專利名稱：一種檢測(cè)一氧化氮的超高靈敏熒光探針的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類檢測(cè)一氧化氮的高靈敏度萘酰亞胺類熒光探針。
背景技術(shù)：
一氧化氮在生命科學(xué)中扮演重要角色，是一個(gè)重要的信使分子。自20世紀(jì)80年代，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)在生物體生命活動(dòng)中會(huì)產(chǎn)生一氧化氮分子。一氧化氮不僅具有免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)傳遞、血壓生理調(diào)控和血小板凝聚的抑制等生理功能，而且還與很多疾病，包括基因突變、癌變、動(dòng)脈硬化等疾病密切相關(guān)。然而，生物體中產(chǎn)生的一氧化氮其生成量較少并且半衰期較短，對(duì)其進(jìn)行實(shí)時(shí)、原位、定量的檢測(cè)，將有助于我們進(jìn)一步了解一氧化氮的生理功能，有助于了解某些疾病的致病原因，并最終找到合適的治療方法。目前對(duì)一氧化氮的檢測(cè)方法主要有電化學(xué)法、比色法、質(zhì)譜法、順磁法。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品中產(chǎn)生的一氧化氮進(jìn)行實(shí)時(shí)原位的檢測(cè)，近年來(lái)利用熒光探針的熒光檢測(cè)法表現(xiàn)出了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)熒光探針對(duì)生物體毒性低，不損傷樣品細(xì)胞，通過(guò)與常規(guī)監(jiān)測(cè)儀器一熒光顯微鏡結(jié)合對(duì)一氧化氮實(shí)現(xiàn)原位的檢測(cè)。目前對(duì)一氧化氮進(jìn)行識(shí)別的熒光團(tuán)主要有熒光素、羅丹明、B0DPIY、菁類染料等，其中熒光素DAF-2系列和羅丹明DAR-2系列是目前主要商品化(InvitrogenTM)的一氧化氮檢測(cè)熒光探針，然而其合成制備工藝比較繁瑣，致使其成本較高，價(jià)格昂貴，不利于廣泛推廣使用。目前盡管對(duì)生命體中一氧化氮的產(chǎn)生和作用機(jī)理進(jìn)行了相應(yīng)的研究探索，然而，由于一氧化氮的產(chǎn)生量較少、壽命較短，并且僅僅在特定的細(xì)胞器中產(chǎn)生。對(duì)其進(jìn)行原位的檢測(cè)能更好的了解一氧化氮在生命活動(dòng)中的作用，以及其作為信使分子對(duì)生物大分子的調(diào)控作用，因此急需設(shè)計(jì)低成本、高靈敏度的一氧化氮熒光探針。尤其是近年來(lái)熒光成像顯微技術(shù)的發(fā)展，而基于萘酰亞胺熒光發(fā)色團(tuán)的一氧化氮熒光探針卻很少，并且在國(guó)際上尚未報(bào)道。為了方便對(duì)一氧化氮的實(shí)時(shí)原位的檢測(cè)，急需研究、開發(fā)具有實(shí)用性的高靈敏度一氧化氮探針。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一類檢測(cè)一氧化氮的萘酰亞胺類熒光探針。其結(jié)構(gòu)通式如(I)所示
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)一氧化氮的超高靈敏熒光探針，其特征是，該熒光探針具有如下結(jié)構(gòu)通式式中
2.權(quán)利要求I所述超高靈敏熒光探針的合成方法，其特征包括如下步驟a、以等摩爾量的4-溴-1，8-萘酐與鄰硝基對(duì)苯二胺為原料，溶解于乙二醇單甲醚中， 加熱至120°C，反應(yīng)5小時(shí)后將反應(yīng)液倒入水中，抽濾，減壓干燥，得到淡黃色固體；b、將步驟a得到的淡黃色固體溶于無(wú)水DMSO(二甲基亞砜)中，加入淡黃色固體等摩爾量的伯胺，加熱回流5小時(shí)，將反應(yīng)液倒入水中，抽濾，減壓干燥，得到黃色固體；C、將步驟b得到的黃色固體溶于四氫呋喃和甲醇的混合液中，在2. 5MPa的氫氣和催化劑催化下，室溫?cái)嚢?4小時(shí)，得到熒光探針產(chǎn)品；四氫呋喃甲醇=5 I ;催化劑為Pd/C、 雷尼鎳、Fe粉/稀鹽酸或氯化亞錫。
3.如權(quán)利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述的伯胺是丙胺、丁胺、二甘醇胺、 N-甲基-2-哌嗪乙二胺、2-嗎啉乙二胺、N, N- 二甲基乙二胺、2-氨基乙基二苯基憐或3-氨丙基二苯基憐。
4.應(yīng)用權(quán)利要求I所述的超高靈敏熒光探針，其特征在于，用于化學(xué)模擬生理體系中一氧化氮的檢測(cè)或用于活細(xì)胞中一氧化氮的檢測(cè)。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述活細(xì)胞為Hella細(xì)胞株、MCF-7細(xì)胞株、 RAW264. 7細(xì)胞株。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)一氧化氮的超高靈敏熒光探針。該熒光探針具有如下結(jié)構(gòu)通式制備時(shí)，先以等摩爾量的4-溴-1，8-萘酐與鄰硝基對(duì)苯二胺為原料，溶解于乙二醇單甲醚中，加熱反應(yīng)，得到淡黃色固體。然后將淡黃色固體溶于無(wú)水DMSO中，加入伯胺，加熱回流，將反應(yīng)液抽濾，減壓干燥，得到黃色固體。黃色固體溶于四氫呋喃和甲醇的混合液中，在的氫氣和催化劑催化下，得到黃色探針產(chǎn)品。該探針?lè)肿泳哂休^好的化學(xué)、光穩(wěn)定性，較好的溶解性和生物兼容性，較高的一氧化氮選擇性，不受其他活性氧和活性氮等物種的干擾。激光共聚焦成像實(shí)驗(yàn)表明這類探針具有較好的細(xì)胞通透性，對(duì)細(xì)胞和生物體無(wú)毒副作用，并能高靈敏的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)原生的一氧化氮。
文檔編號(hào)C09K11/06GK102617467SQ20121003863
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月21日
發(fā)明者于海波, 張曉琳, 張玉慧, 肖義 申請(qǐng)人:大連理工大學(xué)