離花青素巧級(jí)分。
[00巧]適于洗脫所選擇的包含花青素巧的級(jí)分的溶劑包括甲醇、乙臘、水及它們的混合 物，依據(jù)柱介質(zhì)的極性和包含花青素巧的汁或提取物的可溶性來(lái)選擇。在一些實(shí)施方式中， 所述溶劑是甲醇水溶液。
[0076] 可添加至所述溶劑W調(diào)節(jié)抑的合適的試劑包括憐酸鐘、氨氧化鋼等。
[0077] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及從含花青素巧的蔬菜或水果的汁或提取物或它 們的組合中分離花青素巧的第二級(jí)分的方法，所述方法包括：a)基于花青素巧分子的電荷 和極性的差異，使用選擇的抑的第二溶劑，在所述離子交換柱上選擇性地分離花青素巧， 其中所述第二溶劑的抑值與用于洗脫所述第一級(jí)分的溶劑的抑值不同，優(yōu)選高于后者的 抑值；W及C)選擇包含分離的花青素巧的第二級(jí)分或級(jí)分組合，W使當(dāng)在抑8.0的水性 溶液中時(shí)，如由具有615nm至635nm的最大吸光度所測(cè)量的，所述第二級(jí)分或級(jí)分組合中的 所述分離的花青素巧提供了美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)所提供的那些顏色特 征。在該實(shí)施方式中，可用選擇的抑的第一溶劑，例如抑為至少約2的溶劑，從所述離子 交換柱分離的所述第一級(jí)分不提供分離的花青素巧的混合物，即，當(dāng)所述分離花青素巧的 混合物在pH8.O的水性溶液中時(shí)，如由具有615nm至635nm的最大吸光度所測(cè)量的，其提 供美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)所提供的那些顏色特征。在一個(gè)實(shí)施方式中，用 pH為約2至約9的溶劑來(lái)從含花青素巧的蔬菜或水果的汁或提取物分離所選擇的第二含花 青素巧的級(jí)分，或者所述抑在W下更優(yōu)選的范圍中的一個(gè)中，即，約3至約9、約4至約9、 約5至約9、約6至約9,或最優(yōu)選約7至約9。 可通過(guò)使用離子交換柱或半制備型HPLC柱進(jìn)一步分級(jí)選擇的含花青素巧的級(jí)分來(lái)分 離額外的含花青素巧的級(jí)分。合適的離子交換介質(zhì)包括陽(yáng)離子和陰離子交換介質(zhì)。合適的 半制備型HPLC柱包括C-18柱。 例如，在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述分級(jí)方法還可包括W下步驟：d)將所選擇的包含分 離的花青素巧的一個(gè)級(jí)分或多個(gè)級(jí)分的組合上樣至離子交換柱；e)基于所述花青素巧分 子的電荷和極性的差異，使用選擇的抑的溶劑，選擇性地分離步驟d)中上樣于所述離子交 換柱上的所述花青素巧；W及f)選擇在步驟e)中分離的包含分離的花青素巧的一個(gè)級(jí)分 或多個(gè)級(jí)分的組合，W使當(dāng)在抑8.O的水性溶液中時(shí)，在步驟f)中選擇的所分離的花青素 巧提供620皿至635皿的最大吸光度。如果期望的話，可W相似的方法產(chǎn)生第S、第四和另 一些額外的含花青素巧的級(jí)分。在另一個(gè)實(shí)施方式中，與由水性溶液中5ppm和IOppm美國(guó) 聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)的L相沖*值限定的分段線所定義的顏色特征相比，pH 8.0的水性溶液中的步驟f)中選擇的所述分離的花青素巧提供了具有12或更小的AE值 的顏色特征。
[0078] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，基于花青素巧分子的電荷和極性的差異在所述離子交換柱 上選擇性分離所述花青素巧的步驟包括W下步驟：（i)首先使用所選擇的抑的溶劑得到 第一級(jí)分，W及（ii)使用第二選擇的抑的第二溶劑，其中所述第二溶劑的抑值與所述第 一溶劑的抑值不同，W得到作為一個(gè)級(jí)分的后續(xù)級(jí)分或得到作為多個(gè)級(jí)分的組合的多種 后續(xù)級(jí)分的組合，其中當(dāng)所述一個(gè)級(jí)分或多個(gè)級(jí)分的組合中的所述分離的花青素巧處于pH 8. 0的水性溶液中的至少一個(gè)濃度時(shí)，與由水性溶液中5ppm和IOppm美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和 化妝品法案藍(lán)1號(hào)的L相沖*值限定的分段線所定義的顏色特征相比，其提供了具有12或 更小的AE值的顏色特征。
[0079] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，基于花青素巧分子的電荷和極性的差異在所述離子交換柱 上選擇性分離所述花青素巧的步驟包括W下步驟：（i)首先使用所選擇的抑的溶劑得到第 一級(jí)分，所述溶劑是第一洗脫溶劑，W及（ii)使用一個(gè)或多個(gè)選擇的抑的后續(xù)洗脫溶劑來(lái) 得到所述一個(gè)級(jí)分或多個(gè)級(jí)分的組合，其中各洗脫溶劑是有差異的，并且所述差異可獨(dú)立 地選自由抑、溶劑組成及其組合所組成的組。優(yōu)選地，所述第一洗脫溶劑的所選擇的抑低 于所述一種或多種后續(xù)級(jí)分的所選擇的抑。優(yōu)選地，所選擇的抑將介于約2至約9范圍， 或W下更優(yōu)選的范圍中的一個(gè)中，即，約3至約9、約4至約9、約5至約9、約6至約9,或 最優(yōu)選約7至約9。在另一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)所述一個(gè)級(jí)分或所述多個(gè)級(jí)分的組合中的所 述分離的花青素巧處于pH8. 0的水性溶液中的至少一個(gè)濃度時(shí)，與由水性溶液中5ppm和 1化pm美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)的L相沖*值限定的分段線所定義的顏色特 征相比，其提供了具有12或更小的AE值的顏色特征。
[0080] 分離的花青素巧級(jí)分可用作著色劑，或者可進(jìn)行進(jìn)一步處理，例如，純化、濃縮、脫 腥或顏色穩(wěn)定化。
[0081] 所述選擇性分離方法可在產(chǎn)生天然藍(lán)色著色劑的商業(yè)有用的量的規(guī)模下進(jìn)行。
[0082] 可將通過(guò)本發(fā)明的方法制備的含花青素巧的天然藍(lán)色著色劑應(yīng)用于或并入所有 類型的可食用制品中，包括供人和動(dòng)物食用的食物、飲料和藥劑?？墒秤弥破返睦影ǎ?寵物食品和零食、干貨（例如，大米、谷物和谷類植物）、湯和調(diào)味汁、糖食制品（例如，所 有類型的巧克力、糖和無(wú)糖糖果、口香糖、糖棒和包有糖衣的糖食）、甜點(diǎn)制品（例如，布下、 糖霜、糖粉和誘頭）、烘賠食品（例如，蛋糕、小甜餅、薄脆餅和餅干）、乳制品（例如，酸乳、 生奶油和干酪）、飲料（例如，乳制飲料、水、汁、茶和蘇打水）、零食制品（例如，薄餅干、零 食棒（snackbars)、咸脆餅干和馨條）化及藥物形式（例如，片劑、混懸劑、可巧嚼劑和糖 漿劑）。所述含花青素巧的天然藍(lán)色著色劑還可并入食品級(jí)著色劑組合物、包衣和焦糖汁 (ink)中。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述含花青素巧的藍(lán)色著色劑包括在涂覆糖食制品表面的 包衣或焦糖汁中。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述含花青素巧的藍(lán)色著色劑包括在涂覆糖食制 品表面的包衣或焦糖汁中，其中所述糖食制品是具有軟質(zhì)拋光或硬質(zhì)拋光糖基包衣的糖食 忍。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述含花青素巧的藍(lán)色著色劑包括在涂覆糖食制品表面的包衣 或焦糖汁中，其中所述糖食制品是具有軟質(zhì)拋光或硬質(zhì)拋光無(wú)糖包衣的糖食忍。
[0083] 在一個(gè)實(shí)施方式中，使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱分級(jí)紅卷屯、菜提取液。用75%v/v的抑 8的0.IM憐酸鐘緩沖液和25%v/v甲醇洗脫第一級(jí)分。用30%v/v的抑8的0.IM憐酸 鐘緩沖液和70%v/v甲醇洗脫第二級(jí)分。
[0084] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱分級(jí)紅卷屯、菜提取液。用75%v/v的 pH6的0.IM憐酸鐘緩沖液和25%v/v甲醇洗脫第一級(jí)分。用75%v/v的抑7的0.IM憐 酸鐘緩沖液和25%v/v甲醇洗脫第二級(jí)分。用75%v/v的抑8的0.IM憐酸鐘緩沖液和 25%v/v甲醇洗脫第S級(jí)分。用30%v/v的抑8的0.IM憐酸鐘緩沖液和70%v/v甲醇 洗脫第四級(jí)分。
[00化]在另一個(gè)實(shí)施方式中，使用C-18半制備型HPLC柱分離紅卷屯、菜提取液。
[0086] 基于花青素巧分子的電荷和極性的差異從蔬菜和水果的汁和提取物中的復(fù)雜的 花青素巧混合物選擇性分離花青素巧級(jí)分的方法產(chǎn)生了提供與所述復(fù)雜混合物所提供的 顏色特征不同的顏色特征的著色劑。
[0087] 基于花青素巧分子的極性的差異從復(fù)雜的花青素巧混合物選擇性分離花青素巧 級(jí)分的方法實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)期感到的對(duì)得到提供與合成著色劑美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案 藍(lán)1號(hào)提供的顏色特征相似的顏色特征的天然著色劑的方法。
[0088] 現(xiàn)將參照W下實(shí)施例闡述本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】。應(yīng)理解，公開(kāi)運(yùn)些實(shí)施例僅用 于說(shuō)明本發(fā)明，且在本發(fā)明的主旨內(nèi)的變化是可預(yù)期的。 實(shí)施例1 使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱分級(jí)紅卷屯、菜提取物
[0089] 使用純甲醇來(lái)活化菲羅口（Phenomenex飯）（托蘭斯，加利福尼亞州） 的SCX(強(qiáng)陽(yáng)離子交換）固相萃取柱（cartridge)。使用0.Ol%v/v酸化水洗涂柱 (cartridge)。將紅卷屯、菜提取物的水性溶液上樣至柱中并用0.01%v/v酸化水洗涂。使 pH8的憐酸鐘緩沖液（0. 1M)過(guò)柱。pH8的25%v/v甲醇溶液來(lái)洗脫并收集級(jí)分1。pH8 的70%v/v甲醇溶液來(lái)洗脫并收集級(jí)分2。
[0090] 用2ml至5ml88%v/v甲酸酸化級(jí)分1和級(jí)分2。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除甲醇。
[0091] 為了去除任何鹽，將級(jí)分1上樣至C-18柱中，并用0. 01%v/v酸化水洗脫。將洗 脫液收集于0.01%v/v酸化水中，并蒸發(fā)殘余的甲醇。還使用與針對(duì)級(jí)分1概述的相同步 驟使級(jí)分2通過(guò)C-18柱。
[0092] 如下表3所示，在不同的抑值下分析紅卷屯、菜提取液巧ed C油bage extract solution, RC巧和級(jí)分1和級(jí)分2提供的最大紫外/可見(jiàn)扣V/VI巧波長(zhǎng)吸光度和顏色特 征。
pH7. 6和抑8.0的級(jí)分2提供與合成的美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)的 入max值（Amax=630nm)最接近的Amax值，即，Amax值分別為616. 40和619. 40。 還可通過(guò)將在抑7.6下和在抑8.0下的級(jí)分2提供的顏色特征與合成的美國(guó)聯(lián)邦食 品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)（抑&C Blue No. 1)提供的顏色特征進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算AE值。 該AE值等于L相沖*顏色空間中的級(jí)分2顏色點(diǎn)與美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1 號(hào)模型之間的最小距離。 因此，使用方程5由W下數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算CL準(zhǔn)或AE值： L相沖*顏色空間中抑7.6的級(jí)分2的X。為： Xo=巧 1. 62, -4. 17, -5.68) L相沖*顏色空間中抑8.O的級(jí)分2的X。為： Xo=巧 1. 56, -5. 80, -5. 81) Xi和X2是來(lái)自美國(guó)聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案藍(lán)1號(hào)（抑&CBlueNo. 1)模型的兩個(gè)占. Xi=巧0. 65, -24. 40, -14. 28) Xz= (97. 69, -6. 43, -3. 57) 對(duì)于抑7. 6的級(jí)分2,計(jì)算的CU值或AE值為6. 7,對(duì)于抑8.0的級(jí)分2計(jì)算的dmm值或AE值為6.0。
[0093] 圖6提供了紅卷屯、菜提取液（RC巧和級(jí)分1和級(jí)分2的在520nm檢測(cè)下高效液相 色譜圖（HPLCC虹omatogram)。圖6示出，來(lái)自紅卷屯、菜提取物的級(jí)分2具有較高濃度的后 洗脫峰（later-elutingpeak)。 實(shí)施例2 使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱和不同高抑值的溶劑分級(jí)紅卷屯、菜提取物
[0094] 使用菲羅口（Phenomenex飯）（托蘭斯，加利福尼亞州）的SCX(強(qiáng)陽(yáng)離子交換） 固相萃取柱（cartridge)。將稀釋于0. 01%v/v酸化水（IOml至15ml)中的紅卷屯、菜提取 物上樣至柱中并用0. 01%v/v酸化水洗涂。使抑6的憐酸鐘緩沖液（0. 1M)過(guò)柱。用抑 6的25%v/v甲醇溶液來(lái)洗脫并收集級(jí)分1。使抑7的憐酸鐘緩沖液（0. 1M)過(guò)柱。用抑 7的25%v/v甲醇溶液來(lái)洗脫并收集級(jí)分2。使抑8的憐酸鐘緩沖液（0. 1M)過(guò)柱。用抑 8的25%v/v甲醇溶液來(lái)洗脫并收集級(jí)分3。用抑8的70%v/v甲醇溶液來(lái)洗脫并收集 級(jí)分4。 陽(yáng)0巧]用20%v/v甲酸酸化級(jí)分1至4。