專利名稱:抗氧化劑接枝的多糖及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及用抗氧化劑接枝的多糖,特別是與位阻酚接枝的透明質(zhì)酸或交聯(lián)的透明質(zhì)酸。
在哺乳動物關(guān)節(jié)中的滑液起著潤滑劑和減震劑的作用?;褐凶钪匾某煞质峭该髻|(zhì)酸鈉,它對滑液的機械性能的貢獻最大。透明質(zhì)酸是天然存在的高分子量的葡糖氨基聚糖(glycosaminoglycan),具有重復(fù)雙糖單元2-氨基-2-脫氧-3-O-(β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-D-葡萄糖。所述雙糖通過β1→4糖甙鍵連接形成無支鏈、不交聯(lián)的多糖鏈。透明質(zhì)酸除在滑液中存在外,還存在于細胞外殼、胞周凝膠、脊椎動物結(jié)締組織的胞外基質(zhì)物質(zhì)、眼的玻璃體液、人的臍帶組織、公雞冠和一些細菌中。
在例如由骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎所致的關(guān)節(jié)發(fā)炎期間,透明質(zhì)酸的分子量及其濃度均降低。透明質(zhì)酸的分子量減小使滑液作為減震劑的能力減弱,于是該滑液對該關(guān)節(jié)的軟骨不能提供適當?shù)谋Wo。此外,透明質(zhì)酸的分子量減小還能降低粘度,因而促進其由關(guān)節(jié)滲出。在晚期關(guān)節(jié)炎的情況下,軟骨被腐蝕掉了,當關(guān)節(jié)運動時會產(chǎn)生疼痛(參見例如“The Merck Manual of Diagnosis and Therapy-16th Edition”,第1338-1342頁)。
所述透明質(zhì)酸的分子量減小和透明質(zhì)酸鈉由滑液中快速流失的原因之一是該分子被羥基游離基降解。羥基游離基的來源有兩個。主要來源是白細胞,當關(guān)節(jié)發(fā)炎時,白細胞進入該關(guān)節(jié),并釋放黃嘌呤過氧化酶和其它的酶,形成過氧化物陰離子、過氧化氫和次氯酸鹽,一旦分解,便形成羥基游離基。羥基游離基的另一個來源為氧在鐵存在下被還原劑還原的還原反應(yīng)。在體內(nèi)通常的還原劑是抗壞血酸。氧被鐵(II)還原成過氧化物陰離子,然后它與鐵(III)反應(yīng)形成過氧化氫。過氧化氫被還原成羥基游離基。
已有報導(dǎo)使用中等分子量的透明質(zhì)酸鈉作為比賽用馬腿關(guān)節(jié)的補充滑液(Balazs等人,J.Equine Vet.Sci.,第217-228頁,1985)。然而人的關(guān)節(jié)滑液中的透明質(zhì)酸鈉的分子量比馬的高得多。
還有人進行了將透明質(zhì)酸鈉的溶液通過注射入人的骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)中作為補充滑液的實驗。下列文獻披露了通過注射透明質(zhì)酸鈉治療關(guān)節(jié)炎的方法Weiss等人,Semin.Arthritis Rheum.,11,第143頁,(1981);Nakimi等人,J.Clin.Pharmacol.Therapy Toxicology,20,第501頁,(1982);Grecomoro等人,Pharmatherapeutica,5,第137頁,(1987)和Briganiti等人,Clinical Trials Journal,24,第333頁,(1987)。然而,已有報導(dǎo)說關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉溶液與安慰劑沒有多少差別(Dahlberg等人,Arthritis & Rheumatism,37,第521頁,1994)。Brown等人在Exp.Physiol.76,第125頁,(1991)中報導(dǎo)關(guān)節(jié)中注射的透明質(zhì)酸的半衰期僅為大約13小時。Dahlberg(見上)披露13小時半衰期對于治療來說為短。據(jù)認為,注射的透明質(zhì)酸的半衰期短,部分因為被羥基游離基的降解(J.M.McCord,Science,185,第529頁,1974)。
本發(fā)明涉及通過將多糖、特別是透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸鈉與抗氧化劑接枝增強多糖、特別是透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸鈉對羥基游離基的抗性的新方法。
本發(fā)明涉及含有在多糖的至少一個羥基基團上與抗氧化劑接枝的多糖的接枝多糖組合物。
在優(yōu)選的實施方案中,所述多糖包括含有酸性基團的多糖。在最優(yōu)選的實施方案中,所述多糖包括透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸的鹽;所述抗氧化劑包括位阻酚;并且所述接枝的組合物對羥基游離基的抗性比未接枝的透明質(zhì)酸或其鈉鹽的大得多。
在另一個實施方案中,本發(fā)明涉及多糖的接枝方法,包括使多糖與抗氧化劑的羥基活性衍生物反應(yīng)。
在另一個實施方案中,本發(fā)明還涉及用于治療哺乳動物關(guān)節(jié)的炎癥例如關(guān)節(jié)炎、預(yù)防手術(shù)后粘連形成和促進慢性創(chuàng)傷愈合的藥用組合物,它含有本發(fā)明的抗氧化劑接枝的多糖作為活性成分。
在另一個實施方案中,本發(fā)明涉及包含抗氧化劑接枝的已交聯(lián)的多糖的藥物傳輸體系。
本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的接枝多糖的美容用組合物。
在再一個實施方案中,本發(fā)明涉及治療哺乳動物關(guān)節(jié)的炎癥例如關(guān)節(jié)炎、降低手術(shù)后粘連形成的發(fā)生率和促進慢性創(chuàng)傷和潰瘍愈合的方法,它包括注射或施用有效量含有本發(fā)明抗氧化劑接枝的多糖作為活性成分的藥用組合物。
本發(fā)明的接枝多糖組合物包含在該多糖的至少一個羥基基團上接枝了抗氧化劑的多糖。
本發(fā)明的組合物包含具有選自下列的分子式的物質(zhì) R-(O)-R2NH-Ar-HNR2, R-(O)-R2-Ar-NH-Ar 式中R代表含有酸性基團或其鹽的多糖或交聯(lián)多糖的主鏈,-(O)-是多糖羥基基團的殘基,R1是氫、C1-C20烷基、苯基或取代的苯基,R2是C1-C20烷基、苯基或取代的苯基,和Ar是芳基或取代的芳基。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含具有選自下列的分子式的物質(zhì) 式中R代表含有酸性基團或其鹽的多糖或交聯(lián)多糖的主鏈,-(O)-是多糖羥基基團的殘基,R1是氫、C1-C20烷基、苯基或取代的苯基,和R2是C1-C20烷基、苯基或取代的苯基。
在式I-V中,最好是,R1選自氫、甲基、乙基、異丙基和叔丁基,和R2選自甲基、乙基、異丙基和叔丁基。
所述組合物更優(yōu)選包含式I、II和IV物質(zhì),式中R1和R2是叔丁基,并且所述多糖包括透明質(zhì)酸。
用在本發(fā)明中的多糖包括例如選自下列的物質(zhì)阿拉伯膠,刺梧桐樹膠,西黃耆膠,刺槐豆膠,瓜爾膠,歐車前膠(psyllium gum),淀粉,果膠,瓊脂,藻酸,丹麥瓊脂,葡聚糖,黃原膠(xanthan),羧甲基纖維素,甲基纖維素,羥基乙基羧甲基纖維素,羧甲基淀粉,陽離子淀粉,透明質(zhì)酸,硫酸軟骨素,硫酸角質(zhì)素,硫酸皮膚素,硫酸乙酰肝素,肝素,聚半乳糖醛酸,聚甘露糖醛酸,聚葡糖醛酸和角叉菜膠。
本發(fā)明的多糖優(yōu)選包括含有酸性基團或酸性基團的鹽的多糖。優(yōu)選的酸性基團包括至少一種選自羧基、硫酸根、亞硫酸根和磷酸根的基團。最優(yōu)選的酸性基團是羧基。
含酸性基團的多糖可以包括例如選自下列的物質(zhì)透明質(zhì)酸,硫酸軟骨素,硫酸角質(zhì)素,硫酸皮膚素,硫酸乙酰肝素,肝素,羧甲基纖維素,羥基乙基羧甲基纖維素,羧甲基淀粉,果膠,黃原膠,藻酸,聚半乳糖醛酸,聚甘露糖醛酸,聚葡糖醛酸和角叉菜膠。
按照本發(fā)明優(yōu)選的鹽包括堿金屬或堿土金屬、鋁或銨的鹽。最優(yōu)選的鹽是鈉鹽。
本發(fā)明的接枝多糖還可以是交聯(lián)的。交聯(lián)多糖可以用本領(lǐng)域公知的任何方法來制備。Sakurai等人在美國專利第4716224號中披露了通過將透明質(zhì)酸或其鹽與多官能環(huán)氧化物交聯(lián)制得的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽。Sakurai等人在美國專利第4863907號中披露了通過將葡糖氨基聚糖或其鹽與多官能環(huán)氧化合物交聯(lián)制得的交聯(lián)葡糖氨基聚糖或其鹽。Huang等人在歐洲專利申請第0507604 A2中披露了離子交聯(lián)的含羧基多糖,其中的交聯(lián)劑是具有三價陽離子的化合物。Mlson等人在美國專利第4716154號中披露了透明質(zhì)酸與雙或多官能環(huán)氧化物或其相應(yīng)的鹵代醇、表鹵代醇或鹵化物和二乙烯基砜交聯(lián)。Mlson等人在美國專利第4772419號中還披露了透明質(zhì)酸與多官能環(huán)氧化物交聯(lián)。della Vale等人在美國專利第4957744號中披露了通過將透明質(zhì)酸的羧基用多元醇酯化制得的透明質(zhì)酸的交聯(lián)酯。Balazs等人在美國專利第4582865、4605691和4636524號中披露了通過與二乙烯基砜反應(yīng)交聯(lián)透明質(zhì)酸及其鹽和其它多糖。Balazs等人在美國專利第5128326和4582865號中披露了透明質(zhì)酸與甲醛、環(huán)氧化物、聚氮丙啶基化合物(polyaziridyl compounds)和二乙烯基砜交聯(lián)。Balazs等人在美國專利第4713448號中披露了通過與醛例如甲醛、戊二醛和乙二醛反應(yīng)將透明質(zhì)酸化學(xué)改性,并指出交聯(lián)發(fā)生的可能性。Kuo等人在美國專利第5356883號中披露通過與雙碳化二亞胺反應(yīng)交聯(lián)透明質(zhì)酸。
用于交聯(lián)多糖的優(yōu)選的方法是將多糖與羧酸二酐或多酐反應(yīng)。優(yōu)選的交聯(lián)組合物包含上述R1和R2是叔丁基的式I的物質(zhì),并且多糖是通過與1,2,4,5-苯四酸二酐反應(yīng)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鈉鹽。
在接枝組合物中,接枝水平最易以每當量多糖重復(fù)單元中存在的抗氧化劑的當量數(shù)來表示。對本發(fā)明來說,接枝的最低水平可低至每1000當量多糖重復(fù)單元大約1當量抗氧化劑。優(yōu)選的最低水平是每700當量多糖重復(fù)單元大約1當量抗氧化劑,最優(yōu)選的最低水平是每600當量多糖重復(fù)單元大約1當量抗氧化劑。
接枝的最高水平可高至每10當量多糖重復(fù)單元大約1當量。優(yōu)選的最高水平是每100當量多糖重復(fù)單元大約1當量,最優(yōu)選的最高水平是每400當量多糖重復(fù)單元大約1當量。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn),當按照本發(fā)明的抗氧化劑接枝的組合物來自透明質(zhì)酸或其鹽時,它對由羥基游離基所致降解的抗性比未接枝的透明質(zhì)酸或其鹽的大得多。
在羥基游離基降解實驗中,羥基游離基按Wong等人在InorganicBiochemistry,14,第127頁(1981)中所述由氯化鐵與抗壞血酸反應(yīng)產(chǎn)生。在典型實驗中,粘度半衰期(viscosity half-life)對于透明質(zhì)酸是0.9小時。當對接枝組合物在同樣條件下進行同樣的實驗時,具有式I的本發(fā)明的交聯(lián)的或未交聯(lián)的物質(zhì),粘度半衰期均在3-48小時范圍內(nèi),表明該接枝組合物對羥基游離基降解的抗性大得多;所述式I中,R,多糖,是透明質(zhì)酸,和R1和R2是叔丁基。
抗氧化劑接枝的組合物通過多糖與羥基活性抗氧化劑衍生物反應(yīng)來制備。術(shù)語“羥基活性抗氧化劑衍生物”是指含有能與含在多糖中的羥基基團反應(yīng)的官能團的抗氧化劑。
用于制備本發(fā)明的組合物的優(yōu)選的羥基活性抗氧化劑選自下列一組物質(zhì)B-R2SR2B-R2-OP(OR2)2B-R2NH-Ar-HNR2VI’ VII’ VIII ’B-R2-Ar-NH-Ar, 和IX 式中R1是氫,C1-C20烷基,苯基或取代的苯基;R2是C1-C20烷基,苯基或取代的苯基;A是-C(O)X,-C(O)OCH2CH2OCH2CH2Y,-C(O)NHCH2CH2CH2Y,-OCH2CH2OCH2CH2Y或-CH2Y;B是-C(O)X,-CH2Y或X;X是鹵素,1-咪唑,苯氧基,硝基苯氧基,對甲苯磺酸根,甲磺酸根或者烷基或芳基羧酸根;Y是鹵素,對甲苯磺酸根和甲磺酸根。
優(yōu)選的羥基活性抗氧化劑包括結(jié)構(gòu)XII的羥基活性位阻酚,其中R1是氫、甲基、乙基、異丙基或叔丁基,和R2是甲基、乙基、異丙基或叔丁基。術(shù)語“位阻酚”是指在該羥基的鄰位至少有一個位置被苯基、取代的苯基或C1-C20烷基取代基占據(jù)的酚類化合物。
優(yōu)選的結(jié)構(gòu)XII的羥基活性位阻酚包括式中取代基如下定義的化合物R1和R2是叔丁基,A是-C(O)X,-CH2Y或C(O)OCH2CH2OCH2CH2Y;其中X是氯或1-咪唑,和Y是溴。具體來講,優(yōu)選的羥基活性位阻酚是3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯,2,6-二叔丁基-4-溴甲基苯酚,3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酸2-[2-(氯乙氧基)乙氧基]乙酯和3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰基-1-咪唑。
由于羥基活性抗氧化劑衍生物可能易與水反應(yīng),因此它們與多糖反應(yīng)最好在干燥的、極性的非質(zhì)子傳遞溶劑中進行。優(yōu)選的溶劑是N-甲基吡咯烷酮,N-乙基吡咯烷酮,N-環(huán)己基吡咯烷酮,4-甲基嗎啉N-氧化物,二甲基甲酰胺,四氫噻吩砜和二甲亞砜。
酸性多糖的鹽可能在所述優(yōu)選的溶劑中不溶解。特別是,透明質(zhì)酸的鈉鹽不溶于所述優(yōu)選的溶劑中,因此,就這個實施方案而言,一般宜將該鈉鹽轉(zhuǎn)化成四烷基銨鹽以增加溶解度。四烷基銨鹽與羥基活性抗氧化劑衍生物接枝反應(yīng)后,產(chǎn)物可通過離子交換轉(zhuǎn)換回該鈉鹽形式。
若要制備抗氧化劑接枝的交聯(lián)組合物,交聯(lián)反應(yīng)可在該接枝反應(yīng)之前或之后進行。當用于交聯(lián)的溶劑與用于接枝反應(yīng)的溶劑相同時,交聯(lián)反應(yīng)還可以與接枝反應(yīng)同時進行。
在接枝反應(yīng)中,羥基活性抗氧化劑衍生物與多糖之比最易以每當量多糖中的重復(fù)單元所用的抗氧化劑衍生物的摩爾數(shù)來表示。對本發(fā)明來說,羥基活性抗氧化劑衍生物的最低水平可低至每1000當量多糖重復(fù)單元大約1當量。優(yōu)選的最低水平是每700當量多糖重復(fù)單元大約1當量,而最優(yōu)選的最低水平是每600當量多糖重復(fù)單元大約1當量。
羥基活性抗氧化劑衍生物的最高水平可高至每10當量多糖重復(fù)單元大約1當量。優(yōu)選的最高水平是每100當量多糖重復(fù)單元大約1當量,最優(yōu)選的最高水平是每400當量多糖重復(fù)單元大約1當量。
如上所述,在其它的實施方案中,本發(fā)明涉及用于治療哺乳動物關(guān)節(jié)的炎癥例如關(guān)節(jié)炎、預(yù)防手術(shù)后粘連和促進慢性創(chuàng)傷和潰瘍愈合的組合物。這些組合物的活性成分包括本發(fā)明抗氧化劑接枝的多糖。優(yōu)選的抗氧化劑接枝的多糖是位阻酚接枝的透明質(zhì)酸或位阻酚接枝的交聯(lián)透明質(zhì)酸,或其藥學(xué)上可接受的鹽。
藥學(xué)上可接受的鹽包括堿金屬或堿土金屬、鋁或銨鹽。優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的鹽是鈉鹽。
本發(fā)明的抗氧化劑接枝的多糖組合物可用于預(yù)防手術(shù)后易產(chǎn)生不希望的粘連的任何動物的術(shù)后粘連。該組合物能用于防止哺乳動物、特別是人的粘連發(fā)展。它們可用于需要抑制術(shù)后粘連形成的所有類型的手術(shù),例如腹部手術(shù),婦科手術(shù),胸部手術(shù),矯形外科手術(shù),神經(jīng)手術(shù)和眼科手術(shù)。用于這種用途的優(yōu)選的組合物是位阻酚接枝的透明質(zhì)酸或位阻酚接枝的交聯(lián)透明質(zhì)酸,或其藥學(xué)上可接受的鹽。
粘連預(yù)防劑可以任何常規(guī)方式例如沖洗、以凝膠、乳膏、薄膜或泡沫直接涂敷至手術(shù)創(chuàng)傷部位或采用任何其它的常規(guī)方法施用至手術(shù)創(chuàng)傷部位。粘連預(yù)防劑可在重傷口愈合之前的任何時間使用,最好是在手術(shù)結(jié)束時在將傷口封閉之前使用。但在某些情況下,在一段時間內(nèi)連續(xù)使用粘連預(yù)防劑可能是合乎需要的。粘連預(yù)防劑的有效量是能降低外科手術(shù)后粘連的發(fā)生率的必需量。該量最好應(yīng)足以將該整個手術(shù)創(chuàng)傷部位覆蓋,并且,若期望,另加一些量以足能覆蓋與創(chuàng)傷部位鄰接的身體組織。
本發(fā)明的抗氧化劑接枝的多糖組合物還可用于促進哺乳動物、特別是人的慢性創(chuàng)傷例如燒傷和潰瘍例如糖尿病性腳部潰瘍的愈合。用于這種用途的優(yōu)選的組合物是位阻酚接枝的透明質(zhì)酸或位阻酚接枝的交聯(lián)透明質(zhì)酸,或其藥學(xué)上可接受的鹽。透明質(zhì)酸能保濕,還具有血管生成特性,這使得它可用于這種用途。當用于使傷口愈合時,該組合物可單獨以水溶液、最好是生理鹽水形式使用,或者該溶液可與愈傷藥和其它水溶性聚合物合用。可將其以任何常規(guī)方式例如沖洗、以凝膠、乳膏、薄膜或泡沫形式直接涂敷至創(chuàng)傷或潰瘍部位、以可施用于傷口或潰瘍上的繃帶或傷口敷裹浸漬或采用任何其它的常規(guī)方法施用至創(chuàng)傷或潰瘍部位。促進愈合的有效量是足以將整個傷口或潰瘍部位覆蓋的量,并且,若期望,另加一些量以足能覆蓋與該傷口或潰瘍部位鄰接的身體組織。典型的抗氧化劑接枝的多糖可以包含水溶性聚合物、抗生素、免疫抑制劑和減痛劑作為其它成分。
在使用本發(fā)明的接枝透明質(zhì)酸或交聯(lián)的接枝透明質(zhì)酸治療哺乳動物、特別是人的關(guān)節(jié)炎癥例如關(guān)節(jié)炎時,通常將該透明質(zhì)酸衍生物溶于生理鹽水中以有足夠的粘度通過注射針頭。最大粘度為大約50000cps,最好為大約30000cps。最小粘度為大約5000cps。然后將該治療溶液注射入患病關(guān)節(jié)內(nèi)。
典型的膝關(guān)節(jié)滑液補給注射法與Miller等人在J.Bone and JointSurgery,40,第636頁(1985)中所述的方法類似。在該方法中,將2.5ml抗氧化劑接枝的透明質(zhì)酸的鈉鹽(接枝透明質(zhì)酸的濃度10mg/ml)在緩沖鹽水(氯化鈉8.5mg/ml,磷酸氫二鈉0.537mg/ml,磷酸二氫鈉0.016mg/ml)中的滅菌溶液緩慢吸入注射器中以確保無氣泡。然后將膝用肥皂清洗、涂抹溴化十六烷基三甲基銨并涂擦碘酊,以準備注射。將該溶液通過預(yù)標記的位于通過脛骨坪連接的關(guān)節(jié)的外側(cè)、髕韌帶緣和外側(cè)股骨髁曲的三角弧注射入滑膜腔內(nèi)。在注射前可以采用局部麻醉。在某些情況下,在滑液補給注射之前可能需要用緩沖的鹽水溶液進行膝吸引術(shù)。這樣的方法見Dahlberg等人在Arthritis & Rheumatism,37,1994,第521頁中所述。
該注射液除所述接枝組合物外還可以含有其它物質(zhì),包括水溶性聚合物例如硫酸軟骨素、硫酸皮膚素,和/或磷脂以改善該溶液的潤滑能力。還可以添加麻醉劑,抗炎劑,抗生素,抗菌劑,細胞毒素和糖。
本發(fā)明的抗氧化劑接枝的多糖、特別是交聯(lián)形式可用作藥物傳輸體系。用于這種用途的優(yōu)選的組合物是位阻酚接枝的透明質(zhì)酸或位阻酚接枝的交聯(lián)透明質(zhì)酸,或其藥學(xué)上可接受的鹽。交聯(lián)透明質(zhì)酸能形成分子籠(molecular cage),具有藥理活性的分子可分散在其中。包含在所述籠中的物質(zhì)通過擴散釋放進入環(huán)境中。藥物分子或藥物分子的混合物與該透明質(zhì)酸可以是共價鍵合或非共價鍵合。共價鍵合可能是通過與該透明質(zhì)酸部分的羧酸或羥基基團相連。透明質(zhì)酸基組合物的凝膠、薄膜、線劑、顆?;蚝>d可被置于、噴霧至、吸入、注射入或植入需要該所含藥理活性物質(zhì)的位置。這些物質(zhì)可以是治療藥(例如麻醉劑,鎮(zhèn)痛劑,抗炎劑,利尿劑,拮抗劑,抗生素,激素,抗風(fēng)濕劑,腎上腺素能受體激動劑,細胞抑制劑,抗高血壓劑或免疫抑制劑),生長因子,酶或細胞抗粘連化合物。
本發(fā)明的抗氧化劑接枝的多糖還可以用作局部用美容劑的組分。用于這種用途的優(yōu)選的組合物是位阻酚接枝的透明質(zhì)酸或位阻酚接枝的交聯(lián)透明質(zhì)酸,或其藥學(xué)上可接受的鹽。由于透明質(zhì)酸在低相對濕度條件下具有保濕作用并能在高相對濕度條件下產(chǎn)生令人愉快和光滑的感覺,因此,在美容制品中已將其用作保濕劑。本發(fā)明組合物能產(chǎn)生類似的作用。還可以使用該接枝透明質(zhì)酸組合物與其它低成本的水溶性聚合物例如羧甲基纖維素、果膠、藻酸鹽、大豆蛋白、酪蛋白和明膠的混合物。
可以將植物來源的天然的提取物例如cactus aloe vera、牧豆樹屬植物、母菊、姜黃、胡蘿卜、jojoba、玫瑰和其它植物的提取物混入含有接枝透明質(zhì)酸的美容制品中。α-羥基酸例如乳酸和羥基乙酸可被加至該制品中以改善皮膚的適應(yīng)性。
典型的抗衰老美容組合物是7%2-羥基乙酸、15%丙二醇、1%位阻酚接枝的透明質(zhì)酸溶液(1g/100ml)、60%水和17%乙醇,所有的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。
面用軟凝膠的配方是25%羧甲基纖維素水性漿液(3g/100ml),11%三乙醇胺水溶液(10g/100ml),5%Methyl Gluceth-10,1%位阻酚接枝的透明質(zhì)酸水溶液(1g/100ml),1%香料和防腐劑,57%水,所有的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。
典型的基礎(chǔ)皮膚保濕劑組合物是0.5%羥基乙基纖維素,2%Methyl Gluceth-10,2%甘油,1%位阻酚接枝的透明質(zhì)酸水溶液(1g/100ml),94%水,0.5%防腐劑和香料,所有的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。
下面用下列實施例舉例說明本發(fā)明,這些實施例用作代表,不應(yīng)被認為是對本發(fā)明范圍的限制。除另作說明外,實施例中的所有份數(shù)和百分數(shù)均按重量計。
實施例13,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯的合成使3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酸(4克)、20ml己烷和20ml亞硫酰氯的混合物沸騰4.5小時。蒸餾去除溶劑和過量的亞硫酰氯,留下固體,不經(jīng)進一步純化直接使用。為鑒定該酰氯,將少量樣品用過量的無水乙醇和三乙胺終止反應(yīng),并用水和二氯甲烷萃取。將溶劑蒸發(fā)后,得到油狀物。1H NMR光譜(CDCl3,ppm(自TMS))證實該油狀物是相應(yīng)的酯7.9ppm(s,Ar,2),5.25ppm(s,OH,1),4.3ppm(q,CH3,18)和1.44ppm(t,CH3,3)。該結(jié)果證實已生成3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯。
實施例22,6-二叔丁基-4-溴甲基苯酚的合成使1g 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、0.9g N-溴丁二酰亞胺和40ml四氯化碳的混合物沸騰1.5小時。濾除丁二酰亞胺,并將得到的有機溶液蒸發(fā),得到具有下列1H NMR光譜數(shù)據(jù)(CDCl3,ppm(自TMS))的粘性液體7.05ppm(s,ArH,2),5.15ppm(s,OH,1),4.35ppm(s,CH2Br,2)和1.3ppm(s,CH3,18)。
實施例33,5-二叔丁基-4-羥基苯甲?;?2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙酯的合成在-個裝有迪安-斯達克榻分水器的250ml燒瓶中,將5g 3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酸、3.7g 2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙醇、0.1g對甲苯磺酸和60ml甲苯的混合物加熱沸騰4天。將得到的混合物用水和二氯甲烷萃取,然后將該二氯甲烷溶液用MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑,得到6.97g具有下列1HNMR光譜數(shù)據(jù)(CDCl3,ppm(自TMS))的酯7.9ppm(s,ArH,2),5.72ppm(s,OH,1),5.45ppm(m,CH2,2),3.86ppm(m,CH2,2),3.7ppm(m,CH2,6),3.6ppm(m,CH2,2)和2.45ppm(s,CH3,18)。
實施例43,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰在-1-咪唑的合成將1g 3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酸、0.7g 1,1’-二羰基二咪唑和50ml二氯甲烷的混合物于室溫攪拌17小時。除去溶劑后,將產(chǎn)物在甲苯和己烷中重結(jié)晶,得到吸濕性固體。將該固體的少量樣品與0.2g乙醇和2ml二氯甲烷混合,并靜置10小時。除去溶劑后,如實施例1用1H NMR僅鑒定出相應(yīng)的乙酯。該結(jié)果表明已生成3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲?;?1-咪唑。
實施例5透明質(zhì)酸的甲基三辛基銨鹽的制備向10g透明質(zhì)酸鈉(發(fā)酵產(chǎn)物,Chisso Corporation,Chiba,Japan)在1000ml水中的溶液中加入50g氯化甲基三辛基銨(Aliquat 336,Aldrich Chemical,Milwaukee,Wisconsin)在50ml丙酮中的溶液。將混合物攪拌過夜,然后濾出橡膠狀沉淀物,用水和丙酮洗滌,然后真空干燥過夜。將其再浸入500ml丙酮中7小時,并真空干燥過夜,得到46.9g橡膠狀物質(zhì)。
實施例63,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯與透明質(zhì)酸接枝向10g透明質(zhì)酸的甲基三辛基銨鹽(用實施例5的方法制得)在1000ml干燥的N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的溶液中加入0.4g 3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯(實施例1)。使該混合物翻滾3小時,然后于10℃儲存16小時。為離子交換回鈉鹽,然后將NaCl水溶液(15g,在250ml水中)加至反應(yīng)混合物中。將得到的溶液攪拌1小時后,加入3g碳酸氫鈉和200ml丙酮以使產(chǎn)物沉淀。將聚合物過濾,用丙酮/水(比率4/1,200ml)洗滌5次,然后用100ml丙酮洗滌。通過將產(chǎn)物再溶于1l水中然后使其沉淀入大體積的甲醇中而將產(chǎn)物進一步純化,得到4g產(chǎn)物。
實施例73,5-二叔丁基-4-羥基苯甲?;?1-咪唑與透明質(zhì)酸接枝向2g透明質(zhì)酸的甲基三辛基銨鹽(用實施例5的方法制得)在280ml NMP中的溶液中加入0.25g 3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲?;?1-咪唑(實施例4)。將該混合物于45℃保持20小時。然后將其按實施例6中所述離子交換回鈉鹽形式。產(chǎn)物重0.92g。
實施例83,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯與同雙酚A的二環(huán)氧甘油醚交聯(lián)的透明質(zhì)酸接枝首先通過將2g透明質(zhì)酸的甲基三辛基銨鹽(用實施例5的方法制得)、0.2g雙酚A的二環(huán)氧甘油醚和280ml NMP混合并將該混合物于45℃保持24小時,進行交聯(lián)反應(yīng)。然后向該混合物中加入0.2g 3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯,并將該全部反應(yīng)混合物于室溫保持17小時。將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成鈉鹽并按實施例6中所述進行后處理。
實施例93,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯與同1,2,4,5-苯四羧酸二酐交聯(lián)的透明質(zhì)酸接枝向5g透明質(zhì)酸的甲基三辛基銨鹽(用實施例5的方法制得)在700mlNMP中的溶液中加入0.5g 1,2,4,5-苯四羧酸二酐。將該混合物于10℃保持7天。然后向該反應(yīng)混合物中加入三乙胺(1ml)和3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲酰氯(0.5g)。16小時后,將產(chǎn)物用NaCl(0.5g)和NaHCO3(0.5g)在50ml水中的溶液進行離子交換,然后通過加入400ml丙酮使產(chǎn)物沉淀。濾出產(chǎn)物,并將其依次用4/1丙酮/水和純丙酮洗滌。干燥后,得到2.9g聚合物。
實施例103,5-二叔丁基-4-羥基苯甲?;?2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙酯與誘明質(zhì)酸接枝將2g透明質(zhì)酸的甲基三辛基銨鹽(用實施例5的方法制得)和0.25g 3,5-二叔丁基-4-羥基苯甲?;?2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙酯在280ml MP中的混合物于45℃保持20小時。將混合物用O.1g NaCl和0.1g NaHCO3在20ml水中的溶液處理,并按實施例9進行后處理。干燥后,得到1.0g聚合物。
實施例11接枝透明質(zhì)酸對羥基游離基降解的抗性羥基游離基用Wong等人在Inorganic Biochemistry,14,第127頁(1981)中所述的鐵離子與抗壞血酸的反應(yīng)產(chǎn)生。
向100ml位阻酚接枝的透明質(zhì)酸的鈉鹽的水溶液(如所示,0.3-0.6%(重量/體積),在pH7.4緩沖)中加入0.25ml氯化鐵溶液(1.1g,在20ml水中)和0.25ml抗壞血酸溶液(0.64g,在20ml水中)。將混合物振搖大約10秒鐘,然后在10分鐘后測定第一粘度(Brookfield)。將這一點的粘度認作100%。樣品的降解抗性通過測定粘度降低至10分鐘值的50%所需的時間(粘度半衰期)來評定。對照為透明質(zhì)酸鈉。結(jié)果見表1。
權(quán)利要求
1.接枝多糖組合物,包含在該多糖的至少一個羥基基團上接枝有抗氧化劑的多糖。
2.權(quán)利要求1的組合物,其中所述抗氧化劑包括位阻酚。
3.權(quán)利要求1或2的組合物,其中所述多糖含有酸性基團或其鹽。
4.權(quán)利要求3的組合物,其中酸性基團包括至少一個選自羧基、硫酸根、亞硫酸根和磷酸根的基團。
5.權(quán)利要求3或4的組合物,其中所述鹽包括堿金屬或堿土金屬、鋁或銨的鹽。
6.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中被接枝的抗氧化劑的含量為每1000多糖重復(fù)單元1當量至每10多糖重復(fù)單元1當量。
7.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中被接枝的抗氧化劑的含量為每700多糖重復(fù)單元1當量至每100多糖重復(fù)單元1當量。
8.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中被接枝的抗氧化劑的含量為每600多糖重復(fù)單元1當量至每400多糖重復(fù)單元1當量。
9.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中接枝多糖包括至少一個選自下列的物質(zhì) R-(O)-R2-SR2 R-(O)-R2NH-Ar-HNR2 R-(O)-R2-Ar-NH-Ar, 式中R代表含有酸性基團或其鹽的多糖或交聯(lián)多糖的主鏈,-(O)-是多糖羥基基團的殘基,R1是氫、C1-C20烷基、苯基或取代的苯基,R2是C1-C20烷基、苯基或取代的苯基,和Ar是芳基或取代的芳基。
10.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中所述接枝的多糖組合物是交聯(lián)的。
11.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中所述接枝的多糖組合物通過與羧酸二酐或多酐反應(yīng)被交聯(lián)。
12.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中所述多糖包括至少一種選自下列的物質(zhì)透明質(zhì)酸,硫酸軟骨素,硫酸角質(zhì)素,硫酸皮膚素,硫酸乙酰肝素,肝素,羧甲基纖維素,羥基乙基羧甲基纖維素,羧甲基淀粉,果膠,黃原膠,藻酸,聚半乳糖醛酸,聚甘露糖醛酸,聚葡糖醛酸和角叉菜膠。
13.上述任一權(quán)利要求的組合物,其中所述接枝的多糖包括接枝的透明質(zhì)酸。
14.權(quán)利要求13的組合物,其中接枝的透明質(zhì)酸對羥基游離基的抗性比未接枝的透明質(zhì)酸的大得多。
15.治療哺乳動物關(guān)節(jié)炎的方法,包括將有效量的組合物注射入患病的關(guān)節(jié)中,其中所述組合物的活性組分為權(quán)利要求13或14的組合物。
16.制備在多糖的至少一個羥基基團上接枝有抗氧化劑的多糖的方法,包括使所述多糖與至少一種選自下列的羥基活性抗氧化劑衍生物反應(yīng) 式中R1是氫,C1-C20烷基,苯基或取代的苯基;R2是C1-C20烷基,苯基或取代的苯基;A是-C(O)X,-C(O)OCH2CH2OCH2CH2Y,-C(O)NHCH2CH2CH2Y,-OCH2CH2OCH2CH2Y或-CH2Y;B是-C(O)X,-CH2Y或X;X是鹵素,1-咪唑,苯氧基,硝基苯氧基,對甲苯磺酸根,甲磺酸根,烷基羧酸根或芳基羧酸根;Y是鹵素,對甲苯磺酸根或甲磺酸根。
17.權(quán)利要求16的方法,其中所述多糖含有酸性基團或其鹽。
18.權(quán)利要求16或17的方法,其中所述多糖包括至少一種選自下列的物質(zhì)透明質(zhì)酸,硫酸軟骨素,硫酸角質(zhì)素,硫酸皮膚素,硫酸乙酰肝素,肝素,羧甲基纖維素,羥基乙基羧甲基纖維素,羧甲基淀粉,果膠,黃原膠,藻酸,聚半乳糖醛酸,聚甘露糖醛酸,聚葡糖醛酸和角叉菜膠。
19.權(quán)利要求16、17或18的方法,其中所述接枝多糖是交聯(lián)的。
20.權(quán)利要求16至19之任一項的方法,其中所述多糖是透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸的鹽。
21.權(quán)利要求16至20之任一項的方法,其中羥基活性抗氧化劑衍生物的用量為每1000多糖重復(fù)單元1當量至每10多糖重復(fù)單元1當量。
全文摘要
本發(fā)明公開了接枝多糖組合物,它包含在該多糖的至少一個羥基基團上接枝有抗氧化劑的多糖。本發(fā)明還公開了用抗氧化劑接枝的多糖或抗氧化劑接枝的交聯(lián)多糖在治療關(guān)節(jié)炎、作為藥物傳輸介質(zhì)方面的用途,降低術(shù)后粘連的發(fā)生率,促進慢性創(chuàng)傷和潰瘍的愈合,和作為美容制品的組分的用途。
文檔編號C09K15/32GK1143084SQ96107159
公開日1997年2月19日 申請日期1996年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月22日
發(fā)明者T·T·阮 申請人:赫爾克里斯有限公司