一種銅綠假單胞菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種銅綠假單胞菌及其應(yīng)用；該銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa QHH S1-27-2，其微生物保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2012468；其應(yīng)用于高礦化度油藏微生物采油中；本發(fā)明的銅綠假單胞菌能夠以原油為唯一碳源進(jìn)行生長，其代謝產(chǎn)物中的生物表面活性劑成分可降低油水界面張力，一定程度增加儲(chǔ)層的有效滲透率，提高注入水的驅(qū)油效率，提高原油采收率。
CCTCC NO:M2012468
20121121
【專利說明】一種銅綠假單胞菌及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】中的銅綠假單胞菌及其應(yīng)用，特別涉及一株產(chǎn)生物表面 活性劑的銅綠假單胞菌及其在高礦化度油藏微生物采油中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 石油是不可再生的資源，但二次采油后仍有60-70%的剩余油和殘余油存留在地 層中，這對于提高采收率、增加可采儲(chǔ)量都是一個(gè)巨大的潛力。據(jù)估計(jì)油田的采收率提高 1 %，就可滿足全世界2?3年的石油消費(fèi)量，因此如何提高提高三次采油技術(shù)水平，具有重 要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和戰(zhàn)略意義。
[0003] 三次采油主要包括物理采油、化學(xué)采油以及微生物采油。物理采油技術(shù)主要通 過將高溫、高壓蒸汽灌入油藏，促進(jìn)原油剝脫、流動(dòng)從而進(jìn)行開采，但成本很高、提高采收 率不明顯；化學(xué)采油技術(shù)主要應(yīng)用表面活性劑促進(jìn)原油剝脫、流動(dòng)、聚集進(jìn)行開采，主要不 足在于對地層水水型要求苛刻、成本很高。微生物采油技術(shù)（microbial enhanced oil recovery，ME0R)是一項(xiàng)利用微生物及代謝產(chǎn)物來提高原油產(chǎn)量和采收率的綜合技術(shù)，具有 工藝簡單、成本低、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)成為頗具應(yīng)用前景的三次采油技術(shù)。
[0004] 菌種是微生物采油的關(guān)鍵，成功用于采油的菌株一般都具有產(chǎn)生生物表面活性劑 的能力。目前，已有研究發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌能夠產(chǎn)生糖脂類生物表面活性劑，起到降低油水 界面張力的作用，相對于其他微生物菌種具有較強(qiáng)的優(yōu)勢，因此在石油工業(yè)和其他行業(yè)中 展示出獨(dú)特的應(yīng)用前景。但是由普通環(huán)境篩選得到的銅綠假單胞菌對油藏儲(chǔ)層環(huán)境不具適 應(yīng)性，特別是對于油藏地層水礦化度耐受性很差，礦化度超過l〇g/l很難生長繁殖，無法在 高礦化度油藏進(jìn)行微生物采油工程。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種高產(chǎn)生物表面活性劑的微生物采油菌株--銅綠假單 胞菌，及其在高礦化度油藏的應(yīng)用。本發(fā)明由高礦化度油藏油井采出水中篩選得到一株銅 綠假單胞菌，高產(chǎn)生物表面活性劑，能夠以原油為唯一碳源進(jìn)行生長，并對目標(biāo)油田的水質(zhì) 具有良好的適應(yīng)性，在高礦化度油藏微生物采油方面具有良好的應(yīng)用前景。
[0006] 本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌，是銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa) QHH S1-27-2,已于2012年11月21日保藏于"中國典型培養(yǎng)物保藏中心"，其保藏編號(hào)為CCTCC N0:M2012468,保藏地址為：湖北省武漢市武漢大學(xué)保藏中心。
[0007] 本發(fā)明還公開了所述的銅綠假單胞菌QHH S1-27-2在高礦化度油藏微生物采油中 的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明銅綠假單胞菌QHH S1-27-2菌株從青海油田油井采出水樣中分離，采用富 集培養(yǎng)、血平板分離、純化得到。其中富集培養(yǎng)基配方為：原油10%、酵母膏0.01%、NaC13%、 KH2PO4O. 5%、NaNO3O. 〇7%、NH4NO3O. 〇7%、MgSO4 · 7H2OO. 〇5%、微量元素液 0· 5mL%、pHL 0_7· 2， 121°C下高壓蒸汽滅菌30min。血平板培養(yǎng)基配方為：蛋白胨1%、牛肉粉0. 3%、NaC10. 5%、脫 纖維羊血5mL%、瓊脂I. 8%，pH7. 0,121°C下高壓蒸汽滅菌15min。
[0009] 本發(fā)明還公開了所述的銅綠假單胞菌QHH S1-27-2,其高產(chǎn)生物表面活性劑的方 法，是將所述銅綠假單胞菌株按3%接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，37°C，150r/min，振蕩培 養(yǎng)72h，即得。其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為植物油10g/L，MgSO 4O. 2g/L，K2HPO4L Og/L， KH2PO4L Og/L，蛋白胨 I. Og/L，F(xiàn)eSO4O. 05g/L，CaCl2O. 02g/L，初始 pH 值 7· 0。
[0010] 本發(fā)明公開了所述的銅綠假單胞菌QHH Sl-27-2在高礦化度油藏微生物采油中的 應(yīng)用方法，是先通過封堵體系對地層高滲帶、大孔道進(jìn)行深部調(diào)剖后，做好微生物驅(qū)施工前 期準(zhǔn)備，使后期注入的微生物更均勻地驅(qū)替到對應(yīng)的油井，提高注入水的波及系數(shù)和降低 油水界面張力，改變油藏巖石孔表面性質(zhì)、油藏原油性能，從而降低油井含水，提升原油采 油率。
[0011] 本發(fā)明一株高產(chǎn)生物表面活性劑且能以原油為唯一碳源生長的菌株銅綠假單胞 菌QHH S1-27-2,該菌株能夠很好的適應(yīng)高礦化度的油藏環(huán)境，能在該油藏環(huán)境中大量繁 殖；微生物發(fā)酵液中的表面活性劑成分可降低油水界面張力，一定程度增加儲(chǔ)層的有效滲 透率，提高注入水的驅(qū)油效率，提高采收率。室內(nèi)驅(qū)油模擬實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)微生物驅(qū)替段塞作用 后，采收率可提高平均16%，說明篩選的菌株驅(qū)油性能較強(qiáng)。利用該菌株制備相應(yīng)的微生物 采油產(chǎn)品，是一項(xiàng)對環(huán)境、對經(jīng)濟(jì)、對社會(huì)生產(chǎn)都友好的優(yōu)良產(chǎn)業(yè)鏈。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1是QHH S1-27-2菌落形態(tài)（a)圖和光鏡照片（b)圖；
[0013] 圖2是QHH S1-27-2系統(tǒng)進(jìn)化樹；
[0014] 圖3是溫度對銅綠假單胞菌生長的影響圖；
[0015] 圖4是礦化度對銅綠假單胞菌生長的影響圖；

【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施例1 :
[0017] 銅綠假單胞菌QHH S1-27-2的獲得
[0018] 采集青海油田采油井油水樣，用無菌的聚苯乙烯瓶裝樣，帶回實(shí)驗(yàn)室。
[0019] (1)富集：取IOg油水樣加入到富集培養(yǎng)基中，IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基裝入250mL三角 瓶中，密封瓶口，50°C，120r/min，恒溫振蕩培養(yǎng)3d。
[0020] (2)血平板分離
[0021] 富集培養(yǎng)后，觀察發(fā)酵液形態(tài)，從能夠使石油分散成油滴的搖瓶培養(yǎng)物中吸取 0. ImL做KT5-KT7梯度稀釋，然后用滅菌的涂布器，均勻涂布血平板，37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2d。利用生物表面活性劑能夠使紅細(xì)胞溶解的特性，在血平板上表現(xiàn)為產(chǎn)生溶血圈。因此 挑取產(chǎn)生大直徑溶血圈的單菌落，轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上放入冰箱中保存。
[0022] (3)菌株的生理生化分析及系統(tǒng)分類鑒定
[0023] QHH S1-27-2從青海油田花土溝工區(qū)S1-27-2下井油水樣中分離，其平板生長菌 落呈圓形，直徑3?4mm，扁平且表曲光滑，邊緣波狀，菌落呈黃綠色。細(xì)胞直桿狀，端圓，大 小為0· 5?0· 9X2?5. 0 μ m，光鏡照片見附圖1。
[0024] 表IQHH S1-27-2 (銅綠假單胞菌）主要的生理生化特征
[0025]

【權(quán)利要求】
1. 一株銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa)QHH S1-27-2,其特征在于，該菌株保 藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC N0:M2012468。
2. -種權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌的應(yīng)用，其特征在于：應(yīng)用于高礦化度油藏微 生物采油中； (1) 將所述銅綠假單胞菌株接種于培養(yǎng)基中，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)，得生物表面活性劑； 所述的培養(yǎng)基為植物油 10g/L，MgS040. 2g/L，K2HP04l. 0g/L，KH2P04l. Og/L，蛋白胨 1. Og/ L，F(xiàn)eS040. 05g/L，CaCl20. 02g/L，初始 pH 值 7. 0 ; 所述的發(fā)酵培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度為37°C，攪拌轉(zhuǎn)速為150rpm，接種量為5%，發(fā)酵時(shí)間 為 72h ; (2) 現(xiàn)場施工選擇復(fù)合微生物驅(qū)油條件的井組進(jìn)行，總注入量按照下述公式計(jì)算。 V=SXHXP V=0.003PV 其中：PV-孔隙體積，m3 ;V-生物性驅(qū)油劑用量，m3 ; 生物性驅(qū)油劑段塞使用量（V)按0. 003PV計(jì)算；S為水驅(qū)控制面積；H為油層有效厚度 (m);P為孔隙度。 現(xiàn)場注入一般等分為3-4個(gè)段塞，段塞間間隔3-5天，間隔期內(nèi)正常注水。每個(gè)段塞通 過注水井將3%微生物菌液注入地層，每日注入量按配注進(jìn)行。
【文檔編號(hào)】C09K8/582GK104371940SQ201310356614
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2013年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月15日
【發(fā)明者】扈福堂, 張立會(huì), 周平, 薛姝雯 申請人:中國石油天然氣股份有限公司