀菌屬菌、頂囊殼屬菌、絲核菌屬菌、腐霉屬菌、輪枝抱屬菌、 疫霉屬菌、小菌核屬菌、伏革菌屬、根腫菌屬菌、根霉屬菌、木霉屬菌、微座抱屬菌、核盤菌屬 菌，但并不限于運(yùn)些。作為運(yùn)些上壤病害的具體例子，可列舉:草坪腐霉病害、生菜根腐病 等，但并不限于運(yùn)些。 優(yōu)選在遭受運(yùn)些植物病害之前應(yīng)用到植物W預(yù)防病害，也可W應(yīng)用在已遭受運(yùn)些植物 病害的植物W去除病害。
[0028] 本發(fā)明中的"植物生長促進(jìn)"是指將本發(fā)明的微生物或者微生物制劑通過地面噴 灑液劑、地面噴灑固體、空中噴灑液劑、空中噴灑固體、水面施用、設(shè)施內(nèi)施用、±壤混和施 用、±壤灌概施用、育苗箱施用法、單花處理、植株底部處理等方法對(duì)植物進(jìn)行處理，或者通 過對(duì)栽培植物的種子/種馨進(jìn)行表面處理(種子包衣、浸潰處理、涂布處理等），從而促進(jìn)栽 培植物的葉面積增大、光合能力增加和葉綠素增加、地上部的莖葉等重量和粗細(xì)增加、地下 部(根等)重量的增加或根的伸長增大，W及/或者子實(shí)或果實(shí)的數(shù)量和重量增加，其結(jié)果關(guān) 系到農(nóng)業(yè)和園藝中產(chǎn)量增加或品質(zhì)改善的效果。
[0029] 作為本發(fā)明的微生物所能防治的病害病原菌，更具體地可列舉:水稻的稻攝病菌 (Pyricularia oryzae)、芝麻葉枯病菌（Cochliobolus miyabeanus)、紋枯病菌 (Rhizoctonia solani)、水稻惡苗病菌（Gibberella fujikuroi);麥類的白粉病菌 (Erysiphe graminis f . sp . hordei，Erys iphe graminis f.sp.tritici)、委秀病菌 (Puccinia striiformis，Puccinia graminis，Puccinia recondita f.sp.tritici， Pucciniahordei)、赤霉病菌（G;Lbberellazeae)、網(wǎng)斑病菌（Pyrenophorateres)、雪腐病 M(Typhula incarnata，Typhula ishikariensis，Sclerotiniaborealis， Micronectriella nivalis)、散黑穗病菌（Ustilago nuda)、網(wǎng)腥黑穗病菌（Tilletia caries，Til let ia toetida)、目良斑病菌（Tapesiayallundea)、云形病菌（Phynchosporium secalis f.sp. hordei )、葉枯病菌（Sept or ia tritici)、穎枯病菌（Le打 tosphaeria nodorum);巧橘黑點(diǎn)病菌(Diapoi'the citri)、瘡娜病菌化Isinoe fawcettii)、褐腐疫霉病 菌（Phytophthora citrophthora)、綠霉病菌（Penicillium digitatum)、青霉病菌 (Penicillium italicum);蘋果花腐病菌（Monilinia mali)、腐爛病菌（Valsa ceratosperma)、白粉病菌（Podosphaera leucotricha)、斑點(diǎn)藩葉病菌（A1 ternaria alter 打 ataapple pathotype)、黑 M 病菌(Ve 打 turia i 打 aequalis)、赤 M 病菌 (Gymnosporangium yamadae)、輪紋病菌（Botriophaeria berengeriana f. sp. piricola)、 蟲軍糞病菌（Zygophiala jamaicensis)、煤污病菌（Gloeodes pomigena)、黑點(diǎn)病菌 (Mycosphaerella pomi)、炭痘病菌（Glomerella cingulata)、褐斑病菌 (Diplocai^ponmal i );梨黑星病菌（Venturia nashicola)、黑斑病菌（Alternaria alternataJapanese pear pathotype)、輪紋病菌（Physalospora piricola)、赤星病菌 (Gymno sporangium asiaticum);桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、黑星病菌 (Cladosporium carpophilum)、擬莖點(diǎn)霉腐爛病菌（Phomopsis sp ?);葡萄褐斑病菌 (PseudocerCOspora vitis)、輪紋病菌（Marssonina viticola)、黑痘病菌（Elsinoe ampelina)、晩腐病菌（Glomerella cingulata)、白粉病菌（Uncinula necator)、誘病菌 (Phakopsora ampelopsidis)、枝枯病菌（Phomopsis sp .);柿白粉病菌（Phyllactinia kakicola)、炭痘病菌（Col le to trichum gloeosporioides)、角斑藩葉病菌（Cercospora kaki)、圓斑藩葉病菌（Mycosphaerella nawae );果梅的黑星病菌（Cladosporium carpophilum);輕桃褐腐病菌（Monilinia frueticola);瓜類的白粉病菌（Sphaerotheca fuliginea)、蔓枯病菌（Didymella bryoniae)、炭痘病菌（Colletotorichum legenarium); 番茄輪紋病菌（Alternaria solani)、葉霉病菌（Cladosporium fulvum);茄子褐紋病菌 (Phomopsis vexans)、白粉病菌化iTsiphe cichoracearum);十字花科蔬萊的黑斑病菌 (Alternaria japonica,Alternaria bracicae，Alternaria brassicicola)、白斑病菌 (Cercosporella brassicae);蔥誘病菌（Pucciniaallii);生姜的根莖腐爛病菌（Pyrhium ultimum，Pythium z igiber i s );草霉白粉病菌（Sphaerotheca humuli)、炭痘病菌 (Glomerella cingulata);大豆紫斑病菌（Cercospora kikuchii )、黑痘病菌化Isinoe glycines)、黑點(diǎn)病菌（Diaporthe phaseolorum var. so jae);紅豆褐斑病菌（Cercospora canescens)、誘病菌（Uromyces phaseoli var.azukicola);扁豆炭痘病菌 (Colletotrichum lindemuthianum);花生黑斑病菌（Cercosporidium personatum)、褐斑 病菌（Cercospora arachidicola)、瘡娜病菌（Shaceloma arachidis);魏豆白粉病菌 化iTsiphe pisi);馬鈴馨早疫病菌（Alternaria solani);茶網(wǎng)餅病菌化xobasidium reticulaturn)、白星病菌（Elsinoe leucospi la)、輪斑病菌（Pestalotiopsis theae， Pestalotiopsis longiseta); ；!：因草白勺赤星病菌（Alternaria longipes)、白粉病菌 (Erysiphe cichoracearum)、炭痘病菌（Colletotrichum邑loeosporioides);甜菜褐斑病 菌（Cercospora beticola);草坪彎抱霉葉枯病菌（Curvularia geniculata)、紋枯?。ㄈ?文：疑似葉枯?。┚–eratobasidium spp.);玫瑰黑星病菌（Diploca;rpon rosae)、白粉病 菌（Shaerotheca pannosa);菊花褐斑病菌（Septoria obesa)、白誘病菌（Puccinia horiana);各種農(nóng)作物的灰霉病菌（Botrytis cinerea)、菌核病菌（Sclerotinia sclerotior皿)等，但并不限于運(yùn)些。
[0030] 作為本發(fā)明的微生物可防治的線蟲，特別是植物寄生性線蟲，例如可列舉:根結(jié)線 蟲類的北方根結(jié)線蟲(Meloidogyne hapla)、南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)、爪 哇根結(jié)線蟲（Meloidogyne javanica)W及其他根結(jié)線蟲（Meloidogyne)種；抱囊形成線蟲 類的馬鈴馨金線蟲(Globodera rostochiensis) W及其他黃金線蟲(Globodera)屬;禾谷抱 囊線蟲化eterodera avenae)、大豆抱囊線蟲化eterodera glycines)、甜菜抱囊線蟲 巧eterodera schachtii)、S葉草抱囊線蟲巧eterodera 及其他抱囊線蟲 (Heterodera)種；種子瘦瘤線蟲類的粒線蟲（Anguina)種；莖和葉線蟲類的滑刃線蟲 (A曲elenchoides)種；刺線蟲類的長尾刺線蟲(Belonolaimus longicauda1:us)W及其他刺 線蟲(Belonolaimus)種；松線蟲類的松材線蟲(Bursa地elenchus x}dophilus)W及其他傘 滑刃線蟲（811'3日911616]1(311113)種；環(huán)線蟲類的環(huán)紋線蟲（〔1'；[(30]16111日）種、小環(huán)線蟲 (Criconemell)種、輪線蟲（Criconemoides)種、中環(huán)線蟲(Mesocriconema)種；莖和鱗莖線 蟲類的馬鈴馨莖線蟲（Ditylenchus destructor)、起絨草莖線蟲（Dit}denchus dipsaci) W及其他莖線蟲化i切l(wèi)enchus)種；錐線蟲類(awl nematodes)類的錐線蟲化olichodorus) 種；螺旋線蟲類的多帶螺旋線蟲化eliocotylenchus multicinctus) W及其他螺旋線蟲 (Helicotylenchus)種；銷和擬銷線蟲類（sheath and sheathoid nematodes)的銷線蟲 (化111；[巧(31；[0地0拘）種和半輪線蟲巧日111；[妊；[(30]1日1]1〇1(1日3)種；潛根線蟲巧^3111]1日]1]11日11日） 種;紐帶線蟲類的紐帶線蟲化oploaimus)種;假根結(jié)線蟲類的根瘤線蟲(NaccAbus)種;長針 線蟲類的橫帶長針線蟲(Xongidorus elongaUis)W及其他長針線蟲(Xongidorus)種;短體 線蟲類的落選短體線蟲（Praty lenchus neglectus)、穿刺短體線蟲（Praty lenchus penetrans)、彎曲短體線蟲（Pratylenchus curvitatus)、古氏短體線蟲（Pratylenchus goodeyi) W及其他短體線蟲（Pratylenchus)種；穿孔線蟲類的香蕉穿孔線蟲（Radopholus similis) W及其他穿孔線蟲(Radopholus)種；盤旋線蟲類的強(qiáng)壯盤旋線蟲(Rotylenchus robustus) W及其他盤旋線蟲（Rotylenchus)種；盾線蟲（Scutellonema)種；短粗根線蟲類 (s1:ut)by root nematodes)的原始毛刺線蟲（Trichodorus primitivus)^及其他毛刺線蟲 (Trichodorus)種、擬毛刺線蟲（Paratrichodorus)種；矮化線蟲類的克萊頓矮化線蟲 (Tylenchorhynchus claytoni)、不定矮化線蟲（Tylenchorhynchus dubius) W及其他矮化 線蟲(Tylenchorhynchus)種;相橘半穿刺線蟲類的半穿刺線蟲(T}denchulus)種；劍線蟲類 的劍線蟲(Xiphinema)種等，但并不限于運(yùn)些。 優(yōu)選在運(yùn)些線蟲附著于植物之前應(yīng)用到植物來預(yù)防病害，也可W應(yīng)用在運(yùn)些線蟲已附 著的植物上去除線蟲。
[0031] 本發(fā)明的微生物制劑(植物病害防治劑、線蟲防治劑和植物生長促進(jìn)劑)除了可W 單獨(dú)使用菌體和/或者培養(yǎng)物之外，也可W做成用非活性的液體或固體的載體稀釋，根據(jù)需 要加入表面活性劑、分散劑、其他輔助劑而成的藥劑來使用。作為具體的制劑例子，可列舉： 顆粒劑、粉劑、可濕性粉劑、懸浮制劑、乳劑等劑型等。
[0032] 作為載體，例如可列舉：滑石、膨潤±、高嶺±、粘±、娃藻±、白炭黑、賠石、熟石 灰、硫酸錠、娃砂、尿素、多孔質(zhì)的固體載體、水、異丙醇、甲基糞、二甲苯、環(huán)己酬、亞烷基二 醇等液體載體等。作為表面活性劑和分散劑，例如可列舉:二糞基甲橫酸鹽、醇硫酸醋鹽、木 質(zhì)素橫酸鹽、烷基芳基橫酸鹽、聚氧乙締二醇酸、聚氧乙締脫水山梨糖醇單烷基化物、聚氧 乙締烷基芳基酸等。作為輔助劑可列舉:簇甲基纖維素、聚乙二醇、丙二醇、阿拉伯膠、黃原 膠等，作為保護(hù)劑可列舉:脫脂乳、抑緩沖劑等。在此情況下，菌株的活菌體的量和/或其培 養(yǎng)物的量、另外應(yīng)用期限和應(yīng)用量可根據(jù)上述活菌的情況而適當(dāng)確定。 作為液體載體，例如可列舉:憐酸緩沖液、碳酸緩沖液、生理鹽水等。此外，作為固體載 體，例如可列舉:高嶺±、粘±、滑石、白聖、石英、綠坡縷石、蒙脫石、娃藻±等天然礦物粉 末;娃酸、氧化侶、娃酸鹽等合成礦物粉末;結(jié)晶纖維素、玉米淀粉、明膠、海藻酸等高分子性 天然物。此外，作為表面活性劑，例如可列舉:聚氧乙締-脂肪酸醋、聚氧乙締-脂肪醇酸、燒 基芳基聚乙二醇酸、烷基橫酸鹽、烷基硫酸鹽、芳基橫酸鹽等。作為輔助劑，例如可列舉:簇 甲基纖維素、聚氧乙締二醇、阿拉伯膠、淀粉、乳糖等。
[0033] 另外，在作為W水系溶劑為載體的液劑制造時(shí)，為了提高溶劑中菌體的水和性，也 可W添加水溶性高分子。作為水溶性高分子，可列舉：聚乙締醇、聚乙二醇、聚乙締基甲基 酸、聚乙締胺、聚乙締化咯燒酬、聚乙締亞胺、聚丙締酷胺等。進(jìn)一步，為了謀求羅氏假單胞 菌對(duì)植物根部的附著性的提高和羅氏假單胞菌在制劑中的穩(wěn)定性的提高，還可W配入木葡 聚糖、瓜爾膠等多糖類。
[0034] 本發(fā)明的微生物制劑中所含的本發(fā)明的微生物的濃度，只要不損害作為植物病害 防治劑、線蟲防治劑和/或者植物生長促進(jìn)劑的效果就沒有特別限制，作為制劑為1〇5~ l〇i3c化/g(菌落形成單位），優(yōu)選為107~l〇i2cfu/g。此外，可根據(jù)所用的本發(fā)明的微生物的 防治效果或病害程度等進(jìn)行適當(dāng)變更。 此外，本發(fā)明的微生物制劑除了上述物質(zhì)W外，只要不妨礙本發(fā)明的效果，就可W含有 在本發(fā)明的微生物的培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基等任意物質(zhì)。
[0035] 關(guān)于本發(fā)明的微生物制劑的使用方法沒有特別限制，可根據(jù)劑型等使用形態(tài)、農(nóng) 作物或病害進(jìn)行適當(dāng)選擇，例如可列舉:地面噴灑液劑、地面噴灑固體、空中噴灑液劑、空中 噴灑固體、水面施用、設(shè)施內(nèi)施用、±壤混和施用、±壤灌概施用、表面處理(種子包衣、涂布 處理等）育苗箱施用法、單花處理、植株底部處理等方法，優(yōu)選列舉將各種劑型的微生物制 劑進(jìn)行如下處理:對(duì)栽培植物的種子/種馨進(jìn)行覆蓋、對(duì)栽培植物的花進(jìn)行單花處理、對(duì)栽 培植物的莖葉進(jìn)行處理、對(duì)栽培植物的傷口處、修剪部位進(jìn)行涂布處理、±壤灌概、±壤混 和等方法。其中，在±壤中施用時(shí)，可W將本發(fā)明的微生物制劑施用在±壤中后再種植栽培 植物，此外，也可W將栽培植物種植在±壤中后再將本發(fā)明的微生物制劑施用在該±壤中。 本發(fā)明的微生物制劑優(yōu)選為防治莖葉病害而噴霧到莖葉。本發(fā)明的微生物制劑優(yōu)選為 防治±壤病害而進(jìn)行噴霧或灌注。
[0036] 本發(fā)明的微生物制劑(植物病害防治劑、線蟲防治劑和植物生長促進(jìn)劑），根據(jù)需 要可W含有本發(fā)明的有效成分W外的有效成分，例如殺蟲劑、其他殺菌劑、除草劑、植物生 長調(diào)節(jié)劑、肥料等。
[0037] 作為殺菌劑成分，例如可列舉:聯(lián)苯S挫醇、慷菌挫、環(huán)挫醇、苯酸甲環(huán)挫、締挫醇、 恩康挫、氣環(huán)挫、氣哇挫、臘苯挫、氣娃挫、粉挫醇、己挫醇、亞胺挫、種菌挫、葉菌挫、臘菌挫、 戊菌挫、丙環(huán)挫、丙硫菌挫、娃氣挫、=挫酬、=挫醇、戊挫醇、四氣酸挫、滅菌挫、咪鮮胺、稻 攝醋、抑霉挫、氣菌挫、氯霜挫、苯菌靈、多菌靈、嚷菌靈、麥穗寧、嚷挫菌胺、上菌靈、嗯咪挫 富馬酸鹽、嗯霉靈、喀菌脂、酸菌胺、締目虧菌醋、氣喀菌醋、酸菌醋、苯氧菌胺、目虧酸菌胺、晚氧 菌醋、化挫酸菌醋、朽菌醋、萎誘靈、苯霜靈、晚酷菌胺、聯(lián)苯化菌胺、環(huán)酷菌胺、氣酷胺、巧化 菌胺、滅誘胺、甲霜靈、精甲霜靈、甲巧酷胺、嗯霜靈、氧化萎誘靈、化嚷菌胺、嚷巧酷胺、嚷酷 菌胺、締酷嗎嘟、氣嗎嘟、氣聯(lián)苯菌、氣化菌胺、環(huán)丙酷菌胺、雙氯氯菌胺、雙烘酷菌胺、氣晚 胺、晚斑朽、乙喀酪橫酸醋、喀菌環(huán)胺、氯苯喀晚醇、喀菌腺、喀菌胺、氣苯喀晚醇、喀霉胺、嗦 氨靈、拌種咯、咯菌臘、氨丙麟酸、嗎菌靈、下苯嗎嘟、十=嗎嘟、苯誘晚、異菌脈、腐霉利、乙 締菌核利、嗯挫菌酬、咪挫菌酬、辛異嚷嘟酬、締丙苯嚷挫、敵菌靈、化菌酬、咯哇酬、丙氧哇 嘟、=環(huán)挫、敵菌丹、克菌丹、棉隆、滅菌丹、氯菌胺、哇氧靈、嗎I挫橫菌胺、代森儘鋒、代森儘、 威百畝、代森聯(lián)、福美鐵、丙森鋒、秋蘭姆、代森鋒、福美鋒、乙霉威、鄉(xiāng)霉威、苯嚷菌胺、霜霉 威鹽酸鹽、甲基硫菌靈、化菌苯威、波爾多液、堿性氯化銅、堿性硫酸銅、氨氧化銅、8-徑基哇 嘟銅、多果定、雙脈辛燒苯橫酸鹽、雙脈辛胺乙酸鹽、雙脈鹽、春雷霉素、鏈霉素、多抗霉素、 上霉素、井崗霉素 A、樂殺蛾、敵蛾普、敵蛾通、二嚷農(nóng)、稻攝靈、克攝散、異稻攝凈、=乙麟酸、 乙憐侶、定菌憐、甲基立枯憐、百菌清、抑菌靈、橫菌胺、六氯苯、四氯苯獻(xiàn)、戊菌隆、五氯硝基 苯、環(huán)氣菌胺、霜脈氯、甲菌定、乙菌定、巧霜靈、苯菌酬、螺環(huán)菌胺、代森錠、硫、石硫合劑、氯 挫靈、碳酸氨鐘、碳酸氨巧、嚷二嗦、葉枯獻(xiàn)、=嗦、壬基酪橫酸銅、徑基異嗯挫、氣氯菌核利、 代森福美鋒、橫菌威、敵攝憐化DDP)、硫菌靈（IBP)、挫蟲酷胺、氣化菌酷胺、異嚷菌胺、W及 化挫糞菌胺，但并不限定于運(yùn)些。
[0038]作為殺蟲劑成分，例如可列舉:化蟲清、化曬酬、殺懼硫憐、乙酷甲胺憐、西維因、滅 多蟲、殺懼丹、=氣氯氯菊醋、酸菊醋、伏蟲隆、氣蟲酷胺、氣蟲脈、抑蟲阱、挫蛾醋、速蛾酬、 化蟲嘟、嚷嗦酬、仲下威(BPMC)、異丙威(MIPC)、馬拉硫憐、殺撲憐、倍硫憐、二嗦憐、異亞諷 憐、曬滅憐、乙硫苯威、抗曬威、氯菊醋、氯氯菊醋、畢芬寧、節(jié)蛾酸、氣娃菊醋、締晚蟲胺、氣 晚脈、甲氧蟲酷阱、化蛾胺、酸蛾酸、開樂散、烘蛾特、嚷蛾酬、四蛾嗦、艾克敵、密滅汀、BT(蘇 云金芽抱桿菌(Bacillus thuringiensis))、巧蟲威、氯氣蟲腺、漠蟲臘、氣蟲清、乙蛾挫、滅 蛾釀、甲基蟲蛾憐、氣丙菊醋、滅蛾猛、毒死婢、阿維菌素、因滅汀、苯下錫、特下硫憐、丙線 憐、硫線憐、克線憐、豐索憐、DSP、除線憐、嚷挫憐、殺線威、異美沙同憐（isamidof OS)、下硫 環(huán)憐、氯挫憐、蟲線憐、丙硫克百威、螺蛾醋、殺蟲丹、谷硫憐、乙拌憐、甲硫威、諷吸憐、對(duì)硫 憐、氣氯氯菊醋、e-氣氯氯菊醋、下基喀晚憐、螺甲蛾醋、硫丹、雙甲脈、四漠菊醋、乙酷蟲臘、 乙蟲清、乙硫憐、敵百蟲、甲胺憐、敵敵畏、速滅憐、久效憐、樂果、伐蟲脈、安果、滅曬憐、甲基 乙拌憐、乙拌憐、二漠憐、甲基對(duì)硫憐、殺懼臘、二胺憐、阿苯達(dá)挫、奧苯達(dá)挫、芬苯達(dá)挫、奧芬 達(dá)挫、丙蟲憐、硫丙憐、丙硫憐、丙漠憐、埃文松、雙硫憐、稻豐散、甲基毒蟲畏 (Dimethylvinfos)、毒蟲畏、殺蟲畏、辛硫憐、異嗯挫憐、化挫硫憐、毒死婢、化嗦硫憐、伏殺 硫憐、亞胺硫憐、蔬果憐、奎硫憐、除蟲菊素、丙締菊醋、烘丙菊醋、節(jié)巧菊醋、氯菊醋、屯氣菊 醋、甲氯菊醋、a-氯氯菊醋a-氯氣氯菊醋、漠氯菊醋、氯戊菊醋、高氯戊菊醋、氣氯菊醋、氣 胺氯菊醋、乙氯菊醋、硫雙威、涕滅威、棉鈴?fù)?、速滅威、滅殺威、殘殺威、苯酸威、苯硫威、?lián) 苯阱醋、克百威、下硫克百威、硫、Pyrif 1叫uinazon J夫線威、下酸脈、除蟲脈、氣鈴脈、雙苯 氣脈、風(fēng)蛾脈、氣晚脈、=環(huán)己基氨氧化錫、油酸鋼、油酸鐘、締蟲醋、締蟲乙醋、樂殺蛾、雙甲 脈、克氯苯、漠蛾醋、=氯殺蛾諷、殺蟲橫、苯蛾特、環(huán)蟲酷阱、氯蟲酷阱、安殺番、二苯丙酸、 挫蟲酷胺、挫曬威、硫酸煙堿、嚷蟲嘟、嚷蟲嗦、嚷蟲胺、巧蟲胺、氣晚胺、蚊蛹酸、喀蛾醋、氣 蟻腺、滅蛹胺、異氯脈酸=丙醋(TPIC)、殺蟲環(huán)、哇蛾酸、瀏陽霉素、印棟素、魚藤酬、徑基丙 基淀粉、倍硫憐亞諷(mesulfenfos)、憐蟲威、異美沙同憐（^ッアミK木乂，isoamidofos)、 涕滅諷威(aldoxycarb)、威百畝、酒石酸甲嚷喀晚、棉隆、鹽酸左旋咪挫、水楊菌胺、挫蟲酷 胺、晚蟲丙酸、氯蟲苯甲酯胺、臘化蛾醋W及下氣蛾醋，但不限定于運(yùn)些物質(zhì)。 實(shí)施例
[0039] 下面，利用實(shí)施例對(duì)本發(fā)明更具體地說明。但是，本發(fā)明的技術(shù)范圍并不限于運(yùn)些 實(shí)施例。
[0040] 從日本國內(nèi)采取的包含植物根的±壤中分離微生物。具體而言，通過對(duì)采取的± 壤進(jìn)行熱處理(8(TC、10分鐘），將所得的干燥±壤1肖懸浮于滅菌水中。將該懸浮液稀釋至 102~104倍，用普通肉湯培養(yǎng)基(榮研化學(xué)株式會(huì)社)進(jìn)行分離培養(yǎng)(28°C、3天），分離所形成 的菌落。將分離的菌落在馬鈴馨-葡聚糖瓊脂培養(yǎng)基上，找出對(duì)各種植物病原菌有效果的菌 株。其結(jié)果得到四種微生物，分別命名為ITB090(NITE BP-01725)、ITB100(NITE BP- 01726) JTB105(NITE BP-01727) JTB117(NITE P-01728)。對(duì)運(yùn)些微生物分析其leSrRNA基 因的序列，進(jìn)行系統(tǒng)分析，全部鑒定為Bacillus sp.。 對(duì)運(yùn)些微生物按照下面的步驟，對(duì)于植物病害防治活性、殺線蟲活性和對(duì)植物的生長 促進(jìn)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0041 ] 實(shí)施例1 植物病害防治效果體外（in vitro)試驗(yàn) (1)各種細(xì)菌的培養(yǎng)方法 對(duì)于ITB090(NITE BP-01725)、ITB100(NITE BP-01726)、ITB105(NITE BP-01727)、 口B117(OTTE P-01728)株，分別將一接種環(huán)的保存菌接種到每燒瓶含有60ml普通肉湯培養(yǎng) 基（榮研化學(xué)株式會(huì)社）的帶擋板的500mlS角燒瓶中，然后用旋轉(zhuǎn)振蕩機(jī)W轉(zhuǎn)速18化pm在 28°C培養(yǎng)2天。用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至成為5X107c化/mL，供對(duì)時(shí)培養(yǎng)試驗(yàn)用。
[0042] (2)對(duì)時(shí)培養(yǎng)方法在加入有馬鈴馨-葡聚糖瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿的邊緣，將上述稀 釋的培養(yǎng)液W每20iU進(jìn)行接種。進(jìn)一步，對(duì)于預(yù)先培養(yǎng)的各種植物病原菌(苗立枯病:紋枯 病菌(I^iizoctonia solani)、斑點(diǎn)落葉病:蘋果褐斑病菌(Alternaria mali)、炭痘病:炭痘 病菌(Glomerella cingula1:a)、稻攝?。旱緮z病菌(Pyricularia oiTzae)和灰霉?。夯颐共?菌(Bot巧tis cinerea))，每個(gè)培養(yǎng)基分別用直徑5mm的木塞穿孔器挖出菌絲，接種到同一 個(gè)培養(yǎng)皿的中屯、。在25°C下將培養(yǎng)皿培養(yǎng)2~5天，觀察對(duì)各種病原菌的括抗作用或形成抑 困圈。
[0043] (3)檢查方法 對(duì)于各種病原菌，觀察到括抗作用或形成抑菌圈時(shí)記為"+"，未觀察到時(shí)記為"一"。
[0044] (4)結(jié)果 檢查結(jié)果如表1所示?？芍景l(fā)明的新型株均對(duì)受試的病原菌具有防治活性。
[0045] [表U
[0046] 實(shí)施例2 對(duì)黃瓜灰霉病(Botirtis cinerea)防治效果試驗(yàn) (1)各種細(xì)菌的培養(yǎng)方法 對(duì)于ITB090(NITE BP-01725)、ITB100(NITE BP-01726)、ITB105(NITE BP-01727)、 口B117(OTTE P-01728)株，分別將一接種環(huán)的保存菌接種到每燒瓶含有60ml普通肉湯培養(yǎng) 基（榮研化學(xué)株式會(huì)社）的帶擋板500mlS角燒瓶中，然后用旋轉(zhuǎn)振蕩機(jī)W轉(zhuǎn)速18化pm在28 °C培養(yǎng)2天。用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至成為5 X107c化/mL，供后面的試驗(yàn)用。作為對(duì) 照，同樣地培養(yǎng)枯草芽胞桿菌(Baci 1 lus subti 1 is)MBI600(購入并分離自樂b年弓一可濕 性粉劑（出光興產(chǎn)株式會(huì)社））。
[0047] (2)處理方法 在胚軸部分切取完全展開的黃瓜子葉（香b光3號(hào)P型），使切口與濕紙巾紙接觸。接 種菌是將在PSA培養(yǎng)基培養(yǎng)的灰霉病抱子懸浮于PS培養(yǎng)基5mL中制備而成的。在子葉的中屯、 部滴下灰霉病菌胞子懸浮液50化。在由滴下而形成的水滴上放紙片(PAP邸DISK)(抗生素 檢測用紙片、厚8mm東洋濾紙），并滴下供試藥劑(濃度5X107c化/血的細(xì)胞懸浮液)5化L，放 入濕室，在25 °C下保管。
[004引（3)檢查方法 在接種后第3日檢查在黃瓜葉上出現(xiàn)的病斑面積，根據(jù)下述式(1)求出防治效價(jià)。 防治效價(jià)={1-(處理區(qū)的病斑面積/未處理區(qū)的病斑面積）}X100...式(1)
[0049] [表2]__
[0050] 結(jié)果如表2所示，通過經(jīng)本發(fā)明所設(shè)及的微生物進(jìn)行處理，灰霉病菌（Botrytis cinerea)所致的黃瓜灰霉病的發(fā)病率與未處理區(qū)相比顯著減少，與枯草芽胞桿菌MBI600株 相比，獲得非常高的防治效果。
[0化1] 實(shí)施例3 線蟲防治效果 (1)各種細(xì)菌的培養(yǎng)方法 對(duì)于ITB090(NITE BP-01725)、ITB100(NITE BP-01726)、ITB105(NITE BP-01727)、 口B117(OTTE P-01728)株，分別將一接種環(huán)的保存菌接種到每燒瓶含有60ml普通肉湯培養(yǎng) 基（榮研化學(xué)(株））的帶擋板500mlS角燒瓶中，然后用旋轉(zhuǎn)振蕩機(jī)W轉(zhuǎn)速18化pm在28°C培 養(yǎng)2天。用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至5X107c化/mL，供試驗(yàn)用。 作為對(duì)照區(qū)，同樣地培養(yǎng)枯草芽胞桿菌MBI600株(購入并分離自樂|^年弓一可濕性粉劑 (出光興產(chǎn)株式會(huì)社）），供試驗(yàn)用。
[0052] (2)殺線蟲活性試驗(yàn)方法 對(duì)自番茄根采集的從卵囊解化在24小時(shí)W內(nèi)的南方根結(jié)線蟲2期幼蟲的殺線蟲活性進(jìn) 行試驗(yàn)。微量滴定板中添加各菌種的稀釋培養(yǎng)液和等量的根結(jié)線蟲2期幼蟲懸浮液（約50 只）。作為比較劑，將枯草芽胞桿菌MBI600株(購入并分離自樂^年弓一可濕性粉劑（出光興 產(chǎn)株式會(huì)社））進(jìn)行同樣稀釋得到的液體供試驗(yàn)用。將滴定板密封，放置在28°C、相對(duì)濕度約 為50 %的培養(yǎng)箱內(nèi)。
[0053] (3)檢查方法 72小時(shí)后，通過在實(shí)體顯微鏡下觀察來檢查線蟲的死亡率。此時(shí)，不動(dòng)的線蟲視為死 亡。殺線蟲率由下式(2)算出。 殺線蟲率（％ )=(死亡線蟲數(shù)^受試線蟲數(shù)）X 100* ??式(2)
[0054] (4)結(jié)果 如表3所示，通過將與本發(fā)明相關(guān)的微生物進(jìn)行處理，對(duì)南方根結(jié)線蟲2期幼蟲，獲得與 枯草芽胞桿菌MBI600株相比極高的殺線蟲活性。
[0化5][表3]
[0056] 實(shí)施例4 對(duì)南方根結(jié)線蟲的防治效果試驗(yàn) (1)各種細(xì)菌的培養(yǎng)方法 對(duì)于ITB090(NITE BP-01725)、ITB100(NITE BP-01726)、ITB105(NITE BP-01727)、 口B117(OTTE P-01728)株，分別將一接種環(huán)的保存株接種到每燒瓶含有60ml普通肉湯培養(yǎng) 基（榮研化學(xué)(株））的帶擋板500mlS角燒瓶中，然后用旋轉(zhuǎn)振蕩機(jī)W轉(zhuǎn)速18化pm在28°C培 養(yǎng)2天。用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至5X107c化/mL，供后面的試驗(yàn)用。作為對(duì)照，同樣地 培養(yǎng)枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)MBI600株(購入并分離自樂|^年弓一可濕性粉劑 (出光興產(chǎn)株式會(huì)社））。
[0化7] (2)處理方法 在用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至1 X 107c化/mL的液體中浸潰黃瓜種子（香b光3 號(hào)P型）30分鐘后，播種在填裝了根結(jié)線蟲污染±壤的1/lOOOOa瓦氏盆(wagner pot)中，該 根結(jié)線蟲污染±壤的根結(jié)線蟲的密度約為3.3只/干±20g。
[005引（3)檢查方法 定植1 個(gè)月后，按照Zeck(Zeck，W.M. (1971) :Pflanzenschutz-Nachichten.Bayer AG， 24,141-144.)的方法對(duì)根的被害程度(根瘤程度），并通過W下的等級(jí)值對(duì)根瘤附生程度進(jìn) 行評(píng)價(jià)。 0:完全未看到根瘤。 1:通過謹(jǐn)慎的觀察，可看到數(shù)個(gè)小根瘤。 2:容易地確認(rèn)到與1同樣的數(shù)個(gè)小根瘤。 3:有許多小根瘤，其中有幾個(gè)發(fā)生融合。根的功能幾乎不受損害。 4:有很多小根瘤，也有幾個(gè)大根瘤。根的大部分具有功能。 5:根的25 %上明顯附生有根瘤，且不具有功能。 6:根的50 %上明顯附生有根瘤，且不具有功能。 7:根的75%上明顯附生有根瘤，且根的再生能力也喪失。 8:完全沒有健全的根，阻礙植物的養(yǎng)分吸收。莖葉部仍為綠色。 9:完全被根瘤覆蓋的根系正在腐敗。植物正在枯死。 10:植物和根都已枯死。
[0059] 按下述式(3)求出根瘤指數(shù)。 根瘤指數(shù)=X(被害程度X個(gè)體數(shù))/(所有檢查個(gè)體數(shù)X10)X100* ??式(3) 基于評(píng)價(jià)的根瘤附生程度，按下述式(4)算出防治效價(jià)。 防治效價(jià)=100-(處理區(qū)的根瘤指數(shù)/未處理區(qū)的根瘤指數(shù)）X 100...式(4)
[0060] [表 4]
[0061] 結(jié)果如表4所示，通過將與本發(fā)明有關(guān)的微生物進(jìn)行處理，由南方根結(jié)線蟲導(dǎo)致的 根瘤指數(shù)與未處理區(qū)相比顯著減少，獲得與枯草芽胞桿菌MBI600株相比極高的防治效果。
[0062] 實(shí)施例5 植物的生長促進(jìn)效果 (1)各種細(xì)菌的培養(yǎng)方法 對(duì)于ITB090(NITE BP-01725)、ITB100(NITE BP-01726)、ITB105(NITE BP-01727)、 口B117(OTTE P-01728)株，分別將一接種環(huán)的保存株接種到每燒瓶含有60ml普通肉湯培養(yǎng) 基（榮研化學(xué)(株））的帶擋板500mlS角燒瓶中，然后用旋轉(zhuǎn)振蕩機(jī)W轉(zhuǎn)速18化pm在28°C培 養(yǎng)2天。作為對(duì)照，同樣地培養(yǎng)枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)MBI600(購入并分離自樂 |^年弓一可濕性粉劑（出光興產(chǎn)株式會(huì)社））。
[0063] (2)各菌的處理方法 對(duì)小麥的處理方法： 在用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至1 X 107c化/mL的液體中浸潰小麥種子30分鐘后，播 種到填裝有育苗培育上的盆中。 對(duì)擬南芥的處理方法： 在填裝有育苗培育±的盆中播種擬南芥后，用滅菌水將得到的培養(yǎng)液稀釋至成為1 X 107cf u/mL，取該溶液5血進(jìn)行灌概處理。 對(duì)玉米的處理方法： 將得到的培養(yǎng)液與玉米種子W每Ig種子重量為1 X 108c化地混和，將各培養(yǎng)液涂抹到 種子上。經(jīng)處理的種子播種到填裝有育苗培育±的盆中。 對(duì)大豆的處理方法： 將得到的培養(yǎng)液與大豆種子W每Ig種子重量為1 X 107c化地混和，將各培養(yǎng)液涂抹到 種子上。經(jīng)處理的種子播種到填裝有育苗培育±的盆中。
[0064] (3)檢查方法 小麥:在播種后3周后測定每個(gè)個(gè)體的地上部重量。 擬南芥:在播種后3周后測定每個(gè)個(gè)體的葉面積。 玉米:在播種后4周后測定每個(gè)個(gè)體的地上部重量。 大豆:在播種后4周后測定每個(gè)個(gè)體的地上部重量。 分別相對(duì)于未處理區(qū)算出增加量。
[0065] (4)結(jié)果 結(jié)果如下表5所示。在任一個(gè)植物體中都處理各株，由此與未處理區(qū)相比，植物的生長 顯著得到促進(jìn)，與枯草芽胞桿菌MBI600株相比，顯示出極高的生長促進(jìn)效果。
[0066] [表 5-U 小麥 相對(duì)于未處理區(qū)的鮮重（％ )
[006引[表 5-3] 玉米 相對(duì)干夫々h巧反的鮮雷（％ )
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 微生物或由這些微生物的菌株誘導(dǎo)而來的突變株，其特征在于，所述微生物選自于 由Bacillus SP.ITB090株（NITE BP-01725)、Bacillus SP.ITB100株（NITE BP-01726)和 Bacillus sp.ITB105株(NITE BP-01727)所組成的組。2. 如權(quán)利要求1所述的微生物或由這些微生物的菌株誘導(dǎo)而來的突變株，其特征在于， Bacillus sp.ITB090株（NITE BP-01725)具有序列號(hào)1的堿基序列所示的16S rDNA， Bacillus sp.ITB090株(NITE BP-01725)的突變株具有與序列號(hào)1的堿基序列有99.5%以 上同源性的堿基序列所示的16S rDNA，Bacillus sp.ITBlOO株(NITE BP-01726)具有序列 號(hào)2的堿基序列所示的16S rDNA，Bacillus sp.ITBlOO株(NITE BP-01726)的突變株具有與 序列號(hào)2的堿基序列有99.5 %以上同源性的堿基序列所示的16S rDNA，Bac i 1 lus sp.ITB105株（NITE BP-01727)具有序列號(hào)3的堿基序列所示的16S rDNA，Bacillus sp.ITB105株(NITE BP-01727)的突變株具有與序列號(hào)3的堿基序列有99.5%以上同源性的 堿基序列所示的16S rDNA。3. -種菌體或其培養(yǎng)物，其特征在于，所述菌體或其培養(yǎng)物是權(quán)利要求1或2所述的微 生物或其突變株的菌體或其培養(yǎng)物。4. 一種微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑含有權(quán)利要求1或2所述的微生物或 其突變株、或者權(quán)利要求3所述的菌體或其培養(yǎng)物。5. 如權(quán)利要求4所述的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是植物生長促進(jìn)劑。6. 如權(quán)利要求4所述的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是植物病害防治劑。7. 如權(quán)利要求4所述的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是線蟲防治劑。8. -種植物生長促進(jìn)方法，其特征在于，包括用權(quán)利要求3所述的菌體或其培養(yǎng)物或者 權(quán)利要求5所述的微生物制劑對(duì)植物或土壤進(jìn)行處理的步驟。9. 一種植物病害防治方法，其特征在于，包括用權(quán)利要求3所述的菌體或其培養(yǎng)物或者 權(quán)利要求6所述的微生物制劑對(duì)植物或土壤進(jìn)行處理的步驟。10. -種線蟲防治方法，其特征在于，包括用權(quán)利要求3所述的菌體或其培養(yǎng)物或者權(quán) 利要求7所述的微生物制劑對(duì)植物或土壤進(jìn)行處理的步驟。11. 一種植物的栽培方法，其特征在于，包括用權(quán)利要求3所述的菌體或其培養(yǎng)物或者 權(quán)利要求4~7中任一項(xiàng)所述的微生物制劑對(duì)植物進(jìn)行處理的步驟。
【文檔編號(hào)】A01G7/00GK106062175SQ201480057082
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2014年10月14日
【發(fā)明人】稻井康二, 田中元?dú)? 天木雄介
【申請(qǐng)人】出光興產(chǎn)株式會(huì)社, 日本史迪士生物科學(xué)株式會(huì)社