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耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針及其合成方法與應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12583591閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一類耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針,其特征在于,所述熒光探針的結(jié)構(gòu)通式為:

式中:

X為碳原子或硫原子;當(dāng)X為CH時(shí),R1為甲基,能夠?yàn)镽或S構(gòu)型;或者X為CH2或S;

染料(dye)為氟硼二吡咯(BODIPY)、萘酰亞胺、香豆素、熒光素或羅丹明的任意一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針,其特征在于,所述氟硼二吡咯(BODIPY)的通式結(jié)構(gòu)為:

式中:

R2、R3、R4、R5、R6獨(dú)自選自氫、甲基、乙基;

R7、R8、R9、R10和R11獨(dú)自選自氫、甲基、乙基、鹵素、烷氧基、羥基、羧基、磺酸基、氰基、醛基、酯基或聚乙二醇基;其中的含酸基團(tuán),如羧基、磺酸基,包括其鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽類。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針,其特征在于,含有氟硼二吡咯通式結(jié)構(gòu)中熒光探針的優(yōu)先結(jié)構(gòu)(CVB-1)為:

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針,其特征在于,所述優(yōu)先熒光探針能與生物標(biāo)記物碳青霉烯酶選擇性識(shí)別,從而起到檢測(cè)碳青霉烯酶的作用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針,其特征在于,所述萘酰亞胺的通式結(jié)構(gòu)為:

式中:

R選自1-6碳的烷基、飽和羧基、飽和酯基或聚乙二醇基。

6.一類耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針,其特征在于,所述熒光探針是在培南類抗生素母核的3-位引入雙鍵后,再與氟硼二吡咯(BODIPY)的2-位相連得到熒光探針,在碳青霉烯酶的作用下使β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán),使整個(gè)熒光探針發(fā)生一定的結(jié)構(gòu)變化,從而產(chǎn)生光學(xué)性質(zhì)的變化,使所述熒光探針具有用于檢測(cè)青霉烯酶及其耐藥菌的性質(zhì),其檢測(cè)原理表示為:

7.一種耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針的合成方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)化合物3的制備

將將化合物1、化合物2置于反應(yīng)瓶中,加入N,N-二甲基甲酰胺(DMF)及三乙胺(TEA),將所得混合物經(jīng)冷凍-真空-溶解三個(gè)循環(huán)脫氣后,加入醋酸鈀(PdOAc2)和三(鄰甲基苯基)膦(P(o-Tol)3,再脫氣兩次;

將反應(yīng)體系在氮?dú)夥諊?0℃反應(yīng)16小時(shí),冷卻后,加入乙酸乙酯稀釋反應(yīng)體系,將乙酸乙酯相用水洗,再用飽和食鹽水洗,用無水硫酸鈉干燥、濃縮;

將所得混合物用石油醚與乙酸乙酯作為流動(dòng)相經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到化合物3;

(2)化合物4的制備

將步驟(1)得到的化合物3溶解于N-甲基吡咯烷酮(NMP)與N,N-二甲基甲酰胺的混合液中,N-甲基吡咯烷酮與N,N-二甲基甲酰胺的體積比為1:3;

加入二氟化氫銨(NH4·HF2),在室溫下反應(yīng);

反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯稀釋反應(yīng)體系,將乙酸乙酯相用水洗,再用飽和食鹽水洗,用無水硫酸鈉干燥、濃縮;

將所得混合物用石油醚與乙酸乙酯作為流動(dòng)相經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到化合物4;

(3)熒光探針(CVB-1)的制備

將步驟(2)得到的化合物4溶解于四氫呋喃(THF)中,加入pH為6.0的0.35M磷酸鹽緩沖液(PB)以及活化鋅粉(Zn),在20℃下反應(yīng)1小時(shí);

將反應(yīng)液過濾,用色譜乙腈洗滌,用反相C18制備柱純化,冷凍干燥,得到黑紫色的化合物,即所述的熒光探針(CVB-1);

所述熒光探針(CVB-1)的合成路徑為:

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的合成方法,其特征在于,所述化合物1為關(guān)鍵中間體,以此為衍生物能夠合成其他的熒光探針化合物。

9.將所述耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針制成試紙、試劑盒或者檢測(cè)芯片在檢測(cè)碳青霉烯酶和含有碳青霉烯耐藥菌中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述應(yīng)用包括以下步驟:

(1)將耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針與待測(cè)樣品在一定條件下混合,形成具有光學(xué)性質(zhì)的化合物;

(2)測(cè)量具有光學(xué)性質(zhì)的化合物的光學(xué)信號(hào)變化,包括熒光、紫外吸收或顏色的變化,從而確定待測(cè)樣品中碳青霉烯酶或者含有碳青霉烯耐藥菌的含量或濃度。

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