一種軟骨染色液、骨骼染色方法以及利用該方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種軟骨染色液、骨骼染色方法以及利用該方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，該染色液的pH范圍為5-7，且每升染色液中至少含有0.14g的阿利新藍(lán)。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明利用阿利新藍(lán)和茜素紅可使骨骼快速染色，阿利新藍(lán)和茜素紅均為酸性物質(zhì)染料，阿利新藍(lán)用于動(dòng)物骨骼中軟骨的染色，茜素紅用于骨骼中硬骨的染色，染色效果明顯，骨骼與肌肉顏色區(qū)別較為清楚，染色方法簡單，無需大量人力、物力，另外鴨胚胎骨骼標(biāo)本的制作方法在保持標(biāo)本外形完整的情況下顯示出體內(nèi)骨骼部分，便于觀察，為研究和教學(xué)提供便利，制作方法操作簡單，周期較短，普通科技人員均可以制作。
【專利說明】一種軟骨染色液、骨骼染色方法以及利用該方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及標(biāo)本制備領(lǐng)域，具體而言，涉及一種軟骨染色液、骨骼染色方法以及利用該方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]家禽的骨骼在生長發(fā)育過程中不形成骨骺的次級(jí)骨化中心，所以無骨骺和骨骺軟骨，骨的加長主要依賴于骨端軟骨的增生和骨化。家禽的骨骼與哺乳動(dòng)物等差異較大，家禽的骨骼具有強(qiáng)度大而重量輕的特點(diǎn)，含有較多的無機(jī)鈣鹽，并且軀干部有些骨已經(jīng)互相愈合。
[0003]動(dòng)物標(biāo)本在生物學(xué)科研、教學(xué)以及科普工作中占有特別重要的地位，骨骼標(biāo)本是研究動(dòng)物骨骼的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其與其他器官相互關(guān)系的主要材料，動(dòng)物骨骼的標(biāo)本和骨骼標(biāo)本制作技術(shù)也見于一些教科書和雜志文章，傳統(tǒng)的骨骼標(biāo)本制作方法一般包括:剔肉、去骨髓、腐蝕、漂白、串裝等步驟，制作過程繁瑣，尤其是剔肉和最后的串裝步驟，工作量大且需要操作者具有較強(qiáng)的專業(yè)知識(shí)和操作技能，否則會(huì)造成骨骼的損壞和骨骼安裝的錯(cuò)誤，制作周期長，另外傳統(tǒng)的骨骼制作方法主要適用于體型相對(duì)較大的動(dòng)物，以及骨骼發(fā)育基本完成的動(dòng)物，對(duì)于骨骼尚未鈣化及硬化的胚胎則難以完成標(biāo)本制作工作，實(shí)用性較低，應(yīng)用范圍比較局限，不適用于類似家鴨這種體型較小的動(dòng)物，所以不能被人們廣泛使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種軟骨染色液、骨骼染色方法以及利用該方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法。
[0005]本發(fā)明實(shí)施例中提供了一種軟骨染色液，該染色液的pH范圍為5-7，且每升染色液中至少含有0.14g的阿利新藍(lán)。
[0006]進(jìn)一步的，該染色液中還包括無水乙醇、冰醋酸和水。
[0007]優(yōu)選的，每升該染色液中包括阿利新藍(lán)為0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸 40mL-60mL 和水 230mL-270mL。
[0008]本發(fā)明實(shí)施例中還提供了一種骨骼染色方法，該方法包括以下步驟:
401:染色劑的制備:染色劑包括軟骨染色液和硬骨染色液,軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)、無水乙醇、冰醋酸和水，硬骨染色液中包括菌素紅、無水乙醇和水；
402:經(jīng)過脫脂后的骨骼浸泡于軟骨染色液中染色2-3天；
403:將骨骼由軟骨染色液中取出后，使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色；
404:清洗后的骨骼浸泡在硬骨染色液中染色2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼。
[0009]優(yōu)選的，步驟401中，每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL ;每升硬骨染色液中包括茜素紅0.04g-0.06g、無水乙醇 690mL -71OmL 和水 290mL_310mL。
[0010]本發(fā)明實(shí)施例中進(jìn)一步提供了一種利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，該方法包括以下步驟 :
601:取動(dòng)物胚胎并剝?nèi)ケ砥?，去除骨骼和腹腔?nèi)的脂肪，并清洗干凈；
602:標(biāo)本固定:將處理后的骨骼整理好姿勢后，浸泡于95%的酒精固定液中固定I天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2-3天，直至標(biāo)本脫水硬化；
603:脫脂:將固定后的標(biāo)本浸泡于丙酮溶液內(nèi)脫脂2-3天，取出后用水持續(xù)沖洗8-16小時(shí)，直至標(biāo)本可以沉入水底為止；
604:染色:將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中2-3天,取出后使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色，然后將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼標(biāo)本；
605:脫色:將染色后的標(biāo)本依次浸泡于不同濃度的KOH溶液中，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色；
606:將脫色后的標(biāo)本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液與丙三醇的梯度溶液中，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最終將標(biāo)本置于純甘油中進(jìn)行密封保存。
[0011]進(jìn)一步的，步驟604中，每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL ;每I升硬骨染色液中包括茜素紅
0.04g-0.06g、無水乙醇 690mL -71OmL 和水 290mL_310mL。
[0012]進(jìn)一步的，步驟605中，將染色后的標(biāo)本浸泡于2%的KOH溶液中8_12小時(shí)，再浸泡于1.5%的KOH溶液中12-24小時(shí)，最后浸泡于1%的KOH溶液中2_3天，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色。
[0013]進(jìn)一步的，步驟606中，1%的KOH溶液與丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分別為:1:4、2:3、3:2、4:1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為1_2天。
[0014]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明利用阿利新藍(lán)和茜素紅可使骨骼快速染色，阿利新藍(lán)和茜素紅均為酸性物質(zhì)染料，阿利新藍(lán)用于動(dòng)物骨骼中軟骨的染色，茜素紅用于骨骼中硬骨的染色，染色效果明顯，骨骼與肌肉顏色區(qū)別較為清楚，染色方法簡單，無需大量人力物力，另外鴨胚胎骨骼標(biāo)本的制作方法在保持標(biāo)本外形完整的情況下顯示出體內(nèi)骨骼部分，從而顯示出鴨胚胎發(fā)育過程中的骨骼發(fā)育情況，便于觀察，為研究和教學(xué)等提供便利，并且該胚胎骨骼標(biāo)本制作方法操作簡單，周期較短，普通科技人員均可以制作。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為本發(fā)明實(shí)施例所述的一種骨骼染色方法的流程圖；
圖2為本發(fā)明實(shí)施例所述的一種利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面通過具體的實(shí)施例并結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0017]本發(fā)明實(shí)施例所述的一種軟骨染色液，該染色液的pH范圍為5-7，且每升染色液中至少含有0.14g的阿利新藍(lán)。本發(fā)明利用阿利新藍(lán)可使骨骼中的軟骨快速染色，阿利新藍(lán)為酸性物質(zhì)染料，在pH為5-7的染色液中染色效果明顯，骨骼與肌肉顏色區(qū)別較為清楚，染色方法簡單，無需大量人力、物力。
[0018]進(jìn)一步的，該染色液中還包括無水乙醇、冰醋酸和水。冰醋酸為該染色液中提供酸性環(huán)境，保證了該溶液的PH為5-7。無水乙醇提供一個(gè)無毒的環(huán)境，可以使溶液中的阿利新藍(lán)快速的進(jìn)入到骨質(zhì)中，染色速度加快，節(jié)省了染色的時(shí)間。
[0019]進(jìn)一步的，每升該染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL。阿利新藍(lán)為酸性物質(zhì)染料，染料與酸性基團(tuán)形成鹽鍵，利用染料的不同PH及不同電解質(zhì)濃度，可區(qū)分酸性黏液物質(zhì)的類別，可以對(duì)骨骼中的軟骨進(jìn)行染色，在酸性環(huán)境下，呈藍(lán)色，染色效果明顯，對(duì)于胚胎時(shí)期的骨骼，每升軟骨染色液中含有阿利新藍(lán)0.14g-0.16g已經(jīng)足以滿足染色效果，含量過多不僅造成染料的浪費(fèi)且染色顏色較深；染料過少將導(dǎo)致染色不均勻，染色效果不明顯。冰醋酸主要用于提供酸性環(huán)境，操作簡單，無水乙醇主要為染料液提供無毒環(huán)境，防止骨骼在浸泡過程中發(fā)霉、變質(zhì)甚至腐爛。
[0020]如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例中還提供了一種骨骼染色方法，該方法包括以下步驟:
401:染色劑的制備:染色劑包括軟骨染色液和硬骨染色液,軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)、無水乙醇、冰醋酸和水，硬骨染色液中包括菌素紅、無水乙醇和水；
402:經(jīng)過脫脂后的骨骼浸泡于軟骨染色液中染色2-3天；
403:將骨骼由軟骨染色液中取出后，使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色；
404:清洗后的骨骼浸泡在硬骨染色液中染色2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼。
[0021]本發(fā)明利用阿利新藍(lán)和茜素紅可使骨骼快速染色,阿利新藍(lán)和茜素紅均為酸性物質(zhì)染料，阿利新藍(lán)用于動(dòng)物骨骼中軟骨的染色，茜素紅用于骨骼中硬骨的染色，染色效果明顯，骨骼與肌肉顏色區(qū)別較為清楚，染色方法簡單，無需大量人力物力，操作簡單，使用方便，時(shí)間短，節(jié)省了大量的勞動(dòng)和時(shí)間。
[0022]優(yōu)選的，步驟401中，每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL ;每升硬骨染色液中包括茜素紅
0.04g-0.06g、無水乙醇690mL-710mL和水290mL-310mL。阿利新藍(lán)為酸性物質(zhì)染料，染料與酸性基團(tuán)形成鹽鍵，利用染料的不同PH及不同電解質(zhì)濃度，可區(qū)分酸性黏液物質(zhì)的類別，可以對(duì)骨骼中的軟骨進(jìn)行染色，在酸性環(huán)境下，呈藍(lán)色，染色效果明顯，對(duì)于胚胎時(shí)期的骨骼，每升軟骨染色液中含有阿利新藍(lán)0.14g-0.16g已經(jīng)足以滿足染色效果，染料過多不僅產(chǎn)生染料的浪費(fèi)且染色顏色較深；染料過少，將導(dǎo)致染色不均勻，染色效果不明顯。冰醋酸主要用于提供酸性環(huán)境，操作簡單，無水乙醇則用于提供整個(gè)染料液的無毒環(huán)境，防止骨骼在浸泡過程中發(fā)霉、變質(zhì)甚至腐爛。茜素紅作為一種染色溶質(zhì)，主要對(duì)骨骼中的硬骨進(jìn)行染色，茜素紅的量為0.04g-0.06g已經(jīng)足以滿足染色效果，過多不僅產(chǎn)生染料的浪費(fèi)且染色顏色較深，染料過少，將導(dǎo)致染色不均勻，染色效果不明顯，無水乙醇則提供整個(gè)染料液的無毒環(huán)境，防止骨骼在浸泡過程中發(fā)霉、變質(zhì)甚至腐爛。
[0023]如圖2所示，本發(fā)明實(shí)施例中進(jìn)一步提供了一種利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，該方法包括以下步驟:
601:取動(dòng)物胚胎并剝?nèi)ケ砥?，去除骨骼和腹腔?nèi)的脂肪，并清洗干凈；602:標(biāo)本固定:將處理后的骨骼整理好姿勢后，浸泡于95%的酒精固定液中固定I天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2-3天，直至標(biāo)本脫水硬化；
603:脫脂:將固定后的標(biāo)本浸泡于丙酮溶液內(nèi)脫脂2-3天，取出后用水持續(xù)沖洗8-16小時(shí)，直至標(biāo)本可以沉入水底為止；
604:染色:將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中2-3天,取出后使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色，然后將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼標(biāo)本；
605:脫色:將染色后的標(biāo)本依次浸泡于不同濃度的KOH溶液中，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色；
606:將脫色后的標(biāo)本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液與丙三醇的梯度溶液中，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最終將標(biāo)本置于純甘油中進(jìn)行密封保存。
[0024]胚胎骨骼標(biāo)本的制作方法在保持標(biāo)本外形完整的情況下顯示出體內(nèi)骨骼部分，從而顯示出胚胎發(fā)育過程中的骨骼發(fā)育情況，便于觀察，為研究和教學(xué)等提供便利，并且該胚胎骨骼標(biāo)本制作方法操作簡單，周期較短，普通科技人員均可以制作。本方法主要運(yùn)用骨骼染色方法進(jìn)行制作，克服了現(xiàn)有技術(shù)只能適用于大型動(dòng)物標(biāo)本的制作的缺陷，本方法可適用于胚胎時(shí)期孵化的動(dòng)物骨骼，操作簡單，使用方便；在標(biāo)本的制作方法中，由于染色劑的改變，從而縮短了標(biāo)本制作的時(shí)間，同時(shí)染色效果明顯，可以很清楚的看出染色的效果，以及標(biāo)本中骨骼的形狀，節(jié)省了工作人員的時(shí)間，操作簡單、方便。
[0025]該方法中，由于染色劑的改變，同時(shí)改變了該骨骼的染色過程，由現(xiàn)有的一次性染色轉(zhuǎn)化為層次性的染色，首先在軟骨染色液中進(jìn)行染色，然后在硬骨染色液中進(jìn)行染色，這種兩步法的染色方法縮短了染色的時(shí)間，同時(shí)染色效果明顯，節(jié)省了工作人員的時(shí)間，操作方便。
[0026]進(jìn)一步的，步驟604中，每`升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL ;每升硬骨染色液中包括茜素紅
0.04g-0.06g、無水乙醇690mL-710mL和水290mL-310mL。阿利新藍(lán)為酸性物質(zhì)染料，染料與酸性基團(tuán)形成鹽鍵，利用染料的不同PH及不同電解質(zhì)濃度，可區(qū)分酸性黏液物質(zhì)的類別，可以對(duì)骨骼中的軟骨進(jìn)行染色，在酸性環(huán)境下，呈藍(lán)色，染色效果明顯，對(duì)于胚胎時(shí)期的骨骼，每升軟骨染色液中含有阿利新藍(lán)0.14g-0.16g已經(jīng)足以滿足染色效果，染料過多不僅產(chǎn)生染料的浪費(fèi)且染色顏色較深；染料過少，將導(dǎo)致染色不均勻，染色效果不明顯。冰醋酸主要用于提供酸性環(huán)境，操作簡單，無水乙醇主要為整個(gè)染料液提供的無毒環(huán)境，防止骨骼在浸泡過程中發(fā)霉、變質(zhì)甚至腐爛。茜素紅作為一種染色溶質(zhì)，主要對(duì)骨骼中的硬骨進(jìn)行染色，茜素紅的量為0.04g-0.06g已經(jīng)足以滿足染色效果，過多不僅產(chǎn)生染料的浪費(fèi)且染色顏色較深，染料過少，將導(dǎo)致染色不均勻，染色效果不明顯，無水乙醇則提供整個(gè)染料液的無毒環(huán)境，防止骨骼在浸泡過程中發(fā)霉、變質(zhì)甚至腐爛。
[0027]進(jìn)一步的，步驟605中，將染色后的標(biāo)本浸泡于2%的KOH溶液中8_12小時(shí)，再浸泡于1.5%的KOH溶液中12-24小時(shí)，最后浸泡于1%的KOH溶液中2_3天，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色。
[0028]進(jìn)一步的，步驟606中，1%的KOH溶液與丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分別為:1:4、2:3、3:2、4:1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為1_2天。[0029]實(shí)施例1:選用鴨胚胎骨骼來制作標(biāo)本，本發(fā)明提供了一種利用骨骼染色方法制備鴨胚胎骨骼標(biāo)本的方法，該方法包括以下步驟:
(1)將孵化14后的鴨種蛋中取出胚胎，剝?nèi)ケ砥ぃコ趋篮透骨粌?nèi)的脂肪，從肛門前開一小口從中掏出內(nèi)臟,并清冼干凈，處理完畢后要保持材料的形體完整；
(2)標(biāo)本固定:將處理后的鴨胚骨骼整理好姿勢后，浸泡于95%的酒精固定液中固定I天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2天，直至標(biāo)本脫水硬化；
(3)脫脂:將固定后的標(biāo)本浸泡于丙酮溶液內(nèi)脫脂2天，取出后用水持續(xù)沖洗8小時(shí)，直至標(biāo)本可以沉入水底為止；
(4)染色:將標(biāo)本浸泡與染色劑中進(jìn)行染色,染色劑包括軟骨染色液和硬骨染色液,將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中2天，取出后使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色，然后將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中2天；每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14 g、無水乙醇690mL、冰醋酸40mL和水270mL，每升硬骨染色液中包括茜素紅0.04g、無水乙醇690mL和水31OmL ；
(5)脫色:將染色后的標(biāo)本浸泡于2%的KOH溶液中8小時(shí)，再浸泡于1.5%的KOH溶液中12小時(shí)，最后浸泡于1%的KOH溶液中2天，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色；
(6)將脫色后的標(biāo)本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液與丙三醇的梯度溶液中，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最終將標(biāo)本置于純甘油中進(jìn)行密封保存；1%的KOH溶液與丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分別為:1:4、2:3、3:2、4:1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為I天。
[0030]實(shí)施例2:選用鴨胚胎骨骼來制作標(biāo)本，本發(fā)明提供了一種利用骨骼染色方法制備鴨胚胎骨骼標(biāo)本的方法，該方法包括以下步驟:
(1)將孵化21天后的鴨種蛋中取出胚胎，剝?nèi)ケ砥?，去除骨骼和腹腔?nèi)的脂肪，從肛門前開一小口從中掏出內(nèi)臟，并清洗干凈，處理完畢后要保持材料的形體完整；
(2)標(biāo)本固定:將處理后的鴨胚骨骼整理好姿勢后，浸泡于95%的酒精固定液中固定I天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2.5天，直至標(biāo)本脫水硬化；
(3)脫脂:將固定后的標(biāo)本浸泡于丙酮溶液內(nèi)脫脂2.5天，取出后用水持續(xù)沖洗12小時(shí)，直至標(biāo)本可以沉入水底為止；
(4)染色:將標(biāo)本浸泡與染色劑中進(jìn)行染色,染色劑包括軟骨染色液和硬骨染色液,將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中2.5天，取出后使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色，然后將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中2.5天；每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.15 g、無水乙醇700mL、冰醋酸50mL和水250mL，每升硬骨染色液中包括茜素紅0.05g、無水乙醇700mL 和水 300mL ；
(5)脫色:將染色后的標(biāo)本浸泡于2%的KOH溶液中10小時(shí)，再浸泡于1.5%的KOH溶液中18小時(shí)，最后浸泡于1%的KOH溶液中2.5天，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色；
(6)將脫色后的標(biāo)本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液與丙三醇的梯度溶液中，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最終將標(biāo)本置于純甘油中進(jìn)行密封保存；1%的KOH溶液與丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分別為:1:4、2:3、3:2、4:1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為1.5天。
[0031]實(shí)施例3:選用鴨胚胎骨骼來制作標(biāo)本，本發(fā)明提供了一種利用骨骼染色方法制備鴨胚胎骨骼標(biāo)本的方法，該方法包括以下步驟:
(1)將孵化25天后的鴨種蛋中取出胚胎，剝?nèi)ケ砥?，去除骨骼和腹腔?nèi)的脂肪，從肛門前開一小口從中掏出內(nèi)臟，并清洗干凈，處理完畢后要保持材料的形體完整；
(2)標(biāo)本固定:將處理后的鴨胚骨骼整理好姿勢后，浸泡于95%的酒精固定液中固定I天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定3天，直至標(biāo)本脫水硬化；
(3)脫脂:將固定后的標(biāo)本浸泡于丙酮溶液內(nèi)脫脂3天，取出后用水持續(xù)沖洗16小時(shí)，直至標(biāo)本可以沉入水底為止；
(4)染色:將標(biāo)本浸泡與染色劑中進(jìn)行染色,染色劑包括軟骨染色液和硬骨染色液,將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中3天，取出后使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色，然后將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中3天；每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.16g、無水乙醇710mL、冰醋酸60mL和水230mL，每升硬骨染色液中包括茜素紅0.06g、無水乙醇710mL和水290mL ；
(5)脫色:將染色后的標(biāo)本浸泡于2%的KOH溶液中12小時(shí)，再浸泡于1.5%的KOH溶液中24小時(shí)，最后浸泡于1%的KOH溶液中3天，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色；
(6)將脫色后的標(biāo)本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液與丙三醇的梯度溶液中，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最終將標(biāo)本置于純甘油中進(jìn)行密封保存；1%的KOH溶液與丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分別為:1:4、2:3、3:2、4:1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為2天。
[0032]由上述實(shí)施例可 知，本方法可適用于任何不同時(shí)期(胚胎孵化天數(shù))的胚胎骨骼染色，尤其適用于小型的動(dòng)物骨骼標(biāo)本，克服了現(xiàn)有技術(shù)只能適用于大型動(dòng)物的骨骼標(biāo)本制作的缺陷，應(yīng)用范圍廣泛，染色效果明顯，肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色，便于觀察；另外利用這種骨骼染色方法制作骨骼的標(biāo)本，制作簡單，制作成本低，制作周期短且效果好，可使骨骼的骨化部分清晰的顯示，能滿足醫(yī)學(xué)、法醫(yī)及科研工作的要求。
[0033]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種軟骨染色液，其特征在于:該染色液的pH范圍為5-7,且每升染色液中至少含有0.14g的阿利新藍(lán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的軟骨染色液，其特征在于:該染色液中還包括無水乙醇、冰醋酸和水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的軟骨染色液，其特征在于:每升該染色液中包括阿利新藍(lán)為0.14g-0.16g、無水乙醇 690mL-710mL、冰醋酸 40mL_60mL 和水 230mL_270mL。
4.一種骨骼染色方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: 401:染色劑的制備:染色劑包括軟骨染色液和硬骨染色液,軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)、無水乙醇、冰醋酸和水，硬骨染色液中包括菌素紅、無水乙醇和水； 402:經(jīng)過脫脂后的骨骼浸泡于軟骨染色液中染色2-3天； 403:將骨骼由軟骨染色液中取出后，使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色； 404:清洗后的骨骼浸泡在硬骨染色液中染色2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的骨骼染色方法，其特征在于:步驟401中，每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL_60mL和水230mL_270mL ；每升硬骨染色液中包括茜素紅0.04g-0.06g、無水乙醇690mL-710mL和水290mL _310mL。
6.一種利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: 601:取動(dòng)物胚胎并剝?nèi)ケ砥?，去除骨骼和腹腔?nèi)的脂肪，并清洗干凈； 602:標(biāo)本固定:將處理后的骨骼整理好姿勢后，浸泡于95%的酒精固定液中固定I天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2-3天，直至標(biāo)本脫水硬化； 603:脫脂:將固定后的標(biāo)本浸泡于丙酮溶液內(nèi)脫脂2-3天，取出后用水持續(xù)沖洗8-16小時(shí)，直至標(biāo)本可以沉入水底為止； 604:染色:將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中2-3天,取出后使用70%的酒精溶液反復(fù)進(jìn)行清洗，直至沖洗液顏色無色，然后將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼標(biāo)本； 605:脫色:將染色后的標(biāo)本依次浸泡于不同濃度的KOH溶液中，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色； 606:將脫色后的標(biāo)本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液與丙三醇的梯度溶液中，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最終將標(biāo)本置于純甘油中進(jìn)行密封保存。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，其特征在于:步驟604中，每升軟骨染色液中包括阿利新藍(lán)0.14g-0.16g、無水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL ;每升硬骨染色液中包括茜素紅0.04g-0.06g、無水乙醇690mL-71OmL 和水 290mL-310mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，其特征在于:步驟605中，將染色后的標(biāo)本浸泡于2%的KOH溶液中8-12小時(shí)，再浸泡于1.5%的KOH溶液中12-24小時(shí)，最后浸泡于1%的KOH溶液中2-3天，直至肌肉顏色變淺，骨組織變?yōu)榧t色。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用骨骼染色方法制備胚胎骨骼標(biāo)本的方法，其特征在于:步驟606中，1%的KOH溶液與丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分別為:1:4、2:3、3:2、4:1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時(shí)間為1-2天。
【文檔編號(hào)】C09B67/26GK103525119SQ201310505973
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】李慧芳, 宋遲, 宋衛(wèi)濤, 徐文娟, 單艷菊, 朱文奇, 束婧婷, 胡艷, 朱春紅, 劉宏祥, 姬改革, 陶志云, 章雙杰 申請人:江蘇省家禽科學(xué)研究所