醋酸去氧皮質(zhì)酮的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了醋酸去氧皮質(zhì)酮的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的醋酸去氧皮質(zhì)酮的藥物組合物中含有醋酸去氧皮質(zhì)酮和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，醋酸去氧皮質(zhì)酮、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時，可降低模型大鼠血清TBIL含量，具有退黃作用；醋酸去氧皮質(zhì)酮和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，退黃作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療黃疸的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，設(shè)及醋酸去氧皮質(zhì)酬的新用途，具體設(shè)及醋酸去氧皮 質(zhì)酬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 醋酸去氧皮質(zhì)酬用于原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退癥的替代治療，屬于內(nèi)泌系統(tǒng)用 藥。
[0003] 迄今為止，尚未見醋酸去氧皮質(zhì)酬及其藥物組合物與黃痘的相關(guān)性報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物，該藥物組合物中含有 醋酸去氧皮質(zhì)酬和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，醋酸去氧皮質(zhì)酬和該天然產(chǎn)物可W協(xié)同治療 黃痘。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實現(xiàn)的：
[0006] -種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0007]
[000引一種醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物，包括醋酸去氧皮質(zhì)酬、如權(quán)利要求1所述的化 合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可W接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)將連翅粉碎，用85~95%乙醇 熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取， 分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用 大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗 脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化 合物(I)。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物(I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備治療黃痘的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 上述醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物在制備治療黃痘的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物中含有醋酸去氧皮質(zhì) 酬和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，醋酸去氧皮質(zhì)酬、化合物（I)單獨(dú)作用時，可降低模型大鼠 血清TBIL含量，具有退黃作用;醋酸去氧皮質(zhì)酬和化合物（I)聯(lián)合作用時，退黃作用進(jìn)一步 提高，可W開發(fā)成治療黃痘的藥物。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0017] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0018] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0019]分離方法：（a)將連翅（2kg)粉碎，用90%乙醇熱回流提?。?0LX3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（化），依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下醇 (化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中 正下醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱 體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(IKHPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESI-MS顯示[Μ+Η]+為m/z 293.U45,結(jié)合核磁特征可得分子式為 Ci6出日0日，不飽和度為7。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)δκ(卵m，CDC13，500MHz):H-2(3.14，d，J = 2.7Hz)， H-3(3.27，d，J = 2.7Hz)，H-5(2.34，d，J = 7.9Hz)，H-6(5.70，dd，J = 7.9,4.6Hz)，H-8口 (2.12，m)，H-80(2.31，m)，H-9a(1.49，dt，J = 3.2，13.2Hz)，H-W(1.62，ddd，J=13.2,4.2， 2.7Hz)，H-13(6.29，d，J = 3.3Hz)，H-13C.76，d，J = 3.3Hz)，H-14(1.02，s)，H-15(1.47，s)， 12-0Me(3.77，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(卵m，CDCl3,125MHz) :211.4(C，1-C)，45.5(CH，2-C)， 62.9(CH，3-C)，69.5(C，4-C)，53.7(CH，5-C)，122.6(CH，6-C)，138.4(C，7-C)，20.3(C出，8- C)，33.5(CH2,9-C)，34.3(C，10-C)，144.6(C，11-C)，167.3(C，12-C)，124.9(C出，13-C),19.2 (CH3，14-C)，21.6 (CH3，15-C)，52.7 ( CH3，12-OMe)。Uc-NMR、DEPT和服QC譜中顯示有 16個碳信 號，包括Ξ個甲基（一個連氧碳），Ξ個亞甲基（一個締控碳），四個次甲基(兩個連氧碳和一 個締控碳），W及六個季碳(兩個締控碳，兩個幾基碳和一個連氧季碳）。W上功能結(jié)構(gòu)再結(jié) 合不飽和數(shù)表明該化合物為Ξ環(huán)結(jié)構(gòu)。iH-NM時普結(jié)合HSQ幻普顯示Ξ個甲基質(zhì)子信號δΗ 1.02 (3H，s)、1.47(3H，s)與3.77(3H，s)，一對端締控質(zhì)子信號δH6.29αH，d，J = 3.3Hz)與5.76 (lH，d，J = 3.3Ηζ)，兩個連氧次甲基質(zhì)子信號 δκ 3.14( lH，d，J = 2.7Hz)、3.27(lH，d，J = 2.7化），一個締控質(zhì)子信號6(15.70(1山(1(1，1 = 7.9,4.6化）。醒財普數(shù)據(jù)6113.77(3山3)與6。 52.7可知該化合物中存在甲氧基，麗8村普中016與(：-12的相關(guān)信號表明了甲氧基連接在(：- 12 位。此外，根據(jù)醒 R 譜數(shù)據(jù) δκ 3.14(lH，d，J = 2.7Hz)、3.27(lH，d，J = 2.7Hz)與 Sc 45.5、 62.9可知該化合物中存在個環(huán)氧結(jié)構(gòu)。通過lH-lHCOSY譜中H-2/H-3，H-5/H-6與H-8/H-9相 關(guān)信號，W及HMBC譜中顯示的H-2與C-1、C-3和C-4，H-3與C-2、C-3和C-15，H-5與C-4、C-巧口 C-10，H-6 與 C-5、C-7、C-8 和 C-10，H-13 與 C-7、C-11和 C-12，H-14 與 C-10 相關(guān)信號，可 W構(gòu)建 該化合物的連接方式，并且上述波譜數(shù)據(jù)表明該化合物為按葉燒型倍半祗。該化合物中的 C-2、C-3、C-4、C-5和C-10為手性碳，通過NOESY試驗與H-H偶合常數(shù)確認(rèn)了相對構(gòu)型。NOESY 譜中護(hù)2/護(hù)14、護(hù)3/護(hù)14、護(hù)3/護(hù)15、護(hù)地/護(hù)13、護(hù)地/護(hù)14^及護(hù)14/護(hù)15的相關(guān)信號表明 該化合物〇2、03、04、(：-5和(：-10構(gòu)型為21?、31?、45、55和101?。綜合氨譜、碳譜、麗8村普和 NOESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一 步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0021 ]該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0022]
[0023] 實施例2:藥理作用
[0024] 本實施例使用一次性灌胃異硫氯酸-1-糞醋(ANIT)復(fù)制大鼠黃痘模型，測定藥物 對黃痘模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和總膽紅素 (TBIL)含量的影響，觀察藥物對肝臟的保護(hù)作用。
[002引1、材料與方法
[0026] 1.1 動物
[0027] 清潔級SD大鼠，罕(:^有，體質(zhì)量260~300g，購自昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中屯、。
[002引1.2試劑與樣品
[0029] 醋酸去氧皮質(zhì)酬購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施 例1。聯(lián)苯雙醋滴丸(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，規(guī)格1.5mg/粒）；異硫氯酸-1-糞醋 (ANIT，華北地區(qū)特種化學(xué)試劑開發(fā)中屯、）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (AST)和總膽紅素(TBIL)測試盒均購自南京建成生物工程研究所。
[0030] 1.3 儀器
[0031] 721型分光光度計（上海分析儀器廠）；RM 6240BD型多道生理信號采集處理系統(tǒng) (北京天創(chuàng)尚邦儀器設(shè)備有限公司）。
[0032] 1.4大鼠分組及模型制備
[0033] 60只SD大鼠（罕半）隨機(jī)均分為6組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組 (聯(lián)苯雙醋O.lOg/kg)和醋酸去氧皮質(zhì)酬組(80mg · kg^)、化合物（I)組(80mg · kg^)、醋酸 去氧皮質(zhì)酬與化合物（I)組合物組【40mg · kg^醋酸去氧皮質(zhì)酬+40mg · kg^化合物（I)】cig 給藥，每天1次，連續(xù)lOd。正常對照組和模型對照組分別給予生理鹽水，于給藥第8天后化， 正常對照組大鼠 ig等量色拉油，其余各組大鼠均一次性ig ANIT(2g溶于100ml色拉油中） lOOmg/kgW復(fù)制黃痘模型。
[0034] 1.5大鼠血清生化指標(biāo)測定實驗
[0(X3日]于末次給藥后化大鼠摘眼球取血2ml，W離屯、半徑為8cm、3000;r/min離屯、15min分 離血清，用分光光度計檢測大鼠血清生化指標(biāo)ALT、AST和TBIL。
[0036] 1.6統(tǒng)計學(xué)方法
[0037] 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，實驗所得數(shù)據(jù)用T±s表示，采用完全隨 機(jī)設(shè)計的單因素方差分析，多個樣本均數(shù)間的兩兩比較采用q檢驗。P<〇.05為差異有統(tǒng)計 學(xué)意義。
[0038] 2、實驗結(jié)果
[0039] 2.1對黃痘模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響
[0040] 與正常對照組比，模型對照組大鼠 TBIL、ALT、AST水平顯著升高(P<0.01)，說明造 模成功。與模型對照組比，陽性對照組大鼠 TBIL、ALT、AST水平顯著降低(P<0.01);與模型 對照組比，醋酸去氧皮質(zhì)酬組、化合物（I)組大鼠 TBIL、ALT、AST水平降低(P<0.05);與模型 對照組相比，醋酸去氧皮質(zhì)酬與化合物（I)組合物組大鼠 TBIL、ALT、AST水平顯著降低(P< 0.01)。結(jié)果見表1。
[0041 ] 表1對黃痘模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響（V ±s, n= 10)
[0042]
[0043] 肝臟分泌膽汁后儲存于膽囊中，然后經(jīng)膽總管流入十二指腸，由膽總管中收集膽 汁可直觀反映膽汁的分泌與排放情況。膽汁的分泌與排放情況是肝臟功能正常與否的反 映，膽汁的正常流動有利于膽道系統(tǒng)內(nèi)的炎癥產(chǎn)物和小顆粒結(jié)石等堵塞物順利流出，有利 于對膽道進(jìn)行沖刷，使膽道系統(tǒng)保持楊通，并且有利于消除膽汁渺積變質(zhì)而引起的對膽囊 組織的持續(xù)刺激。各種因素引起的膽汁滯留必定會使膽囊組織在化學(xué)刺激下遭受損傷。
[0044] 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，膽囊炎的發(fā)生與膽汁成分改變和膽道動力障礙有關(guān)，使膽囊壁增 厚、肌肉纖維萎縮，故膽囊的收縮功能減退。該疾病的治療難點(diǎn)是膽囊壁的不良重構(gòu)而引起 膽囊收縮功能的喪失，單純應(yīng)用西藥抗感染很難達(dá)到恢復(fù)膽囊收縮功能的目的。膽汁在膽 道系統(tǒng)內(nèi)的儲存、排出有賴于膽囊和膽道口括約肌的協(xié)調(diào)運(yùn)動。膽囊收縮功能下降或膽汁 濃聚，不利于膽汁的排泄，從而加劇膽囊炎的急性發(fā)作。
[0045] 如果肝細(xì)胞受到損傷，膽紅素就可W直接進(jìn)入血液而導(dǎo)致血液中的膽紅素含量升 高，并沉積在眼球和皮膚等部位，引起黃痘，因此血漿中的膽紅素水平可W直接反映肝臟的 健康狀況。ANIT誘發(fā)大鼠黃痘的生化指標(biāo)和病理形態(tài)學(xué)改變，類似于人類肝內(nèi)膽汁渺積病 變。在大鼠一次性ig ANIT 4化時血清TBIL達(dá)高峰，7化后開始下降。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生病變，肝 細(xì)胞腫脹，肝小膽管管腔閉塞，排泄膽汁受阻，則血中膽紅素升高，就會發(fā)生肝細(xì)胞性黃痘。
[0046] 上述結(jié)果表明，醋酸去氧皮質(zhì)酬、化合物（I)單獨(dú)作用時，可降低模型大鼠血清 TBIL含量，具有退黃作用;醋酸去氧皮質(zhì)酬和化合物(I)聯(lián)合作用時，退黃作用進(jìn)一步提高， 可W開發(fā)成治療黃痘的藥物。
[0047] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物，其特征在于:包括醋酸去氧皮質(zhì)酬、如權(quán)利要求 1所述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受 的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸 附載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將連 翅粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步 驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫 12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗 脫得到4個組分；（d)步驟k)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2: 1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療黃痘的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2~4任一所述的醋酸去氧皮質(zhì)酬的藥物組合物在制備治療黃痘的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P1/16GK106083767SQ201610380361
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月31日
【發(fā)明人】王昌榮
【申請人】王昌榮