一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液及使用方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液及使用方法。將巴氏芽孢桿菌(Bacilluspasteurii)接種于含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，在25～30℃下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初始PH值為6左右，培養(yǎng)12～24小時(shí)，培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度OD600，得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)，觀(guān)察得到于18小時(shí)左右就進(jìn)入穩(wěn)定期，相比于前人研究菌種生長(zhǎng)速度明顯加快；本發(fā)明具有可以充分利用培養(yǎng)液中物質(zhì)，工藝簡(jiǎn)單，效率高，用時(shí)短，環(huán)境清潔，成本低廉，同時(shí)還提高了微生物誘導(dǎo)碳酸鈣的效率，可以縮短混凝土裂縫修補(bǔ)時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)液的配制方法，特別是涉及一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng) 液的配制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物礦化作用是一種很普遍的自然現(xiàn)象，幾乎每一種生物都能合成礦物。其中近 三分之二是鈣礦，并且相當(dāng)一部分具有膠結(jié)功能。它們通過(guò)其自身的生命活動(dòng)，與周?chē)h(huán)境 介質(zhì)之間不斷發(fā)生著酶化作用，逐漸形成碳酸鈣。利用微生物制備碳酸鈣具有環(huán)境清潔，綠 色環(huán)保，工藝簡(jiǎn)單，成本低的優(yōu)點(diǎn)，該技術(shù)得到了廣泛的應(yīng)用。同時(shí)巴氏芽孢桿菌是制備碳 酸鈣的常用菌，但由于其在一般培養(yǎng)條件下需要近48小時(shí)才能到達(dá)穩(wěn)定期，因此，用于裂縫 修補(bǔ)、混凝土膠結(jié)等實(shí)際工程中具有耗時(shí)較長(zhǎng)，效率較低等缺點(diǎn)。
[0003] 巴氏芽孢桿菌的生長(zhǎng)特征與培養(yǎng)液成分、培養(yǎng)溫度、PH值、氧氣供給等因素有關(guān)， 可以通過(guò)對(duì)這些條件進(jìn)行控制，得到最適宜的培養(yǎng)條件，可以促進(jìn)菌種快速生長(zhǎng)，縮短培養(yǎng) 周期，從而提尚制備碳酸鈣的效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 技術(shù)問(wèn)題:本發(fā)明的目的是提供一種利用培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)成分來(lái)促進(jìn)微生物快速 生長(zhǎng)的培養(yǎng)液及使用方法。
[0005] 技術(shù)方案：本發(fā)明所采用的一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液中加入了酪蛋白 胨、豆粉蛋白胨和酵母浸膏三種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中，酪蛋白胨、豆粉蛋白胨和酵母浸膏的含量 為g/L:酪蛋白胨為13-17g/L，豆粉蛋白胨為4-6g/L，酵母浸膏為5-6g/L，NaCl為4-6g/L，尿 素為18-22g/L，瓊脂為18-22g/L，余量為蒸餾水。
[0006] 酪蛋白胨、豆粉蛋白胨在早中期提供氮源、生長(zhǎng)因子，酵母浸膏在中后期提供氮 源、生長(zhǎng)因子，促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)，穩(wěn)定期減小一半。
[0007] 本發(fā)明的促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液的使用方法為:將巴氏芽孢桿菌Bacillus pasteurii接種于所述的培養(yǎng)液中，在25~30°C下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初始PH值為6 左右，培養(yǎng)12~24小時(shí)，培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度 〇D_，得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)，觀(guān)察得到于18小時(shí)左右就進(jìn)入穩(wěn)定期，相比于前人研究菌種生長(zhǎng) 速度明顯加快。
[0008] 本發(fā)明將巴氏芽孢桿菌(Bacillus pasteurii)接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中含有尿 素，以其為營(yíng)養(yǎng)源，可以產(chǎn)生脲酶，不斷分解尿素，從而使溶液中的PH值適當(dāng)?shù)纳?，更利?菌體的生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)培養(yǎng)液中含有酪蛋白胨和豆粉蛋白胨，兩者為菌種生長(zhǎng)提供氮源和 碳源，同時(shí)兩者之間的相互影響可以共同促進(jìn)菌種生長(zhǎng)繁殖，而酵母浸膏在提供氮源和碳 源的基礎(chǔ)上還能提供無(wú)機(jī)鹽與NaCl相互配合進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)。
[0009] 有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0010] 本發(fā)明可以充分利用培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，相比于前人研究菌種生長(zhǎng)速度明顯得 到加快，觀(guān)察到于18小時(shí)左右就進(jìn)入了菌種生長(zhǎng)的穩(wěn)定期，而且具有工藝簡(jiǎn)單，效率高，用 時(shí)短，環(huán)境清潔，成本低廉，同時(shí)還提高了后續(xù)制備碳酸鈣的效率，可以縮短裂縫修補(bǔ)、混凝 土膠結(jié)的時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)在25~30°C下恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初始PH值為6左右為最優(yōu)培 養(yǎng)條件，培養(yǎng)12~24小時(shí)即可進(jìn)行后續(xù)的試驗(yàn)。
【附圖說(shuō)明】
[0011 ] 圖1為室溫下菌種培養(yǎng)24小時(shí)內(nèi)的生長(zhǎng)0D6QQ曲線(xiàn)圖。
[0012]圖2為室溫下在只有酪蛋白胨作為營(yíng)養(yǎng)源的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)的生長(zhǎng)OD600曲線(xiàn) 圖。
[0013] 圖3為室溫下在只有豆粉蛋白胨作為營(yíng)養(yǎng)源的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)的生長(zhǎng)OD600曲 線(xiàn)圖。
[0014] 圖4為室溫下在只有NaCl提供無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)的生長(zhǎng)OD600曲線(xiàn)圖。 [0015]圖5為室溫下在只有酵母浸膏提供無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)的生長(zhǎng)0D 6QQ曲線(xiàn) 圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施案例1
[0017] 一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液的配制方法，將巴氏芽孢桿菌（Bacillus pasteurii)接種于含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，在25~30 |下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初 始PH值為6左右，培養(yǎng)12~24小時(shí)，在培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光度 計(jì)測(cè)量吸光度〇D_，得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)，在本實(shí)施案例中，恒溫振蕩的溫度可選擇25、27或 30°C，控制初始PH值為5.5、6或6.5，培養(yǎng)時(shí)間可選擇12、15、17、20或24小時(shí)。此外，本實(shí)施例 可以只加酪蛋白胨不加豆粉蛋白胨作為主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);本實(shí)施例也可以只加豆粉蛋白胨不 加酪蛋白胨作為主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);本實(shí)施例還可以只加 NaCl提供無(wú)機(jī)鹽或者只加酵母浸膏提 供無(wú)機(jī)鹽。
[0018] 實(shí)施案例2
[0019]將巴氏芽孢桿菌(Bacillus pasteurii)接種于含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中（培養(yǎng) 基成分如表1所示），在25~30 °C下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初始PH值為6左右，培養(yǎng)12~ 24小時(shí)，得到渾濁的培養(yǎng)基，24小時(shí)后取出菌液在顯微鏡下觀(guān)察，在培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí) 取出部分菌液，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度〇D_，得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)（圖1)，觀(guān)察得到于18 小時(shí)左右就進(jìn)入穩(wěn)定期。
[0020]表1培養(yǎng)基成分
[0021]
[0022] 實(shí)施案例3
[0023]將巴氏芽孢桿菌(Bacillus pasteurii)接種于在案例1培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上只加酪蛋 白胨不加豆粉蛋白胨作為主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，在25~30°C下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并 控制初始PH值為6左右，培養(yǎng)48小時(shí)，在培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光 度計(jì)測(cè)量吸光度 0D6QQ，得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)（圖2)，觀(guān)察得到于40小時(shí)左右進(jìn)入穩(wěn)定期。
[0024] 實(shí)施案例4
[0025]將巴氏芽孢桿菌(Bacillus pasteurii)接種于在案例1培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上只加豆粉 蛋白胨不加酪蛋白胨作為主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，在25~30°C下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并 控制初始PH值為6左右，培養(yǎng)48小時(shí)，在培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光 度計(jì)測(cè)量吸光度 0D6QQ，得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)（圖3)，觀(guān)察得到于44小時(shí)左右進(jìn)入穩(wěn)定期。
[0026] 實(shí)施案例5
[0027] 將巴氏芽孢桿菌(Bacillus pasteurii)接種于在案例1培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上只用NaCl 不加酵母浸膏提供無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基中，在25~30 |下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初始PH值為 6左右，培養(yǎng)30小時(shí)，在培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度 OD6Q0,得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)（圖4)，觀(guān)察得到于26小時(shí)左右進(jìn)入穩(wěn)定期。
[0028] 實(shí)施案例6
[0029] 將巴氏芽孢桿菌(Bacillus pasteurii)接種于在案例1培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上只用酵母 浸膏不加 NaCl提供無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基中，在25~30°C下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)，并控制初始PH值 為6左右，培養(yǎng)30小時(shí)，在培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌液，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光 度OD600,得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)（圖5)，觀(guān)察得到于24小時(shí)左右進(jìn)入穩(wěn)定期。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液，其特征在于該培養(yǎng)液的組成為： 酪蛋白膝 13-17 g/L 豆粉蛋白腺 4-6 g/L 酵母浸膏 4-目g/L NaCI 日-6 g/L 尿素 18-22 g/L 瓊脂 化-22 g/L 余量為蒸饋水。2. -種如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)液的使用方法，其特征在于:將 己氏芽抱桿菌Bacillus pasteurii接種于所述的培養(yǎng)液中，在25~30°C下進(jìn)行恒溫振蕩培 養(yǎng)，并控制初始PH值為5.5-6.5之間，培養(yǎng)12~24小時(shí)，培養(yǎng)過(guò)程中每隔兩小時(shí)取出部分菌 液，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度OD600 ,得到菌種生長(zhǎng)曲線(xiàn)，觀(guān)察得到于18小時(shí)左右就進(jìn)入穩(wěn) 定期，相比于其它菌種生長(zhǎng)速度明顯加快。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK106085944SQ201610661889
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年8月12日 公開(kāi)號(hào)201610661889.7, CN 106085944 A, CN 106085944A, CN 201610661889, CN-A-106085944, CN106085944 A, CN106085944A, CN201610661889, CN201610661889.7
【發(fā)明人】繆林昌, 孫瀟昊, 童天志
【申請(qǐng)人】東南大學(xué)