一種不對稱菁染料化合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種不對稱菁染料化合物(I)，及其作為淬滅劑的應(yīng)用。本發(fā)明提供的不對稱菁染料的熒光淬滅劑化合物，可有效淬滅ROX通道的熒光，同時(shí)可以對穩(wěn)定DNA雙鏈，使PCR過程中解鏈溫度增加2～3℃，不但可以應(yīng)用于常規(guī)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法，而且可以有效地使用在針對單核苷酸多態(tài)性分析領(lǐng)域。
【專利說明】一種不對稱菁染料化合物及其應(yīng)用 (一）

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種不對稱菁染料化合物，及其作為熒光淬滅劑尤其是R0X通道熒光 淬滅劑的應(yīng)用。 (二）

【背景技術(shù)】
[0002] 核酸雜交技術(shù)是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一，可以用來對遺傳疾病進(jìn)行診斷，人 體鑒定，微生物鑒定，親子鑒定，近年來正逐漸用于病毒的特異，敏感和快速診斷。
[0003] 核酸雜交技術(shù)一個很重要的方面是對雜交的探測，一個經(jīng)常使用的工具是熒光寡 核苷酸探針，一種特別有用的熒光探針類型是自淬滅探針，此探針包括了報(bào)告染料和淬滅 染料，二者之間通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET)過程發(fā)生作用。盡管使用該基序的不同探針 的設(shè)計(jì)可能在細(xì)節(jié)上存在差異，F(xiàn)RET探針含有連接到寡核苷酸上的熒光團(tuán)和淬滅劑。
[0004] 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)通過檢測PCR產(chǎn)物中熒光信號強(qiáng)度來達(dá)到定量的目的，該 技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了 PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效 解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前已在動植物基因工程，微生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中 得到廣泛應(yīng)用。
[0005] 熒光染料廣泛用于生物學(xué)研究和診斷，熒光染料優(yōu)于常規(guī)的放射性材料，因?yàn)闊?光染料通常具有足夠的檢測靈敏度，廉價(jià)并且無毒，具有可區(qū)分顏色范圍的各種熒光團(tuán)使 得能平行檢測多種生物學(xué)靶標(biāo)的多重實(shí)驗(yàn)更加可行，在體外和體內(nèi)描述不同生物學(xué)靶標(biāo)之 間在空間和時(shí)間上的關(guān)系常要求能平行顯示多個靶標(biāo)。此外，大量熒光染料為進(jìn)行高通量 和自動化試驗(yàn)打開了新的通道。
[0006] R0X熒光染料現(xiàn)有技術(shù)中一般用于調(diào)整PCR加樣誤差所引起的PCR管與管之間的 差異，目前還未有R0X通道淬滅劑被廣泛使用。 (三）


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供新的淬滅劑，其具有低背景信號和/或高淬滅功效。本發(fā)明 提供一種不對稱菁染料的熒光淬滅劑化合物，可有效淬滅R0X的熒光。
[0008] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0009] -種不對稱菁染料化合物，其結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種不對稱菁染料化合物，其結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
式⑴中： 札為-Η、-N02、-0H或C1?C4烷基； R2為-H、C1?C4烷基、苯基或鹵素取代苯基； R3、R4為-H、C1?C4烷基或活性基團(tuán)，并且R3、R4中至少一個為活性基團(tuán)。
2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述活性基團(tuán)為下列之一：羧酸，羧酸的 丁二酰亞胺酯，肼，胺，馬來酰亞胺，亞磷酰胺。
3. 如權(quán)利要求1所述的不對稱菁染料化合物，其特征在于所述化合物為下列之一：
4. 權(quán)利要求1所述的不對稱菁染料化合物作為熒光淬滅劑的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述淬滅劑為ROX通道淬滅劑。
【文檔編號】C09B23/06GK104059376SQ201410311061
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年7月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月1日
【發(fā)明者】方維佳, 鄭怡 申請人:浙江大學(xué)