(R)?α?硫辛酸的制備方法
【專利摘要】一種(R)?α?硫辛酸的制備方法，屬于藥物化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域。步驟：先將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，然后離心分離；將得到的還原酶催化劑引入由6?羰基?8?氯辛酸、葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和水組成的體系進(jìn)行手性還原反應(yīng)；將得到的(S)?6?羥基?8?氯辛酸投入到由氯化試劑、催化劑和溶劑組成的體系中進(jìn)行氯化反應(yīng)；將得到的(R)?6,8?二氯辛酸投入到由硫磺、硫化鈉、相轉(zhuǎn)移催化劑和水組成的體系中進(jìn)行環(huán)合反應(yīng)，得到成品。具有以下工藝條件溫和，成本低廉，產(chǎn)物純度高和收率高，光學(xué)純度高；工藝路線所用試劑易得，技術(shù)方案合理且對(duì)環(huán)境友好。
【專利說(shuō)明】
(R) -α-硫辛酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于藥物化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種(R)-Ct-硫辛酸的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]α-硫辛酸是一種能消除加速老化和致病的自由基、類似維他命的化合物，兼具水溶性又具脂溶性的特性，可協(xié)助輔酶進(jìn)行有利于機(jī)體免疫力的生理代謝，是一種萬(wàn)能抗氧化劑藥物。α-硫辛酸對(duì)肝臟疾病、糖尿病、HIV病毒、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)退化等許多疾病的治療都有一定的效果，例如可以輔助治療2型糖尿病改善胰島功能葡萄糖代謝，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，可預(yù)防白內(nèi)障，可預(yù)防肌肉損傷等等。
[0003]研究表明，硫辛酸的兩個(gè)對(duì)映體顯示出不同的生物活性，其中R型生物活性遠(yuǎn)高于S型，S型基本無(wú)活性，但亦無(wú)毒副作用。(R)-Ct-硫辛酸是人體內(nèi)硫辛酸的天然形式，作為維生素類藥物，效果優(yōu)于消旋的α-硫辛酸，未來(lái)(R)-Ct-硫辛酸將越來(lái)越多的代替α-硫辛酸，成為普遍使用的藥品和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充品。
[0004]工業(yè)上合成(R)-a-硫辛酸的方法主要有兩種:一種是化學(xué)拆分消旋α-硫辛酸的方法，該法目前在工業(yè)生產(chǎn)中使用較多，但由于α-硫辛酸獨(dú)特的雙硫鍵五元環(huán)結(jié)構(gòu)，在拆分過(guò)程中易發(fā)生聚合，導(dǎo)致收率不穩(wěn)定，增加成本;另一種是以(R)-6，8_二氯辛酸(或其酯)為原料，經(jīng)酯化、環(huán)合、水解得到(R)-a-硫辛酸，該法收率較第一種方法有所提高。目前，在有關(guān)的文獻(xiàn)和專利報(bào)道中(W02007028729A1，US7135328B2，US7157253B2)都是采用生物酶法，先制備得到(R)-6-羥基-8-氯辛酸乙酯(或甲酯)，然后通過(guò)氯代，合成得到(R)-6，8-二氯辛酸乙酯(或甲酯)。由于在氯代一步，(R)-6-羥基-8-氯辛酸乙酯(或甲酯)將產(chǎn)生部分構(gòu)型反轉(zhuǎn)，使產(chǎn)物產(chǎn)生部分的S-型的產(chǎn)物，降低了(R)-C1-硫辛酸的光學(xué)純度，嚴(yán)重影響了工業(yè)化生產(chǎn)推廣應(yīng)用。
[0005]發(fā)明專利公布號(hào)CN103451124A公開(kāi)了 “一株紅球菌以及用于制備光學(xué)純(R)-6-羥基-8-氯辛酸酯及其它光學(xué)活性手性醇的用途”，該專利教導(dǎo)了采用培養(yǎng)發(fā)酵制備的羰基還原酶制備(R)-6_羥基-8-氯辛酸酯等中間體，但是在其往下制備(R)-Ct-硫辛酸的各步反應(yīng)中，氯代反應(yīng)是關(guān)鍵的一步，存在著構(gòu)型保持和構(gòu)型反轉(zhuǎn)的競(jìng)爭(zhēng)幾率，因而不利于獲得所需的單一構(gòu)型，降低了光學(xué)純度，不利于放大生產(chǎn)和工業(yè)化推廣。
[0006]公布號(hào)CN105087681A公開(kāi)了 “(S)_6_羥基-8-氯辛酸乙酯的制備方法和應(yīng)用”，使(R)-a-硫辛酸的光學(xué)純度顯著提高。但是，由于酶還原反應(yīng)主要為水溶液的體系，選定6-羰基-8-氯辛酸乙酯作為底物原料，其溶解度較低，反應(yīng)條件要求苛刻，而且易于波動(dòng)，可控性較差，不利于控制成本和工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。
[0007]針對(duì)上述已有技術(shù)，有必要繼而探索與改進(jìn)，下面將要介紹的技術(shù)方案便是在這種背景下產(chǎn)生的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種工藝條件溫和、有助于降低制備成本、有利于提高產(chǎn)物純度和收率以及光學(xué)純度并且有益于體現(xiàn)高效綠色環(huán)保而藉以滿足工業(yè)化放大生產(chǎn)要求的(R)-a-硫辛酸的制備方法。
[0009]本發(fā)明的任務(wù)是這樣來(lái)完成的，一種(R)-Ct-硫辛酸的制備方法，包括以下步驟:
A)制備還原酶催化劑，先將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)并且控制擴(kuò)增培養(yǎng)的溫度和控制擴(kuò)增培養(yǎng)的時(shí)間，然后離心分離，得到還原酶催化劑；
B)制備(S)-6_羥基-8-氯辛酸，將由步驟A)得到的還原酶催化劑引入由6-羰基-8-氯辛酸、葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和水組成的體系進(jìn)行手性還原反應(yīng)并且控制手性還原反應(yīng)的溫度、控制手性還原反應(yīng)的時(shí)間以及控制所述體系的pH值，得到(S) -6-羥基-8-氯辛酸；
C)制備(R)_6，8-二氯辛酸，將由步驟B)得到的(S) -6-輕基-8-氯辛酸投入到由氯化試劑、催化劑和溶劑組成的體系中進(jìn)行氯化反應(yīng)，并且控制氯化反應(yīng)的溫度和控制氯化反應(yīng)的時(shí)間，得到(R) -6，8-二氯辛酸；
D)制備(R)-α-硫辛酸，將由步驟C)得到的(R)-6，8-二氯辛酸投入到由硫磺、硫化鈉、相轉(zhuǎn)移催化劑和水組成的體系中進(jìn)行環(huán)合反應(yīng)并且控制環(huán)合反應(yīng)的溫度和控制環(huán)合反應(yīng)的時(shí)間，得到(R)-a-硫辛酸。
[0010]在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施例中，步驟Α)中所述的控制擴(kuò)增培養(yǎng)的溫度是將擴(kuò)增培養(yǎng)的溫度控制為20-50°C，所述的控制擴(kuò)增培養(yǎng)的時(shí)間是將擴(kuò)增培養(yǎng)的時(shí)間控制為24-48h0
[0011]在本發(fā)明的另一個(gè)具體的實(shí)施例中，步驟A)中所述的將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中的引入方式為以接種方式引入，并且該近平滑假絲酵母菌接種至所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中的接種量與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10?100。
[0012]在本發(fā)明的又一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為3~8，并且該發(fā)酵培養(yǎng)基由以下按重量稱取的原料構(gòu)成:葡萄糖10?50g、蛋白胨I?20g、磷酸二氫鉀I?10g、磷酸氫二鉀I?10g、氯化鈉0.1?2g、硫酸鎂0.1?2g和水1000g。
[0013]在本發(fā)明的再一個(gè)具體的實(shí)施例中，步驟B)中所述的還原酶催化劑、6-羰基-8-氯辛酸、葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和水八者的重量比為卜300:0.22?66:0.01?0.5:0.3?90:0.06?0.66:3.4?6.8:5.7?11.4:1000。
[0014]在本發(fā)明的還有一個(gè)具體的實(shí)施例中，步驟B)中所述的控制手性還原反應(yīng)的溫度是將手性還原反應(yīng)的溫度控制為20?35°C;所述的控制手性還原反應(yīng)的時(shí)間是將手性還原反應(yīng)的時(shí)間控制為6-12h;所述的控制體系的pH值是將體系的pH值控制為5.5-7.00
[0015]在本發(fā)明的更而一個(gè)具體的實(shí)施例中，步驟C)中所述的(S)-6_羥基-8-氯辛酸、氯化試劑、催化劑和溶劑四者的摩爾比為1.0:2.0~3.0:0.5?1.0:10.0-35.0 ；所述的控制氯化反應(yīng)的溫度是將氯化反應(yīng)的溫度控制為為50?90°C，所述的控制氯化反應(yīng)的時(shí)間是將氯化反應(yīng)的時(shí)間控制為3-6h。
[0016]在本發(fā)明的進(jìn)而一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的氯化試劑為氯化亞砜、三氯氧磷、磺酰氯、三氯化磷或固體光氣;所述的催化劑為吡啶、三乙胺或N，N-二甲基甲酰胺;所述的溶劑為二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氫呋喃、甲基叔丁基醚、I，4_二氧六環(huán)或乙腈。
[0017]在本發(fā)明的又更而一個(gè)具體的實(shí)施例中，步驟D)中所述的(R)-6，8_二氯辛酸、硫磺、硫化鈉、相轉(zhuǎn)移催化劑和水五者的摩爾比為1.0: 1.2?2.0: 1.2?2.0: 0.01?0.1:10.0?35.0;所述的控制環(huán)合反應(yīng)的溫度是將環(huán)合反應(yīng)的溫度控制為75?90°C，所述的控制環(huán)合反應(yīng)的時(shí)間是將環(huán)合反應(yīng)時(shí)間控制為為90-180min。
[0018]在本發(fā)明的又進(jìn)而一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的相轉(zhuǎn)移催化劑為芐基三乙基氯化銨、四丁基溴化銨、四丁基氯化銨、四丁基硫酸氫銨、三辛基甲基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨或十四烷基三甲基氯化銨。
[0019]本發(fā)明提供的技術(shù)方案具有以下技術(shù)效果:其一，工藝條件溫和，成本低廉，產(chǎn)物純度高和收率高，光學(xué)純度高；其二，本發(fā)明的工藝路線所用試劑易得，技術(shù)方案合理并且對(duì)環(huán)境友好，可以大量生產(chǎn)來(lái)滿足使用需求，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步闡述，顯然，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員所做的本發(fā)明的其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0021]實(shí)施例1:
A)制備還原酶催化劑，先將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C并且在ISOrpm的攪拌下進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)48h，近平滑假絲酵母菌與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10，擴(kuò)增培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行離心分離，得到還原酶催化劑，在本步驟中，所述的近平滑假絲酵母菌(Candida parapsilosis)保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC N0.9630。本步驟中的所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下按重量稱取的原料構(gòu)成:葡萄糖15g、蛋白胨5g、磷酸二氫鉀5g、磷酸氫二鉀lg、氯化鈉lg、硫酸鎂0.5g和水100(^成值為5。另外配制富集培養(yǎng)基，組成如下:(順)2304 1.0g/LjKH2PO4 3.0g/L,K2HPO4 6.0g/L,MgS04 0.5g/L，CaCl2 0.05g/L。
[0022]本步驟所述的擴(kuò)增培養(yǎng)分離的具體過(guò)程如下:
在250mL錐形瓶?jī)?nèi)加入50mL的富集培養(yǎng)基和2mM的6-羰基-8-氯辛酸作為碳源，加入土樣后，于30°C，180rpm培養(yǎng)I?6天。之后將該培養(yǎng)液涂布于豐富培養(yǎng)基平板上，30°C培養(yǎng)I?3天，長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行平板劃線分離純化，將得到的單菌落接種到液體豐富培養(yǎng)基中，在300C，180rpm培養(yǎng)2天后，離心分離得到還原酶催化劑65g;
B)制備(S)-6-羥基-8-氯辛酸，在5L反應(yīng)瓶中加入IL磷酸鈉緩沖溶液(0.1Μ，ρΗ6.0)、
IOg由步驟A)得到的還原酶催化劑、30g的6-羰基-8-氯辛酸、5U的葡萄糖脫氫酶液、3g的葡萄糖和0.65g煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，在30 °C下，通過(guò)pH儀自動(dòng)滴加0.5M NaOH溶液使反應(yīng)體系的P H控制在6.5，反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋蒸至干得到(S)-6-羥基-8-氯辛酸29.5g，GC含量97.5%，收率95.0%，旋光值-19.4 °，ee值99.23%。
[0023]手性氣相色譜分析條件:色譜柱為手性毛細(xì)管柱CP-Chirasi1-DEXCB，以氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度280°C，檢測(cè)器溫度280°C，反應(yīng)產(chǎn)物乙?；筮M(jìn)行分析，柱溫160°C，測(cè)定產(chǎn)物ee值；
C)制備(R)_6，8-二氯辛酸:
在2L反應(yīng)瓶中，加入氯化亞砜35.6g、N，N-二甲基甲酰胺8g和二氯乙烷150g，攪拌15分鐘，降溫至10°C，滴加(3)-6-羥基-8-氯辛酸288(質(zhì)量%含量97.5%)，升溫至70°C，回流3.5小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，降溫至室溫，加水30mL攪拌10分鐘，分層，甲苯層于70 °C減壓旋蒸至干，得剩余物減壓精餾，蒸出6，8_二氯辛酸，得到淡黃色透明液體29.Sg，(R)-6，8-二氯辛酸，GC含量96.0%，收率 96.8%，旋光值+14.0 0;
D)制備(R)-a-硫辛酸:
在2L反應(yīng)瓶中，加入(R)-6，8-二氯辛酸22g(質(zhì)量%含量96.0%)、硫磺4.5g、四丁基溴化銨1.4g、水22g，攪拌，升溫至85°C，滴加硫化鈉水溶液(硫化鈉11.5g，水12g，即11.5g硫化鈉溶于12g水中得到的硫化鈉水溶液，以下雷同)，滴加完畢，在85°C下攪拌2小時(shí)，降溫至60°C，靜置分層，油層用甲苯萃取，精制、干燥得(R)-a-硫辛酸16.7g，HPLC含量98.8%，收率91.3%，旋光值+112。，ee 值98.88% 0
[0024]實(shí)施例2:
A)制備還原酶催化劑，先將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在20°C并且在ISOrpm的攪拌下進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)36h，近平滑假絲酵母菌與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:40，擴(kuò)增培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行離心分離，得到還原酶催化劑，在本步驟中，所述的近平滑假絲酵母菌(Candida parapsilosis)保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC N0.9630。本步驟中的所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下按重量稱取的原料構(gòu)成:葡萄糖10g、蛋白胨lg、磷酸二氫鉀lg、磷酸氫二鉀10g、氯化鈉0.18、硫酸鎂0.18和水100(^，？!1值為8。另外配制富集培養(yǎng)基，組成如下:(冊(cè)4)23041.0g/L,KH2PO4 3.0g/L,K2HPO4 6.0g/L,MgS04 0.5g/L,CaCl2 0.05g/L。
[0025]本步驟所述的擴(kuò)增培養(yǎng)分離的具體過(guò)程如下:
在250mL錐形瓶?jī)?nèi)加入50mL的富集培養(yǎng)基和2mM的6-羰基-8-氯辛酸作為碳源，加入土樣后，于30°C，180rpm培養(yǎng)I?6天。之后將該培養(yǎng)液涂布于豐富培養(yǎng)基平板上，30°C培養(yǎng)I?3天，長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行平板劃線分離純化，將得到的單菌落接種到液體豐富培養(yǎng)基中，在300C，ISOrpm培養(yǎng)2天后，離心分離得到還原酶催化劑70g;
B)制備(S)-6-羥基-8-氯辛酸，在5L反應(yīng)瓶中加入IL磷酸鈉緩沖溶液(0.1Μ，ρΗ6.0)、50g由步驟A)得到的還原酶催化劑、30g的6-羰基-8-氯辛酸、5U的葡萄糖脫氫酶液、Ig的葡萄糖和0.1Og煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，在20 °C下，通過(guò)pH儀自動(dòng)滴加0.5M NaOH溶液使反應(yīng)體系的pH控制在5.5，反應(yīng)6小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋蒸至干得到(S)-6-羥基-8-氯辛酸30.4g，GC含量97.6%，收率97.9%，旋光值-19.7 °，ee值99.25%o
[0026]手性氣相色譜分析條件:色譜柱為手性毛細(xì)管柱CP-Chirasi1-DEXCB，以氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度280°C，檢測(cè)器溫度280°C，反應(yīng)產(chǎn)物乙酰化后進(jìn)行分析，柱溫160°C，測(cè)定產(chǎn)物ee值；
C)制備(R)_6，8-二氯辛酸:
在2L反應(yīng)瓶中，加入三氯化磷40.8g、吡啶9.4g和乙腈220g，攪拌15分鐘，降溫至10°C，滴加(S)-6-羥基-8-氯辛酸28g(質(zhì)量%含量97.6%)，升溫至50 V，回流4小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，降溫至室溫，加水30mL攪拌10分鐘，分層，甲苯層于70°C減壓旋蒸至干，得剩余物減壓精餾，蒸出6,8-二氯辛酸，得到淡黃色透明液體29.2g，(R)-6，8-二氯辛酸，GC含量97.5%，收率95.0%，旋光值+14.2°;
D)制備(R)-a-硫辛酸: 在2L反應(yīng)瓶中，加入(R)-6，8_二氯辛酸22g(質(zhì)量%含量97.5%)、硫磺5.5g、芐基三乙基氯化銨1.8g、水23g，攪拌，升溫至85 0C，滴加硫化鈉水溶液(硫化鈉11.7g，水15g)，滴加完畢，在75°C下攪拌1.5小時(shí)，降溫至60°C，靜置分層，油層用甲苯萃取，精制、干燥得(R)-a-硫辛酸16.9g，HPLC 含量 98.7%，收率 92.1%，旋光值+113。，ee 值98.68%。
[0027]實(shí)施例3:
A)制備還原酶催化劑，先將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在50°C并且在ISOrpm的攪拌下進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)24h，近平滑假絲酵母菌與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:100，擴(kuò)增培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行離心分離，得到還原酶催化劑，在本步驟中，所述的近平滑假絲酵母菌(Candida parapsilosis)保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC N0.9630。本步驟中的所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下按重量稱取的原料構(gòu)成:葡萄糖50g、蛋白胨20g、磷酸二氫鉀10g、磷酸氫二鉀6g、氯化鈉2g、硫酸鎂2g和水1000g，pH值為3。另外配制富集培養(yǎng)基，組成如下:(NH4)2S04 1.0g/LjKH2PO4 3.0g/L,K2HPO4 6.0g/L,MgS04 0.5g/L，CaCl2 0.05g/L。
[0028]本步驟所述的擴(kuò)增培養(yǎng)分離的具體過(guò)程如下:
在250mL錐形瓶?jī)?nèi)加入50mL的富集培養(yǎng)基和2mM的6-羰基-8-氯辛酸作為碳源，加入土樣后，于30°C，180rpm培養(yǎng)I?6天。之后將該培養(yǎng)液涂布于豐富培養(yǎng)基平板上，30°C培養(yǎng)I?3天，長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行平板劃線分離純化，將得到的單菌落接種到液體豐富培養(yǎng)基中，在300C，180rpm培養(yǎng)2天后，離心分離得到還原酶催化劑66g;
B)制備(S)-6-羥基-8-氯辛酸，在5L反應(yīng)瓶中加入IL磷酸鈉緩沖溶液(0.1Μ，ρΗ6.0)、220g由步驟A)得到的還原酶催化劑、30g的6-羰基-8-氯辛酸、5U的葡萄糖脫氫酶液、30g的葡萄糖和0.33g煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，在35°C下，通過(guò)pH儀自動(dòng)滴加0.5M NaOH溶液使反應(yīng)體系的pH控制在7.0，反應(yīng)12小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋蒸至干得到(S)-6-羥基-8-氯辛酸28.7g，GC含量97.7%，收率92.4%，旋光值-19.9 0，ee值99.28%;
手性氣相色譜分析條件:色譜柱為手性毛細(xì)管柱CP-Chirasi 1-DEXCB，以氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度280°C，檢測(cè)器溫度280°C，反應(yīng)產(chǎn)物乙?；筮M(jìn)行分析，柱溫160°C，測(cè)定產(chǎn)物ee值。
[0029]C)制備(R)-6，8_二氯辛酸:
在2L反應(yīng)瓶中，加入三氯氧磷38.0g、三乙胺7.6g和四氫呋喃200g，攪拌15分鐘，降溫至10°C，滴加(S)-6-羥基-8-氯辛酸28g(質(zhì)量%含量97.7%)，升溫至90°C，回流6小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，降溫至室溫，加水30mL攪拌10分鐘，分層，甲苯層于70°C減壓旋蒸至干，得剩余物減壓精餾，蒸出6，8-二氯辛酸，得到淡黃色透明液體29.2g，(R)-6，8-二氯辛酸，GC含量98.0%，收率94.9%，旋光值+14.8°。
[0030]D)制備(R)-a-硫辛酸:
在2L反應(yīng)瓶中，加入(R)-6，8-二氯辛酸22g(質(zhì)量%含量98.0%)、硫磺5.4g、四丁基硫酸氫銨1.9g、水24g，攪拌，升溫至85°C，滴加硫化鈉水溶液(硫化鈉13g，水12.5g)，滴加完畢，在90°C下攪拌3小時(shí)，降溫至60°C，靜置分層，油層用甲苯萃取，精制、干燥得(R)-a-硫辛酸16.8g，HPLC含量98.9%，收率91.5%，旋光值+114。，ee值98.92%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種(R)-Ct-硫辛酸的制備方法，其特征在于包括以下步驟: A)制備還原酶催化劑，先將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)并且控制擴(kuò)增培養(yǎng)的溫度和控制擴(kuò)增培養(yǎng)的時(shí)間，然后離心分離，得到還原酶催化劑； B)制備(S)-6-羥基-8-氯辛酸，將由步驟A)得到的還原酶催化劑引入由6-羰基-8-氯辛酸、葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和水組成的體系進(jìn)行手性還原反應(yīng)并且控制手性還原反應(yīng)的溫度、控制手性還原反應(yīng)的時(shí)間以及控制所述體系的pH值，得到(S) -6-羥基-8-氯辛酸； C)制備(R)_6，8-二氯辛酸，將由步驟B)得到的(S)-6-輕基-8-氯辛酸投入到由氯化試劑、催化劑和溶劑組成的體系中進(jìn)行氯化反應(yīng)，并且控制氯化反應(yīng)的溫度和控制氯化反應(yīng)的時(shí)間，得到(R) -6，8-二氯辛酸； D)制備(R)-α-硫辛酸，將由步驟C)得到的(R)-6，8-二氯辛酸投入到由硫磺、硫化鈉、相轉(zhuǎn)移催化劑和水組成的體系中進(jìn)行環(huán)合反應(yīng)并且控制環(huán)合反應(yīng)的溫度和控制環(huán)合反應(yīng)的時(shí)間，得到(R)-a-硫辛酸。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(R)-Ct-硫辛酸的制備方法，其特征在于步驟Α)中所述的控制擴(kuò)增培養(yǎng)的溫度是將擴(kuò)增培養(yǎng)的溫度控制為20-50°C，所述的控制擴(kuò)增培養(yǎng)的時(shí)間是將擴(kuò)增培養(yǎng)的時(shí)間控制為24-48h。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(R)-Ct-硫辛酸的制備方法，其特征在于步驟A)中所述的將近平滑假絲酵母菌引入發(fā)酵培養(yǎng)基中的引入方式為以接種方式引入，并且該近平滑假絲酵母菌接種至所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中的接種量與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10?100。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的(R)-a-硫辛酸的制備方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為3?8，并且該發(fā)酵培養(yǎng)基由以下按重量稱取的原料構(gòu)成:葡萄糖10?50g、蛋白胨I?20g、磷酸二氫鉀I?10g、磷酸氫二鉀I?10g、氯化鈉0.1?2g、硫酸鎂0.1?2g和水1000g。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(R)-a-硫辛酸的制備方法，其特征在于步驟B)中所述的還原酶催化劑、6-羰基-8-氯辛酸、葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和水八者的重量比為卜300: 0.22?66:0.01?0.5:0.3-90: 0.06-0.66: 3.4-6.8:5.7?11.4:1000。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(R)-a-硫辛酸的制備方法，其特征在于步驟B)中所述的控制手性還原反應(yīng)的溫度是將手性還原反應(yīng)的溫度控制為20?35°C;所述的控制手性還原反應(yīng)的時(shí)間是將手性還原反應(yīng)的時(shí)間控制為6_12h;所述的控制體系的pH值是將體系的pH值控制為5.5?7.0。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(R)-a-硫辛酸的制備方法，其特征在于步驟C)中所述的(S)-6-羥基-8-氯辛酸、氯化試劑、催化劑和溶劑四者的摩爾比為1.0:2.0?3.0:0.5?1.0:10.0?35.0;所述的控制氯化反應(yīng)的溫度是將氯化反應(yīng)的溫度控制為為50?90°C，所述的控制氯化反應(yīng)的時(shí)間是將氯化反應(yīng)的時(shí)間控制為3-6h。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的(R)-a-硫辛酸的制備方法，其特征在于所述的氯化試劑為氯化亞砜、三氯氧磷、磺酰氯、三氯化磷或固體光氣;所述的催化劑為吡啶、三乙胺或N，N-二甲基甲酰胺;所述的溶劑為二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氫呋喃、甲基叔丁基醚、I，4_二氧六環(huán)或乙腈。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(R)-Ct-硫辛酸的制備方法，其特征在于步驟D)中所述的(R)-6，8-二氯辛酸、硫磺、硫化鈉、相轉(zhuǎn)移催化劑和水五者的摩爾比為1.0: 1.2?2.0:1.2?2.0:0.0l?0.1:10.0-35.0;所述的控制環(huán)合反應(yīng)的溫度是將環(huán)合反應(yīng)的溫度控制為75?90°C，所述的控制環(huán)合反應(yīng)的時(shí)間是將環(huán)合反應(yīng)時(shí)間控制為為90-180min。10.根據(jù)權(quán)利要求1或9所述的(R)-a-硫辛酸的制備方法，其特征在于所述的相轉(zhuǎn)移催化劑為芐基三乙基氯化銨、四丁基溴化銨、四丁基氯化銨、四丁基硫酸氫銨、三辛基甲基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨或十四烷基三甲基氯化銨。
【文檔編號(hào)】C07D339/04GK106083811SQ201610411176
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日 公開(kāi)號(hào)201610411176.5, CN 106083811 A, CN 106083811A, CN 201610411176, CN-A-106083811, CN106083811 A, CN106083811A, CN201610411176, CN201610411176.5
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