專利名稱：一種油脂降解菌的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種油脂降解菌。
背景技術：
油脂是重要的化工原料，主要用于甘油制取和高級脂肪酸的制備，油脂類化合物會對生態(tài)環(huán)境造成嚴重污染并且食用廢油棄油會對人體健康造成威脅。因此，研究油脂類化合物的生物降解對于保護環(huán)境及提高人類健康具有重要意義。低溫含油脂的廢水屬于工業(yè)中難處理的廢水之一。國內(nèi)對低溫油脂高效降解微生物的研究很少見，針對于此，篩選低溫條件下的油脂高效降解菌并了解其降解特性，可為低溫油脂類廢水的工業(yè)化處理提供微生物菌劑資源，從而對解決低溫油脂類廢水生物處理系統(tǒng)的問題奠定基礎。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種油脂降解菌。油脂降解菌，它為油脂降解B5，屬于Paucimonas-lemoignei屬新種，已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC No :M2011523，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2011年5月30日；它為革蘭氏陰性好氧菌，菌體大小為0.8μπιΧ3.0μπι;它在 PDA固體培養(yǎng)基上形成圓形菌落，淡粉色、半透明，表面光滑，邊緣呈波浪狀，不易挑起；夠利用葡萄糖，不能氧化乙醇或醛糖。本發(fā)明油脂降解菌B5，接觸酶反應陽性、產(chǎn)吲哚試驗陽性、甲基紅試驗反應陰性、 淀粉水解陰性、油脂水解陽性、硝酸鹽還原反應陰性、明膠液化陰性、檸檬酸利用陰性、糖發(fā)酵試驗既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣。本發(fā)明油脂降解菌B5，經(jīng)16SrDNA測序及同源性比較，得到與其最相近的種屬是 Paucimonas-lemoignei,同源性達98% ；結合細菌形態(tài)特征、生長條件、生理生化鑒定結果， 確定油脂降解菌B5為Paucimonas-lemoignei屬的一個新菌種。油脂降解菌B5，屬于Paucimonas-lemoignei屬新種，已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC No :M2011523，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2011年 5月30日。本發(fā)明油脂降解菌B5，具有低溫條件下油脂類廢水的生物強化處理功能，菌株的油脂降解率可達95%，不造成環(huán)境二次污染；對于解決低溫條件下油脂類廢水生物處理系統(tǒng)的問題很有幫助，具有較高的應用價值。


圖1為具體實施方式
一中油脂降解菌B5的原子力學顯微鏡觀察圖，圖2為具體實施方式
一中油脂降解菌B5的原子力學顯微鏡觀察圖。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式油脂降解菌B5，屬于Paucimonas-lemoignei屬新種，已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC No :M2011523，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2011年5月30日；它為革蘭氏陰性好氧菌，菌體大小為 0. 8 μ mX 3. 0 μ m ；它在PDA固體培養(yǎng)基上形成圓形菌落，淡粉色、半透明，表面光滑，邊緣呈波浪狀，不易挑起；夠利用葡萄糖，不能氧化乙醇或醛糖。本實施方式中油脂降解菌B5，其形態(tài)如圖1和2所示；其生長溫度為5 15°C，生長PH值為5. 5 9. 5 ；最適生長溫度為5°C，最適生長pH值為7. 0。依據(jù)《伯杰氏細菌學鑒定手冊》對油脂降解菌B5進行常規(guī)生理生化鑒定，實驗結果為接觸酶反應陽性、產(chǎn)吲哚試驗陽性、甲基紅試驗反應陰性、淀粉水解陰性、油脂水解陽性、硝酸鹽還原反應陰性、明膠液化陰性、檸檬酸利用陰性、糖發(fā)酵試驗既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣。本實施方式油脂降解菌B5，是從小區(qū)居民生活區(qū)中的生活污水水樣中經(jīng)過馴化， 再經(jīng)過活化初篩，然后再進行活化和復篩得到，過程如下馴化過程為挑取一菌環(huán)菌種接種于斜面培養(yǎng)基中，在15°C 5°C漸變的溫度下置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每培養(yǎng)一個生長周期后重新挑取該斜面培養(yǎng)基中的菌株接種于其他的斜面培養(yǎng)基上，再次培養(yǎng)，在漸變的溫度下逐漸停留在5°C。在5°C反復接種培養(yǎng)2個月， 完成整個馴化過程，得到8株能夠在5°C條件下穩(wěn)定生長繁殖的兼性嗜冷菌。1°C左右保藏菌種。初篩是將得到的8株菌分別接種于油脂中性紅培養(yǎng)基中，進行5°C的低溫培養(yǎng)活化，經(jīng)2 3次活化后確定菌種回復了活力后再次接種于油脂中性紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4天后觀察。通過觀察培養(yǎng)基中菌落生長時產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物使中性紅顏色變化情況的差異來判斷該種菌能否降解油脂或是降解油脂的初步情況。將馴化得到的8株菌株在相同條件下培養(yǎng)相同時間，若其中一株菌的單菌落生長的比較大且顏色鮮紅則證明該菌能在低溫下良好的生長且具有降解油脂的功效，從而初步測定出菌株對油脂的降解情況。對這8株菌隨機編號1-8號，并做好記錄，以便復篩的時候方便記錄結果。復篩是將初篩使用的8株菌，分別接種于以花生油為唯一碳源的無碳源培養(yǎng)基中，馴化數(shù)周后，再次接種于油脂液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)過4天后通過觀察選取長勢良好的 3株菌，繼續(xù)以花生油為唯一碳源進行培養(yǎng)，活化2周后利用752型紫外分光光度計在波長為580nm處測其光密度值篩選出生長較好的菌株，通過具體的實驗數(shù)據(jù)確定了 1株菌為優(yōu)勢菌，該菌種的編號為5號。其中每升斜面培養(yǎng)基由5gNaCl、10g蛋白胨和5g牛肉膏組成，pH值為7. 0 7. 2 ； 每升油脂中性紅培養(yǎng)基由5gNaCl、10g蛋白胨、IOg花生油、5g牛肉膏、20g瓊脂和ImL中性紅(1. 6%中性紅水溶液)組成，pH值為7. 2 ；TSB培養(yǎng)基由30gTSB商品化培養(yǎng)基粉末和20g 瓊脂組成；每升復篩培養(yǎng)基由 5g(NH4)2S04、2gK2HP04、0. 5gMgS04 WH2OJgNaCUgNH4H2PO4 和 20g花生油組成。篩選出的菌依據(jù)《伯杰氏細菌學鑒定手冊》對其進行常規(guī)生理生化鑒定，采用CTAB 法進行細菌總DNA的提取。將所得細菌基因組DNA用細菌16SrDNA通用引物進行PCR擴增， 電泳后割膠回收PCR產(chǎn)物，通過airlock脂肪酸鑒定系統(tǒng)對5號菌株進行檢測鑒定進行同源性比較，發(fā)現(xiàn)本實施方式篩選得到的菌最相近的種屬是Paucimonas-lemoignei，同源性達98%，結合細菌形態(tài)特征、生長條件、生理生化鑒定結果，發(fā)現(xiàn)與本屬其它菌種有區(qū)別，確定為Paucimonas-lemoignei屬的一個新菌種，命名為油脂降解菌B5。
本實施方式中，在1500mg/L油脂濃度以下，培養(yǎng)Mh時，苯胺降解率達到40% ；培養(yǎng)84h時，苯胺降解率可達73. 5%以上，培養(yǎng)時，苯胺降解率達到95% ；實驗證明油脂高效降解菌B5具有低溫處理含油脂廢水的功能，而且無需添加其它化學制劑，具有廣闊的應用前景。
權利要求
1. 一種油脂降解菌，其特征在于油脂降解菌B5，屬于Paucimonas-lemoignei屬新種， 已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC No :M2011523，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2011年5月30日。
全文摘要
一種油脂降解菌，它涉及一種油脂降解菌。油脂降解菌B5，屬于Paucimonas-lemoignei屬新種，已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC NoM2011523，保藏地址為武漢市武漢大學，保藏日期為2011年5月30日。本發(fā)明油脂降解菌B5，具有低溫條件下油脂類廢水的生物強化處理功能，菌株的油脂降解率可達95％，不造成環(huán)境二次污染；對于解決低溫條件下油脂類廢水生物處理系統(tǒng)的問題很有幫助，具有較高的應用價值。
文檔編號C02F3/34GK102559535SQ20111016898
公開日2012年7月11日 申請日期2011年6月22日 優(yōu)先權日2011年6月22日
發(fā)明者關健飛, 劉翔, 宋北, 牛佳, 王繼華 申請人:哈爾濱師范大學