一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑及其制備方法。該復合微生物制劑的原料由津島鏈霉菌發(fā)酵液，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液組成；本發(fā)明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內(nèi)的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，以及通過次級代謝產(chǎn)物誘導水稻產(chǎn)生抗病性，能產(chǎn)生多種抗菌素如紅網(wǎng)鏈霉菌素，無活菌素和纈氨霉素，能對水稻稻瘟病病原菌產(chǎn)生超強抑制效果；本發(fā)明中所使用的這4株菌株都是可從土壤中直接分離得到，都具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內(nèi)部或土壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長起到肥料的效果。
【專利說明】
一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物防治與微生物菌劑應用技術領域，具體涉及一種防治水稻稻 瘟病的復合微生物制劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 水稻稻瘟病又稱稻熱病、叩頭瘟等，是一種世界性真菌病害，對全球水稻生產(chǎn)造成 極大危害，被列為水稻三大病害之首，是水稻苗期和抽穗期最重要的病害，在我國所有稻區(qū) 均有發(fā)生，在病害流行年份一般造成減產(chǎn)10% - 20%，病害重的年份減產(chǎn)40%-50%，甚至顆粒 無收。20世紀90年代以來，我國稻瘟病的年發(fā)生面積均在380萬hm2以上，年損失稻谷達數(shù)億 公斤。在生產(chǎn)上我國目前主要是應用化學農(nóng)藥來防治稻瘟病，一般在苗期時采用化學殺菌 劑浸種防治苗瘟，移栽本田后使用葉面噴霧防治葉瘟與穗頸瘟?，F(xiàn)階段生產(chǎn)上主要應用春 雷霉素、三環(huán)哩或以三環(huán)哩與硫磺、三環(huán)哩與異稻瘟凈復配的復配殺菌劑在苗期和抽穗期 噴霧防治稻瘟病。但稻瘟病的發(fā)生受品種、氣候影響較大，對稻瘟病的發(fā)生程度、發(fā)生期的 預測預報精度不高，應用化學農(nóng)藥防治稻瘟病，因藥劑本身沒有內(nèi)吸性，很難在防治適期用 藥，且由于病菌對常用藥劑抗藥性的逐漸增強，使得防效不斷下降。另外化學藥劑的成倍使 用，農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)已遭到嚴重破壞，收獲后加工成的大米農(nóng)藥殘留嚴重，已給人們健康帶來 不可忽視的嚴重危脅。
[0003] 化學農(nóng)藥對農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)的嚴重破壞，病原菌對藥劑的抗性越來越明顯。同時，化 學農(nóng)藥不易降解，高殘留，對人畜極不安全都嚴重限制了在將來的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的使用。因 此，非化學性防治措施目前已成為防治水稻病害的核心方式，而生物防治則為其中最有前 途。郭堅華等在專利號2011100743369中公開了一種防治水稻紋枯病和稻瘟病的生防菌株 JH21及其生防菌劑；徐正君等在專利號2010100281327中公開了一種防治水稻稻瘟病和紋 枯病的芽孢桿菌菌株；由于病原菌的多樣性和同步進化特性，現(xiàn)有的單一拮抗菌株由于其 作用方式單一、防治效果不穩(wěn)定、生產(chǎn)和使用也無法達到很理想的防治效果，因此，生防菌 的很多生物功能需要依靠兩株或兩株以上的細菌間的協(xié)同作用，才能發(fā)揮出更好的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑。該復合微生 物制劑的原料配比為:津島鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，阿氏芽孢 桿菌發(fā)酵液20-40份，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份。在所述微生物制劑中的津島鏈霉菌， 紫丁香鏈霉菌，阿氏芽孢桿菌，美麗短芽孢桿菌等4種菌是從400多株微生物菌株中篩選得 到的能共生共存，能產(chǎn)生多種抗菌素如紅網(wǎng)鏈霉菌素，無活菌素和纈氨霉素，能對水稻稻瘟 病病原菌一梨孢霉產(chǎn)生超強抑制效果，從而達到防治水稻稻瘟病的作用；另一方面，本發(fā)明 的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內(nèi)的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，或者通過次級 代謝產(chǎn)物誘導水稻產(chǎn)生抗病性，增強其防病效果;再次，本發(fā)明中所使用的這4株菌株都是 可從土壤中直接分離得到，都具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內(nèi)部或土壤中繁殖生 長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸收、刺激植株 生長起到肥料的效果； 本發(fā)明的第二目的在于提供一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑的制備方法，該方 法步驟簡單，確保微生物制劑的藥肥效果突出。
[0005] 為了達到上述目的，該防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑的制備方法，包括以下 步驟： 步驟一:津島鏈霉菌發(fā)酵液的制備 取出津島鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30Γ培養(yǎng)7天。 在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱 中30°C培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗 脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為津島鏈霉菌種子液； 發(fā)酵:將上述制備的津島鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的津島鏈 霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-32 °C，開攪拌200r/min，前24小時，通氣量為每 分鐘為200L空氣，24-36小時，通氣量為400L，36小時后，通氣量為600L，培養(yǎng)40-48小時，待 菌體含量達到60g/L，即可停罐，即得到津島鏈霉菌發(fā)酵液； 其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基:硝酸鉀：1克，可溶性淀粉:20克，磷酸氫二鉀:0.5 克，硫酸鎂:. 5克，氯化鈉:0.5克，硫酸亞鐵:0.01克，瓊脂:20克，蒸餾水補足1000ml，PH7. 2 ~7.4; 其中，所述的津島鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基:花生柏粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷 酸氫二鉀〇. 04%，硫酸鎂0.05%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。
[0006] 步驟二:紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液的制備 取出紫丁香鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30°c培養(yǎng)7 天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng) 箱中30°C培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水 洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為紫丁香鏈霉菌種子液； 發(fā)酵:將上述制備的紫丁香鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的紫丁 香鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-30°C，開攪拌200r/min，前18小時，通氣量 為每分鐘為300L空氣，18-32小時，通氣量為500L，32小時后，通氣量為700L，培養(yǎng)40-48小 時，待菌體含量達到80g/L，即可停罐，即得到紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液； 其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基:硝酸鉀：1克，可溶性淀粉:20克，磷酸氫二鉀:0.5 克，硫酸鎂:. 5克，氯化鈉:0.5克，硫酸亞鐵:0.01克，瓊脂:20克，蒸餾水補足1000ml，PH7. 2 ~7.4; 其中，所述的紫丁香鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基:芝麻柏粉3%，棉柏1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘 蔗糖蜜3%，硫酸錳0.002%，磷酸氫二鉀0.01%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10_ 0 · 15MPa，121°C 滅菌 30 分鐘。
[0007] 步驟三，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液的制備 取出阿氏芽孢桿菌保藏管，用LB固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng)48小時。在 平板下挑取單個菌落接種至裝有LB固體培養(yǎng)基，在30 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無 菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L阿氏芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐 中，開攪拌120r/min，前12小時通氣量為200L/min，12小時后通氣量為320L/min，30°C培養(yǎng) 26-36小時，待總芽孢含量不低于60億cfu/ml，即可作為阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液； 其中，所述LB固體培養(yǎng)基:酵母提取物5.0 g，蛋白胨10.0，NaC110.0 g，瓊脂20 g，水 1000mL，pH7.2; 其中，所述阿氏芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖5g/L，玉米淀粉25 g/L，豆柏粉30 g/L， 魚粉5 g/L，硫酸鎂0.4 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.5 g/L，碳酸鈣5 g/L，pH7.0。各 培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。
[0008] 步驟四，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液的制備 取出美麗短芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng) 48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基，在30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L美麗短芽孢桿菌發(fā)酵 培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為200L/min，8小時后通氣量為 300L/min，30°C培養(yǎng)24-36小時，待總芽孢含量不低于80億cfu/ml，即可作為美麗短芽孢桿 菌發(fā)酵液； 其中，所述營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基:蛋白胨10.0 g/L，牛肉膏3.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L， 瓊脂20 g/L，pH 7.2 ± 0.2; 其中，所述美麗短芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖8g/L，木薯粉20 g/L，菜柏粉30 g/L， 玉米漿干粉10 g/L，硫酸鎂0.4 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.2 g/L，碳酸鈣5 g/L， pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。
[0009] 步驟五，混合發(fā)酵液 將前四個步驟制備的菌液按津島鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液20-40 份，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份，混勻，即得到防治水稻 稻瘟病的復合微生物制劑。
[0010] 其中，該復合微生物制劑在防治水稻稻瘟病的方法為葉面噴施每次2-5L該復合微 生物制劑/畝，其稀釋的倍數(shù)為100-200倍，連續(xù)使用2-3次，每7-10天使用一次。
[0011] 本發(fā)明具有的優(yōu)點和有益效果:?:、本發(fā)明中包含的津島鏈霉菌，紫丁香鏈霉菌， 阿氏芽孢桿菌，美麗短芽孢桿菌等4種菌是從400多株微生物菌株中篩選得到的能共生共 存，能在植株的根，莖，葉以及土壤中能夠生長繁殖，能產(chǎn)生多種抗菌素如紅網(wǎng)鏈霉菌素，無 活菌素和纈氨霉素；它們對抑制水稻稻瘟病病原菌一梨孢霉有特別強大的效果，從而達到 超強防治水稻稻瘟病的效果，其對水稻稻瘟病的藥效高，平均防效在90. 0%以上，且針對性 強;?、本發(fā)明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內(nèi)的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用， 或者通過次級代謝產(chǎn)物誘導水稻產(chǎn)生抗病性，增強其防病效果;纖、本發(fā)明中所使用的這4 株菌株都是可從土壤中直接分離得到，都具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內(nèi)部或土 壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對養(yǎng)分的吸 收、刺激植株生長起到肥料的效果；（4)、本發(fā)明復合微生物制劑對人、畜安全，屬于環(huán)境友 好型，利用本發(fā)明方法防治水稻稻瘟病不易產(chǎn)生抗藥性，本發(fā)明制備方法穩(wěn)定、菌種多，相 對于單一拮抗菌，產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)廣泛，效果顯著，成本低、使用簡單。
【具體實施方式】
[0012] 實施例1 一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑，該微生物制劑的原料配比為:津島鏈霉菌發(fā) 酵液30份，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液40份，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液30份，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液30 份。
[0013] 為了達到上述目的，該防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑的制備方法，包括以下 步驟： 步驟一:津島鏈霉菌發(fā)酵液的制備 取出津島鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30Γ培養(yǎng)7天。 在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱 中30°C培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗 脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為津島鏈霉菌種子液； 發(fā)酵:將上述制備的津島鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的津島鏈 霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-32 °C，開攪拌200r/min，前24小時，通氣量為每 分鐘為200L空氣，24-36小時，通氣量為400L，36小時后，通氣量為600L，培養(yǎng)44小時，檢測其 菌體含量為65g/L，停罐，即得到津島鏈霉菌發(fā)酵液； 其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基:硝酸鉀：1克，可溶性淀粉:20克，磷酸氫二鉀:0.5 克，硫酸鎂:. 5克，氯化鈉:0.5克，硫酸亞鐵:0.01克，瓊脂:20克，蒸餾水補足1000ml，PH7. 2 ~7.4; 其中，所述的津島鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基:花生柏粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷 酸氫二鉀〇. 04%，硫酸鎂0.05%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。
[0014] 步驟二:紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液的制備 取出紫丁香鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng)7 天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng) 箱中30°C培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水 洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為紫丁香鏈霉菌種子液； 發(fā)酵:將上述制備的紫丁香鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的紫丁 香鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-30°C，開攪拌200r/min，前18小時，通氣量 為每分鐘為300L空氣，18-32小時，通氣量為500L，32小時后，通氣量為700L，培養(yǎng)42小時，檢 測其菌體含量為85g/L，停罐，即得到紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液； 其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基:硝酸鉀：1克，可溶性淀粉:20克，磷酸氫二鉀:0.5 克，硫酸鎂:. 5克，氯化鈉:0.5克，硫酸亞鐵:0.01克，瓊脂:20克，蒸餾水補足1000ml，PH7. 2 ~7.4; 其中，所述的紫丁香鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基:芝麻柏粉3%，棉柏1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘 蔗糖蜜3%，硫酸錳0.002%，磷酸氫二鉀0.01%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10_ 0 · 15MPa，121°C 滅菌 30 分鐘。
[0015]步驟三，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液的制備 取出阿氏芽孢桿菌保藏管，用LB固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng)48小時。在 平板下挑取單個菌落接種至裝有LB固體培養(yǎng)基，在30 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無 菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L阿氏芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐 中，開攪拌120r/min，前12小時通氣量為200L/min，12小時后通氣量為320L/min，30°C培養(yǎng) 29小時，檢測其總芽孢含量為64億cfu/ml，即可作為阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液； 其中，所述LB固體培養(yǎng)基:酵母提取物5.0 g，蛋白胨10.0，NaC110.0 g，瓊脂20 g，水 1000mL，pH7.2; 其中，所述阿氏芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖5g/L，玉米淀粉25 g/L，豆柏粉30 g/L， 魚粉5 g/L，硫酸鎂0.4 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.5 g/L，碳酸鈣5 g/L，pH7.0。各 培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。
[0016] 步驟四，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液的制備 取出美麗短芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng) 48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基，在30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L美麗短芽孢桿菌發(fā)酵 培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為200L/min，8小時后通氣量為 300L/min，30°C培養(yǎng)32小時，檢測其總芽孢含量為86億cfu/ml，即可作為美麗短芽孢桿菌 發(fā)酵液； 其中，所述營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基:蛋白胨10.0 g/L，牛肉膏3.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L， 瓊脂20 g/L，pH 7.2 ± 0.2; 其中，所述美麗短芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖8g/L，木薯粉20 g/L，菜柏粉30 g/L， 玉米漿干粉10 g/L，硫酸鎂0.4 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.2 g/L，碳酸鈣5 g/L， pH7.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。
[0017] 步驟五，混合發(fā)酵液 將前四個步驟制備的菌液按津島鏈霉菌發(fā)酵液30份，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液40份，阿氏 芽孢桿菌發(fā)酵液30份，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液30份，混勻，即得到防治水稻稻瘟病的復合微 生物制劑。
[0018] 實施例2平板抑菌試驗 按照《植病研究法》中平板對峙培養(yǎng)試驗方法，對實施例1制備的復合微生物制劑對稻 瘟病菌的抑制效果進行評價，待清水對照處理組病菌菌絲長滿平板時統(tǒng)計結果如下，該復 合微生物制劑對稻瘟病菌生長抑制率為95. 44%。
[0019] 實施例3復合微生物制劑在水稻稻瘟病溫室試驗 每小區(qū)為6.7m2，三個重復;水稻植株長至分蘗期時接種病原菌； 接種稻瘟病菌抱子后，至對照組開始發(fā)病時第一次噴施復合微生物制劑30ml，將其稀 釋100倍噴施，此后每隔7-10天噴施一次菌劑，連續(xù)三次。至水稻收獲，調(diào)查防效和產(chǎn)量；以 20%三環(huán)唑WP(江蘇豐登農(nóng)化有限公司）為對照藥劑?？瞻讓φ战M為每次噴清水。
[0020] 試驗結果：如表1所述，復合微生物制劑在溫室試驗中對水稻稻瘟病防效達90. 74%，遠遠高于三環(huán)唑處理組。同時，使用本復合微生物制劑的能夠明顯促進水稻植株的生 長，生物量增長率為87. 95%。
[0021 ]表1復合微生物制劑在水稻稻瘟病溫室試驗結果

實施例4復合微生物制劑在水稻大田中的應用效果 1、 試驗選擇在水稻高產(chǎn)區(qū)中稻中進行； 2、 試驗地址選擇在湖南省隆回縣灘頭鎮(zhèn)一農(nóng)戶責任田中；在同一塊有明顯的稻瘟病的 田， 3、 藥劑用法與用量： 試驗組：出現(xiàn)稻瘟病后，葉面噴施每次3L該復合微生物制劑/畝，其稀釋的倍數(shù)為100-200倍，連續(xù)使用3次，每7天使用一次； 對照組：出現(xiàn)稻瘟病后，以20%三環(huán)唑WP(江蘇豐登農(nóng)化有限公司）為對照藥劑進行噴 施，每組使用面積為2畝。施肥水平為純氮20 kg/667m2，P205 10kg/667m2，K20 20 kg/ 667m2，基:蘗:穗=5:2:3。噴施器械選用農(nóng)民通用手動背負式噴霧器，病蟲害防治及田間管 理略高于大田生產(chǎn)。其它管理措施相同。
[0022] 4、試驗結果:從表2可以看出，本發(fā)明的復合微生物制劑相對于化學藥劑在大田試 驗中具有明顯的優(yōu)勢，使用本發(fā)明的復合微生物制劑的平均畝產(chǎn)可以達到688kg/畝，稻瘟 病指只有3.12,而使用化學藥劑的產(chǎn)量只有612kg，稻瘟病指高達12.45,本發(fā)明的復合微生 物制劑相對于化學藥劑能夠在大田上增產(chǎn)12.4 %，相對化學藥劑對稻瘟病的防效高達 74.94%，具有顯著的效果。
[0023]表2各試驗組的水稻產(chǎn)量
【主權項】
1. 一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑，其特征在于，該微生物制劑的原料配比為： 津島鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份， 美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑，其特征在于，其制備 方法，包括以下步驟： 步驟一:津島鏈霉菌發(fā)酵液的制備 取出津島鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30Γ培養(yǎng)7天， 在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱 中30°C培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗 脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為津島鏈霉菌種子液； 發(fā)酵:將上述制備的津島鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的津島鏈 霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-32 °C，開攪拌200r/min，前24小時，通氣量為每 分鐘為200L空氣，24-36小時，通氣量為400L，36小時后，通氣量為600L，培養(yǎng)40-48小時，待 菌體含量達到60g/L，即可停罐，即得到津島鏈霉菌發(fā)酵液； 其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5 克，硫酸鎂:. 5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml， PH7.2~7.4; 其中，所述的津島鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基:花生柏粉3%，葡萄糖1%，石粉1%，大豆糖蜜2%，磷 酸氫二鉀〇. 04%，硫酸鎂0.05%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘； 步驟二:紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液的制備 取出紫丁香鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng)7 天，在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng) 箱中30°C培養(yǎng)6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水 洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為紫丁香鏈霉菌種子液； 發(fā)酵:將上述制備的紫丁香鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至裝有滅菌的600L的紫丁 香鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，控溫28-30°C，開攪拌200r/min，前18小時，通氣量 為每分鐘為300L空氣，18-32小時，通氣量為500L，32小時后，通氣量為700L，培養(yǎng)40-48小 時，待菌體含量達到80g/L，即可停罐，即得到紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液； 其中，所述的高氏一號固體培養(yǎng)基與步驟一的高氏一號固體培養(yǎng)基相同； 其中，所述的紫丁香鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基：芝麻柏粉3%，棉柏1%，玉米淀粉2%，石粉1%，甘 蔗糖蜜3%，硫酸錳0.002%，磷酸氫二鉀0.01%，硫酸鎂0.02%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10_ 0 · 15MPa，121°C 滅菌 30 分鐘； 步驟三，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液的制備 取出阿氏芽孢桿菌保藏管，用LB固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng)48小時，在 平板下挑取單個菌落接種至裝有LB固體培養(yǎng)基，在30 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，用3000ml無 菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L阿氏芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐 中，開攪拌120r/min，前12小時通氣量為200L/min，12小時后通氣量為320L/min，30°C培養(yǎng) 26-36小時，待總芽孢含量不低于60億cfu/ml，即可作為阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液； 其中，所述LB固體培養(yǎng)基:酵母提取物5.0 g，蛋白胨10.0，NaCllO.O g，瓊脂20 g，水 1000mL，pH7.2; 其中，所述阿氏芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖5g/L，玉米淀粉25 g/L，豆柏粉30 g/L， 魚粉5 g/L，硫酸鎂0.4 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.5 g/L，碳酸鈣5 g/L，pH7.0;各 培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘； 步驟四，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液的制備 取出美麗短芽孢桿菌保藏管，用營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基分別劃平板進行復蘇，30°C培養(yǎng) 48小時，在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基，在30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L美麗短芽孢桿菌發(fā)酵 培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為200L/min，8小時后通氣量為 300L/min，30°C培養(yǎng)24-36小時，待總芽孢含量不低于80億cfu/ml，即可作為美麗短芽孢桿 菌發(fā)酵液； 其中，所述營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g/L，牛肉膏3.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L， 瓊脂20 g/L，pH 7.2 ± 0.2; 其中，所述美麗短芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖8g/L，木薯粉20 g/L，菜柏粉30 g/L， 玉米漿干粉10 g/L，硫酸鎂0.4 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.2 g/L，碳酸鈣5 g/L， pH7.0，各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘； 步驟五，混合發(fā)酵液 將前四個步驟制備的菌液按津島鏈霉菌發(fā)酵液20-40份，紫丁香鏈霉菌發(fā)酵液20-40 份，阿氏芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份，美麗短芽孢桿菌發(fā)酵液20-40份，混勻，即得到防治水稻 稻瘟病的復合微生物制劑。3.根據(jù)權利要求1所述的一種防治水稻稻瘟病的復合微生物制劑，其特征在于，該復合 微生物制劑在防治水稻稻瘟病的方法為葉面噴施每次2-5L復合微生物制劑/畝，其稀釋的 倍數(shù)為100-200倍，連續(xù)使用2-3次，每7-10天使用一次。
【文檔編號】C12R1/07GK106085930SQ201610746763
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月29日
【發(fā)明人】蔣常德, 胡艷暉
【申請人】佛山市艷暉生物科技有限公司