一種取代的雜芳基化合物及包含該化合物的組合物及其用圖
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種取代的雜芳基化合物及包含該化合物的組合物及其用途，本發(fā)明公開了如式（I）所示的雜芳基化合物，或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、前藥，立體異構(gòu)體、水合物或溶劑化合物。本發(fā)明所的雜芳基述化合物及包含該化合物的組合物可用于調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）和/ 或內(nèi)源性促紅細胞生成素（EPO），同時具有更好的藥代動力學(xué)參數(shù)特性，能夠提高化合物在動物體內(nèi)的藥物濃度，以提高藥物療效和安全性。
【專利說明】
-種取代的雜芳基化合物及包含該化合物的組合物及其用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種取代的雜芳基化合物及包含該化合物的 組合物，W及能夠調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)因子化IF)亞單位的穩(wěn)定性和增加體外及體內(nèi)內(nèi)源性促紅 細胞生成素的方法和化合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 缺氧誘導(dǎo)因子化IF)是一種堿性螺旋-環(huán)-螺旋(WlLH)PAS^er/Arnt/Sim)轉(zhuǎn)錄激 活劑，其調(diào)控隨細胞氧濃度改變的基因表達的改變。HIF是一種含有一個氧調(diào)節(jié)α亞單位 化IFa)和一個組成性表達β亞單位化ΙΡβ)的雜二聚體，也被稱為芳香控受體核轉(zhuǎn)運蛋白 (ARNT)。在氧合(常氧)細胞中，HI化亞單位通過設(shè)及視網(wǎng)膜血管瘤抑制蛋白（PVHUE3連接 酶復(fù)合物泛素化的機制迅速降解。在缺氧條件下，HI化不降解，且一種活性ΗΚα/β復(fù)合物在 細胞核中累積并激活若干基因的表達，包括糖酵解酶、葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白（GLUT)-l、促紅細胞 生成素化P0)和血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEG巧。(Maxwell等人，自然，1999,399,271-275)。
[0003] 促紅細胞生成素化P0)是隨HI化而產(chǎn)生的一種自然存在的激素，其刺激運載氧氣 貫穿全身的紅細胞的產(chǎn)生。EP0通常由腎分泌，且內(nèi)源性EK)在氧減少(缺氧）的條件下增加。 所有類型貧血的特征在于血液運載氧的能力減少，并因而伴有類似體征與癥狀，包括皮膚 及粘膜蒼白、虛弱、頭暈、易疲勞和嗜睡，導(dǎo)致生活質(zhì)量的下降。具有嚴重貧血情況的受試者 表現(xiàn)出難W呼吸及屯、臟崎形。貧血通常與紅細胞中或血紅蛋白中血液缺乏有關(guān)。
[0004] 局部缺血和缺氧病癥是發(fā)病和死亡的主要原因。屯、血管病每年引起至少一千五百 萬的死亡且是造成全世界30%死亡的原因。在多種屯、血管病中，缺血性屯、臟病和腦血管病 引起約17%的死亡。每年報道有一百Ξ十萬非致命性急性屯、肌梗塞的病例，構(gòu)成大約每 !00,000人中300人的發(fā)病率。另一方面，估計每年有五百萬美國人患有靜脈血栓癥，且約 600,000運些病例導(dǎo)致肺栓塞。約Ξ分之一的肺栓塞患者最終死亡，使得肺栓塞成為美國人 死亡的第Ξ個最普遍原因。
[0005] 當(dāng)前，局部缺血和缺氧病癥的治療集中在癥狀的減輕和致病性病癥的治療上。例 如，屯、肌梗塞的治療包括用W控制疼痛和減輕屯、臟工作負荷的硝酸甘油和鎮(zhèn)痛藥。使用其 它藥物，包括地高辛(digoxin)、利尿劑、氨利酬(amrinone)、i3-阻斷劑、降脂劑和血管緊張 素轉(zhuǎn)換酶抑制劑來穩(wěn)定病況，但運些療法中沒有一個可直接作用于由局部缺血和缺氧產(chǎn)生 的組織損壞。
[0006] 由于當(dāng)前治療中及生產(chǎn)和使用重組EP0中的不足，所W依然需要有效治療W下疾 病的化合物:促紅細胞生成素相關(guān)病況，例如貧血，包括與糖尿病、貧血、潰瘍、腎衰竭、癌 癥、感染、透析、手術(shù)和化學(xué)療法相關(guān)的貧血和設(shè)及局部缺血和缺氧的病況，例如動脈閉塞 性疾病、屯、絞痛、腸梗塞、肺梗塞、腦局部缺血和屯、肌梗塞。也需要有效預(yù)防由局部缺血引起 的組織損壞的化合物，所述局部缺血由于例如動脈粥樣硬化、糖尿病和例如肺栓塞及其類 似病癥的肺部病癥而發(fā)生。總之，在此項技術(shù)中需要調(diào)節(jié)HIF和/或內(nèi)源性促紅細胞生成素， 且可用于治療和預(yù)防HIF相關(guān)和EP0相關(guān)病癥的方法和化合物，所述病癥包括設(shè)及貧血、局 部缺血和缺氧的病況。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對W上技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種化合物及包含該化合物的組合物，其可用 于調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)因子化IF)和/或內(nèi)源性促紅細胞生成素巧P0)和/或具有更好藥效學(xué)/藥代 動力學(xué)性能。
[000引對此，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0009] 本發(fā)明的目的是提供一類新型可用于調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)因子化IF)和/或內(nèi)源性促紅 細胞生成素化P0)的和/或具有更好藥效學(xué)/藥代動力學(xué)性能的化合物。
[0010] 本發(fā)明的第一方面中，提供了一種式（I)所示的化合物，或其晶型、藥學(xué)上可接受 的鹽、水合物或溶劑化合物。
[0011]
[001^ 其中，1?1、護、護、於、護、護、護、護、護、1?10、護、護、護各自獨立地為氨、気、面素；
[001 ；3 ]附加條件是 r1、R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R8、R9、r10、r11、r1 哺 R"中至少一個是気代的或 気。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，Ri和R2各自獨立地為気或氨。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，Ri、R2是気。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，R3、R4和R5各自獨立地為気或氨。
[0017]在另一優(yōu)選例中，R6、R7、R8各自獨立地為気或氨。
[001引在另一優(yōu)選例中，護、1?1<\護、護和護各自獨立地為気或氨。
[0019]在另一選例中，所述化合物可選自下組化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，但不局限 于如下化合物：
[0020]
[0021]
[0022]在另一優(yōu)選例中，気在気代位置的気同位素含量至少是大于天然気同位素含量 (0.015% )，較佳地大于30%，更佳地大于50%，更佳地大于75%，更佳地大于95%，更佳地 大于99%。
[002；3] 具體地說，在本發(fā)明中1?1、護、護、於、1?5、護、護、護、護、1?1\護、護和1?13各気代位置中 気同位素含量至少是5%，較佳地大于10%，更佳地大于15%，更佳地大于20%，更佳地大于 25%，更佳地大于30 %，更佳地大于35%，更佳地大于40 %，更佳地大于45 %，更佳地大于 50%，更佳地大于55 %，更佳地大于60%，更佳地大于65 %，更佳地大于70 %，更佳地大于 75%，更佳地大于80 %，更佳地大于85%，更佳地大于90 %，更佳地大于95 %，更佳地大于 99%。
[0024]在另一優(yōu)選例中，式(I )中化合物的r1、R2、R3、R4、R5、R 6、R7、R8、R9、R10、Rll、r1 哺R"， 至少其中一個R含気，更佳地兩個R含気，更佳地Ξ個R含気，更佳地四個R含気，更佳地五個R 含気，更佳地六個R含気，更佳地屯個R含気，更佳地八個R含気，更佳地九個R含気，更佳地十 個尺含気，更佳地^^一個R含気，更佳地十二個R含気，更佳地十Ξ個R含気。
[0025]在另一優(yōu)選例中，所述化合物不包括非気代化合物。
[00%]在本發(fā)明的第二方面中，提供了一種制備藥物組合物的方法，包括步驟:將藥學(xué)上 可接受的載體與本發(fā)明第一方面中所述的化合物，或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或 溶劑合物進行混合，從而形成藥物組合物。
[0027] 在本發(fā)明的第Ξ方面中，提供了一種藥物組合物，它含有藥學(xué)上可接受的載體和 本發(fā)明第一方面中所述的化合物，或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。
[0028] 可用于本發(fā)明藥物組合物中的藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于任何助流劑、增 甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味增強劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、崩解劑、助 懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。
[0029] 本發(fā)明藥物組合物可配制成固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)制劑，如片劑、丸劑、膠囊 劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、乳劑、懸浮劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸人劑、凝膠劑、微球及氣溶膠 等。
[0030] 給予本發(fā)明藥物組合物的典型途徑包括但不限于口服、直腸、透黏膜、經(jīng)腸給藥， 或者局部、經(jīng)皮、吸入、腸胃外、舌下、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)給藥。 優(yōu)選口服給藥或注射給藥。
[0031] 本發(fā)明的藥物組合物可W采用本領(lǐng)域周知的方法制造，如常規(guī)的混合法、溶解法、 制粒法、制糖衣藥丸法、磨細法、乳化法、冷凍干燥法等。
[0032] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可W互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
[003引本文中，如無特別說明，"面素'指F、C1、Br、和I。更佳地，面原子選自F、C巧郵r。
[0034] 本文中，如無特別說明，"気代"指化合物或基團中的一個或多個氨被気所取代;気 代可W是一取代、二取代、多取代或全取代。術(shù)語"一個或多個気代的"與"一次或多次気代" 可互換使用。
[0035] 本文中，如無特別說明，"非気代的化合物"是指含気原子比例不高于天然気同位 素含量(0.015%)的化合物。
[0036] 本發(fā)明還包括同位素標(biāo)記的化合物，等同于原始化合物在此公開?？蒞列為本發(fā) 明的化合物同位素的例子包括氨，碳，氮，氧，憐，硫，氣和氯同位素，分別如2h，3h，i 3c，i4c， 哨，"0，180，畔，3申，355，1中^及3吃1。本發(fā)明中的化合物，或?qū)τ丑w，非對映體，異構(gòu)體，或藥 學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，其中含有上述化合物的同位素或其他其他同位素原子都在本 發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明中某些同位素標(biāo)記化合物，例如化和1化的放射性同位素也在其中， 在藥物和底物的組織分布實驗中是有用的。氣，即化和碳-14,即1化，它們的制備和檢測比較 容易，是同位素中的首選。同位素標(biāo)記的化合物可W用一般的方法，通過用易得的同位素標(biāo) 記試劑替換為非同位素的試劑，用示例中的方案可W制備。
[0037] 藥學(xué)上可接受的鹽包括無機鹽和有機鹽。一類優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物與酸形成 的鹽。適合形成鹽的酸包括但并不限于:鹽酸、氨漠酸、氨氣酸、硫酸、硝酸、憐酸等無機酸； 甲酸、乙酸、Ξ氣乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、班巧酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、 巧樣酸、苦味酸、苯甲酸、甲橫酸、乙橫酸、對甲苯橫酸、苯橫酸、糞橫酸等有機酸；W及脯氨 酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一類優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物與堿形成的鹽， 例如堿金屬鹽(例如鋼鹽或鐘鹽）、堿±金屬鹽(例如儀鹽或巧鹽）、錠鹽(如低級的燒醇錠鹽 W及其它藥學(xué)上可接受的胺鹽），例如甲胺鹽、乙胺鹽、丙胺鹽、二甲基胺鹽、；甲基胺鹽、二 乙基胺鹽、Ξ乙基胺鹽、叔下基胺鹽、乙二胺鹽、徑乙胺鹽、二徑乙胺鹽、Ξ徑乙胺鹽，W及分 別由嗎嘟、贓嗦、賴氨酸形成的胺鹽。
[0038] 術(shù)語"溶劑合物"指本發(fā)明化合物與溶劑分子配位形成特定比例的配合物。"水合 物"是指本發(fā)明化合物與水進行配位形成的配合物。
[0039] 本發(fā)明提供調(diào)節(jié)HIF和/或EP0的方法，其通過抑制HWa徑基化從而穩(wěn)定HIF和激活 HIF調(diào)控基因的表達。所述方法也可應(yīng)用于預(yù)防、預(yù)先治療或治療HIF和/或EP0相關(guān)病況，包 括貧血、局部缺血和缺氧病況。
[0040] 局部缺血和缺氧是兩種與HIF有關(guān)的病況并包括(但不限于）屯、肌梗塞、肝局部缺 血、腎局部缺血和中風(fēng)；周圍血管病癥、潰瘍、燒傷和慢性傷口；肺栓塞；和缺血-再灌注損 傷，包括例如與手術(shù)和器官移植相關(guān)的缺血-再灌注損傷。
[0041] 本發(fā)明的一個方面提供用于治療多種局部缺血和缺氧病況的方法，特別是使用本 文中所描述的化合物。在一個實施例中，當(dāng)在局部缺血或缺氧后投予時，本發(fā)明的方法產(chǎn)生 治療益處。例如，在屯、肌梗塞之后，本發(fā)明的方法使得發(fā)病率和死亡率驚人的降低，并且顯 著改善屯、臟結(jié)構(gòu)和性能。另一方面，當(dāng)在肝中毒性-局部缺血性損傷之后投予時，本發(fā)明的 方法改善肝功能。缺氧是肝臟疾病的一個重要組成部分，尤其在與肝毒性化合物，例如乙醇 有關(guān)的慢性肝病中。另外，已知由HI化誘導(dǎo)的基因表達在酒精性肝病中增加，例如一氧化氮 合成酶和葡萄糖轉(zhuǎn)運體-1。
[0042] 因此，本發(fā)明提供治療局部缺血或缺氧相關(guān)病況的方法，所述方法包含將治療有 效量的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽單獨或與醫(yī)藥上可接受的賦形劑組合投予受試者。在 一個實施例中，在產(chǎn)生局部缺血的病況之后立即投予所述化合物，例如屯、肌梗塞、肺栓塞、 腸梗塞、缺血性中風(fēng)和腎缺血-再灌注損傷。在另一個實施例中，將所述化合物投予診斷為 與慢性局部缺血的發(fā)生相關(guān)的病況的患者，例如屯、原性肝硬化、黃斑變性、肺栓塞、急性呼 吸衰竭、新生兒呼吸窘迫綜合癥和充血性屯、力衰竭。
[0043] 本發(fā)明的另一方面提供使用本文中所描述的化合物治療有發(fā)生局部缺血或缺氧 病況危險的患者的方法，例如動脈粥樣硬化高危個體。動脈粥樣硬化的危險因素包括，例如 高脂血癥、吸煙、高血壓、糖尿病、高膜島素血癥和腹部肥胖。因此，本發(fā)明提供預(yù)防局部缺 血性組織損傷的方法，所述方法包含將治療有效量的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽單獨或 與醫(yī)藥上可接受的賦形劑組合投予需要的患者。在一個實施例中，可基于素因性病況投予 所述化合物，例如高血壓、糖尿病、動脈閉塞性疾病、慢性靜脈機能不全、雷諾氏病、慢性皮 膚潰瘍、硬化、充血性屯、力衰竭和系統(tǒng)性硬化。
[0044] 在一個特定實施例中，將所述方法用于增加受損組織、傷口和潰瘍中的血管形成 和/或肉芽組織形成。例如，本發(fā)明的化合物已經(jīng)顯示在傷口愈合中可有效刺激肉芽組織形 成。肉芽組織含有新形成的滲漏血管和臨時血漿蛋白基質(zhì)，例如纖維蛋白原和血漿纖維結(jié) 合蛋白。來自炎性細胞、血小板和激活內(nèi)皮的生長因子的釋放刺激成纖維細胞和內(nèi)皮細胞 在肉芽組織中的遷移和增殖。若血管形成或神經(jīng)刺激削弱，則可發(fā)生潰瘍。本發(fā)明的方法有 效促進肉芽組織的形成。因而，本發(fā)明提供用于治療具有由于例如梗塞造成的組織損壞、具 有由例如創(chuàng)傷或損傷誘導(dǎo)的傷口或具有由于某種病癥(例如糖尿病)而產(chǎn)生的慢性傷口或 潰瘍的患者的方法。所述方法包含將治療有效量的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽單獨或與 醫(yī)藥上可接受的賦形劑組合投予需要的患者。
[0045] 發(fā)明的另一方面提供使用所述化合物預(yù)先治療受試者W減少或預(yù)防與局部缺血 或缺氧相關(guān)的組織損壞發(fā)生的方法。當(dāng)在設(shè)及局部缺血或缺氧的病況之前立即投予時，本 發(fā)明的方法產(chǎn)生治療益處。例如，在誘導(dǎo)屯、肌梗塞之前應(yīng)用本發(fā)明的方法顯示屯、臟結(jié)構(gòu)和 性能得到在統(tǒng)計學(xué)上有顯著意義的改善。另一方面，當(dāng)在缺血-再灌注損傷之前和之間立即 投予時，本發(fā)明的方法產(chǎn)生治療益處，顯著減少與腎衰竭相關(guān)的診斷參數(shù)。
[0046] 因此，本發(fā)明提供預(yù)先治療受試者W減少或預(yù)防與局部缺血或缺氧相關(guān)的組織損 壞的方法，所述方法包含將治療有效量的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽單獨或與醫(yī)藥上可 接受的賦形劑組合投予具有局部缺血病癥病史的患者，例如屯、肌梗塞，或具有迫近局部缺 血癥狀的患者，例如屯、絞痛。在另一個實施例中，可基于暗示可能局部缺血的物理參數(shù)投予 所述化合物，例如對于處于全身麻醉下或暫時在高海拔下工作的個體。在又一實施例中，可 將所述化合物用于器官移植中，用W預(yù)先治療器官供體或在移植入受體之前，用W維持自 身體移除的器官。
[0047]先前研究已經(jīng)顯示，在本發(fā)明的方法中使用的某些化合物是溶膠原脯氨酷4-徑化 酶的有效抑制劑。盡管認識到最初梗塞或傷口的恢復(fù)需要結(jié)締組織在壞死區(qū)域內(nèi)沉積，但 是本發(fā)明證明對于癒痕形成的治療無副作用。因而，基于本發(fā)明的某些化合物在治療和預(yù) 防缺氧組織損壞和纖維化上所提供的益處，本發(fā)明涵蓋一種治療或預(yù)防設(shè)及局部缺血或缺 氧病況的"雙重治療"方法，包括與并發(fā)反應(yīng)性纖維化相關(guān)的局部缺血或缺氧，例如屯、肌梗 塞和隨之而來的充血性屯、力衰竭。所述方法可使用一種化合物，其抑制一種W上具有相同 特異性或不同特異性的2-酬戊二酸雙加氧酶，例如HIF脯氨酷徑化酶和溶膠原脯氨酷4-徑 化酶?；蛘撸龇椒墒褂没衔锏慕M合，其中每一化合物特異抑制僅一種2-酬戊二酸雙 加氧酶，例如一種化合物特異抑制HIF脯氨酷徑化酶且第二種化合物特異抑制溶膠原脯氨 酷4-徑化酶。
[004引在一個方面，本發(fā)明的化合物抑制一種或一種W上2-酬戊二酸雙加氧酶。在一個 實施例中，所述化合物抑制至少兩種具有相同特異性或不同特異性的2-酬戊二酸雙加氧酶 家族成員，例如HI刊甫氨酷徑化酶和HIF天冬酷胺-徑化酶(FIH-1)。在另一實施例中，所述化 合物對于一種2-酬戊二酸雙加氧酶具有特異性，例如HI刊甫氨酷徑化酶，并且對于其它家族 成員顯示出很少的特異性或不顯示特異性。
[0049] 所述化合物可與多種其它治療方法組合投予。在一個實施例中，所述化合物和另 一種2-酬戊二酸雙加氧酶抑制劑一起投予，其中運兩種化合物對于個別的2-酬戊二酸雙加 氧酶家族成員具有不同的特異性。所述兩種化合物可同時W-個相對于另一個的比例投 予。對于適于給定治療過程或特定受試者的比例的測定在所述領(lǐng)域的技術(shù)水平之內(nèi)?；蛘撸?所述兩種化合物可在治療時程中連續(xù)投予，例如在屯、肌梗塞之后。在一個特定實施例中，一 種化合物特異抑制HIF脯氨酷徑化酶的活性，且第二種化合物特異抑制溶膠原脯氨酷4-徑 化酶的活性。在另一特定實施例中，一種化合物特異抑制HI刊甫氨酷徑化酶的活性，且第二 種化合物特異抑制HIF天冬酷胺酷-徑化酶的活性。在另一實施例中，所述化合物與另一具 有不同作用模式的治療劑一起投予，例如ACE抑制劑(ACEI)、血管緊張素-Π 受體阻斷劑 (ARB)、抑制素、利尿劑、地高辛、肉毒堿等。
[0050] 本發(fā)明提供增加內(nèi)源性促紅細胞生成素化P0)的方法。運些方法可在體內(nèi)應(yīng)用，例 如血漿中，或在體外應(yīng)用，例如在經(jīng)調(diào)節(jié)的細胞培養(yǎng)基中。本發(fā)明進一步提供增加內(nèi)源性 EP0含量的方法，用W預(yù)防、預(yù)先治療或治療EP0相關(guān)病況，包括例如與貧血和神經(jīng)系統(tǒng)素亂 相關(guān)的病況。貧血相關(guān)病況包括例如急性或慢性腎臟疾病、糖尿病、癌癥、潰瘍、病毒感染 (例如HIV、細菌或寄生蟲）、炎癥等的病癥。貧血病況可進一步包括與程序或治療相關(guān)的病 況，所述程序或治療包括例如放射治療、化學(xué)治療、透析和手術(shù)。貧血相關(guān)病癥另外包括異 常血紅蛋白和/或紅血球，例如發(fā)現(xiàn)于如小紅細胞性貧血、低血色素貧血癥、再生障礙性貧 血等病癥中。
[0051] 本發(fā)明可用于預(yù)防性或同時增加經(jīng)歷特定治療或程序的受試者中的內(nèi)源性EPO， 例如正W疊氮胸巧(齊多夫定)或其它逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑治療的感染HIV貧血患者、接受含環(huán) 順氯氨銷或不含順氯氨銷的循環(huán)化學(xué)療法的貧血癌癥患者、或計劃經(jīng)歷手術(shù)的貧血或非貧 血患者。增加內(nèi)源性EP0的方法也可用于預(yù)防、預(yù)先治療或治療與神經(jīng)損壞或神經(jīng)組織退化 相關(guān)的EK)相關(guān)病況，包括(但不限于）中風(fēng)、創(chuàng)傷、癒痛、脊髓損傷和神經(jīng)變性病癥。
[0052] 另外，所述方法可用于增加計劃經(jīng)歷手術(shù)的貧血或非貧血患者中的內(nèi)源性EP0含 量，用W減少對外源輸血的需要或用W便于手術(shù)前血液的儲存。通常在手術(shù)前自體供血后 發(fā)生的血液血細胞比容的少量減少并不刺激內(nèi)源性EP0或補償性紅血球生成的增加。然而， 內(nèi)源性EP0的手術(shù)前刺激將有效增加紅血球質(zhì)量和自體供血體積，同時維持更高的血細胞 比容水平，并且所述方法特異性的涵蓋于本文中。在一些手術(shù)人群中，特別是手術(shù)失血超過 2升的個體，可應(yīng)用本發(fā)明的方法來減少異源血液曝露。
[0053] 本發(fā)明的方法也可用于增強運動性能、改善鍛煉能力和促進或增強有氧調(diào)節(jié)。例 如，運動員可使用所述方法W促進訓(xùn)練且±兵可使用所述方法W改善例如持久力和忍耐 力。
[0054] 本發(fā)明的方法已顯示可增加體外治療培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基中和體內(nèi)治療的動物血 漿中的內(nèi)源性促紅細胞生成素含量。盡管腎是體內(nèi)促紅細胞生成素的主要來源，但一經(jīng)適 當(dāng)刺激，其它器官，包括大腦、肝和骨髓可且確能合成促紅細胞生成素。使用本發(fā)明的方法 可增加多個身體器官中內(nèi)源性促紅細胞生成素的表達，包括大腦、腎和肝。實際上，本發(fā)明 的方法甚至增加在經(jīng)歷雙測腎切除術(shù)的動物中內(nèi)源性促紅細胞生成素的含量。
[0055] 本發(fā)明的方法證明即使當(dāng)腎功能損害時，也可增加促紅細胞生成素的含量。盡管 本發(fā)明并不為促紅細胞生成素產(chǎn)生的機制所限制，但通常在腎衰竭過程中可見的促紅細胞 生成素分泌的減少可歸因于腎組織中流動/灌注增加所致的高氧癥。
[0056] 另一方面，本發(fā)明的方法增加體內(nèi)治療的動物中血細胞比容和血液血紅蛋白水 平。隨著化合物在本發(fā)明的方法中使用而產(chǎn)生的血漿EP0、血細胞比容和血液血紅蛋白的增 加具有劑量敏感性，然而可確定劑量方案W產(chǎn)生恒定、可控的本發(fā)明化合物的響應(yīng)水平。另 一方面，使用本發(fā)明化合物的治療可醫(yī)治貧血，例如由毒性化合物，例如化學(xué)治療劑順氯氨 銷誘導(dǎo)的貧血，或由于失血所致的貧血，例如創(chuàng)傷、損傷、寄生蟲或手術(shù)。
[0057] 用本發(fā)明的化合物治療的動物中，在血細胞比容和血液血紅蛋白增加之前是血液 中循環(huán)未成熟紅細胞（網(wǎng)織紅細胞)百分率的增加。因而，本發(fā)明涵蓋本發(fā)明化合物在增加 動物血液中網(wǎng)織紅細胞的含量從而產(chǎn)生無細胞網(wǎng)織紅細胞溶菌產(chǎn)物的方法（如Pelham和 Jackson在《歐洲生物化學(xué)雜志》化ur.J.Biochem. )67:247-256( 1976)中所描述）中的用途。 通過用本發(fā)明的化合物單獨治療或與另一種化合物，例如乙酷苯阱等組合治療，動物(例如 兔子等）中循環(huán)網(wǎng)織紅細胞的含量增加。
[0058] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明化合物可用于調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)因子 化IF)和/或內(nèi)源性促紅細胞生成素化P0)。通過気化運一技術(shù)改變化合物在生物體中的代 謝，使化合物具有更好的藥代動力學(xué)參數(shù)特性。在運種情況下，可W改變劑量并形成長效制 劑，改善適用性。用気取代化合物中的氨原子，由于其気同位素效應(yīng)，能夠提高化合物在動 物體內(nèi)的藥物濃度，W提高藥物療效。用気取代化合物中的氨原子，由于某些代謝產(chǎn)物被抑 審IJ，可能提高化合物的安全性。
【具體實施方式】
[0059] 下面更具體地描述本發(fā)明式I結(jié)構(gòu)化合物的制備方法，但運些具體方法不對本發(fā) 明構(gòu)成任何限制。本發(fā)明化合物還可W任選將在本說明書中描述的或本領(lǐng)域已知的各種合 成方法組合起來而方便地制得，運樣的組合可由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員容易地進行。
[0060] 通常，在制備流程中，各反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在室溫至回流溫度(如(TC~100 °C，優(yōu)選0°C~80°C)下進行。反應(yīng)時間通常為0.1小時-60小時，較佳地為0.5-24小時。
[0061 ] 實施例1制備N-[(4-%基-1-甲基-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]-2,2-cb-甘氨酸 (化合物11)
[0062]
[0063] 步驟1:4-漠-2-甲基-苯甲酸甲醋(化合物2)的合成。
[0064] 冰浴下，將二氯亞諷（5.50mL, 70 . OOmmol)滴加到4-漠-2-甲基苯甲酸（5 . OOg, 23.2mmol)的甲醇(60mL)溶液中，滴加完畢后，反應(yīng)液回流攬拌反應(yīng)5小時。冷卻至室溫，減 壓濃縮反應(yīng)液。濃縮液用飽和的碳酸氨鋼溶液調(diào)至中性，用乙酸乙醋萃取，有機層用飽和的 食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮得到4.3g淡黃色油狀物，收率：81.1 %。iH NMR (300MHz，CDCl3) (δ/卵 m)7.79(d，J = 8.3Hz，1H), 7.45-7.35(m，2H) ,3.89(5，3H) ,2.58(3, 3H)。
[0065] 步驟2:2-甲基-4-苯氧基苯甲酸甲醋(化合物3)的合成。
[0066] 氮氣保護下，將1,4-二氧六環(huán)（30mL)加入到4-漠-2-甲基-苯甲酸甲醋（4.30g, 18 . SOmmol),苯酪（1.90g, 20 . OOmmol ), Cs2C〇3( 18.40g, 56.40mmol),艦化亞銅（716mg， 3.76mmo 1)，順-二甲基甘氨酸（775mg，7.52mmo 1)的混合中，反應(yīng)液在100°C下攬拌反應(yīng)過 夜。冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。濃縮液用乙酸乙醋（1 OOmL)和水(60mL)，有機層用飽和食 鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到3.60g棟色油狀物，收率： 79.1%〇1h NMR(400MHz，CDCl3)(S/ppm)7.97-7.93(m，lH)，7.44-7.37(m，2H)，7.20(dd，J = 10.7,4.2Hz，lH)，7.08(dd，J=8.5,0.9Hz，2H)，6.88-6.79(m，2H)，3.89(s，3H)，2.60(s, 抓)。
[0067] 步驟3:2-(漠甲基)-4-苯氧基苯甲酸甲醋(化合物4)的合成。
[006引氮氣保護下將過氧化苯甲酯(BP0,638mg, 2.60mmol)加入到2-甲基-4-苯氧基苯甲 酸甲醋（9 . lOg，37 . eOmmol)和N-漠代下二酷亞胺（NBS，7.02g，39.5mmol)的四氯化碳 (160mL)溶液中，反應(yīng)回流攬拌6小時。冷卻至室溫，過濾，濾液分別用飽和碳酸氨鋼水溶液， 飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到10.9g棟色油狀物，收 率:90.3%。
[0069] 步驟4:2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)橫酷氨）甲基)-4-苯氧基苯甲 酸甲醋(化合物5)的合成
[0070] 室溫下將艦化鋼（10.40g，69.50mmol)，碳酸鋼(9.60g，69.50mmol)加入到2-(漠甲 基）-4-苯氧基苯甲酸甲醋（14.90mg , 46 . OOmmo 1)和對甲苯橫酷甘氨酸甲醋（12.40g , 51.OOmmol)的N，N-二甲基甲酯胺（118mL)，反應(yīng)在室溫下反應(yīng)過夜。加水（100血)澤滅反應(yīng)， 用乙酸乙醋萃取，有機相分別用水（lOOmL)和飽和食鹽水（lOOmL X 2)洗涂，無水硫酸鋼干 燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到18.9g棟色油狀物，收率:85.0 %。LC-MS(APCI):m/z = :484.
[0071] 步驟5:4-徑基-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物6)的合成
[0072] 冰浴下，將甲醇鋼（12.70g. 234.60mmo 1)的甲醇（40mL)溶液滴加到2-( ((N-(2-甲 氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)橫酷氨）甲基)-4-苯氧基苯甲酸甲醋（18.90g，39.10mmol)的 二甲亞諷（82mL)溶液中，滴加完畢后，反應(yīng)液在室溫下攬拌2小時。減壓除去甲醇，加水 (50mL)稀釋濃縮液，用1N的稀鹽酸將抑值調(diào)至pH=10左右。乙酸乙醋（lOOmL X 3)萃取，有 機層用分別用水(lOOmL)和飽和食鹽水(lOOmL)洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進 行柱分離得到9. Ig白色固體，收率:78.8%。LC-MS(APCI):m/z = 296.1 (M+1)。
[0073] 步驟6:1-((二甲基氨）甲基)-4-徑基-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋（化合物8) 的合成。
[0074] 室溫下，將N，N，N'，N'-四甲基甲二胺（1.08g，10.60mmol)緩慢滴加到4-?基-7-苯 氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋(2.60g.8.80mmol)的乙酸(4mL)溶液中，反應(yīng)升溫至55°C攬拌反 應(yīng)6小時。冷卻至室溫，直接用于下一步反應(yīng)。LC-MS(APCI) :m/z = 353.1 (M+1)。
[0075] 步驟7:1-((乙酷氧基甲基）甲基)-4-?基-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋（化合 物9)的合成。
[0076] 室溫下，將醋酸酢(2.50g，24.60mmol)緩慢滴加到上述的反應(yīng)中，此間保持溫度不 超過50°C。滴加完畢后，反應(yīng)液升溫至100°C攬拌反應(yīng)過夜。冷卻至60°C，緩慢加入20mL的水 后，降溫至室溫，固體過濾，用水洗涂濾餅。將濾餅溶于20mL的二氯甲燒和lOmL的水，攬拌5 分鐘，分出有機相。將嗎啡嘟(0.80g，8. SOmmol)在冰浴下加入到有機相中，攬拌反應(yīng)2小時。 減壓濃縮反應(yīng)液，加入丙酬（2mL)和甲醇（2mL)混合溶劑中，冰浴下析出固體，固體過濾，用 甲醇(冷，1血)洗涂，真空干燥得到1.80g白色固體，收率:55.7 %。LC-MS(APCI):m/z = 367.1 (M+1)。
[0077] 步驟8:4-徑基-1-甲基-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物10)的合成
[0078] 將1-((乙酷氧基甲基）甲基）-4-徑基-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋（1.30g, 3.50mmol)溶于無水乙酸乙醋（26mL)中，加入碳酸鋼（186mg，1. SOmmol)和Pd/C( 10 %， 170mg)，反應(yīng)液在氨氣下80°C下攬拌過夜。冷卻至室溫，娃藻±過濾，濾液減壓濃縮。粗品進 行柱分離得到600mg白色固體，收率:55.4%。LC-MS(APCI):m/z = 310.1 (M+1)。
[0079] 步驟9:N-[(4-^基-1-甲基-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]-2,2-cb-甘氨酸(化合 物11)的合成
[0080] 室溫下，將甲醇鋼（220mg，4. OOmmol)加入到4-徑基-1-甲基-7-苯氧基異哇嘟基- 3-簇酸甲醋（（120mg，0.39mmo 1)和気代甘氨酸-d5 (1 OOmg，1.20mmo 1)的気代甲醇-d4 (3mL) 溶液，反應(yīng)液封管11 〇°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷，1 OmL)洗涂，固體 干燥。固體溶于5血的水中，用乙酸乙醋(5血)萃取。水相用0.5血的乙酸將抑至調(diào)至酸性，懸 濁液在室溫下攬拌至有大量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3x ImL)，丙酬(冷，2x 0.5mL) 洗涂，真空干燥得到60mg米白色固體，收率:45.2%，LC-MS(APCI): m/z = 355.2(M+1); 1h NMR(300MHz，DMS0-d6)(S/ppm)13.32(s，lH)，12.80(s，lH)，9.10(s，lH)，8.29(d，J=9.0Hz， lH),7.61(d J = 2.2Hz,lH),7.50(m,3H),7.25(t J = 7.4Hz,lH),7.17(d J = 7.7Hz,2H), 2.70(s，3H)。
[0081] 實施例2制備N-[(4-%基-1-d-甲基-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸(化合物 蠟
[0082]
[0083] 步驟1:4-徑基-1-(d-甲基)-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物12)的合成。
[0084] 將1-((乙酷氧基甲基）甲基）-4-徑基-7-苯氧基異哇嘟基-3-簇酸甲醋（250mg, 0.68mmo 1)溶于無水乙酸乙醋（5mL)中，加入碳酸鋼(40mg，0.34mmo 1)和Pd/C(50 % in 〇2〇， 30mg)，反應(yīng)液在氨氣下80°C下攬拌過夜。冷卻至室溫，娃藻±過濾，濾液減壓濃縮。粗品進 行柱分離得至Ijl30mg白色固體，收率：61.6%eLC-MS(APCI) :m/z = 311.1(M+1) ;1h 匪R (300MHz,DMSO-de) (δ/ppm) 11.50(s,lH), 8.34(m,lH), 7.60(dJ = 2.1Hz,lH), 7.51 (m,3H), 7.26(t J = 7.4Hz,lH),7.19(m,2H),3.95(s,3H),2.63(d J = 5.3Hz,2H)〇
[0085] 步驟2:N-[(4-^基甲基)-7-苯氧基-3-異哇嘟基）幾基]甘氨酸（化合物 13)的合成。
[0086] 室溫下，將甲醇鋼（226.8mg, 4.20mmol)加入到4-徑基-1-(甲基-d)-7-苯氧基異哇 嘟基-3-簇酸甲醋（（130111邑，0.42111111〇1)和甘氨酸（94.5111邑，1.30111111〇1)的気代甲醇-(1(3血）溶 液，反應(yīng)液封管11 〇°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷，ImL)洗涂，固體干 燥。固體溶于3mL的水中，用乙酸乙醋（3mL)萃取。水相用乙酸將pH至調(diào)至酸性，懸濁液在室 溫下攬拌至有大量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3xlmL)，丙酬(冷，2x0.5mL)洗涂，真空干 燥得到29mg白色固體，收率：19.5%，LC-MS(APCI):m/z = 354.1(M+l);lHNMR(300MHz， DMSO-de) (δ/ppm) 13.32(s,lH), 12.79(s,lH),9.11 (tJ = 6.1Hz,lH),8.30(m,lH), 7.62(d, J = 2.0Hz，lH)，7.51(m，3H)，7.25(t，J = 7.3Hz，lH)，7.18(d，J = 7.Wz，2H)，4.04(d，J = 6.1Hz，2H)，2.69(s，2H)。
[0087] 實施例3制備N-[(4-%基-1-甲基-7-(2,4,6-cb-苯氧基））--3-異哇嘟基)幾基]甘 氨酸(化合物23)
[008引
[0089] 步驟1:2，4，6-d3-苯酪(化合物15)的合成。
[0090] 室溫下將NaOD(40 % in D20，3. OOg，30.0 Ommo 1)加入到苯酪（2.80g，30.30mmo 1)的 重水(44mL)中，微波180°C下反應(yīng)45分鐘。冷卻至室溫，加入HCK0.5M aq，60血），用乙酸乙 醋（lOOmL X 2)萃取，有機層用飽和的食鹽水巧OmL)洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮 液進行柱分離得到2.9g棟色油狀物，收率：100 % dLC-MS(APCI ) :m/z = 96.1 (M-1); iH NMR (300MHz，CDC!3) (S/ppm)7.26(s，2H), 6.85(s，lH)。
[0091] 步驟2:2-甲基-4-(2,4,6-cb-苯氧基)-苯甲酸甲醋(化合物16)的合成。
[0092] 氮氣保護下，將1,4-二氧六環(huán)（37mL)加入到4-漠-2-甲基-苯甲酸甲醋（5.40g, 23.6mmol，2,4,6-屯-苯酪（2.30g,23.6mmol)，Cs2C〇3(23 . lg,70 .SOmmol)，艦化亞銅（900mg， 4.70mmol)，N,N-二甲基甘氨酸（1.20g, 16.80mmol)的混合中，反應(yīng)液在100°C下攬拌反應(yīng)過 夜。冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。濃縮液用乙酸乙醋（1 OOmL)和水(60mL)，有機層用飽和食 鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到3.40g棟色油狀物，收率： 58.7%。
[0093] 步驟3:2-(漠甲基)-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲醋(化合物17)的合成。
[0094] 氮氣保護下將過氧化苯甲酯(BP0，170.8mg，0.70mmo 1)加入到2-甲基-4- (2，4，6- cb-苯氧基)-苯甲酸甲醋(3.40g，14.1 Ommo 1)和N-漠代下二酷亞胺(NBS，2.38g，13.40mmo 1) 的四氯化碳(58mL)溶液中，反應(yīng)回流攬拌過夜。冷卻至室溫，過濾，濾液分別用飽和碳酸氨 鋼水溶液，飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到2.90g棟色 油狀物，收率:63.5%。
[00巧]步驟4:2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基）-4-甲基苯基）橫酷氨）甲基）-4-(2,4,6-d3- 苯氧基)-苯甲酸甲醋(化合物18)的合成。
[0096] 室溫下將艦化鋼（2.00旨，13.40111111〇1)，碳酸鐘（1.85旨，13.40111111〇1)加入到2-(漠甲 基）-4- (2，4，6-d3-苯氧基）-苯甲酸甲醋（2.90g，8.95mmol)和對甲苯橫酷甘氨酸甲醋 (2.40g，9.85mmol)的N，N-二甲基甲酯胺(23mL)，反應(yīng)在室溫下反應(yīng)6小時。加水巧OmL)澤滅 反應(yīng)，用乙酸乙醋(50mL X 3)萃取，有機相分別用水巧OmL)和飽和食鹽水巧OmL X 2)洗涂， 無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離，得到4.20g黃色固體，收率:96.4% "LC-MS (APCI):m/z = 487.1(M+l)。
[0097]步驟5:4-徑基-7-( 2，4，6-d3-苯氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物19)的合成。 [009引冰浴下，將甲醇鋼(3.02g. 55.90mmol)的甲醇-d(9血)溶液滴加到2-( ((N-( 2-甲氧 基-2-氧乙基）-4-甲基苯基）橫酷氨）甲基）-4-(2,4,6-d3-苯氧基）-苯甲酸甲醋（4.20g, 8.60mmo 1)的二甲亞諷（18mL)溶液中，滴加完畢后，反應(yīng)液在室溫下攬拌化rS。減壓除去甲 醇，加水(50mL)稀釋濃縮液，用1N的稀鹽酸將抑值調(diào)至抑=10左右。乙酸乙醋（50血X 3)萃 取，有機層用分別用水(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮 液進行柱分離得到2.50g白色固體，收率:96.6 %。LC-MS(APCI):m/z = 299.1 (M+1)。
[0099] 步驟6:1-((二甲基氨）甲基)-4-徑基-7-(2,4,6-d3-苯氧基)-哇嘟基-3-簇酸甲醋 (化合物20)的合成。
[0100] 室溫下，將N，N，N'，N'-四甲基甲二胺(830mg，7.80mmol)緩慢滴加到4-徑基-7-(2， 4，6-d3-苯氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋（2. OOg，6.70mmol)的乙酸(4mU溶液中，反應(yīng)升溫 至55°C攬拌反應(yīng)6小時。冷卻至室溫，直接用于下一步反應(yīng)。LC-MS(APCI):m/z = 356.2(M+ Do
[0101] 步驟7:l-((乙酷氧基甲基）甲基)-4-?基-7-((2,4,6-d3-苯氧基)-異哇嘟基-3- 簇酸甲醋(化合物21)的合成
[0102] 室溫下，將醋酸?。?.80g，16.50mmol)緩慢滴加到上述的反應(yīng)中，此間保持溫度不 超過50°C。滴加完畢后，反應(yīng)液升溫至100°C攬拌反應(yīng)過夜。冷卻至60°C，緩慢加入25mL的水 后，降溫至室溫，固體過濾，用水洗涂濾餅。將濾餅溶于25mL的二氯甲燒和12mL的水，攬拌5 分鐘，分出有機相。將嗎啡嘟(〇.90g)在冰浴下加入到有機相中，攬拌反應(yīng)2小時。減壓濃縮 反應(yīng)液，加入丙酬(2mL)和甲醇（2mL)混合溶劑中，冰浴下析出固體，固體過濾，用甲醇(冷， ImL)洗涂，真空干燥得至 ljl.20g 白色固體，收率:55.9%DLC-MS(APCI):m/z = 370.1(M+l)。
[0103] 步驟8:4-?基-1-甲基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基）-異哇嘟基-3-簇酸甲醋（化合物 22)的合成
[0104] 將1-((乙酷氧基甲基）甲基)-4-徑基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸 甲醋（300mg,0.81mmol)溶于無水乙酸乙醋（6mL)中，加入碳酸鋼（53mg，0.40mmol)和Pd/C (10%，45mg)，反應(yīng)液在氨氣下80°C下攬拌過夜。冷卻至室溫，娃藻±過濾，濾液減壓濃縮。 粗品進行柱分離得到220mg白色固體，收率:86.90 %。LC-MS(APCI):m/z = 313.1 (M+1)。
[0105] 步驟9:N-[(4-^基-1-甲基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基)--3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸 (化合物23)的合成
[0106] 室溫下，將甲醇鋼(383.8g，7. lOmmo 1)加入到4-徑基-1-甲基-7-(苯-2，4，6-d3-氧 基-異哇嘟基-3-簇酸甲醋(220mg，0.70mmol)和気代甘氨酸-ds (169.2mg，2.12mmol)的気代 甲醇-d (4.8mU溶液，反應(yīng)液封管110 °C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷， 3mL)洗涂，固體干燥。固體溶于3mL的水中，用乙酸乙醋（3mL)萃取。水相用乙酸將抑至調(diào)至 酸性，懸濁液在室溫下攬拌至有大量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3x 2mL)，丙酬(冷，2x 2血)洗涂，真空干燥得至Ijl26mg 白色固體，收率:49.7%，LC-MS(APCI):m/z = 356.2(M+l);iH NMR(300MHz，DMS0-d6)(S/ppm)13.：M(s，lH)，9.07(s，lH)，8.29(d，J = 9.0Hz，lH)，7.62(d，J = 2.3Hz，lH)，7.53(dd J = 9.0,2.4Hz，lH)，7.48(d J = 4.0Hz，2H)，4.04(d J = 6.1Hz，2H), 2.70(s，3H)。
[ο…7]實施例4制備Ν-[(4-徑基-1-甲基-7-(d5-苯氧基)-3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸 [010 引
[0109] 步驟l:ds-苯酪(化合物24)的合成。
[0110] 室溫下將5%Pt/C(600mg)加入到苯酪(3.00邑，31.90111111〇1)的重水（100血）中，也置 換反應(yīng)體系的空氣，封管室溫反應(yīng)48小時。娃藻±過濾，濾液用乙酸乙醋（lOOmL)萃取，有機 層用飽和的食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮得到3.Og棟色油狀物，不純化直接用于 下一步反應(yīng)。1〇]?5^口口）：111八=98.1(]\1-1);4醒1?(3001化，〔0(：13)(8/卵111)7.26(3,0.0細， 97%D)，6.94(s，0.03H，97%D)，6.86(s，0.06H，97%D)，5.58(s，lH)。
[0川]步驟2:2-甲基-4-(d5-苯氧基)-苯甲酸甲醋(化合物化）的合成。
[0112] 氮氣保護下，將1,4-二氧六環(huán)（50mL)加入到4-漠-2-甲基-苯甲酸甲醋（7.60g, 33.3mmol)，d日-苯酪（3 . OOg, 30.3mmol)，CS2CO3 (29.60g, lOOmmol)，艦化亞銅（1.30g， 6.66mmol)，N,N-二甲基甘氨酸（1.70g, 16.50mmol)的混合中，反應(yīng)液在100°C下攬拌反應(yīng)過 夜。冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。濃縮液用乙酸乙醋（1 OOmL)和水(60mL)，有機層用飽和食 鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到4.30g棟色油狀物，收率： 68.7%。
[OW]步驟3:2-(漠甲基)-4-(苯-ds-氧基)-苯甲酸甲醋(化合物26)的合成。
[0114] 氮氣保護下將過氧化苯甲酯(8口0,296111邑，1.23111111〇1)加入到2-甲基-4-((1日-苯氧 基)-苯甲酸甲醋(4.30g, 17.50mmol)和N-漠代下二酷亞胺(NBS,3.27g, 18.30mmol)的四氯 化碳(75mL)溶液中，反應(yīng)回流攬拌過夜。冷卻至室溫，過濾，濾液分別用飽和碳酸氨鋼水溶 液，飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到4. lOg棟色油狀 物，收率:71.8%。
[0115] 步驟4:2-( ((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)橫酷氨）甲基)-4-(苯-ds-氧 基)-苯甲酸甲醋(化合物27)的合成。
[0116] 室溫下將艦化鋼（2.80g, 18.90mmol),碳酸鐘（2.60g, 18.90mmol)加入到2-(漠甲 基)-4-(苯-ds-氧基）-苯甲酸甲醋（4.1 Og，12.60mmo 1)和對甲苯橫酷甘氨酸甲醋（3.37g， 13.90mmo 1)的N，N-二甲基甲酯胺(35血），反應(yīng)在室溫下反應(yīng)過夜。加水巧0血)澤滅反應(yīng)，用 乙酸乙醋（50mL X 3)萃取，有機相分別用水(50mL)和飽和食鹽水(50mL X 2)洗涂，無水硫 酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到5.4g黃色固體，收率:87.7 %。LC-MS(APCI): m/ z = 489.1(M+l)。
[0117] 步驟5:4-徑基-7-(苯-ds-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物28)的合成。
[0118] 冰浴下，將甲醇鋼（3.90g. 71.90mmol)的甲醇（1 ImL)溶液滴加到2-2-( ((N-(2-甲 氧基-2-氧乙基）-4-甲基苯基）橫酷氨）甲基）-4-(苯-ds-氧基）-苯甲酸甲醋（5.40g, 11. Immol)的二甲亞諷(23mL)溶液中，滴加完畢后，反應(yīng)液在室溫下攬拌化rs。減壓除去甲 醇，加水(50mL)稀釋濃縮液，用1N的稀鹽酸將抑值調(diào)至抑=10左右。乙酸乙醋（50血X 3)萃 取，有機層用分別用水(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮 液進行柱分離(淋洗劑:石油酸/乙酸乙醋(乂八）=3:1)，得到3.00邑白色固體，收率:90.2%。 LC-MS(APCI):m/z = 301.1(M+l)。
[0119] 步驟6:1-((二甲基氨）甲基)-4-?基-7-(苯-ds-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化 合物29)的合成。
[0120] 室溫下，將N，N，N'，N'-四甲基甲二胺（1.23g，12.00mmol)緩慢滴加到4-徑基-7- (ds-苯氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋（3 . OOg，10 . OOmmo 1)的乙酸（5mU溶液中，反應(yīng)升溫至 55°C攬拌反應(yīng)6小時。冷卻至室溫，直接用于下一步反應(yīng)。LC-MS(APCI):m/z = 358.1(M+l)。
[0121] 步驟7:1-((乙酷氧基甲基）甲基)-4-?基-7-(苯-ds-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲 醋(化合物30)的合成。
[0122] 室溫下，將醋酸酢(2.50g，24.60mmol)緩慢滴加到上述的反應(yīng)中，此間保持溫度不 超過50°C。滴加完畢后，反應(yīng)液升溫至100°C攬拌反應(yīng)過夜。冷卻至60°C，緩慢加入25mL的水 后，降溫至室溫，固體過濾，用水洗涂濾餅。將濾餅溶于25mL的二氯甲燒和12mL的水，攬拌5 分鐘，分出有機相。將嗎啡嘟(〇.90g)在冰浴下加入到有機相中，攬拌反應(yīng)2小時。減壓濃縮 反應(yīng)液，加入丙酬(2mL)和甲醇（2mL)混合溶劑中，冰浴下析出固體，固體過濾，用甲醇(冷， ImL)洗涂，真空干燥得到 2.08g 白色固體，收率:55.9%DLC-MS(APCI):m/z = 372.1(M+l)。
[0123] 步驟8:4-?基-1-甲基-7-(苯-ds-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋（化合物31)的合 成。
[0124] 將1-((乙酷氧基甲基）甲基）-4-徑基-7-(ds-苯氧基）-異哇嘟基-3-簇酸甲醋 (500mg, 1.34mmol)溶于無水乙酸乙醋（lOmL)中，加入碳酸鋼（75mg，0.70mmol)和Pd/C (10%，75mg)，反應(yīng)液在氨氣下80°C下攬拌過夜。冷卻至室溫，娃藻±過濾，濾液減壓濃縮。 粗品進行柱分離得到400mg白色固體，收率:94.70%DLC-MS(APCI):m/z = 315.1(M+l)。
[0125] 步驟9:N-[(4-^基-1-甲基-7-(ds-苯氧基)--3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸（化合物 32)的合成。
[0126] 室溫下，將甲醇鋼（1.05邑，19.4111111〇1)加入到4-徑基-1-甲基-7-(苯-(15-氧基)-異 哇口林基-3-簇酸甲醋（200mg，0.64mmo 1)和気代甘氨酸-ds (154mg, 1.92mmol)的気代甲醇-d (4.5mL)溶液，反應(yīng)液封管110 °C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷，5mL)洗 涂，固體干燥。固體溶于5mL的水中，用乙酸乙醋(5mL)萃取。水相用乙酸將抑至調(diào)至酸性，懸 濁液在室溫下攬拌至有大量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3x 2mL)，丙酬(冷，2x 2mL)洗 涂，真空干燥得至Ij 150mg 白色固體，收率：65.2 %，LC-MS(APCI): m/z = 358.1 (M+1); 1h 醒R (300MHz,DMS0-d6)(5/ppm)13.33(s,lH),12.88(s,lH),9.08(s,lH),8.29(d J = 9.0Hz, lH)，7.61(d J = 2.0Hz，lH)，7.52(dd J = 9.0,2.2Hz，lH)，4.04(d J = 6.1Hz，2H)，2.70(s, 抓)。
[0127] 實施例5制備N-[(4-%基-1-(d-甲基)-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]-2,2-d2-甘 氨酸
[012 引
[0129] 室溫下，將甲醇鋼（243mg，4.5mmol)加入到4-徑基-1-(d-甲基)-7-苯氧基異哇嘟 基-3-簇酸甲醋（130mg，0.42mmol)和気代d日-甘氨酸（108mg，1.35mmol)的気代甲醇-d (3血） 溶液，反應(yīng)液封管ll〇°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷，ImL)洗涂，固體 干燥。固體溶于3mL的水中，用乙酸乙醋（3mL)萃取。水相用乙酸將抑至調(diào)至酸性，懸濁液在 室溫下攬拌至有大量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3xlmL)，丙酬(冷，2x0.5mL)洗涂，真空 干燥得到66mg米白色固體，收率:41.2 %，LC-MS(APCI):m/z = 356.2(M+1); 1h NMR(300MHz， DMS0-d6)(S/ppm)13.35(s，lH)，9.07(s，lH)，8.29(m，lH)，7.62(d，J=1.9Hz，lH)，7.51(m， 3H),7.25(t J = 7.4Hz,lH),7.17(d J = 7.7Hz,2H),2.69(d J = 5.2Hz,2H)〇 [0"0] 實施例6制備N-[(4-%基-1-(d3-甲基)-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]-2,2-d2-甘 氨酸(化合物36)
[0131]
[0132] 步驟l:N-[(4-^基-1-甲基-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸(化合物35)的合 成。
[0133] 室溫下，將甲醇鋼（1. 〇5g，19.4mmol)加入到4-徑基-1-甲基-7-苯氧基異哇嘟基- 3-簇酸甲醋（600mg，1.94mmo 1)和甘氨酸(437mg，5.80mmo 1)的甲醇（4mL)溶液，反應(yīng)液封管 1 l〇°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷，5mL)洗涂，固體干燥。固體溶于5mL 的水中，用乙酸乙醋（5mL)萃取。水相用乙酸將pH至調(diào)至酸性，懸濁液在室溫下攬拌至有大 量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3x2血），丙酬(冷，2x 2mL)洗涂，真空干燥得到125mg白色 固體，收率：18.3 %，LC-MS(APCI):m/z = 353.1 (M+1); 1h NMR(500MHz，DMSO-ds) (δ/卵m) 13.31(s，lH)，9.09(s，lH)，8.29(d，J = 9.0Hz，lH)，7.61(d，J = 2.2Hz，lH)，7.53(dd，J = 9.0,2.2Hz，lH)，7.47(t，J = 7.9Hz，2H)，7.25(t J = 7.4Hz，lH)，7.17(d，J = 7.9Hz，2H), 4.03(d，J = 6.1Hz，2H)，2.70(s，3H)。
[0134] 步驟2:化合物n-[(4-^基-1-(cb-甲基)-7-苯氧基-3-異哇嘟基)幾基]-2,2-cb-甘 氨酸(化合物36)的合成。
[0135] 將40%気氧化鋼的重水溶液(0.20mL)加入到N-[(4-^基-1-甲基-7-苯氧基-3-異 哇嘟基)幾基]甘氨酸（1 OOmg，0.25mmo 1)的重水(3mL)，氮氣保護下封管140°C反應(yīng)化rS。冷 卻至室溫，用3N的鹽酸溶液將體系的pH調(diào)至4左右，用乙酸乙醋萃取(20mLx 4)，有機相用飽 和食鹽水（15mL)洗涂，無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮，濃縮液進行制備薄層色譜分離得到灰色 固體15mg，收率30. ο %，LC-MS (APCI): m/z = 358.2 (M+1); 1η NMR( 300MHz，DMSO-ds) (δ/ppm) 13.43(s,lH),9.01(s,lH),8.30(d J = 9.0Hz,lH),7.62(d J = 2.2Hz,lH),7.52(m,3H), 7.26(t J = 7.4Hz,lH),7.18(d J = 7.7Hz,2H)〇
[0側(cè)實施例7制備N-[(4-%基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸(化 合物46)
[0137]
[013引步驟1:3-d-苯酪(化合物38)的合成。
[0139] 室溫下Pd/C(50%in D2〇，1.00g)加入到間漠苯酪（3.50g，20.00mmol)的気代甲 醇-d(20mU中，置換空氣，気氣氣球下反應(yīng)過夜。娃藻±過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液進行 柱分離得到 2.8g 棟色油狀物，收率：52.0%，LC-MS(APCI) :m/z = 94. l(M-l) ;iH NMR (300MHz，CDCl3) (S/ppm)7.26(s，2H), 6.85(s，lH)。
[0140] 步驟2:2-甲基-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲醋(化合物39)的合成。
[0141] 氮氣保護下，將1,4-二氧六環(huán)（35mL)加入到4-漠-2-甲基-苯甲酸甲醋（4.50g, 19.80mmol)，苯-3-d-酪（1.80g, 18.90mmol)，Cs2C〇3(19.40g,59.4mmol)，艦化亞銅（754mg， 3.96mmo 1)，N,N-二甲基甘氨酸（815mg, 7.90mmo 1)的混合中，反應(yīng)液在100°C下攬拌反應(yīng)過 夜。冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。濃縮液用乙酸乙醋（1 OOmL)和水(60mL)，有機層用飽和食 鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮，濃縮液進行柱分離得到2 . Mg棟色油狀物，收率： 58.9%。
[0142] 步驟3:2-(漠甲基)-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲醋(化合物40)的合成。
[0143] 氮氣保護下將過氧化苯甲酯(BP0,170.8mg, 0.70mmo 1)加入到2-甲基-4-(苯-3-d- 氧基)-苯甲酸甲醋(2.40g，10.0 Ommo 1)和N-漠代下二酷亞胺(NBS，1.87g，10.5mmol)的四氯 化碳(43mL)溶液中，反應(yīng)回流攬拌過夜。冷卻至室溫，過濾，濾液分別用飽和碳酸氨鋼水溶 液，飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮液進行柱分離，得到2.OOg棟色油狀 物，收率:62.1%。
[0144] 步驟4:2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基）-4-甲基苯基)橫酷氨）甲基)-4-(3-d-苯氧 基)-苯甲酸甲醋(化合物41)的合成。
[0145] 室溫下將艦化鋼（1.39g ,9.30mmol),碳酸鐘（1.28g ,9.30mmol)加入到2-(漠甲 基）-4- (3-d-苯氧基）-苯甲酸甲醋（2 . OOg，6.20mmol)和對甲苯橫酷甘氨酸甲醋（1.66g， 6.80mmo 1)的N,N-二甲基甲酯胺（16血），反應(yīng)在室溫下反應(yīng)4hrs。加水（50mL)澤滅反應(yīng)，用 乙酸乙醋（50mL X 3)萃取，有機相分別用水(50mL)和飽和食鹽水(50mL X 2)洗涂，無水硫 酸鋼干燥。減壓濃縮得到3.70g黃色固體，不純化直接用于下一步反應(yīng)，收率：100 %，LC-MS (APCI):m/z = 485.1(M+l)。
[0146] 步驟5:4-徑基-7-(3-d-苯氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物42)的合成。
[0147] 冰浴下，將甲醇鋼(4. lOg. 76. OOmmo 1)的甲醇-d(8血)溶液滴加到2-(((N-(2-甲氧 基-2-氧乙基）-4-甲基苯基）橫酷氨）甲基）-4-(3-d-苯氧基）-苯甲酸甲醋（3.70g, 7.60mmo 1)的二甲亞諷（16mL)溶液中，滴加完畢后，反應(yīng)液在室溫下攬拌1小時。減壓除去甲 醇，加水(50mL)稀釋濃縮液，用1N的稀鹽酸將抑值調(diào)至抑=10左右。乙酸乙醋（50血X 3)萃 取，有機層用分別用水(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗涂，無水硫酸鋼干燥。減壓濃縮，濃縮 液進行柱分離得到1.1 Og白色固體，兩步收率:59.9 %。LC-MS(APCI):m/z = 297.1 (M+1)。
[014引步驟6:1-((二甲基氨）甲基)-4-徑基-7-(3-d-苯氧基)-哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合 物43)的合成。
[0149] 室溫下，將N，N，N'，N'-四甲基甲二胺（460mg，4.50mmo 1)緩慢滴加到4-徑基-7- (苯-3-d-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋（1.10g，3.70mmol)的乙酸(2血)溶液中，反應(yīng)升溫至 55°C攬拌反應(yīng)6小時。冷卻至室溫，直接用于下一步反應(yīng)。LC-MS(APCI):m/z = 354.2(M+l)。
[0150] 步驟7:1-((乙酷氧基甲基）甲基)-4-?基-7-(苯-3-d-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲 醋(化合物44)的合成。
[0151] 室溫下，將醋酸酢（1.10g，10.4mmol)緩慢滴加到上述的反應(yīng)中，此間保持溫度不 超過50°C。滴加完畢后，反應(yīng)液升溫至100°C攬拌反應(yīng)過夜。冷卻至60°C，緩慢加入1 OmL的水 后，降溫至室溫，固體過濾，用水洗涂濾餅。將濾餅溶于lOmL的二氯甲燒和5mL的水，攬拌5分 鐘，分出有機相。將嗎啡嘟(322mg，3.70mmol)在冰浴下加入到有機相中，攬拌反應(yīng)2小時。減 壓濃縮反應(yīng)液，加入丙酬（ImL)和甲醇（ImL)混合溶劑中，冰浴下析出固體，固體過濾，用甲 醇(冷，ImL)洗涂，真空干燥得到920mg白色固體，收率:67.6% eLC-MS(APCI) :m/z = 368.1 (M +1)。
[0152] 步驟8:4-?基-1-甲基-7-(3-d苯-氧基)-異哇嘟基-3-簇酸甲醋(化合物45)的合 成
[0153] 將1-((乙酷氧基甲基）甲基）-4-徑基-7-(3-d-苯氧基）-異哇嘟基-3-簇酸甲醋 (920111邑，2.50111111〇1)溶于無水乙酸乙醋（18111〇中，加入碳酸鋼（132111邑，1.25111111〇1)和？(1八 (10%，140mg)，反應(yīng)液在氨氣下80°C下攬拌過夜。冷卻至室溫，娃藻±過濾，濾液減壓濃縮。 粗品進行柱分離得到570mg白色固體，收率:73.50% dLC-MS(APCI) :m/z = : 311.1 (M+1)。
[0154] 步驟9:N-[(4-^基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-3-異哇嘟基)幾基]甘氨酸(化合物 46)的合成
[01巧]室溫下，將甲醇鋼(351g，6.50mmol)加入到4-徑基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-異哇 嘟基-3-簇酸甲醋（200mg，0.65mmol)和甘氨酸（17〇111邑，2.12111111〇1)的気代甲醇-(1(4.5血)溶 液，反應(yīng)液封管ll〇°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，固體過濾，甲醇(冷，3mL)洗涂，固體干 燥。固體溶于2mL的水中，用乙酸乙醋（3mL)萃取。水相用乙酸將pH至調(diào)至酸性，懸濁液在室 溫下攬拌至有大量固體析出，過濾。濾餅分別用水(3x 2mL)，丙酬(冷，2x ImL)洗涂，真空干 燥得到 137mg 白色固體，收率：59.6 %，LC-MS(APCI): m/z = 355.2(M+1); 1h NMR( 300MHz， DMS0-d6)(δ/卵m)13.31(s，lH)，12.83(s，lH)，9.10(t，J = 5.細z，lH)，8.29(d，J = 9.0Hz， lH)，7.61(s，lH)，7.56-7.44(m，2H)，4.03(d J = 6.1Hz，2H)，2.70(s，3H)。
[015W 實施例8制備N-[(4-%基-1-甲基-7-(2,4,6-d3-苯氧基））--3-異哇嘟基)幾基]- 2,2-cb-甘氨酸（化合物47)
[0157]
[0158] 合成方法與實施例3類似，不同之處在于用気代甘氨酸替代甘氨酸，気代甲醇替代 甲醇，得最終產(chǎn)物化合物47。LC-MS(APCI): m/z = 358.4(M+1); 1h NMR( 300MHz，DMSO-ds) (δ/ ppm)13.：M(s，lH)，9.07(s，lH)，8.29(d，J = 9.0Hz，lH)，7.62(d，J = 2.3Hz，lH)，7.53(dd，J = 9.0,2.4Hz，lH)，7.48(d J = 4.0Hz，2H)，2.70(s，3H)。
[0159] 實施例9制備N-[(4-%基-1-甲基-7-(d5-苯氧基））--3-異哇嘟基)幾基]-2,2-d2- 甘氨酸(化合物48)
[0160]
[0161]合成方法與實施例4類似，不同之處在于用気代甘氨酸替代甘氨酸，気代甲醇替代 甲醇，得最終產(chǎn)物化合物48。LC-MS(APCI): m/z = 360.1 (M+1); 1h NMR( 300MHz，DMSO-ds) (δ/ ppm)13.33(s,lH),12.88(s,lH),9.08(s,lH),8.29(d J = 9.0Hz,lH),7.61(d J = 2.0Hz, lH)，7.52(dd，J = 9.0,2.2Hz，lH)，2.70(s，3H)。
[016。實施例10制備N-[(4-%基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-3-異哇嘟基)幾基]-2,2-d2- 甘氨酸(化合物49)
[0163]
[0164] 合成方法與實施例7類似，不同之處在于用気代甘氨酸替代甘氨酸，気代甲醇替代 甲醇，得最終產(chǎn)物化合物49。
[01 化]LC-MS(APCI):m/z = 355.2(M+1);1h NMR(300MHz，DMSO-ds) (δ/ppm)13.31(S，1H)， 12.83(s，lH) ,9.10(t，J = 5.細z，lH),8.29(d，J = 9.0Hz，IH),7.61 (s，lH) ,7.56-7.44(m, 2H),2.70(s,3H)〇
[0166] 生物活性測試。
[0167] 代謝穩(wěn)定性評價。
[0168] 微粒體實驗：人肝微粒體：0.5mg/mL，Xenotech ;大鼠肝微粒體：0.5mg/mL， Xenotech;輔酶(NADPH/NADH): lmM，Sigma Life Science;氯化儀:5mM，lOOmM憐酸鹽緩沖劑 (抑為7.4)。
[0169] 儲備液的配制：精密稱取一定量的化合物實施例1-7粉末，并用DMS0分別溶解至 5mM〇
[0170] 憐酸鹽緩沖液（10OmM，pH7.4)的配制：取預(yù)先配好的0.5M憐酸二氨鐘15OmL和 700mL的0.5M憐酸氨二鐘溶液混合，再用0.5M憐酸氨二鐘溶液調(diào)節(jié)混合液抑值至7.4，使用 前用超純水稀釋5倍，加入氯化儀，得到憐酸鹽緩沖液（lOOmM)，其中含lOOmM憐酸鐘，3.3mM 氯化儀，抑為7.4。
[0171] 配制NADPH再生系統(tǒng)溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM 氯化儀），使用前置于濕冰上。
[0172] 配制終止液:含有50ng/mL鹽酸普糞洛爾和2(K)ng/mL甲苯橫下脈（內(nèi)標(biāo)）的乙臘溶 液。取25057.化L憐酸鹽緩沖液(pH7.4)至50mL離屯、管中，分別加入812.化L人肝微粒體，混 勻，得到蛋白濃度為〇.625mg/mL的肝微粒體稀釋液。取25057.化L憐酸鹽緩沖液(PH7.4)至 50血離屯、管中，分別加入812.扣L SD大鼠肝微粒體，混勻，得到蛋白濃度為0.625mg/mL的肝 微粒體稀釋液。
[0173] 樣品的解育：用含70 %乙臘的水溶液將相應(yīng)化合物的儲備液分別稀釋至0.25mM， 作為工作液，備用。分別取39祉L的人肝微粒體或者大鼠肝微粒體稀釋液加入96孔解育板中 (N=2)，分別加入化L0.25mM的的工作液中，混勻。
[0174] 代謝穩(wěn)定性的測定：在96孔深孔板的每孔中加入30化L預(yù)冷的終止液，并置于冰 上，作為終止板。將96孔解育板和NADPH再生系統(tǒng)置于37 °C水浴箱中，100轉(zhuǎn)/分鐘震蕩，預(yù)解 5min。從解育板每孔取出80化解育液加入終止板，混勻，補充20yLNADPH再生系統(tǒng)溶液，作為 Omin樣品。再向解育板每孔加入80化的NADPH再生系統(tǒng)溶液，啟動反應(yīng)，開始計時。相應(yīng)化合 物的反應(yīng)濃度為ΙμΜ，蛋白濃度為0.5mg/mL。分別于反應(yīng)10、30、90min時，各取100μΙ反應(yīng)液， 加入終止板中，滿旋3min終止反應(yīng)。將終止板于5000 Xg，4°C條件下離屯、lOmin。取10化L上 清液至預(yù)先加入10化L蒸饋水的96孔板中，混勻，采用LC-MS/MS進行樣品分析。
[0175] 數(shù)據(jù)分析:通過LC-MS/MS系統(tǒng)檢測相應(yīng)化合物及內(nèi)標(biāo)的峰面積，計算化合物與內(nèi) 標(biāo)峰面積比值。通過化合物剩余量的百分率的自然對數(shù)與時間作圖測得斜率，并根據(jù)W下 公式計算tl/2和化int，其中V/M即等于1/蛋白濃度。
[0176]
[0177] 實驗結(jié)果如下表2所示，同F(xiàn)G4592相比，本發(fā)明化合物在人肝微粒體與大鼠肝微粒 體實驗中都表現(xiàn)出優(yōu)異的代謝穩(wěn)定性。
[0178] 表1實施例1 -10化合物的肝微粒代謝評價
[0179]
[0180] 大鼠中的藥代動力學(xué)評價。
[0181 ] 6只雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周齡，體重約210g，分成2組，每組3只，經(jīng)靜脈或 口服單個劑量的化合物(經(jīng)靜脈3mg/kg，口服lOmg/kg)，比較其藥代動力學(xué)差異。
[0182] 大鼠采用標(biāo)準飼料飼養(yǎng)，給予水。試驗前16小時開始禁食。藥物用PEG400和二甲亞 諷溶解。眼眶采血，采血的時間點為給藥后0.083小時，0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4 小時、6小時、8小時、12小時和24小時。
[0183] 大鼠吸入乙酸后短暫麻醉，眼眶采集3(Κ)化血樣于試管。試管內(nèi)有30化1%肝素鹽 溶液。使用前，試管于60°C烘干過夜。在隨后一個時間點血樣采集完成之后，大鼠乙酸麻醉 后處死。
[0184] 血樣采集后，立即溫和地顛倒試管至5次，保證混合充分后放置于冰上。血樣在4°C 50(K)rpm離屯、5分鐘，將血漿與紅細胞分離。用移液器吸出1(Κ)化血漿到干凈的塑料離屯、管 中，表明化合物的名稱和時間點。血漿在進行分析前保存在-80°C。用LC-MS/MS測定血漿中 本發(fā)明化合物的濃度。藥代動力學(xué)參數(shù)基于每只動物在不同時間點的血藥濃度進計算。
[0185] 實驗結(jié)果如下表3所示，相對于對照化合物FG-4592,本發(fā)明化合物11、化合物32、 化合物49的口服利用率大幅度提高，說明其在動物體內(nèi)具有更好的藥物動力學(xué)，因而具有 更好的藥效學(xué)和治療效果。
[0186]表2大鼠藥代動力學(xué)實驗
[0187]
[0188] 應(yīng)理解，運些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，實施例中未 注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說 明，否則份數(shù)和百分比為重量份和重量百分比。
[0189] W上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細說明，不能認定 本發(fā)明的具體實施只局限于運些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在 不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可W做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的 保護犯i圍。
【主權(quán)項】
1. 一種取代的雜芳基化合物，其特征在于:如式（I)所示的雜芳基化合物，或其晶型、藥 學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑化合物，其中，1?1、護、護、於、護、護、護、護、護、1?"、護、護、護各自獨立地為氨、気、面素； 附加條件是1?1、護、護、於、護、護、護、護、護、3"、護、護和護中至少一個是気代的或気。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于:Ri和R2各自獨立地為気或氨。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于:R3、R4和R5各自獨立地為気或氨。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于:R6、R7、R8各自獨立地為気或氨。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于:護、1?1*\1?11、1?12和1?13各自獨立地為気或 氨。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于:所述化合物選自下組化合物或其藥學(xué)上 可接受的鹽：7. -種藥物組合物，其特征在于:其含有藥學(xué)上可接受的載體和如權(quán)利要求1~6任意 一項所述的取代的雜芳基化合物，或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物、立體 異構(gòu)體、前藥或同位素變體的藥物組合物。8. -種如權(quán)利要求1所述的化合物，或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑化合 物的用途，其特征在于：制備預(yù)防和治療慢性疾病性貧血、葡萄糖耐受不良和/或腎病相關(guān) 貧血，W及癌癥貧血或血細胞相關(guān)病癥藥物中的用途。
【文檔編號】A61P1/16GK106083720SQ201610538562
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月11日
【發(fā)明人】王義漢, 任興業(yè)
【申請人】深圳市塔吉瑞生物醫(yī)藥有限公司