本發(fā)明涉及一種新的活細(xì)胞標(biāo)記染料，及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

光學(xué)成像在生物醫(yī)學(xué)研究中起著重要的作用，尤其在生物學(xué)研究、臨床前診斷與篩查以及圖像引導(dǎo)治療危及生命疾病方面具有重要的作用。光致發(fā)光光譜成像由于具有成像快速穩(wěn)定、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分辨率高、靈敏度高以及生物毒性低的特點，使得其在生物成像的應(yīng)用方面有巨大的優(yōu)勢。如今，光致發(fā)光材料已經(jīng)被廣泛報道，例如綠色熒光蛋白(gfp)、有機(jī)染料、量子點(qd)、稀土發(fā)光納米粒子。

然而，綠色熒光蛋白(gfp)存在諸如易被蛋白水解酶水解以及與自發(fā)熒光光譜重疊等內(nèi)在缺陷，使得它很難被用于體內(nèi)細(xì)胞追蹤實驗。此外，綠色熒光蛋白(gfp)還有一個激發(fā)光光譜窄而發(fā)射光光譜寬的關(guān)鍵缺陷，這使得它不能通過單一的發(fā)射光來同時激發(fā)多種熒光蛋白。更糟糕的是，包括羅丹明、生物素以及4‘,6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)在內(nèi)的這些商品化的有機(jī)染料同樣也有嚴(yán)重的缺陷，這些染料在每平方1千瓦的共振照射下幾秒就會發(fā)生快速且不可逆的淬滅或光漂白現(xiàn)象。而量子點在一定程度上可以克服光漂白的問題，它通常可以反應(yīng)細(xì)胞的毒性同時顯示單粒子能級的閃爍。因此，克服了目前光致發(fā)光材料中所存在的缺陷，可用于臨床應(yīng)用的理想化新型pl材料應(yīng)具有以下特點：(1)連續(xù)且寬的發(fā)射光譜；(2)高耐光漂白性；(3)良好的生物相容性；(4)較高的亞細(xì)胞分變率。

幸運的是，能夠發(fā)射更亮熒光和產(chǎn)生較少光漂白的稀土發(fā)光納米粒子可以用來作為光致發(fā)光成像研究的潛在候選材料。具體地來講，由于稀土納米粒子中的每個單粒子中存在大量熒光發(fā)射器，使得其量子閃爍點會完全消失。并且稀土納米粒子在光照下所發(fā)出的冷光是很穩(wěn)定的，這使得稀土納米粒子可以被持續(xù)觀察任意長的時間。此外，具有不同形態(tài)、尺寸以及相位控制的發(fā)光稀土納米粒子已經(jīng)可以被合成制備，并且這些粒子的疏水表面通常會接受親水性修飾，這一修飾過程對于粒子的生物相容性以及在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用非常重要。然而，目前大多數(shù)用于發(fā)光稀土納米粒子表面修飾的方法都有兩個重大的缺陷：納米粒子的反應(yīng)性和納米粒子易團(tuán)聚。更糟糕的是，雖然傳統(tǒng)的稀土熒光材料具有較高的生物組織成像對比度，但是它們只有一個熒光發(fā)射峰，并且難以提供亞細(xì)胞級別的分辨率。通常，發(fā)光稀土納米粒子具有兩個優(yōu)點：寬而連續(xù)的激發(fā)光譜，以及突出的耐光漂白性，而對一些地方進(jìn)行改進(jìn)之后又賦予其更好的生物相容性和亞細(xì)胞級別的分辨率。

因此，有必要設(shè)計一種新的稀土染料及制備方法和應(yīng)用，以克服上述缺陷。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種稀土染料及制備方法和應(yīng)用，具有同時標(biāo)記出活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的功能。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明提供一種稀土染料，該稀土染料的化學(xué)組成為laof:cem,tbn，其中，1≤m≤5，0.5≤n≤1.5。

較佳的，該稀土染料的平均粒徑小于等于10nm。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明還提供上述稀土染料的制備方法，包括如下步驟：

a.將氟鑭化合物，氟鈰化合物和氟鋱化合物按2：2:1加入到油氨溶液中，加熱到230～300攝氏度，反應(yīng)20分鐘～1小時,反應(yīng)產(chǎn)物用乙醚沉淀后，用丙酮溶液洗滌。

b.先將10～100mg的laof:ce,tb納米晶體重新分散在甲苯中備用,然后在三角燒瓶中將0.1-1gpaa溶解在2～20ml丙三醇溶液中，加熱至110攝氏度后，加入laof:ce,tb納米晶體甲苯溶液，在持續(xù)通入氮氣的條件下150～450轉(zhuǎn)每分針磁力攪拌5-15分鐘，加熱至240攝氏度并保溫1～3h，直至溶液變澄清，反應(yīng)完成后，冷卻至室溫后，通過12000rpm離心30分鐘，并用水-乙醇溶液(1:1)洗滌來獲得laof:ce,tb@paa納米晶體；

c.將所制備的laof:ce,tb@paa納米晶體按0.5～5mg/ml濃度重新分散在2-嗎啉代乙磺酸(mes)緩沖鹽溶液中，ph6.0，加入2mm濃度的edc和5mm濃度nhs，使paa上的羧酸基團(tuán)活化為琥珀酰亞胺酯，半小時后加入精氨酸，至終濃度為5～50mg/ml，調(diào)ph到7.0，反應(yīng)12小時。在nhs/edc反應(yīng)之后，通過12000rpm離心和磷酸鹽緩沖液洗滌收集laof:ce,tb@paa@arg納米晶體。

較佳的，在步驟a中，加熱到270攝氏度。

較佳的，在步驟b中，先將30mg的laof:ce,tb納米晶體重新分散在甲苯中備用,然后在三角燒瓶中將0.5gpaa溶解在10ml丙三醇溶液中。

較佳的，在步驟b中，在持續(xù)通入氮氣的條件下300轉(zhuǎn)每分針磁力攪拌10分鐘。

較佳的，在步驟b中，加熱至240攝氏度并保溫1小時。

較佳的，在步驟c中，將所制備的laof:ce,tb@paa納米晶體按1mg/ml濃度重新分散在2-嗎啉代乙磺酸(mes)緩沖鹽溶液中。

較佳的，在步驟c中，半小時后加入精氨酸，至終濃度為10mg/ml。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明還提供上述稀土染料的用途，包括如下步驟：將制得的laof:ce,tb@paa@arg納米晶體按照5μg/ml～25μg/ml的濃度混入細(xì)胞培養(yǎng)液，細(xì)胞培養(yǎng)12～48小時后，利用共聚焦顯微鏡或者熒光顯微鏡觀察被熒光標(biāo)記的活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的laof:ce,tb@paa@arg納米顆粒，由于具有很好的水溶性與生物相容性，又具有很好的雙光熒光特性，因此，可以進(jìn)行活細(xì)胞形態(tài)標(biāo)記。更由于其獨特的紅綠雙光熒光特性，可以同時標(biāo)記出細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。同時，相對的傳統(tǒng)細(xì)胞標(biāo)記染料，本發(fā)明具有光穩(wěn)定性強(qiáng)，完全沒有熒光漂白和熒光衰減的問題。

附圖說明

圖1.精氨酸功能化laof:ce,tb納米晶體的合成及其生物成像的示意圖；

圖2.精氨酸功能化納米晶體的形態(tài)和光譜表征圖；

圖中：(a)laof:ce,tb@paa@arg的hrtem圖像中相應(yīng)的tem圖像和流體動力學(xué)尺寸(內(nèi)部圖)；(b)和(c)laof:ce,tb@paa@arg的hrtem圖像；(d)laof:ce,tb@paa@arg的ft-ir光譜中相應(yīng)的fft模型；(e)laof:ce,tb@paa@arg的ft-ir光譜；(f)laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@paa的紫外吸收光譜；

圖3.用于細(xì)胞成像的精氨酸功能化納米晶體的熒光性能圖；

圖中：(a)laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@paa的熒光光譜；(b)laof:ce,tb@paa@arg的白光圖片和熒光圖片；(c)所制備的laof:ce,tb@paa@arg在hepg2癌細(xì)胞成像中的應(yīng)用；37℃下用laof:ce,tb@paa@arg(25mg/ml)孵育1小時后進(jìn)行hepg2細(xì)胞的clsm成像；細(xì)胞核用hoechst染成藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)染為紅色，整個細(xì)胞在激發(fā)光照射下染為綠色；細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)通過合并上述兩個通道圖像分別清晰地成像為綠色和黃色；

圖4.laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@paa對癌細(xì)胞和正常細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性檢測圖；在用不同劑量的laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@paa對hepg2(a)和l929(b)細(xì)胞孵育24小時后，使用標(biāo)準(zhǔn)阿爾瑪藍(lán)測定法(n＝5)來檢測細(xì)胞活力；

圖5.具有或不具有精氨酸修飾的合成納米晶體在癌細(xì)胞成像圖；

(a)在37℃下分別用laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@pa(25mg/ml)溫育hepg2細(xì)胞4小時，然后對hepg2進(jìn)行clsm成像；通過合并綠色熒光和紅色熒光，分別使細(xì)胞核呈綠色，而細(xì)胞質(zhì)呈紅色；并且將細(xì)胞核用hoechst染料染成藍(lán)色來用于比較。(b)使用imagej軟件來進(jìn)行熒光定量分析；

圖6.合成的光致發(fā)光納米晶體在細(xì)胞成像應(yīng)用中的光穩(wěn)定性圖；

在8小時白熾燈照射前后，用25mg/mllaof:ce,tb@paa@arg和鈣黃綠素am孵育hepg2細(xì)胞，進(jìn)行clsm成像；

圖7.laof:ce,tb@paa@arg在纖維化細(xì)胞成像中的應(yīng)用圖。

具體實施方式

為使對本發(fā)明的目的、構(gòu)造、特征、及其功能有進(jìn)一步的了解，茲配合實施例詳細(xì)說明如下。

在說明書及權(quán)利要求書當(dāng)中使用了某些詞匯來指稱特定的元件。所屬領(lǐng)域中具有通常知識者應(yīng)可理解，制造商可能會用不同的名詞來稱呼同一個元件。本說明書及權(quán)利要求書并不以名稱的差異來作為區(qū)分元件的方式，而是以元件在功能上的差異來作為區(qū)分的準(zhǔn)則。在通篇說明書及權(quán)利要求當(dāng)中所提及的「包括」為開放式的用語，故應(yīng)解釋成「包括但不限定于」。

本發(fā)明稀土染料的組成及制備方法

本發(fā)明提供一種稀土染料，該稀土染料的化學(xué)組成為laof:cem,tbn，其中，1≤m≤5，0.5≤n≤1.5。較佳的，m為3，n為1。

如圖1所示，油胺包覆的45％鈰和15％鋱共摻雜氟氧化鑭納米晶體是由三氟乙酸酯前體通過高沸點溶劑法合成的。為了提升晶體疏水表面的親水性，將油胺包覆的納米晶體與聚丙烯酸(paa)反應(yīng)，通過強(qiáng)配體交換反應(yīng)形成paa包覆的laof：45％ce，15％tb納米晶體(laof:ce,tb@paa)。為了增加滲透過膜能力和納米晶體的生物相容性，通過edc/nhs化學(xué)反應(yīng)將精氨酸綴合到納米晶體(laof:ce,tb@paa@arg)的表面。同時為了共價修飾納米晶體表面上的paa中的所有羧基，而向反應(yīng)體系中加入過量的精氨酸。因此，納米晶體上的精氨酸的數(shù)量可以被認(rèn)為等于paa羧基的數(shù)目，其在30mg納米晶體上大約有0.6mmol的量。

下面將結(jié)合具體的實施例，對本發(fā)明制備稀土染料的方法進(jìn)行詳細(xì)描述。

a.將三氟乙酸鑭，三氟乙酸鈰和三氟乙酸鋱按2:2:1的比例加入到油氨溶液中，加熱到230～300(例如230、270、300)攝氏度，反應(yīng)20分鐘～1小時，例如20分鐘，半小時或者1h，反應(yīng)產(chǎn)物用乙醚沉淀后，用丙酮溶液洗滌。

b.先將10～100mg(例如10mg、30mg、100mg)的laof:ce,tb納米晶體重新分散在甲苯中備用,然后在三角燒瓶中將0.1～1g(例如，0.1g，0.5g，1g)paa溶解在2～20ml(例如2ml，10ml，20ml)丙三醇溶液中，加熱至110攝氏度后，加入laof:ce,tb納米晶體甲苯溶液，在持續(xù)通入氮氣的條件下150～450(例如150、300、450)轉(zhuǎn)每分針磁力攪拌5～15(例如5、10、15)分鐘，再整個系統(tǒng)加熱至240攝氏度并保溫一定1～3h(例如0.5h、1h、1.5h)，直至溶液變澄清，反應(yīng)完成后，冷卻至室溫后，通過12000rpm離心30分鐘，并用水-乙醇溶液(1:1)洗滌來獲得laof:ce,tb@paa納米晶體；

c.將所制備的laof:ce,tb@paa納米晶體按0.5～5mg/ml(例如，0.5mg/ml、1mg/ml、5mg/ml)濃度重新分散在2-嗎啉代乙磺酸(mes)緩沖鹽溶液中，ph6.0，加入2mm濃度的edc和5mm濃度nhs，使paa上的羧酸基團(tuán)活化為琥珀酰亞胺酯，半小時后加入精氨酸，至終濃度為5～50(例如5、10、20、30、40、50)mg/ml，調(diào)ph到7.0，反應(yīng)12小時。在nhs/edc反應(yīng)之后，通過12000rpm離心和磷酸鹽緩沖液洗滌收集laof:ce,tb@paa@arg納米晶體。

通過透射電子顯微鏡(tem)，動態(tài)光散射(dls)和高分辨率透射電子顯微鏡(hrtem)來進(jìn)一步測定所制備的納米晶體的形態(tài)，尺寸和物理結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡圖像結(jié)果顯示laof:ce,tb@paa@arg保持著單分散納米結(jié)構(gòu)，并且具有約小于10nm的均勻直徑(圖2a中所示為小于5nm)。由于官能化覆蓋劑(paa和精氨酸)的厚度都很薄，所以納米晶體的水動力學(xué)尺寸僅為5.7nm(圖2a)。并且超小尺寸的功能化納米晶體可能有益于其在生物成像和細(xì)胞標(biāo)記中的應(yīng)用。此外，高分辨率透射電子顯微鏡圖像顯示這些精氨酸官能化的納米晶體保留著球形形態(tài)(圖2b)并能顯示出高質(zhì)量的晶體結(jié)構(gòu)(圖2c)。并且圖2d中的快速傅里葉變換(fft)模型證實所獲得的laof:ce,tb@paa@arg是單晶體。所有這些結(jié)果表明已經(jīng)成功地合成具有突出單分散性的超小納米晶體。

此外，通過傅里葉變換紅外(ftir)光譜(圖2e)可以表征生長納米晶體的表面官能團(tuán)。在paa包覆后，位于1603和1715cm^-1的兩個尖帶分別與c-o和c＝o基團(tuán)的伸縮振動相關(guān)，并且在2850-3485cm^-1范圍內(nèi)的寬吸收則歸因于o-h振動，這表明生長納米晶體表面覆蓋有-cooh基團(tuán)。至于laof：ce，tb@paa@arg的ft-ir光譜，在1640和1400cm^-1處、與conh振動相關(guān)的峰表明精氨酸成功通過酰胺鍵進(jìn)行修飾。并且通過紫外吸收光譜(圖2f)再次驗證了該結(jié)果，即紫外吸收光譜中260和325nm處的特征吸收峰證明在nhs/edc化學(xué)反應(yīng)之后形成了酰胺鍵。

需要特別說明的是：如圖(3a)所示，laof:ce,tb@paa和laof:ce,tb@paa@arg呈現(xiàn)出一個窄雙熒光光譜：在545nm處的綠色熒光發(fā)射峰和在585nm和620nm處的紅色熒光發(fā)射峰。此外，laof:ce,tb@paa@arg的量子產(chǎn)率(qys)為40％，要遠(yuǎn)高于laof:ce,tb@paa的16％的量子產(chǎn)率，并且很可能是因為精氨酸修飾大大增強(qiáng)了晶體在水中的單分散性。值得注意的是，受益于精氨酸帶來的更好的單分散性和來自鑭的更高的電子傳輸能力，其40％的量子產(chǎn)率也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過我們以前gdof納米晶體所含有的16％的量子產(chǎn)率?？偠灾?，與通常具有1％～10％量子產(chǎn)率的細(xì)胞成像量子點相比，laof:ce,tb@paa@arg表現(xiàn)出替代現(xiàn)有細(xì)胞染料的巨大性能優(yōu)勢。

上述laof:ce,tb@paa@arg納米晶體(稀土染料)的應(yīng)用如下：

將制得的laof:ce,tb@paa@arg納米晶體按照5μg/ml-25μg/ml的濃度混入細(xì)胞培養(yǎng)液，細(xì)胞培養(yǎng)12-48小時后，利用共聚焦顯微鏡或者熒光顯微鏡觀察被熒光標(biāo)記的活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。

在ph7.4的類似生理環(huán)境的磷酸鹽緩沖鹽(pbs)溶液中，laof:ce,tb@paa@arg可以良好分散，并在254nm激發(fā)下可以發(fā)射出強(qiáng)黃綠色熒光(圖3b)。在細(xì)胞成像方面(hepg2，一種人肝癌細(xì)胞)，laof：ce，tb@paa@arg可迅速穿透細(xì)胞基質(zhì)，結(jié)合密集區(qū)域，例如核仁，并在24小時孵育后將相應(yīng)區(qū)域染上色。而在相同的激發(fā)波長下，僅納米晶體(綠色通道和紅色通道，圖3c)可以發(fā)射具有不同強(qiáng)度的兩種不同的熒光(綠色和紅色)。合并來自綠色通道和紅色通道的圖像，laof:ce,tb@paa@arg可以清晰地將核染成綠色同時將細(xì)胞質(zhì)染成橙色(合并(紅/綠)，圖3c)。并且核的位置可以通過hoechst染色(合并(綠/紅/hoechst)，圖3c)來確認(rèn)。

為了對活細(xì)胞進(jìn)行染色成像，細(xì)胞毒性是細(xì)胞化學(xué)染色法中的最大障礙。因此，擁有優(yōu)異熒光性能的laof:ce,tb@paa@arg進(jìn)一步迫使我們研究其生物相容性。基于阿爾瑪藍(lán)(thermofisherscientific)測定法，我們選擇具有不同劑量的laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@paa來測試它們在兩種細(xì)胞系(hepg2和l929)中的細(xì)胞毒性。如所預(yù)期的那樣，在圖4a中，沒有精氨酸修飾的laof:ce,tb@paa對hepg2細(xì)胞系生長抑制呈現(xiàn)劑量依賴性。與之形成鮮明對比的是，該細(xì)胞系對laof:ce,tb@paa@arg(圖4a)的處理有抗性，這表明精氨酸修飾顯著增加了納米晶體的生物相容性。并且在正常體細(xì)胞系l929中也發(fā)現(xiàn)了相似的結(jié)果，其中l(wèi)aof:ce,tb@paa@arg在200μg/ml到所使用的最高濃度之間都顯示出對l929細(xì)胞具有完全抑制作用。以上這些數(shù)據(jù)顯示了laof:ce,tb@paa@arg納米晶體的體外生物相容性是令人滿意的，表明它們在用于活細(xì)胞成像方面有巨大潛力。

為了研究laof:ce,tb@paa@arg和laof:ce,tb@paa的細(xì)胞成像性能，再次將hepg2細(xì)胞分別與25μg/ml的這兩種納米晶體孵育。在孵育24小時后，laof:ce,tb@paa@arg使細(xì)胞具有明亮的熒光，而通過laof:ce,tb@paa的成像是黯淡無光的(圖5a)。在定量熒光強(qiáng)度(圖5b)實驗中，laof:ce,tb@paa@arg的熒光強(qiáng)度要超過laof:ce,tb@paa至少5倍。值得注意的是，這一差距要比它們之間相差2.5倍的qy要大，推測是由于精氨酸的存在增加了細(xì)胞滲透性。在我們的設(shè)計中，精氨酸功能化納米晶體將通過類似于細(xì)胞穿透肽的作用方式，與細(xì)胞表面負(fù)電荷靜電結(jié)合，或類似于通過滲透和膜裂解活性來誘導(dǎo)內(nèi)吞和胞吞囊泡逃逸的方式來進(jìn)入細(xì)胞中。同時，精氨酸增加了我們的納米晶體與細(xì)胞外單層膜的結(jié)合并中和了陰離子脂質(zhì)的表面電荷，促進(jìn)跨膜電場的發(fā)展，所以精氨酸在細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙層中可以形成瞬時孔。因此，精氨酸修飾將會導(dǎo)致染料對于活細(xì)胞具有更高的滲透性，這有利于形成更高分辨率的細(xì)胞成像，并降低染料的使用成本。

如今，商品化有機(jī)染料被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究和臨床診斷，但染料的光漂白現(xiàn)象妨礙了其在需要長時間持續(xù)的細(xì)胞成像中的應(yīng)用。為了檢測laof:ce,tb@paa@arg的抗光漂白性，使用商業(yè)化的活細(xì)胞熒光染料calceinam作為參照來比較納米晶體的光漂白。正如所預(yù)料的那樣，laof:ce,tb@paa@arg顯示出更強(qiáng)的抗光漂白性。詳細(xì)地說，在用calceinam和納米晶體對細(xì)胞染色后立即觀察，發(fā)現(xiàn)這兩種物質(zhì)都能在細(xì)胞形態(tài)成像中發(fā)出明亮的熒光。在暴露于可見光(400-800nm)8小時后，來自細(xì)胞內(nèi)laof:ce,tb@paa@arg的綠色和紅色熒光信號幾乎完全保持其初始熒光強(qiáng)度(圖6)，甚至在更亮的熒光中具有更高分辨率的核與細(xì)胞質(zhì)圖像依然有此特點。與此形成鮮明對比的是，calceinam的熒光在相同的條件下幾乎消失不見。這些結(jié)果表明我們的功能化納米晶體可以用于活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的長時間成像。

通過laof:ce,tb@paa@arg對纖維化細(xì)胞成像來區(qū)分纖維化細(xì)胞與正常細(xì)胞本發(fā)明合成的laof:ce,tb@paa@arg具有同時對癌細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核成像的優(yōu)越能力，借助其可以快速簡便地區(qū)分細(xì)胞是否癌化。除了診斷癌癥之外，對于臨床醫(yī)生和研究者來講還存在另一個棘手的問題，即區(qū)分纖維化細(xì)胞與正常細(xì)胞。為了驗證laof:ce,tb@paa@arg是否具有解決這個問題的能力，使用人支氣管上皮細(xì)胞(beas-2b)細(xì)胞系作為纖維化的模型，同時用10ng/ml纖維化誘導(dǎo)劑tgf-β1處理。為了可視化觀察正常細(xì)胞和纖維化細(xì)胞之間的不同形態(tài)，將用纖維化誘導(dǎo)劑孵育的beas-2b細(xì)胞作為實驗組樣品，而不使用誘導(dǎo)劑的則作為對照。在通過laof:ce,tb@paa@arg成像后，細(xì)胞形態(tài)被清晰地成像。如圖7所示，對照組的細(xì)胞仍然保持著圓形或橢圓形輪廓的正常形狀。與之形成鮮明對比的是，大多數(shù)纖維化細(xì)胞是紡錘形，但有些細(xì)胞甚至呈現(xiàn)出類似星狀樣的形狀且伴隨著絲狀細(xì)胞質(zhì)外圍。受益于laof:ce,tb@paa@arg的優(yōu)異的細(xì)胞成像性能，可以清楚地觀察到這些細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，從而為診斷纖維化細(xì)胞帶來巨大的便利。

本發(fā)明提供的laof:ce,tb@paa@arg納米顆粒，由于具有很好的水溶性與生物相容性，又具有很好的雙光熒光特性，因此，可以進(jìn)行活細(xì)胞形態(tài)標(biāo)記。更由于其獨特的紅綠雙光熒光特性，可以同時標(biāo)記出細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。同時，相對的傳統(tǒng)細(xì)胞標(biāo)記染料，本發(fā)明具有光穩(wěn)定性強(qiáng)，完全沒有熒光漂白和熒光衰減的問題。

本發(fā)明已由上述相關(guān)實施例加以描述，然而上述實施例僅為實施本發(fā)明的范例。必需指出的是，已揭露的實施例并未限制本發(fā)明的范圍。相反地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)所作的更動與潤飾，均屬本發(fā)明的專利保護(hù)范圍。