本發(fā)明涉及土壤改良技術領域，具體涉及一種生物酵素土壤改良劑及其制備方法。

背景技術：

由于我國南北方氣候的差異，南方濕潤多雨，土壤多呈酸性，而北方干旱少雨，土壤多呈堿性。土壤偏(過)酸性或偏(過)堿性，都會不同程度地降低土壤養(yǎng)分的有效性，具體表現(xiàn)有以下五個方面：(1)土壤中磷的有效性明顯受酸堿性的影響，在ph值超過7.5或低于6時，磷酸和鈣或鐵、鋁形成遲效態(tài)，使有效性降低；鈣、鎂和鉀在酸性土壤中易代換也易淋失，鈣、鎂在強堿性土壤中溶解度低，有效性降低；硼、錳、銅等微量元素，在堿性土壤中有效性大大降低，而鉬、在強酸性土壤中與游離鐵、鋁生成的沉淀，降低有效性；(2)強酸土壤和強堿性土壤中氫和鈉較多，而鈣缺少，難以形成良好的土壤結構，不利于作物生長；(3)土壤微生物一般最適宜的ph值是6.5～7.5之間的中性范圍，過酸或過堿都嚴重地抑制土壤微生物的活動，從而影響氮素及其他養(yǎng)分的轉化和供應；(4)一般作物在中性或近中性土壤生長最適宜，甜菜、紫苜蓿、紅三葉不適宜酸性土；茶葉要求強酸性和酸性土，中性土壤不適宜生長；(5)土壤過酸容易產(chǎn)生游離態(tài)的al3+和有機酸，直接危害作物。堿性土壤中可溶鹽分達一定數(shù)量后，會直接影響作物的發(fā)芽和正常生長，含碳酸鈉較多的堿化土壤，對作物更有毒害作用。

現(xiàn)有的土壤改良劑效果單一，大多目的在于增加土壤的養(yǎng)分，鮮有涉及調節(jié)土壤酸堿性，沒有從本質上解決土壤問題，因此改良效果并不明顯。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對以上問題，提供了一種可調節(jié)土壤酸堿性的生物酵素土壤改良劑及其制備方法。

本發(fā)明的技術方案是：

一種生物酵素土壤改良劑，按質量份計包括以下組分：乳酸菌25～35份、固氮菌8～12份、放線菌8～12份、硅酸鹽細菌3～8份、枯草芽孢桿菌6～10份、白僵菌2～5份、綠僵菌2～5份、多粘類芽孢桿菌3～8份、木霉菌3～8份、酵母菌8～12份、光合菌3～8份以及生物酶0.7～1.1份，其中有效活菌濃度為100～200億/ml，

所述生物酶包括纖維素酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木聚糖酶、植酸酶、脂肪酶及葡萄糖異構酶。

一種生物酵素土壤改良劑的制備方法，包括如下步驟：

1)、菌株活化：選擇非致病性的乳酸菌、固氮菌、放線菌、硅酸鹽細菌、枯草芽孢桿菌、白僵菌、綠僵菌、多粘類芽孢桿菌、木霉菌、酵母菌和光合菌分別接種至各自的試管斜面培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～5天，培養(yǎng)箱溫度28～37℃，培養(yǎng)結束后放在4～8℃冷藏柜中保存待用；

2)、三角瓶培養(yǎng)基制備：按比例配制出各菌種相應的培養(yǎng)基，放入1000ml三角瓶中，每瓶裝600ml，利用培養(yǎng)基滅菌柜進行滅菌，滅菌溫度118～121℃，滅菌壓力95～115kp，滅菌結束后放入無菌室冷卻至常溫；

3)、一級培養(yǎng)：在無菌環(huán)境中將步驟1)得到的菌種分別接入步驟2)得到的相應的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度28～37℃，得到各菌種的一級培養(yǎng)液；

4)、二級培養(yǎng)：將各自的一級培養(yǎng)液作為種子液，重新接入各自的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度28～37℃，得到各菌種的二級培養(yǎng)液；

5)、擴大培養(yǎng)：

5.1)、好氧發(fā)酵：按比例將各菌種的二級培養(yǎng)液接入到擴大培養(yǎng)基中，二級培養(yǎng)液與擴大培養(yǎng)基的比例為1:9，然后放入發(fā)酵罐中，通入無菌空氣使溶解氧控制在7mg/l，每隔40分鐘開啟超聲波發(fā)生器3分鐘，超聲波頻率為42khz，攪拌發(fā)酵1.5～2.2小時；

5.2)厭氧發(fā)酵：取消無菌空氣的通入，密封超聲發(fā)酵34～35.5小時得生物酵素，超聲發(fā)酵的條件為每隔40分鐘開啟頻率為42khz的超聲波發(fā)生器3分鐘后關閉，得生物酵素；

6)、生物酶的制備：用0.1微米孔徑的超濾膜對步驟5)所得的生物酵素進行濃縮，再利用20khz超聲波對濃縮液進行生物破壁，提取生物酶，并制取酶制劑；

7)、將生物酵素和酶制劑按質量比100:1混合得成品。

所述步驟5)中的擴大培養(yǎng)基按質量份包括氨基酸態(tài)螯合劑10份、紅糖1份、蛋白胨0.1份和水78份。

所述步驟5)發(fā)酵過程中利用水循環(huán)冷熱交換系統(tǒng)控制發(fā)酵熱，使發(fā)酵溫度維持在37±1℃。

所述步驟6)酶制劑的制取方法為：在超聲波破壁液加入氯化鈉，氯化鈉濃度控制在0.14mol/l，然后利用轉速為1×104r/min的離心機濾除細胞碎片及細胞器，得到較純酶溶液，利用20nm超濾平板膜進一步濃縮，然后利用冷凍干燥機將酶濃縮液干燥，得到酶粉，最后加入惰性填料caco3，酶粉與填料比為1:10，標準化后即得酶制劑。

本發(fā)明的有益效果是：

(1)各種有益微生物菌群科學配比，同時改變傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵原料，使用新型的氨基酸態(tài)螯合劑，加速復合菌群的生長繁殖；同時在超聲波存在條件下，加強了對微量元素的螯合能力，極大增加利用率，相較于傳統(tǒng)的微生物制劑，具有活性高，各菌群之間協(xié)調作用強，在農(nóng)作物上使用后像給植物“喂奶”，可用于各種農(nóng)作物、蔬菜及瓜果、花卉等，植物生長迅速、葉面濃綠、花蕾增多、坐果率高、果實光滑，增產(chǎn)效果十分顯著，糧食作物增產(chǎn)10％，蔬菜及瓜果等可增產(chǎn)增值20％～30％，且沒有任何激素；

(2)生物酵素與生物酶同時作用，該生物酶是由生物酵素各組分菌種進行生物破壁，使其從活菌直接轉化為生物酶，更易為生物酵素各組分菌種吸收，具有專一性，與生物酵素共同使用，其作為胞外酶可快速促進微生物菌體對環(huán)境營養(yǎng)物質的吸收利用，在兩小時內生物酵素即可完全活化，極大加強微生物各種群之間的協(xié)同作用，使各有益菌群呈爆發(fā)式增長，短期內形成優(yōu)勢菌群，生物酵素功效提升數(shù)十倍，相較于傳統(tǒng)的微生物制劑功效可增強數(shù)百倍以上，使農(nóng)產(chǎn)品提早上市；

(3)調節(jié)土壤酸、堿性：利用固氮菌對在偏酸(ph值5.0)和偏堿(ph值8.0)的條件下，菌株均能保持較強的生長勢和較高的固氮酶活性，并能通過調節(jié)自身代謝適應環(huán)境的酸、堿變化，使土壤ph值快速趨近于中性；

(4)減少農(nóng)藥、化肥使用量：硅酸鹽細菌能溶解土壤中難溶性鉀及磷，且產(chǎn)生激素、氨基酸等物質，增強了土壤肥力，在作物生長過程中可有效減少化肥使用量40％以上，同時發(fā)明中涉及的白僵菌、綠僵菌、木霉菌等微生物菌群對土壤和作物中的病害菌群及有害蟲卵有強力的殺滅作用，大大減少農(nóng)藥的使用量；

(5)對重金屬污染及農(nóng)藥殘留均有降解作用：所涉及的酵母菌群可對土壤中的重金屬污染物進行生物解毒，枯草芽孢桿菌群可降解農(nóng)藥殘留，在超聲波條件下，其產(chǎn)生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質是普通菌群的3倍以上，可強力降解農(nóng)產(chǎn)品表面附著的農(nóng)藥殘留物質，生產(chǎn)出綠色無公害的農(nóng)產(chǎn)品，相較于普通的瓜果蔬菜，使用本發(fā)明的蔬菜瓜果，其農(nóng)藥殘留接近于零，真正生產(chǎn)出綠色有機農(nóng)產(chǎn)品。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的生產(chǎn)工藝流程圖。

具體實施方式

本發(fā)明中各組分具有以下作用：

(1)放線菌：全球70％殺菌劑由該菌提取，對土壤病害效果顯著，72小時對根結線蟲卵塊孵化抑制率達到82.3％，主要菌種：鏈霉菌(streptomyces)、小單胞菌(micromonospra)、諾卡氏菌(nocard'sbacillus)、游動放線菌(actinoplanete)等。

(2)固氮菌：將土壤及大氣中的分子態(tài)氮氣轉化為農(nóng)作物能利用的氨，作物可快速吸收，在偏酸(ph值5.0)和偏堿(ph值8.0)的條件下，菌株均能保持較強的生長勢和較高的固氮酶活性,并能通過調節(jié)自身代謝適應環(huán)境的酸、堿變化,使培養(yǎng)液趨近中性；培養(yǎng)液中nacl濃度在0.5～2.5g.l-1、(nh4)2so4濃度在0.05～0.50g·l^-1時,菌株均能保持旺盛生長且有較高的固氮酶活性，主要菌種：圓褐固氮菌(azotobacterchroococcum)、大豆根瘤菌(soybeanrhizobia)等。

(3)硅酸鹽細菌：溶解土壤中難溶性鉀及磷，并產(chǎn)激素、氨基酸、多糖等物質促進作物的生長，主要菌種：膠質芽孢桿菌(bacillusmucilaginosus)、土壤芽孢桿菌(b.edaphic)等。

(4)枯草芽孢桿菌：能產(chǎn)生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質，對土壤致病菌抑制作用強，主要菌種：枯草芽孢桿菌(b.subtilis)等。

(5)白僵菌：稱之為“地下害蟲專殺”，且可以反復侵染，長期持效，一次用藥，整季無蟲的特點，對蠐螬、金針蟲、地老虎、螻蛄等鞘翅目、鱗翅目、直翅目地下害蟲，有很好的殺滅作用；并可侵染多種磷翅目幼蟲，對松毛蟲防效顯著，對菜青蟲、玉米螟、小菜蛾、大豆食心蟲、稻苞蟲等防效良好，主要菌種：布氏白僵菌(beauveriabassiana)等。

(6)綠僵菌：對直翅目(蝗蟲)、鱗翅目(蛾類害蟲)、雙翅目(蚊蠅類害蟲)和鞘翅目(甲蟲)等7目200多種昆蟲，對地下害蟲蠐螬、地老虎、地蛆效果也較為理想，主要菌種：綠僵菌(metarhiziumanisopliae)等。

(7)多粘類芽孢桿菌：灌根可防治植物細菌和真菌性土傳病害，并使葉部細菌和真菌病害明顯減少；并具有明顯的促生長、增產(chǎn)作用，主要菌種：多粘類芽孢桿菌(paenibacilluspolymyxa)等。

(8)木霉菌：高效生物殺菌劑，專治灰霉病，具有保護和治療雙重功效，主要菌種：里氏木霉菌(trichodermareesei)、深綠木霉菌(t.atroviride)、哈茨木霉菌(t.harzianum)、棘孢木霉菌(t.asperellum)等。

(9)酵母菌：疏松土壤，擴大根系面積，增強光合、減少肥料使用量，提高產(chǎn)量，改善品質，酵母菌能夠影響土壤的生物降解作用，影響土壤結構的改變，可以吸收、固定土壤中的營養(yǎng)物(如n、p、s、fe)，使其轉化為生物可利用的形式而進入食物鏈，對土壤重金屬污染有解毒作用。酵母菌數(shù)量增加為土壤有益微生物、土壤微型動物及作物提供了促進生長的生理活動物質，主要菌種：假絲酵母菌(candidafamata)、白色念珠菌(candidaalbicans)、白色隱球菌(cryptococcusalbidus)、深紅酵母菌(rhodotorularubra)、漢遜德巴利酵母(debaryomyceshansenii)、發(fā)酵產(chǎn)阿拉伯糖醇等。

(10)光合菌：在光照不足環(huán)境中能提高作物光合作用，施入土壤后，可迅速激活植物細胞活性，促進根系發(fā)育，提高光合作用和生殖生長能力，主要菌種：深紅紅螺菌(rhodospirillumrubrum)、綠色紅假單胞菌(r.viridis)、球形紅假單胞菌(r.sphaeroid)等。

(11)乳酸菌：抑制腐敗菌的繁殖，消解腐敗菌產(chǎn)生的毒素，主要菌種：乳酸乳球菌(lactococcuslactis)、乳酸鏈球菌(streptococcuslactis)、雙歧桿菌(bifidobacteriumbifidum)等。

(12)氨基酸螯合劑：富含18種游離氨基酸，其在螯合狀態(tài)下更利于微生物的合成及代謝。氨基酸有(蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、色氨酸、亮氨酸、組氨酸、精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、硒半胱氨酸、脯氨酸、絲氨酸、吡咯賴氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺)。其中賴氨酸、蛋氨酸對乳酸菌的生長有促進作用。酪氨酸、異亮氨酸能提高固氮菌的固氮能力。甘氨酸、賴氨酸天冬氨酸可組成放線菌細胞壁。谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、纈氨酸用于合成枯草芽孢桿菌的脂肽。硅酸鹽細菌能利用谷氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、和精氨酸。天冬酰胺、苯丙氨酸主要為木霉菌、白僵菌、綠僵菌所吸收。光合菌、酵母菌、可吸收大部分氨基酸。枯草芽胞桿菌的繁殖，分解了培養(yǎng)基中紅糖及蛋白胨等養(yǎng)分，產(chǎn)生出利于酵母菌吸收的營養(yǎng)物質，而酵母菌的生長代謝所產(chǎn)生的底物又為其他菌群的快速生長提供了豐富的可快速吸收的營養(yǎng)物質，從而加速了復合菌群的生長繁殖。

以上各菌種的培養(yǎng)基分別為：

(1)放線菌

(2)固氮菌

(3)硅酸鹽細菌

(4)枯草芽孢桿菌

(5)白僵菌、木霉菌

(6)綠僵菌

(7)多粘類芽孢桿菌

(8)酵母菌

6---8brix.麥芽汁1.0升ph值：自然

(9)光合菌

b：5.0克nahco3溶于50毫升蒸餾水中

c：無水乙醇2.0克

d：0.1n.h3po4

注：將b、c、d分別抽濾滅菌后，再將a、b、c混合，用d調ph至7.0，121℃滅菌15分鐘。

(10)乳酸菌

下面結合實施例對本發(fā)明作具體說明。

實施例1

按質量份計，生物酵素土壤改良劑包括以下組分：乳酸菌25份、固氮菌8份、放線菌8份、硅酸鹽細菌3份、枯草芽孢桿菌6份、白僵菌2份、綠僵菌2份、多粘類芽孢桿菌3份、木霉菌3份、酵母菌8份、光合菌3份以及生物酶0.7份，其中有效活菌濃度為100億/ml，所述生物酶包括纖維素酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木聚糖酶、植酸酶、脂肪酶及葡萄糖異構酶(其比例約為纖維素酶10％、酸性蛋白酶20％、中性蛋白酶20％、木聚糖酶10％、植酸酶20％、脂肪酶10％及葡萄糖異構酶10％)。

其制備方法包括如下步驟：

1)、菌株活化：選擇非致病性的乳酸菌、固氮菌、放線菌、硅酸鹽細菌、枯草芽孢桿菌、白僵菌、綠僵菌、多粘類芽孢桿菌、木霉菌、酵母菌和光合菌分別接種至各自的試管斜面培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)箱溫度28℃，培養(yǎng)結束后放在4℃冷藏柜中保存待用；

2)、三角瓶培養(yǎng)基制備：按比例配制出各菌種相應的培養(yǎng)基，放入1000ml三角瓶中，每瓶裝600ml，利用培養(yǎng)基滅菌柜進行滅菌，滅菌溫度118℃，滅菌壓力95kp，滅菌結束后放入無菌室冷卻至常溫；

3)、一級培養(yǎng)：在無菌環(huán)境中將步驟1)得到的菌種分別接入步驟2)得到的相應的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度28℃，得到各菌種的一級培養(yǎng)液；

4)、二級培養(yǎng)：將各自的一級培養(yǎng)液作為種子液，重新接入各自的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度28℃，得到各菌種的二級培養(yǎng)液；

5)、擴大培養(yǎng)：

5.1)、好氧發(fā)酵：按比例將各菌種的二級培養(yǎng)液接入到擴大培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)基按質量份包括氨基酸態(tài)螯合劑10份、紅糖1份、蛋白胨0.1份和水78份，二級培養(yǎng)液與擴大培養(yǎng)基的比例為1:9，然后放入發(fā)酵罐中，通入無菌空氣使溶解氧控制在7mg/l，每隔40分鐘開啟超聲波發(fā)生器3分鐘，超聲波頻率為42khz，攪拌發(fā)酵1.5小時；

5.2)厭氧發(fā)酵：取消無菌空氣的通入，密封超聲發(fā)酵35.5小時得生物酵素，超聲發(fā)酵的條件為每隔40分鐘開啟頻率為42khz的超聲波發(fā)生器3分鐘后關閉，得生物酵素；

以上發(fā)酵過程中發(fā)酵過程中利用水循環(huán)冷熱交換系統(tǒng)控制發(fā)酵熱，使發(fā)酵溫度維持在36℃；

6)、生物酶的制備：用0.1微米孔徑的超濾膜對步驟5)所得的生物酵素進行濃縮，再利用20khz超聲波對濃縮液進行生物破壁，提取生物酶，并制得酶制劑，所述酶制劑的制備方法為：在超聲波破壁液加入氯化鈉，氯化鈉濃度控制在0.14mol/l，然后利用轉速為1×104r/min的離心機濾除細胞碎片及細胞器，得到較純酶溶液，利用20nm超濾平板膜進一步濃縮，然后利用冷凍干燥機將酶濃縮液干燥，得到酶粉，最后加入惰性填料caco3，酶粉與填料比為1:10，標準化(將酶粉與填料的混合物脫水，然后研碎后得干粉，即酶制劑)后即得酶制劑；

7)、將生物酵素和酶制劑按100:1混合得成品，純酶物質與有效菌種配比可達1:1。

實施例2

按質量份計，生物酵素土壤改良劑包括以下組分：乳酸菌35份、固氮菌12份、放線菌12份、硅酸鹽細菌8份、枯草芽孢桿菌10份、白僵菌5份、綠僵菌5份、多粘類芽孢桿菌8份、木霉菌8份、酵母菌12份、光合菌8份以及生物酶1.1份，其中有效活菌濃度為200億/ml，所述生物酶包括纖維素酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木聚糖酶、植酸酶、脂肪酶及葡萄糖異構酶。

其制備方法包括如下步驟：

1)、菌株活化：選擇非致病性的乳酸菌、固氮菌、放線菌、硅酸鹽細菌、枯草芽孢桿菌、白僵菌、綠僵菌、多粘類芽孢桿菌、木霉菌、酵母菌和光合菌分別接種至各自的試管斜面培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，培養(yǎng)箱溫度37℃，培養(yǎng)結束后放在8℃冷藏柜中保存待用；

2)、三角瓶培養(yǎng)基制備：按比例配制出各菌種相應的培養(yǎng)基，放入1000ml三角瓶中，每瓶裝600ml，利用培養(yǎng)基滅菌柜進行滅菌，滅菌溫度121℃，滅菌壓力115kp，滅菌結束后放入無菌室冷卻至常溫；

3)、一級培養(yǎng)：在無菌環(huán)境中將步驟1)得到的菌種分別接入步驟2)得到的相應的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度37℃，得到各菌種的一級培養(yǎng)液；

4)、二級培養(yǎng)：將各自的一級培養(yǎng)液作為種子液，重新接入各自的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度37℃，得到各菌種的二級培養(yǎng)液；

5)、擴大培養(yǎng)：

5.1)、好氧發(fā)酵：按比例將各菌種的二級培養(yǎng)液接入到擴大培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)基按質量份包括氨基酸態(tài)螯合劑10份、紅糖1份、蛋白胨0.1份和水78份，二級培養(yǎng)液與擴大培養(yǎng)基的比例為1:9，然后放入發(fā)酵罐中，通入無菌空氣使溶解氧控制在7mg/l，每隔40分鐘開啟超聲波發(fā)生器3分鐘，超聲波頻率為42khz，攪拌發(fā)酵2.2小時；

5.2)厭氧發(fā)酵：取消無菌空氣的通入，密封超聲發(fā)酵34小時得生物酵素，超聲發(fā)酵的條件為每隔40分鐘開啟頻率為42khz的超聲波發(fā)生器3分鐘后關閉，得生物酵素；

以上發(fā)酵過程中發(fā)酵過程中利用水循環(huán)冷熱交換系統(tǒng)控制發(fā)酵熱，使發(fā)酵溫度維持在38℃；

6)、生物酶的制備：用0.1微米孔徑的超濾膜對步驟5)所得的生物酵素進行濃縮，再利用20khz超聲波對濃縮液進行生物破壁，提取生物酶，并制取酶制劑，酶制劑的制取方法為：在超聲波破壁液加入氯化鈉，氯化鈉濃度控制在0.14mol/l，然后利用轉速為1×104r/min的離心機濾除細胞碎片及細胞器，得到較純酶溶液，利用20nm超濾平板膜進一步濃縮，然后利用冷凍干燥機將酶濃縮液干燥，得到酶粉，最后加入惰性填料caco3，酶粉與填料比為1:10，標準化后即得酶制劑；

7)、將生物酵素和酶制劑按100:1混合得成品。

實施例3

按質量份計，生物酵素土壤改良劑包括以下組分：乳酸菌30份、固氮菌10份、放線菌10份、硅酸鹽細菌5份、枯草芽孢桿菌8份、白僵菌3份、綠僵菌3份、多粘類芽孢桿菌5份、木霉菌5份、酵母菌10份、光合菌5份以及生物酶1.0份，其中有效活菌濃度為150億/ml，所述生物酶包括纖維素酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、木聚糖酶、植酸酶、脂肪酶及葡萄糖異構酶。

其制備方法包括如下步驟：

1)、菌株活化：選擇非致病性的乳酸菌、固氮菌、放線菌、硅酸鹽細菌、枯草芽孢桿菌、白僵菌、綠僵菌、多粘類芽孢桿菌、木霉菌、酵母菌和光合菌分別接種至各自的試管斜面培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，培養(yǎng)箱溫度32℃，培養(yǎng)結束后放在5℃冷藏柜中保存待用；

2)、三角瓶培養(yǎng)基制備：按比例配制出各菌種相應的培養(yǎng)基，放入1000ml三角瓶中，每瓶裝600ml，利用培養(yǎng)基滅菌柜進行滅菌，滅菌溫度120℃，滅菌壓力105kp，滅菌結束后放入無菌室冷卻至常溫；

3)、一級培養(yǎng)：在無菌環(huán)境中將步驟1)得到的菌種分別接入步驟2)得到的相應的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度32℃，得到各菌種的一級培養(yǎng)液；

4)、二級培養(yǎng)：將各自的一級培養(yǎng)液作為種子液，重新接入各自的三角瓶培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)溫度32℃，得到各菌種的二級培養(yǎng)液；

5)、擴大培養(yǎng)：

5.1)、好氧發(fā)酵：按比例將各菌種的二級培養(yǎng)液接入到擴大培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)基按質量份包括氨基酸態(tài)螯合劑10份、紅糖1份、蛋白胨0.1份和水78份，二級培養(yǎng)液與擴大培養(yǎng)基的比例為1:9，然后放入發(fā)酵罐中，通入無菌空氣使溶解氧控制在7mg/l，每隔40分鐘開啟超聲波發(fā)生器3分鐘，超聲波頻率為42khz，攪拌發(fā)酵2小時；

5.2)厭氧發(fā)酵：取消無菌空氣的通入，密封超聲發(fā)酵34小時得生物酵素，超聲發(fā)酵的條件為每隔40分鐘開啟頻率為42khz的超聲波發(fā)生器3分鐘后關閉，制得生物酵素；

以上發(fā)酵過程中發(fā)酵過程中利用水循環(huán)冷熱交換系統(tǒng)控制發(fā)酵熱，使發(fā)酵溫度維持在37℃；

6)、生物酶的制備：用0.1微米孔徑的超濾膜對步驟5)所得的生物酵素進行濃縮，再利用20khz超聲波對濃縮液進行生物破壁，提取生物酶，并制取酶制劑，方法為：在超聲波破壁液加入氯化鈉，氯化鈉濃度控制在0.14mol/l，然后利用轉速為1×104r/min的離心機濾除細胞碎片及細胞器，得到較純酶溶液，利用20nm超濾平板膜進一步濃縮，然后利用冷凍干燥機將酶濃縮液干燥，得到酶粉，最后加入惰性填料caco3，酶粉與填料比為1:10，標準化后即得酶制劑；

7)、將生物酵素和酶制劑按100:1混合得成品。

理化指標為：生物菌劑為紅褐色液體，菌劑聞起來有檸檬酸味，ph值為3～5之間；酶制劑為白色粉末。

本發(fā)明的用法及用量：

(1)酸堿性土壤改良：

根據(jù)土壤酸化程度及土壤營養(yǎng)狀況，每畝用量50～100公斤，灌根兌水100倍；堿性土壤每畝用量100～200公斤，兌水100倍澆灌于土壤面。

(2)農(nóng)作物品質改善：

根據(jù)不同作物，每畝用量20～50公斤，稀釋兌水50倍霧化噴灑于作物表面。