一種城市垃圾處理方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種城市垃圾處理方法。由于脂肪酶具有很強(qiáng)的分解油脂的能力從而可以為各個(gè)微生物提供營養(yǎng)物質(zhì)。木糖氧化堿菌反硝化亞種、解淀粉芽孢桿菌、漢遜德巴利酵母漢遜變種、菱型伊薩酵母、嗜角蛋白粉落霉和巴氏諾卡菌這幾種菌在組合使用時(shí)能夠充分的合理利用營養(yǎng)物質(zhì)，特別是在酵母中轉(zhuǎn)入了脂肪酶之后，其對于油脂類的降解能力得到大幅度的提高，使得城市垃圾處理的能力和效率得到了大幅度的提高，而且整個(gè)處理周期也得到了縮短，具有極高的應(yīng)用和推廣價(jià)值。
【專利說明】
一種城市垃圾處理方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于城市垃圾處理的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國雖然是發(fā)展中國家，但是近年來城市化水平也逐年提高，2015年，我國城鎮(zhèn)化 率達(dá)到56.1%，城鎮(zhèn)常住人口達(dá)到了7.7億，如此眾多的人口，每天產(chǎn)生的垃圾也是天量。城 市垃圾由于垃圾復(fù)雜，處理困難，焚燒是城市垃圾(包括生活垃圾和醫(yī)療垃圾)處理的一個(gè) 重要手段。
[0003] 垃圾焚燒作為目前主要的垃圾處理技術(shù)之一，已經(jīng)有150年左右的發(fā)展歷史，最開 始是在歐洲發(fā)展起來的，經(jīng)過處理的垃圾焚燒產(chǎn)生的熱量可以用于火力發(fā)電，我國垃圾焚 燒發(fā)電雖起步較晚，但發(fā)展迅速。1988年，深圳建立起我國第一座引進(jìn)日本三菱進(jìn)口設(shè)備和 技術(shù)的垃圾發(fā)電廠一一深圳市政環(huán)衛(wèi)綜合處理廠。2000年，珠海建立起第一座以國產(chǎn)設(shè)備 為主的垃圾發(fā)電廠一一珠海垃圾發(fā)電廠（日處理垃圾3X 200噸，裝機(jī)容量6MW)。隨后浙江寧 波、杭州、上海浦東和浦西、山東荷澤、廣東南海、山西太原、重慶、湖南長沙、天津、廣州等多 個(gè)城市的垃圾發(fā)電廠相繼建成。目前，我國已有垃圾發(fā)電廠140多座。
[0004] 但是由于我國城市垃圾具有成分雜、水分高、熱值低等特點(diǎn)，其含水量一般都在 50 %以上，平均熱值只有低，特別在南方地區(qū)垃圾中含水量更大，這種狀況不利于焚燒。焚 燒爐一般采用爐排進(jìn)行垃圾焚燒，由于爐排的機(jī)械設(shè)計(jì)，無法將焚燒爐封閉，焚燒時(shí)飛灰中 的有害氣體難免排出；而垃圾未封閉焚燒，溫度低，垃圾燃燒不充分，二噁英類有害物質(zhì)無 法得到有效的抑制;第三，機(jī)械傳動的爐排結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜，維護(hù)工作較重。同時(shí)，焚燒過程中 將產(chǎn)生大量的飛灰，如按每噸垃圾產(chǎn)生3%的焚燒飛灰來計(jì)算，每年我國至少會產(chǎn)生14萬噸 以上的焚燒飛灰，并且逐年增長。焚燒時(shí)產(chǎn)生的飛灰雖然垃圾焚燒場采取了收集措施，但由 于產(chǎn)生的飛灰量大，溫度高，除塵設(shè)備如布袋除塵、靜電除塵無法達(dá)到大量收集飛灰中灰塵 的要求，而且更換麻煩，效果不理想，相當(dāng)多的焚燒飛灰排放在大氣中，對垃圾焚燒場周邊 地區(qū)污染相當(dāng)嚴(yán)重，而且由于焚燒飛灰富集對人體有致癌作用的二惡英和呋喃等毒性物 質(zhì)，對焚燒場周邊的人群造成極大的傷害。許多垃圾處理廠由于設(shè)備復(fù)雜，維護(hù)成本高，處 理方法復(fù)雜，運(yùn)行成本很高，無法真正有效地對垃圾進(jìn)行處理。
[0005] 垃圾衛(wèi)生填埋處置方式自問世以來，由于具有技術(shù)可靠、工藝簡單、管理方便以及 投資省、運(yùn)行費(fèi)用低、適用范圍廣、對垃圾成分無嚴(yán)格要求、可作最終處置等一系列優(yōu)點(diǎn)，在 許多國家得到了廣泛的應(yīng)用，在我國垃圾填埋處置約占全部垃圾處理量的70%，而且在今 后相當(dāng)長時(shí)間內(nèi)，衛(wèi)生填埋將是我國生活垃圾處理與處置不可替代的主要手段。但現(xiàn)行傳 統(tǒng)垃圾衛(wèi)生填埋處理處置技術(shù)僅把填埋場作為一個(gè)被動接受垃圾的系統(tǒng)，填埋垃圾的自然 降解速度很慢，垃圾滲濾液處理困難，在封場后相當(dāng)長一段時(shí)間內(nèi)仍需要對填埋場進(jìn)行維 護(hù)和管理，存在占用大量土地，封場后維護(hù)監(jiān)管期長，填埋場再用困難等弊端，不符合可持 續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略等缺點(diǎn)。
[0006] 堆肥法是生活垃圾生物處理的一種重要方法，它可以使垃圾中的有機(jī)物質(zhì)在微生 物作用下逐漸分解形成穩(wěn)定的腐殖質(zhì)類物質(zhì)。傳統(tǒng)厭氧堆肥法，發(fā)酵周期長達(dá)4-6個(gè)月，占 地面積大，有機(jī)物分解慢，產(chǎn)生惡臭，蚊蠅孳生，污水四溢，形成二次污染。80年代后，人們開 始研究向堆肥中接種一些微生物，加快垃圾中難降解有機(jī)物的降解，縮短垃圾堆體從中溫 升至高溫的時(shí)間，迅速殺滅蚊蠅蟲卵及有害病原菌，縮短發(fā)酵周期。但目前的專利技術(shù)多采 用一些人工馴化的微生物菌種，這些菌種接種到垃圾后，由于其在野生條件下生存能力較 差，在生長速度上很難與垃圾中的土著微生物競爭，容易受土著微生物的抑制，難以保證接 種微生物發(fā)揮效應(yīng)。
[0007] CN 1724480 A中公開了高效微生物復(fù)合菌劑處理城市生活垃圾的技術(shù)，它采用接 種微生物復(fù)合菌劑在好氧動態(tài)發(fā)酵條件下處理生活垃圾，既依次將生活垃圾分揀、粉碎、接 種高效微生物復(fù)合菌劑、在動態(tài)好氧條件下發(fā)酵。主發(fā)酵周期為7~8天，發(fā)酵周期仍然偏 長。
[0008] CN 103525804 A-種用于垃圾降解的生物處理劑，所述生物處理劑通過蠟狀芽孢 桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌、類產(chǎn)堿假單胞菌和釀酒酵母與載體的共同作用，能 高效降解生活垃圾，尤其是餐廚垃圾，降解率達(dá)到85%，但是該菌劑特異性的適用于廚房垃 圾，并不適合大規(guī)模的城市垃圾的處理。
[0009] 因此，開發(fā)一種制備簡單，適宜于大規(guī)模的城市垃圾處理的微生物菌劑從而用于 城市生活垃圾的處理變得迫在眉睫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明一個(gè)技術(shù)方案為提供一種混合菌劑，所述的混合菌劑為木糖氧化堿菌反硝 化亞種CGMCC 1.768、解淀粉芽孢桿菌CGMCC 1.1177、漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831、 菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏諾卡菌CGMCC 4.1128,各菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體積比為10~15:5~10:10~20:1~30:5~15:10~ 20 〇
[0011] 本發(fā)明另外一個(gè)技術(shù)方案為提供一種混合菌劑，所述的混合菌劑為木糖氧化堿菌 反硝化亞種CGMCC 1.768、解淀粉芽孢桿菌CGMCC 1.1177、漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831、 菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏諾卡菌CGMCC 4.1128，各菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體積比為10:5:10:1:5:10。所述的菌液混合體積比也 可以為：12:5:12:20:7:6。其中菌液的濃度為2*108個(gè)個(gè)/ml。
[0012] 本發(fā)明另外提供一種能夠表達(dá)脂肪酶的表達(dá)載體。所述載體為真核表達(dá)載體。 [0013]更加優(yōu)選的所述的載體為pScIKP載體。
[0014]所述的脂肪酶，為從假單胞菌中分離獲得的，其序列如SEQ ID N0:1所示，命名為 Pslip〇
[0015] 本發(fā)明另外提供一種脂肪酶的變體，所述的脂肪酶在SEQ ID N0:4所示氨基酸序 列有一處突變，所述突變?yōu)?83A，101G，112E，124L，143T，165A，249N，261L，268L，291H，322M， 343厶，3856,4016,4231(，5051'，5220,5296,5421，561厶，5696,5700,583厶或591￥任--處突 變。
[0016] 具體的，所述的突變位點(diǎn)的取代形式分別為在SEQ ID N0:4序列有一個(gè)A83T， G101Q，E112S，L124V，T143G，A165S，N249S，L261K，L268Q，H291S，M322T，A343M，G385Q， G401S，K423v，T505S，Q522P，G529N，I542E，A561Q，G569S，Q570P，A583S或V591L的突變。所述 A83T為第83位點(diǎn)的A替換T。
[0017]本發(fā)明另外提供一種真核表達(dá)載體，所述載體為在pScIKP載體的基礎(chǔ)上融合了如 SEQ ID N0:1所示脂肪酶基因，命名為pScIKP-Pslip。
[0018] 所述的脂肪酶變體也分別構(gòu)建為表達(dá) G101Q，pScIKP-Pslip-E112S，pScIKP-Pslip-L124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A165S，pScIKP-Pslip-N249S，pScIKP-Pslip-L261K，pScIKP-Pslip-L268Q，pScIKP-Pslip-H291S，pScIKP-Pslip-M322T，pScIKP-Pslip-A343M，pScIKP-Pslip-G385Q，pScIKP-Pslip-G401S，pScIKP-Pslip-K423v，pScIKP-Pslip-T505S，pScIKP-Pslip-Q522P，pScIKP-Pslip-G529N，pScIKP-Pslip-I542E，pScIKP-Pslip-A561Q，pScIKP-Pslip-G569S，pScIKP-Pslip-Q570P，pScIKP-Pslip-A583S或pScIKP-Pslip-V591L。
[0019] 本發(fā)明另外提供一種優(yōu)化的混合菌劑，所述的混合菌劑為木糖氧化堿菌反硝化亞 種〇6110：1.768、解淀粉芽孢桿菌0610：1.1177、漢遜德巴利酵母漢遜變種0610：2.1831、 菱型伊薩酵母〇^〇 ： 2.1592、嗜角蛋白粉落霉061〇：3.3544、巴氏諾卡菌061〇：4.1128，各 菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體積比為10~15:5~10:10~20:1~30:5~15:10~20;其中漢 遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831和菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592中分別導(dǎo)入了pScIKP-Pslip Pslip-L124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A165S，pScIKP-Pslip-N249S，pScIKP-Pslip-L261K，pScIKP-Pslip-L268Q，pScIKP-Pslip-H291S，pScIKP-Pslip-M322T，pScIKP-Pslip-A343M，pScIKP-Pslip-G385Q，pScIKP-Pslip-G401S，pScIKP-Pslip-K423v，pScIKP-Pslip-T505S，pScIKP-Pslip-Q522P，pScIKP-Pslip-G529N，pScIKP-Pslip-I542E，pScIKP-Pslip-A561Q，pScIKP-Pslip-G569S，pScIKP-Pslip-Q570P，pScIKP-Pslip-A583SSpScIKP-Pslip-V591L 載體。
[0020] 本發(fā)明另外提供一種垃圾處理方法，首先原生垃圾先經(jīng)過粗分選工序，分選出竹 木類、廢電池、塑料、玻璃、打火機(jī)、金屬、織物等進(jìn)行回收，將磚瓦石塊等無機(jī)材料用于新型 建材的制造;將剩余的有機(jī)物質(zhì)混合物破碎攪拌混勻，在混合過程中加入混合菌種，將混合 菌種按照體積比1:50用水稀釋，將稀釋好的混合菌種按照垃圾重量的0.5% (V/W)加入，通 風(fēng)供氧發(fā)酵5天，溫度控制在45° C，將生物處理所產(chǎn)生的滲濾水經(jīng)發(fā)酵罐底管道進(jìn)入污水處 理系統(tǒng)，產(chǎn)生的廢氣經(jīng)過發(fā)酵罐上部的管道進(jìn)入廢氣處理系統(tǒng);將發(fā)酵后的產(chǎn)物作為有機(jī) 肥進(jìn)行后續(xù)的利用。所述的混合菌種為各個(gè)菌種經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，按如下體積比混合:木糖氧 化堿菌反硝化亞種CGMCC 1.768、解淀粉芽孢桿菌CGMCC 1.1177、漢遜德巴利酵母漢遜變種 CGMCC 2.1831、菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏諾卡菌 CGMCC 4.1128,各菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體積比為10~15:5~10:10~20:1~30:5~15 :10~20〇
[0021] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0022] 城市垃圾含有很多物質(zhì)，特別是城市的餐廚廢棄物富含油脂和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物 質(zhì)，如果不經(jīng)過降解，無法被釀酒酵母當(dāng)做碳源和氮源所利用，脂肪酶具有很強(qiáng)的分解油脂 的能力從而可以為各個(gè)微生物提供營養(yǎng)物質(zhì)。木糖氧化堿菌反硝化亞種、解淀粉芽孢桿菌、 漢遜德巴利酵母漢遜變種、菱型伊薩酵母、嗜角蛋白粉落霉和巴氏諾卡菌這幾種菌在組合 使用時(shí)能夠充分的合理利用營養(yǎng)物質(zhì)，特別是在酵母中轉(zhuǎn)入了脂肪酶之后，其對于油脂類 的降解能力得到大幅度的提高，使得城市垃圾處理的能力和效率得到了大幅度的提高，而 且整個(gè)處理周期也得到了縮短，具有極高的應(yīng)用和推廣價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0023]實(shí)施例1脂肪酶基因的克隆
[0024]以假單胞菌DNA為模板，采用引物1加入EcoR頂每切位點(diǎn)：
[0025] GGATCCatgggtgtgtatgactacaaga，與引物2加入 Spel 酶切位點(diǎn)：
[0026] ACTAGTtcaggcgatcacgattccatcagc;進(jìn)行了 PCR 擴(kuò)增。其中基因的PCR 反應(yīng)條件為： 94。〇511^11，941€458,54.61€408,72。(：1038，循環(huán)30次，70。(：1011^11，4。(：永恒。
[0027]通過膠回收系統(tǒng)回收條帶1854bp左右，通過測序，其序列如SEQ ID N0:1所示。在 NCBI中通過blast比對，發(fā)現(xiàn)其就是脂肪酶的一種。
[0028]按照變本領(lǐng)域常規(guī)基因突變方式，將所述的基因分別在A 83T，G 101Q，E112S，L 124V，T 143G，A 165S，N 249S，L 261K，L 268Q，H 291S，M 322T，A 343M，G 385Q，G 401S，K 423v，T 505S，Q 522P，G 529N，I 542E，A 561Q，G 569S，Q 570P，A583S或V 591L進(jìn)行點(diǎn)突 變，具體的實(shí)施方式采用重疊 PCR的方式獲得了突變后的目的基因。
[0029]實(shí)施例2轉(zhuǎn)基因酵母細(xì)胞的制備
[0030]將實(shí)施例1得到的編碼序列以及相應(yīng)的突變序列以及pScIKP載體分別用限制性內(nèi) 切酶EcoRI和Spel雙酶切，純化雙酶切后的產(chǎn)物，將兩者用T4DNA連接酶連接過夜，平板轉(zhuǎn) 化，鑒定重組子，通過PCR鑒定獲得了57個(gè)陽性的重組子。其中，通過質(zhì)粒提取，并鑒定，成功 獲得了重組質(zhì)粒pScIKP-Pslip。同時(shí)類似的也分別獲得了重組質(zhì)粒pScIKP-Pslip-A 83T， pScIKP-Pslip-G 101Q，pScIKP-Pslip-E 112S，pScIKP-Pslip-L 124V，pScIKP-Pslip-T 143G，pScIKP-Pslip-A165S，pScIKP-Pslip-N249S，pScIKP-Pslip-L261K，pScIKP-Pslip-L 268Q，pScIKP-Pslip-H 291S，pScIKP-Pslip-M 322T，pScIKP-Pslip-A 343M， pScIKP-Pslip-G 385Q，pScIKP-Pslip-G 401S，pScIKP-Pslip-K 423v，pScIKP-Pslip-T 505S，pScIKP-Pslip-Q522P，pScIKP-Pslip-G529N，pScIKP-Pslip-I542E，pScIKP-Pslip-A 561Q，pScIKP-Pslip-G 569S，pScIKP-Pslip-Q 570P，pScIKP-Pslip-A583S和 pScIKP-Pslip-V 591L〇
[0031]在釀酒酵母進(jìn)行電轉(zhuǎn)化之前，對漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831、菱型伊 薩酵母CGMCC 2.1592進(jìn)行抗性篩選標(biāo)記G418的敏感性測定，發(fā)現(xiàn)CGMCC2.1831和CGMCC 2.1592在濃度為175μg/ml的YH平板上酵母已經(jīng)被抑制而不能生長，因而在篩選轉(zhuǎn)化子的時(shí) 候可以用超過175μg/ml的G418的濃度來篩選。
[0032] 將上述得到的基因表達(dá)重組質(zhì)粒pScIKP-Pslip用限制性內(nèi)切酶Apal線性化后，用 電穿孔轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入所述的二個(gè)酵母中，在G418的濃度為175μg/ml的YPD瓊脂平板上培養(yǎng)4d 后，挑取能夠正常生長的菌落即為轉(zhuǎn)有上述重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子。以基因特異性的引物1和引 物2進(jìn)行菌落PCR，均能成功擴(kuò)增出大小為1854bp左右的的基因片段，驗(yàn)證了基因確實(shí)已經(jīng) 轉(zhuǎn)入并整合入二個(gè)酵母基因組中。
[0033]使用上述相似的方法 d_pScIKP-Pslip-A83T，pScIKP-Pslip-G101Q，pScIKP-Pslip-E112S，pScIKP-Pslip-L124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A 165S，pScIKP- Pslip-N 249S，pScIKP-Pslip-L 261K，pScIKP-Pslip-L 268Q，pScIKP-Pslip-H 291S， pScIKP-Pslip-M322T，pScIKP-Pslip-A343M，pScIKP-Pslip-G385Q，pScIKP-Pslip-G 401S， pScIKP-Pslip-K423v，pScIKP-Pslip-T505S，pScIKP-Pslip-Q522P，pScIKP-Pslip-G529N,pScIKP-Pslip-I 542E,pScIKP-Pslip-A561Q,pScIKP-Pslip-G569S,pScIKP-Pslip-Q570P，pScIKP-Pslip-A583S和pScIKP-Pslip-V591L載體也都分別導(dǎo)入漢遜德巴利酵母漢 遜變種06110：2.1831和菱型伊薩酵母0610： 2.1592中，并通過?0?驗(yàn)證了導(dǎo)入成功。
[0034]實(shí)施例3菌劑的制備
[0035] 將木糖氧化堿菌反硝化亞種CGMCC 1.768、解淀粉芽孢桿菌CGMCC 1.1177、漢遜德 巴利酵母漢遜變種CGMCC 2. 1831、菱型伊薩酵母CGMCC 2. 1592、嗜角蛋白粉落霉 CGMCC3.3544、巴氏諾卡菌CGMCC 4.1128，各菌按照最適培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體 積比為10:5:10:1:5:10制備得到相應(yīng)的菌劑。其中各菌混合前的濃度為2*108個(gè)/ml。
[0036] 導(dǎo)入了脂肪酶基因或其變體漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831和菱型伊薩 酵母CGMCC 2.1592分別替換上述原始的沒有導(dǎo)入脂肪酶基因的漢遜德巴利酵母漢遜變種 CGMCC 2.1831、菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592對應(yīng)的制備成為相應(yīng)的菌劑。菌劑命名為： Pslip 菌劑，A83T 菌劑，G101Q 菌劑，E112S 菌劑，L124V 菌劑，T143G 菌劑，A165S 菌劑，N249S 菌 劑，L261K菌劑，L268Q菌劑，H291S菌劑，M322T菌劑，A343M菌劑，G385Q菌劑，G401S菌劑， K423v 菌劑，T505S 菌劑，Q522P 菌劑，G529N 菌劑，I542E 菌劑，A561Q 菌劑，G569S 菌劑，Q570P 菌 劑，A583S菌劑或V 591L菌劑。
[0037]實(shí)施例4菌劑垃圾處理效果驗(yàn)證
[0038]將來自某垃圾處理廠的垃圾經(jīng)過粗分，去掉一些固體和不能分解的部分，分選出 竹木類、廢電池、塑料、玻璃、打火機(jī)、金屬、織物等進(jìn)行回收，將磚瓦石塊等無機(jī)材料用于新 型建材的制造。將剩余的有機(jī)質(zhì)混合物破碎攪拌混勻，在混合過程中加入混合菌種，將混合 菌種按照體積比1:50用水稀釋，將稀釋好的混合菌種按照垃圾重量的0.5% (V/W)加入，通 風(fēng)供氧發(fā)酵5天，溫度控制在45° C，將生物處理所產(chǎn)生的滲濾水經(jīng)發(fā)酵罐底管道進(jìn)入污水處 理系統(tǒng)，產(chǎn)生的廢氣經(jīng)過發(fā)酵罐上部的管道進(jìn)入廢氣處理系統(tǒng);將發(fā)酵后的產(chǎn)物作為有機(jī) 肥進(jìn)行后續(xù)的利用。所述的混合菌種為各個(gè)菌種經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，按如下體積比混合:木糖氧 化堿菌反硝化亞種CGMCC 1.768、解淀粉芽孢桿菌CGMCC 1.1177、漢遜德巴利酵母漢遜變種 CGMCC 2.1831、菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏諾卡菌 CGMCC 4.1128，各菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體積比為10:10:20:30:15:20，各菌液在混合 前的細(xì)胞濃度為2*108個(gè)/ml?；旌虾蟮木鷦舛葹橐不鞠嗤Ｍㄟ^處理后，垃圾的重量減 重率(垃圾減重率-(分選后的垃圾重量-發(fā)酵好的垃圾重量)/分選后的垃圾重量XI00 % )為 40.21%〇
[0039] 同時(shí)檢測處理后的垃圾樣品中的脂肪含量以及蛋白質(zhì)含量。脂肪含量測定方法： 參照GB/T5009.6-2003方法中索氏抽提法，利用SZC-C脂肪測定儀乙醚作為提取劑，測定處 理后的垃圾中脂肪含量。粗蛋白含量測定方法:參照GB/T6432-94方法用KDY-9820型凱氏定 氮儀，測定處理后垃圾中粗蛋白含量。通過測定，二者的含量分別為6.32%，2.1%。處理后 的垃圾在味覺上仍然呈現(xiàn)酸敗氣味。
[0040] 將漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831、菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592分別導(dǎo)入 了脂肪酶基因后的轉(zhuǎn)基因的漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831、菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592制備得到的菌劑按照上述相似的方法，也分別測定相應(yīng)的數(shù)據(jù)，結(jié)果如下：
[0041]
[0042]
[0043]
[0044]實(shí)施例5有機(jī)肥效果驗(yàn)證
[0045]將實(shí)施例4發(fā)酵之后得到的發(fā)酵產(chǎn)物，經(jīng)過干燥粉碎后，以每m2玉米苗田施加10kg 發(fā)酵后的有機(jī)肥的比例，分別施加本發(fā)明制備得到的有機(jī)肥，施加之后，不施加其它肥料， 行距株距相同，從發(fā)芽開始，培養(yǎng)l〇〇d，測定lm2內(nèi)植株的生物量，具體數(shù)據(jù)如下：
[0046]
[0047]
[0048] 從以上結(jié)果可以看出，本發(fā)明制備的到的有機(jī)肥，其油脂類物質(zhì)能夠更好的被消 化為小分子的物質(zhì)從而被植物利用，提高了植物的利用效率。
[0049] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范 圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種城市生活垃圾的處理方法，包括施加一種混合菌劑。2. 如權(quán)利要求1所述的處理方法，其特征在于:所述的混合菌劑為木糖氧化堿菌反硝化 亞種061(：(：1.768、解淀粉芽孢桿菌061(：(：1.1177、漢遜德巴利酵母漢遜變種061(^ 2.1831、 菱型伊薩酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏諾卡菌CGMCC 4 · 1128，各菌擴(kuò)大培養(yǎng)后，菌液混合的體積比為10~15:5~10:10~20:1~30:5~15:10~20。3. 如權(quán)利要求2所述的處理方法，其特征在于：其中漢遜德巴利酵母漢遜變種CGMCC 2.1831、 菱型伊薩酵母061〇： 2.1592中分別導(dǎo)入了口5(31砑-?81丨口質(zhì)粒，其中口5(31砑-?811口 為pScIKP載體上加入了Pslip基因，所述基因的序列如SEQ ID N〇:l所示，編碼的氨基酸序 列如SEQ ID No:4所示。4. 如權(quán)利要求3所述的處理方法，其特征在于:其中Pslip基因編碼的氨基酸序列存在 一個(gè)突變，所述的突變位點(diǎn)為在SEQ ID N〇:4所示序列基礎(chǔ)上分別進(jìn)行如下突變:A83T， G101Q，E112S，L124V，T143G，A165S，N249S，L261K，L268Q，H291S，M322T，A343M，G385Q， G401S，K423v，T505S，Q522P，G529N，I542E，A561Q，G569S，Q570P，A583SSV591L。5. -種處理城市生活垃圾的處理方法，首先原生垃圾先經(jīng)過粗分選工序，分選出竹木 類、廢電池、塑料、玻璃、打火機(jī)、金屬、織物等進(jìn)行回收，將磚瓦石塊等無機(jī)材料用于新型建 材的制造;將剩余的有機(jī)物質(zhì)混合物破碎攪拌混勻，在混合過程中加入混合菌種，將混合菌 種按照體積比1 : 50用水稀釋，將稀釋好的混合菌種按照垃圾重量的0.5% (V/W)加入，通 風(fēng)供氧發(fā)酵5天，溫度控制在45 °C，將生物處理所產(chǎn)生的滲濾水經(jīng)發(fā)酵罐底管道進(jìn)入污水處 理系統(tǒng)，產(chǎn)生的廢氣經(jīng)過發(fā)酵罐上部的管道進(jìn)入廢氣處理系統(tǒng)，產(chǎn)生的有機(jī)物質(zhì)作為有機(jī) 肥被利用;其中混合菌種為權(quán)利要求3-4中任一所述的菌劑。6. -種蛋白變體，其特征在于:所述蛋白變體是在SEQ ID No :4所不序列基礎(chǔ)上進(jìn)行 如下任一點(diǎn)突變：A83T，G101Q，E112S，L124V，T143G，A165S，N249S，L261K，L268Q，H291S， M322T，A343M，G385Q，G401S，K423 V，T505S，Q522P，G529N，I542E，A561Q，G569S，Q570P， A583S或V591L。
【文檔編號】C12N1/14GK106085929SQ201610744552
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月28日
【發(fā)明人】竇欣童
【申請人】竇欣童