金銀合金納米材料溶液。
[0044]實(shí)施例2
谷胱甘肽-金銀合金納米材料的制備方法如圖1所示，包括以下步驟:
步驟一，2.64mL，10mM的硝酸銀溶液和2.64mL，10mM的檸檬酸三鈉溶液加入到41.25mL的去離子水中，均勻攪拌。
[0045]步驟二，將7.93mL，50mM新鮮配制的硼氫化鈉溶液加入到步驟一中的混合溶液當(dāng)中，不停攪拌12h。攪拌過夜后，得到銀納米粒子溶液。
[0046]步驟三，307.3mg的谷胱甘肽粉末加入到步驟二所得銀納米粒子溶液當(dāng)中，隨后對混合物在65° C下，油浴反應(yīng)40h，得到淺橙色的溶液，即用谷胱甘肽穩(wěn)定的銀納米粒子溶液。
[0047]步驟四，將4mL步驟三的谷胱甘肽穩(wěn)定的銀納米粒子溶液加入到10.SmL的去離子水中，均勻攪拌；然后在室溫下緩慢逐滴加入1.2mL，1mM的氯金酸溶液(HAuC14*4H20)，繼續(xù)不停攪拌20min，然后在HOOOrpm下，離心20min，得到沉淀物(AgCl)和上清液。
[0048]步驟五，將步驟四所得上清液與過量的甲醇溶液進(jìn)行徹底的混合反應(yīng)，再在14000rpm下離心25min得到沉淀物。甲醇溶液中去離子水與甲醇的體積比為1:4。
[0049]步驟六，將步驟五所得沉淀物用適量的pH7.40，1mM并含有0.9%的NaCl的PBS緩沖溶液重新溶解，最后保存在4° C下，即可以得到谷胱甘肽-金銀合金納米材料溶液。
[0050]實(shí)施例3
將按照實(shí)施例1和實(shí)施例2的方法制備得到的谷胱甘肽-金銀合金納米材料進(jìn)行進(jìn)行TEM,熒光，紅外，紫外以及XRD和SEM的相關(guān)表征。
[0051]如圖2所示的谷胱甘肽-金銀合金納米材料的三維熒光圖譜。從圖中可以看出，本發(fā)明制備的金銀合金熒光納米材料具有相對較強(qiáng)的熒光特性。
[0052]如圖3和圖4所示的谷胱甘肽-金銀合金納米材料的??Μ圖和粒徑分布圖，在谷胱甘肽作為穩(wěn)定劑和表面保護(hù)劑的情況下，金銀合金納米材料均勻穩(wěn)定的分布，并且粒徑分布均勻，大小約為28.5nm。
[0053]如圖5 所示不同的加入量氯金酸(40(^1^、60(^1^、80(^1^、100(^1^、120(^1^1400 μ L、1600 μ L、1800 μ L和2000 μ L)對谷胱甘肽-金銀合金納米材料的熒光強(qiáng)度優(yōu)化關(guān)系圖。從圖中可以看出，選擇1.2mL，1mM的氣金酸洛液是制備谷I光甘妝穩(wěn)定的金銀合金納米材料的最佳用量。
[0054]如圖6所示時間對谷胱甘肽-金銀合金納米材料的穩(wěn)定性測試示意圖。從圖中可以看出，本發(fā)明的谷胱甘肽穩(wěn)定的金銀合金納米材料具備相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性，能長時間放置而對其熒光特性沒有太大的影響。
[0055]如圖7所示谷胱甘肽-金銀合金納米材料的EDS測試示意圖。從圖中可以看出，金和銀的含量相對較高。
[0056]圖8為谷胱甘肽(GSH)，谷胱甘肽-銀納米粒子(GSH-AgNPs)和谷胱甘肽-金銀合金納米材料(GSH-AgAuNAs)紅外對比圖。可以看出，在波數(shù)為2530cm 1的峰位置，出現(xiàn)明顯的對比，說明在GSH-AgAuNAs的制備過程中，GSH已經(jīng)成功地覆蓋在其表面。
[0057]圖9為銀納米粒子(AgNPs )，谷胱甘肽-銀納米粒子(GSH-AgNPs)和谷胱甘肽-金銀合金納米材料(GSH-AgAuNAs)紫外對比圖?？梢钥闯鯝gNPs在390nm處出現(xiàn)一明顯的吸收特征峰，說明在制備過程中的確生成了 AgNPs。
[0058]圖10和圖11分別為AgCl的XRD圖譜和SEM圖。XRD的圖譜特征與文獻(xiàn)報道的標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致，說明加入的氯金酸已經(jīng)成功地用于谷胱甘肽穩(wěn)定的金銀合金納米材料的制備中。
[0059]具體實(shí)施例4
將按照實(shí)施例1和實(shí)施例2的方法制備得到的谷胱甘肽-金銀合金納米材料進(jìn)行組氨酸的檢測，包括以下步驟:
1)將100μ L的用PBS緩沖液(ρΗ7.40，1mM)配制的谷胱甘肽穩(wěn)定的金銀合金納米材料(GSH-AgAuNAs)溶液與300 μ L，1mM的銅離子溶液充分混合；
2)然后在加入不同體積的，ImM的組氨酸溶液，最終反應(yīng)體積為lmL，室溫下培育20-30
min ；
3)最后在熒光分光光度計上進(jìn)行掃描測試。激發(fā)光波長為390nm，掃描范圍為500~700nm，激發(fā)光和發(fā)射光狹縫寬度均為10nm，掃描速率為1200nm/min，光電倍增管電壓為 700V。
[0060]檢測結(jié)果如圖12和圖13所示，隨著組氨酸的濃度從2 μ M到150 μ M依次增加，熒光強(qiáng)也對應(yīng)變強(qiáng)。說明谷胱甘肽-金銀合金納米材料可以對組氨酸進(jìn)行定量檢測。
[0061]具體實(shí)施例5
將按照實(shí)施例1和實(shí)施例2的方法制備得到的谷胱甘肽-金銀合金納米材料與磁性納米粒子進(jìn)行對目標(biāo)物人絨毛膜促性腺激素(HCG)的免疫分析。具體操作如下:
1)先分別對谷胱甘肽穩(wěn)定的金銀合金納米材料(GSH-AgAuNAs)和磁性納米粒子完成表面修飾后；
2)將1.5mL的已經(jīng)功能化的谷胱甘肽穩(wěn)定的金銀合金納米材料(GSH-AgAuNAs)與ImL加有不同標(biāo)準(zhǔn)濃度的HCG抗體溶液進(jìn)行均勻混合反應(yīng)，該混合物在25-37° C下培育
1.5-2.5h，直至反應(yīng)達(dá)到平衡；
3)然后，將0.5mL的已經(jīng)修飾完成的磁性納米粒子與上述的混合物進(jìn)行培育反應(yīng)25-30min，隨后，一個“三明治”式的連接物形成，并帶有磁性；
4)最后對混合物進(jìn)行磁性分離，得到的上清液用于進(jìn)行熒光分析檢測。該熒光分析參數(shù)設(shè)置為:激發(fā)光波長為390nm，掃描范圍為500~700nm，激發(fā)光和發(fā)射光狹縫寬度均為10nm，掃描速率為1200nm/min，光電倍增管電壓為700V。
[0062]檢測結(jié)果如圖14和15所示，隨著HCG的濃度a_i從O到600ng*mL 1依次增強(qiáng)，熒光強(qiáng)度也對應(yīng)增強(qiáng)。說明谷胱甘肽-金銀合金納米材料可以對目標(biāo)物人絨毛膜促性腺激素進(jìn)行免疫分析。
[0063]以上所揭露的僅為本發(fā)明一種較佳實(shí)施例而已，當(dāng)然不能以此來限定本發(fā)明之權(quán)利范圍，因此依本發(fā)明權(quán)利要求所作的等同變化，仍屬本發(fā)明所涵蓋的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種谷胱甘肽-金銀合金納米材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一，制備銀納米粒子溶液； 步驟二，將谷胱甘肽加入步驟一所得銀納米粒子溶液中，然后在65-70° C下油浴反應(yīng)40-50h后加去離子水?dāng)嚢杈鶆颍? 步驟三，再加氯金酸溶液攪拌均勻；接著離心處理，得到沉淀物AgCl和上清液； 步驟四，將步驟三所得上清液與過量的甲醇溶液混合反應(yīng)后再次離心處理，得到的沉淀物； 步驟五，將步驟四所得沉淀物用適量的PBS緩沖溶液重新溶解。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟一所述銀納米粒子溶液的制備方法包括以下步驟:首先將硝酸銀溶液和檸檬酸三鈉溶液加入去離子水中混合攪拌均勻；再加入新鮮配制的硼氫化鈉溶液混合攪拌至反應(yīng)完全。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述谷胱甘肽、銀納米粒子和氯金酸的物質(zhì)的量之比為1:5.2:10-1:5.5:10。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟五所述PBS緩沖溶液pH值為7.40，濃度為 5-10 禮，含有 0.6-0.9%NaCl。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述硝酸銀溶液、檸檬酸三鈉溶液和硼氫化鈉溶液的物質(zhì)的量之比為1:1: 1.2-1:1:1.5。6.一種根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述制備方法制備的谷胱甘肽-金銀合金納米材料。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述谷胱甘肽-金銀合金納米材料的應(yīng)用，其特征在于，用于對組氨酸的定量檢測和對人絨毛膜促性腺激素的免疫分析。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述對組氨酸的定量檢測包括以下步驟: 步驟一，將用PBS緩沖液配制的谷胱甘肽-金銀合金納米材料與銅離子溶液充分混合； 步驟二，再加入不同體積的組氨酸溶液，室溫下培育； 步驟三，最后進(jìn)行熒光光譜表征測試。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述對人絨毛膜促性腺激素的免疫分析包括以下步驟: 步驟一，分別對谷胱甘肽-金銀合金納米材料和磁性納米粒子進(jìn)行表面修飾； 步驟二，將表面修飾過的谷胱甘肽-金銀合金納米材料與不同濃度的人絨毛膜促性腺激素抗體溶液在25-37° C下培育； 步驟三，將表面修飾過的磁性納米粒子與步驟二所得混合物進(jìn)行培育； 步驟四，對步驟三所得混合物進(jìn)行磁性分離，將得到的上清液進(jìn)行熒光分析檢測。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種谷胱甘肽-金銀合金納米材料及其制備方法與應(yīng)用，制備方法包括以下步驟：先制備銀納米粒子溶液；然后添加谷胱甘肽在65-70°C下油浴反應(yīng)40-50h后加去離子水?dāng)嚢杈鶆?；再加入氯金酸溶液攪拌、離心處理后上清液與過量的甲醇溶液混合反應(yīng)，再次離心處理得到的沉淀物用PBS緩沖溶液重新溶解，即得到谷胱甘肽-金銀合金納米材料溶液；可用于對組氨酸的定量檢測和對人絨毛膜促性腺激素的免疫分析。本發(fā)明的制備方法簡單方便，采用了谷胱甘肽作為還原劑和穩(wěn)定劑，避免了毒性試劑的使用，具備環(huán)境友好性。本發(fā)明制備的谷胱甘肽-金銀合金納米材料結(jié)構(gòu)穩(wěn)定均勻，分散性好和具有強(qiáng)烈的熒光特性，可用于各種生物樣品的分析檢測及其他相關(guān)功能材料檢測。
【IPC分類】C09K11/58, G01N21/64, G01N33/68, B22F9/24, B82Y30/00, G01N33/76
【公開號】CN105038771
【申請?zhí)枴緾N201510250664
【發(fā)明人】高文華, 黃曉鵬, 陳耀文, 陳漢佳, 張歆, 謝曉娜, 梁一丹
【申請人】汕頭大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年5月18日