專利名稱：一種具有細(xì)胞膜通透性的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種單線態(tài)氧測定用熒光探針及其應(yīng)用，具體地說是ー種具有細(xì)胞膜通透性的銪配合物熒光探針及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
單線態(tài)氧是ー種不穩(wěn)定的處于高能量激發(fā)態(tài)的氧分子，近二十年來，基于單線態(tài)氧的強(qiáng)氧化性質(zhì)來殺死腫瘤細(xì)胞的癌癥光動カ治療技術(shù)(photodynamic therapy,簡稱TOT)在臨床醫(yī)學(xué)中得到了越來越多的應(yīng)用，該技術(shù)通常使用卟啉衍生物如血卟啉、血卟啉單甲醚等光敏化劑作為治療藥物(文獻(xiàn)I :W.M. Sharman, C. M. Allen, J. E. L ier，Drug. Discov. Today. 1999, 4, 507 ；文獻(xiàn) 2 :Τ· J. Dougherty, J. Clin. Laser. Med.Surg. 2002, 20, 3 ;文獻(xiàn) 3 X. Ding, Q. Xu, F. Liu, P. Zhou, Y. Gu, J. Zeng, J. An, ff. Dai, X. Li,CancerLett. 2004, 216，43)，當(dāng)光敏化劑富集在腫瘤細(xì)胞中后，通過對腫瘤部位進(jìn)行光照，光敏化劑吸收光能后可將能量傳遞給氧分子而生成單線態(tài)氧，進(jìn)而利用單線態(tài)氧的氧化作用達(dá)到使腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死的目的。近幾年來，5-氨基酮戊酸及其衍生物作為TOT藥物在癌癥臨床治療中也得到了許多的應(yīng)用(文獻(xiàn)4 :A. Casas, H. Fukuda, G. D. Venosa，A. B. Batlle, J. Cancer2001, 85, 279 ；文獻(xiàn) 5 :J. M. Gauff ier, K. Berg, Q. Peng, H. Anhol t,P. K. Selbo, L. Ma, J. Moan, CancerRes. 1997, 57, 1481),5-氛基麗戍酸本身并不是一種光敏化劑，但其進(jìn)入細(xì)胞后可以代謝成血紅素前體原卟啉IX，從而變成ー種在光照下可產(chǎn)生單線態(tài)氧的光敏化劑。由于單線態(tài)氧在癌癥PDT治療藥物性能評價(jià)及治療效果評價(jià)等方面具有重要的作用，活體細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的測定技術(shù)研究引起了越來越多的關(guān)注。目前可用于活體細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的檢測主要有以下幾種方法(I)利用單線態(tài)氧自身淬滅過程產(chǎn)生憐光的檢測方法(文獻(xiàn) 6 :S. Oelckers, T. Ziegler, I. Michler, B. Roder, J. Photochem.Photobiol. B:Biol. 1999, 53, 121 ；文獻(xiàn) 7 :L. K. Andersen, P. R. Ogilby, Photochem.Photobiol. 2001, 73, 489 ；文獻(xiàn) 8 :L. K. Andersen, Ζ. Gao, P. R. Ogilby, L. Poulsen,
I.Zebger, J. Phys. Chem. Α2002, 106,8488)。該方法專一1丨生很高，但檢出信號弱，靈敏度底，無法用于低濃度單線態(tài)氧的檢測。(2)利用帶有蒽環(huán)的熒光素類熒光探針的檢測方法(文獻(xiàn) 9 K. Tanaka, T. Miura, N. Umezawa, Y. Urano, K. Kikuchi, Τ. Higuchi, Τ. Nagano, J. Am.Chem. Soc. 2001，123，2530)。該方法靈敏度高，但由于光敏化劑藥物本身就具有非常強(qiáng)的熒光，該方法不能用于光敏化劑藥物共存下細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的熒光測定。(3)我們建立的利用銪配合物熒光探針結(jié)合時間分辨熒光測定技術(shù)的檢測方法(文獻(xiàn)10 B. Song, G. Wang,M. Tan，J. Yuan，J. Am. Chem. Soc. 2006, 128，13442)。該方法利用了銪配合物的長壽命熒光特性，采用時間分辨熒光測定技術(shù)來消除光敏化劑藥物的本底熒光，進(jìn)而可實(shí)現(xiàn)活體細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的實(shí)時原位測定。但由于探針與細(xì)胞共培養(yǎng)時不能通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使得其在癌癥PDT研究中較難廣泛使用。
本發(fā)明在我們上述銪配合物單線態(tài)氧熒光探針研制的基礎(chǔ)上，通過對配合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改良制備出ー種具有細(xì)胞膜通透性，與細(xì)胞共培養(yǎng)即可通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的銪配合物熒光探針，利用該熒光探針結(jié)合時間分辨熒光測定技術(shù)建立了一種用于PDT藥物(血卟啉單甲醚及5-氨基酮戊酸)在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生單線態(tài)氧的實(shí)時原位熒光測定技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種靈敏度高、選擇性及水溶性好、適用范圍廣、具有細(xì)胞膜通透性、可用于對活體細(xì)胞內(nèi)PDT藥物光照下產(chǎn)生的單線態(tài)氧進(jìn)行實(shí)時原位熒光測定的銪配合物熒光探針及應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下ー種具有細(xì)胞膜通透性的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針，是以三價(jià)銪離子與ー種含 有9-甲基蒽取代聯(lián)三吡啶骨架結(jié)構(gòu)的大環(huán)配體形成的中性配合物(簡稱[MTDTA-Eu])為熒光探針，其中所述配合物[MTDTA-Eu]的結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種具有細(xì)胞膜通透性的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針，其特征在于是以三價(jià)銪離子與一種含有9-甲基蒽取代聯(lián)三吡啶骨架結(jié)構(gòu)的大環(huán)狀配位體所形成的配合物為熒光探針，所述三價(jià)銪配合物的結(jié)構(gòu)式為
2.應(yīng)用權(quán)利要求I所述的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針，其特征在于通過將配合物與細(xì)胞共培養(yǎng)的方法將配合物轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，配合物與細(xì)胞內(nèi)的單線態(tài)氧反應(yīng)導(dǎo)致其熒光顯著增強(qiáng)，進(jìn)而用于細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的熒光測定。
3.應(yīng)用權(quán)利要求I所述的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針，其特征在于通過將配合物與 水溶液中的單線態(tài)氧反應(yīng)導(dǎo)致其熒光顯著增強(qiáng)，進(jìn)而用于水溶液中單線態(tài)氧的熒光測定。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針，其特征在于，銪配合物單線態(tài)氧熒光探針是試劑或含有其的試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有細(xì)胞膜通透性的銪配合物單線態(tài)氧熒光探針及其應(yīng)用。探針的結(jié)構(gòu)為。探針可通過與細(xì)胞共培養(yǎng)的方法直接進(jìn)而細(xì)胞內(nèi)，用于細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的時間分辨熒光分析等生化測定。探針也可用于各種化學(xué)、光化學(xué)及生物化學(xué)體系中單線態(tài)氧的熒光測定或時間分辨熒光測定。
文檔編號C09K11/06GK102732246SQ201210197718
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月15日
發(fā)明者葉志強(qiáng), 戴志超, 袁景利 申請人:大連理工大學(xué)